药物分析实验：实验四 药物中特殊杂质的检查
(2021年整理)8《药物分析》第四章(2课时)
武汉软件工程职业学院教案（理论教学首页）（第1页）章节名称第四章药物的杂质检查授课安排授课时数2授课时间第五周授课方法讲授授课教具多媒体教学目的1、明确药物的杂质“特殊物质的检查”的测定意义、原理及注意事项；2、学会测定药物中特殊杂质的操作技术。
教学重点学会测定药物中特殊杂质的操作技术；教学难点学会测定药物中特殊杂质原理及注意事项；项目6几种药物特殊杂质的检查一、利用药物与杂质在物理性质方面的差异（一）臭味及挥发性质的差异例如：黄凡士林中异性有机物检查：本品2.0g ，直火加热无辛味。
浓过氧化氢中不挥发性杂质检查：10ml 水浴蒸干残渣＜15mg 。
（二）颜色差异例如：磺胺嘧啶中有色偶氮苯化合物的检查：取本品2.0g ，加NaOH 试液10ml ，加水25ml ，与黄色3号比色液比，不得更深。
（三）溶解行为的差异：例如：吡哌酸中碱中不溶物吡哌酸甲酯（I ）和（II ）（四）旋光性质的差异：例如：硫酸阿托品中莨菪碱检查：本品溶液(50mg/ml)α＜-0.4（五）对光吸收性质的差异（1）紫外分光光度法：①在一定的波长杂质有吸收，而药物无吸收；②杂质杂质紫外吸收光谱与药物紫外吸收光谱重叠；③药物在紫外区有明显吸收，而杂质吸收很弱货物吸收。
（2）原子吸收分光光度法：主要用于药物中金属盐等杂质的检查，如曾用于维生素C 、硫酸庆大霉素和安痛定注射液中Na 、K 、Ca 、Mg 含量测定。
（3）红外分光光度法：主要用于药物中无效和低效晶型的检查，如甲苯米唑装订线中A晶型的检查。
（4）荧光分析法：例如利血平中氧化产物的检查，是根据利血平纯品无荧光，其氧化产物有荧光。
1.紫外分光光度法：例如：地蒽酚中二羟基蒽醌的检查。
再如：苯丙醇中苯丙酮的检查：可利用供试液的吸收度比来控制杂质；纯品苯丙醇A247nm/A258nm=0.59，99.5%时A247nm/A258nm=0.79；因此规定供试品A247nm/A258nm＜0.79；即所含苯丙酮＜0.5%。
特殊杂质的检查
以碘化钾以碘化钾-淀粉作外指示剂的方法，适用于 多种药物及其制剂的亚硝酸钠滴定法。
应用外指示剂法时，应注意其灵敏度与反应 的体积有关。为避免偏差，可是测定时溶液体积 与标化时亚硝酸钠滴定液的体积一致或测定与标 化均进行空白校正。
谢 谢！
五.含量测定
I. 亚硝酸钠滴定法 • 原理:芳伯氨基药物在酸性溶液中与亚硝 原理:
酸钠定量反应,生成重氮盐, 酸钠定量反应,生成重氮盐,用永停法指示 反应终点
H
+
ArAr-NHCOR+H2O ArAr-NH2+NaNO2+ 2HCl
Ar-NH2+RCOOH ArArAr-N2 Cl +NaCl+2H2O
蓝色
Na2[Fe(NO)(CN)5]+H2O Na2[Fe(CN)5H2O]+H2N
Na2Fe(CN)5H2N
检查方法 本品1.0g，加甲醇溶液（1 2） 本品1.0g，加甲醇溶液（1 2） 20ml溶解后，加碱性亚硝基铁氰化钠试液 20ml溶解后，加碱性亚硝基铁氰化钠试液 1ml，摇匀放置30min；如显色，与对乙酰 1ml，摇匀放置30min；如显色，与对乙酰 氨基酚对照品1.0g加对氨基酚50 氨基酚对照品1.0g加对氨基酚50 µg用同一 方法制成的对照品比较，不得更深（0.005%） 0.005%） 对氨基酚对照溶液不稳定，应临用前新 鲜配制。
+ -
（3）温度（10-30℃）条件下滴定：通常温 ）温度（10-30℃）条件下滴定：通常温 度高重氮化反应速度快；但温度太高，可 使亚硝酸逸失，并可使重氮盐分解： Ar-N Cl +H2O ArArAr-OH+N2 +HCl 一般温度每升高10℃，重氮化反应速度加 一般温度每升高10℃，重氮化反应速度加 快2.5倍，但重氮盐的分解速度相应加速2 2.5倍，但重氮盐的分解速度相应加速2 倍；所以滴定一般在低温下进行。由于低 温时反应太慢，经试验可在室温下进行。 温时反应太慢，经试验可在室温下进行。
药分实验思考题
药分实验实验一：氯化钠的杂志检查1.药物中杂质检查的意义是什么药物中的杂质是影响药品质量的主要因素之一，药品的杂质是药品中不具治疗作用或对人体有危害或影响药品稳定性和疗效的物质，因此，杂质检测是控制药品质量的一项重要指标，以保证药品质量和临床用药安全有效。
2.药物中杂质的来源主要有哪些什么的一般杂质什么是特殊杂质来源：（1）由生产过程中引入的（2）贮藏过程中产生的一般杂质：指在自然界中分布较广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质。
特殊杂质：指某一个或某一类药物的生产或贮藏过程中引入的杂质3.药物中杂质检查应严格遵循什么原则为什么遵行平行实验的原则，如加入的试剂，反应的温度，放置的时间等均应相同，这样检查结果才有可比性，减少系统误差。
4.试计算出氯化钠中溴化物，硫酸盐，镁盐，钾盐，铁盐，重金属和砷盐的限量5.取某一药物进行金属检测，规定限量为百万分之十，应取多少ml标准铅溶液6.某一药物砷盐限量为百万分之四，取标准砷溶液2ml做对照，问应取供试品多少克实验二：药物中特殊杂志的检查1.简要说明以上杂志检查项目的原理和方法1)阿司匹林中水杨酸检查的原理：水杨酸在弱酸性环境中和FeCl3作用显紫色，而阿司匹林结构中无游离酚羟基，不能发生此反应。
方法为化学方法中的显色反应检查法：取一定量的被检杂质标准溶液和一定量供试品溶液，在相同条件下处理比较反应结果从而确定含量是否超过限量。
2)盐酸普鲁卡因中对氨基苯甲酸检查原理：盐酸普鲁卡因、对氨基苯甲酸在酸性条件下可与二甲氨基醛缩合而成色。
不同物质分配系数不同，在薄层色谱中可被分离，且斑点大小和浓度有关。
方法：本实验采取薄层色谱中的的杂质对照品法，根据杂质限量取供试品溶液和一定浓度的杂志对照片溶液，分别点样于薄层色谱板上，展开，斑点定位，供试品溶液除斑点外的其他斑点与相应的杂志对照片进行比较，若供试品杂质斑点颜色不深于对照品杂杂质斑点，则说明没有超过限量。
药物的检查—特殊杂质的检查(药物分析课件)
常用的检查方法---色谱法---高效液相色谱法
（4）面积归一化法
适合于所有杂质都能出峰，粗 略测定杂质峰面积 可求出各峰（各组分）占总量 的百分数。
杂质检查法：气相色谱法(GC)
用于药物中挥发性杂质的检查,如药物中 残留溶剂、农药残留量等。 检查方法同高效液相色谱法.
4
菪碱的检查）
二、化学性质上的差异
1.酸碱性的差异
举例：硫酸阿托品中其他生物碱的检查
阿托品的碱性大于其他碱：阿托品＞山莨菪碱＞东莨菪碱、
樟柳碱
硫酸阿托（杂质：东、山、樟）
HCl [BH]+（溶解）
氨水 碱化
要求：不得出现浑浊
溶液中 浑浊 （盐酸阿托品） (其他碱游离)
[BH]+
化学性质上的差异
2.氧化还原性的差异
举例：葡萄糖亚铁中高铁盐的检查
10mlHCl 本品5g (100ml水) 3g KI
I2
Na2S2O3滴定 淀粉指示剂
蓝色消失
含Fe3+≤0.1%
特殊杂质检查方法---分光光度法
分光光度 法
1.紫外-可见分光光度法 （肾上腺素中肾上腺酮检查）
2.原子吸收分光光度法 （维生素C中铁、铜检查）
内标加校正因子法
校正因子 ( f ) AS / CS AR / CR
含量(CX )
f
AX AS / CS
S：内标 R：对照品 X：样品
常用的检查方法---色谱法---高效液相色谱法
（2）外标法
含量(C X
)
CR
AX AR
R：对照品 X：样品
常用的检查方法---色谱法---高效液相色谱法
（3）主成分自身对照法（不加校正因子）
药物分析-卡因类药物特殊杂质的检查
Detection wavelength: 254 nm
2、质谱条件
Positive Scan mode 80~600 mau 喷雾电压：4000V 裂解电压：70V 干燥气（N2）：9.5 L/min 干燥气压力：40psi 干燥气温度：350℃
Agillent 安捷伦 Waters 沃特斯 Bruker 布鲁克 Varian 瓦里安 AB 美国应用生物系统 Shimadzu 岛津 Finnigan 菲尼根
LC-MS分析： 1、色谱条件 Zobax SB-C18 (150 mm×4.6 mm, i.d., 5 μm) Column temperature: 25 ℃
8
8
三、盐酸利多卡因注射液中2,6—二甲基苯胺及 其他杂质的检查
采用高效液相色谱法
不加校正因子的主成分自身稀释对照法
限量： 2,6—二甲基苯胺 0.04%
其他单个杂质
0.5%
其他杂质总限量 1.0%
（四）盐酸罗哌卡因对映体的纯度检查
CH3 O
NHC
C3H7 N
HCl
CH3
长效酰胺类局麻药， R-盐酸罗哌卡因心脏毒性大 临床使用S－盐酸罗哌卡因
检查方法
2010版：HPLC法
固定相：C18
流动相：磷酸缓冲（含庚烷磺酸钠）-ห้องสมุดไป่ตู้甲醇
检测波长：279nm
外标法计算限量
2005年版 原理： ☆TLC 杂质对照品法
☆对氨基苯甲酸最低检出量为0.01μg ☆苯胺最低检出量0.01μg
二、盐酸氯普卡因注射液中有关物质和光解产物的 检查
药物分析实验报告(2015.9)
药物分析实验报告
班级：
姓名：
学号：
沧州医学高等专科学校药学系
实验一查阅中国药典
实验二药物的鉴别试验
实验三葡萄糖的一般杂质检查
实验四药物的特殊杂质检查
实验五复方氨林巴比妥注射液的含量测定
实验六对乙酰氨基酚片的溶出度检查和含量测定
实验七盐酸普鲁卡因注射液的含量测定（亚硝酸钠滴定法）
实验八硫酸阿托品注射液的含量测定（酸性染料比色法）
实验九维生素AD胶丸中V A的含量测定（三点校正法）
实验十维生素B1片的含量测定（紫外-可见分光光度法）
实验十一维生素C片的含量测定（碘量法）
实验十二黄体酮注射液的含量测定（HPLC法-内标法）
实验十三头孢氨苄胶囊的溶出度检查及含量测定（HPLC法）
实验十四诺氟沙星胶囊的鉴别（TLC法）及溶出度检查（UV法）
实验十五中药何首乌中二苯乙烯苷的含量测定（HPLC法）
实验十六复方乙酰水杨酸片的含量测定（终结考核性实验）。
药物分析-典型药物的常见特殊杂质检查项目与方法
典型药物的常见特殊杂质检查项目与方法药物名称特殊杂质检查项目检查方法阿司匹林游离水杨酸纳氏比色管比色法布洛芬有关物质 TLC,自身稀释对照法丙磺舒有关物质 TLC,自身稀释对照法盐酸普鲁卡因注射液对氨基苯甲酸TLC,杂质对照品(对氨基苯甲酸)法对乙酰氨基酚有关物质 TLC,杂质对照品(对氯乙酰苯胺)法对氨基酚纳氏比色管比色法肾上腺素酮体UV,310nm 测定吸光度值苯巴比妥中性或碱性物质重量分析法,碱性条件下用乙醚提取后称定重量司可巴比妥钠中性或碱性物质重量分析法,碱性条件下用乙醚提取后称定重量异烟肼游离肼TLC,杂质对照品（硫酸肼）法硝苯地平有关物质 HPLC，外标法诺氟沙星有关物质 HPLC，外标法盐酸氯丙嗪有关物质 TLC，自身稀释对照法地西泮及其注射液有关物质HPLC，不加校正因子的主成分自身对照法奥沙西泮有关物质 TLC，自身稀释对照法硫酸阿托品莨菪碱旋光法其他生物碱比浊法盐酸吗啡阿扑吗啡比色法罂粟酸比色法其他生物碱 TLC，自身稀释对照法与对照品（磷酸可待因）法硫酸奎宁三氯甲烷-乙醇中的不溶物重量分析法其他金鸡纳碱TLC，自身稀释对照法硝酸士的宁马钱子碱硝化反应后观察颜色，不得显红色或红棕色葡萄糖亚硫酸盐与可溶性淀粉加碘试液反应应，应即显黄色蛋白质与磺基水杨酸反应，不得产生沉淀右旋糖酐20 分子量与分子量分布分子排阻HPLC，示差折光检测器醋酸地塞米松有关物质HPLC，不加校正因子的主成分自身对照法硒UV，氧瓶燃烧破坏后测定吸光度值维生素B1 总氯量容量分析法，银量法维生素C 铁盐和铜盐原子吸叫分光光度法维生素E 生育酚容量分析法，铈量法正已烷GC，FID检测器，外标法FID（火焰离子化检测器）维生素K1 甲萘醌比色法顺式异构体 HPLC，面积归一化法青霉素钠（钾）吸光度难关 UV青霉素聚合物分子排阻HPLC，葡聚糖凝胶柱， UV检测器阿莫西林有关物质 HPLC，梯度洗脱阿莫西林聚合物分子排阻HPLC，葡聚糖凝胶柱，UV检测器硫酸庆大霉素 G组分 HPLC，蒸发光散射检测器盐酸四环素有关物质 HPLC，加校正因子的主成分对照法罗红霉素有关物质HPLC。
药物分析实验：实验四 药物中特殊杂质的检查
HPLC法(主成分自身对照法）
判定方法： ❖ 规定杂质峰数目 ❖ 规定杂质峰面积
2、系统适应性差
环维黄样星D (TLC)：
①其他生物碱检查薄层色谱系统适用性差,无法分出环维 黄杨星D中杂质;
②由于点样量低,无法控制环维黄杨星D中杂质;
③含量测定方法由于专属性差,难于控制样品中环维黄杨
星D的实际含量。
实验四 药物中特殊杂质的检查
1
一、目的要求
Hale Waihona Puke 1 掌握本实验中药物特殊杂质的来源、检查方
法和原1理。
2 掌握特殊杂质检查的操作方法及杂质限量计
算；
3 4 5
2
二、实验原理
取本品0.10g ，加乙醇1ml 溶解后，加冷水适量使成50ml，立即加新 制的稀硫酸铁铵溶液〔取盐酸溶液(9→100)1ml ，加硫酸铁铵指示液 2ml 后，再加水适量使成 100ml〕1ml ，摇匀；30秒钟内如显色，与 对照液（精密称取水杨酸0.1g，加水溶解后，加冰醋酸1ml ，摇匀， 再加水使成1000ml，摇匀，精密量取1ml ，加乙醇1ml 、水48ml与 上述新制的稀硫酸铁铵溶液1ml ，摇匀）比较，不得更深(0.1％) 。
Gymnastone（HPLC）:
0.30
0.15
0.20 0.10
0.10 0.05
AU
AU
0.00 0.00
0.00
5.00
10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00
5.00
10.00
15.00
20.00
分钟
流动相：超纯水-乙腈分钟(60:40,V/V)；检测器： 30%～70%（0～30 min）,70%
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氢化可的松中其它甾体的检查
• 1、进样或点样溶液浓度太低
98.6%
TLC检查其他甾体特点：
（1）简便易行，不需特殊的仪器； （2）不需对照品； （3）只能控制单个杂质的限量； （4）要求杂质与主成分的显色灵敏度接 近。
氢化可的松
•
碱性四氮唑蓝试液 皮质激素C17-a-醇酮基具有还原性,在强碱 溶液中能将四氮唑蓝定量地还原为甲瓒
取本品加氯仿-甲醇（9 ：1）制成3.0mg/ml作为供试液， 精密量取适量，加氯仿-甲醇（9 ：1）稀释成0.06mg/ml作 为对照液；照薄层色谱法，各取5μl，分别点于同一硅胶G 板上，以 为展开剂，展开后晾干，在105℃干燥10分钟，
放杂质冷斑，点喷，以不碱得性多四于氮3唑个蓝，1试其液颜，色立与即对检照视液，的供主试斑品点溶比液较如，显 不得更深。2
限量% . % %
控制总杂质限量是多少?
2010年版-氢化可的松有关物质
• 【检查】有关物质 取本品，精密称定，用甲醇溶解并稀释制成每l m l 中约含氢化可的松0. 5mg的溶液，作为供试 品溶液；精密量取1ml， 置100ml量瓶中，用甲醇稀释至刻 度，摇匀，作为对照溶液；另取泼 尼松龙对照品，精密称定，加 流动相溶解并定量稀释制成每l m l 中约 含5ug的溶液， 作为 对照品溶液。照含量测定项下的色谱条件，取对 照溶液20uL注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，1使主成分峰高约为 满量程的30%。再精密量取供试品溶液、对照溶液与对照品溶液各 20uL，分别注入液相色谱仪，2记录色谱图至供试品溶液主成分峰保 留时间的3倍，供试品中如有与对照品溶液色谱图中泼尼松龙峰保留 时间一致的 峰，3按外标法以峰面积计箅，4不得过0.5%;5其他单个杂 质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0. 5倍（0. 5%),6各 杂质峰面积 的和不得大于对照溶液主峰面积的1.5倍。7供试品溶液色谱图中任何 小于对照溶液主峰面积0.01倍的 峰可忽略不计。
Gymnastone（HPLC）:
0.30
0.15
0.20 0.10
0.10 0.05
AU
AU
0.00 0.00
0.00
5.00
10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00
5.00
10.00
15.00
20.00
分钟
流动相：超纯水-乙腈分钟(60:40,V/V)；检测器： 30%～70%（0～30 min）,70%
HPLC法(主成分自身对照法）
判定方法： ❖ 规定杂质峰数目 ❖ 规定杂质峰面积
2、系统适应性差
环维黄样星D (TLC)：
①其他生物碱检查薄层色谱系统适用性差,无法分出环维 黄杨星D中杂质;
②由于点样量低,无法控制环维黄杨星D中杂质;
③含量测定方法由于专属性差,难于控制样品中环维黄杨
星D的实际含量。
PDA检测器，检测波长275nm。
（30～50 min）
5-羟甲基糠醛
• 精密量取本品适量(约相当于葡萄糖1.0g),置 100ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀, 照UV法 ,在284nm的波长处测定,吸光度不得过0.32.
肾上腺素中酮体的检查
•
肾上腺素
肾上腺酮
2017-3-18
14
实验四 药物中特殊杂质的检查
1
一、目的要求
1 掌握本实验中药物特殊杂质的来源、检查方
法和原1理。
2 掌握特殊杂质检查的操作方法及杂质限量计
算；
3 4 5
2
二、实验原理
取本品0.10g ，加乙醇1ml 溶解后，加冷水适量使成50ml，立即加新 制的稀硫酸铁铵溶液〔取盐酸溶液(9→100)1ml ，加硫酸铁铵指示液 2ml 后，再加水适量使成 100ml〕1ml ，摇匀；30秒钟内如显色，与 对照液（精密称取水杨酸0.1g，加水溶解后，加冰醋酸1ml ，摇匀， 再加水使成1000ml，摇匀，精密量取1ml ，加乙醇1ml 、水48ml与 上述新制的稀硫酸铁铵溶液1ml ，摇匀）比较，不得更深(0.1％) 。