钙敏感受体在心肌梗死病人外周血T淋巴细胞上的表达和作用及其与信号转导通路的关系
钙敏感受体的研究及临床应用进展
钙敏感受体的研究及临床应用进展曾敬雅;孙轶华【摘要】目前,关于治疗受体蛋白异常疾病的研究不断深入,研究的主要靶点之一是G-蛋白偶联受体(GPCRs).GPCRs是受体蛋白中的一类大家族,GPCRs结构的特殊性为疾病的诊疗开辟了新的思路.钙敏感受体(CaSR),作为GPCRs中的一员,自1993年首次发现以来,已经在很多组织器官中进行了研究,发现其表达量的改变与某些疾病的发生发展相关联.另外,针对CaSR的相关试剂已在一些疾病中进行了初步尝试.本文就CaSR与疾病的关系及其在疾病诊疗中的潜力进行了综合叙述.【期刊名称】《标记免疫分析与临床》【年(卷),期】2015(022)002【总页数】5页(P145-148,151)【关键词】G-蛋白偶联受体;钙敏感受体;受体疾病【作者】曾敬雅;孙轶华【作者单位】哈尔滨医科大学附属第二医院检验科,黑龙江哈尔滨150086;哈尔滨医科大学附属第二医院检验科,黑龙江哈尔滨150086【正文语种】中文1 G-蛋白偶联受体(GPCRs)G-蛋白偶联受体(G-protein coupled receptors，GPCRs)是7次跨膜受体，是迄今为止发现的最大的、最多样化的细胞膜受体超家族，介导了多种细胞内信号分子的转导过程。
这些受体拥有相似的埋藏在细胞膜内的跨膜区域，但是暴露在细胞内外的部分千差万别。
GPCRs家族的发现及研究大大提高了人类对细胞信号转导途径的认识，一方面拓展了人们对许多生命现象的理解，另一方面也为疾病的治疗提供了新的药物靶点。
很多人类疾病与GPCRs相关，因此它是制药行业重点研究的对象。
据统计，在所有现代药物中，有50%以上是以GPCRs作为靶点的［1］。
作用于GPCRs的药物对疼痛认知障碍、高血压、胃溃疡、鼻炎、哮喘等各类疾病均具有良好的治疗作用，深入研究GPCRs的特性，可以进一步研发出更好的新药。
以GPCRs为靶点的著名药物包括卡维地洛、雷尼替丁、奥氮平、替加色罗、盐酸西那卡塞、氯雷他定等等。
钙离子钙离子通道与载体
钙离子、钙离子通道与T淋巴细胞的激活于路遥121140072摘要：钙离子通过钙离子通道调节其浓度影响T淋巴细胞的激活。
关键词：钙离子钙离子通道钙离子振荡 T淋巴细胞激活Abstract：Calcium ions through calcium channels adjusting its concentration to affect the activation of T lymphocytes. Keywords：Calcium Calcium channel Calcium oscillation T lymphocyte Activation1.钙离子在这一课题下我们首先要提到的是钙离子。
钙离子【Ca2+】对维持肌体细胞正常生理功能来说非常重要，因为Ca2+可以帮助肌细胞、神经细胞等维持细胞功能。
大量的实验已经证实Ca2+是一种普遍存在的第二信使，在细胞内传递信息并调控一系列生命过程（比如基因转录、蛋白质的合成与分解、细胞的生长与凋亡等【1-3】）。
细胞内Ca2+的持续振荡（详见3.钙离子振荡）是细胞赖以生存的基础，一旦Ca2+的振荡消失，或者振幅和周期发生比较大的变化，细胞就可能发生病变，甚至死亡。
一般有两种途径可以提高细胞内Ca2+的浓度:一是通过胞内Ca2+库释放Ca2+，二是细胞外的Ca2+通过细胞膜上的Ca2+通道进入细胞。
在很多类型的细胞中，当细胞外环境的Ca2+被移除后，细胞质中Ca2+的振荡会随之消失，这表明，细胞膜上的Ca2+通道（详见2.钙离子通道）和细胞质中的Ca2+振荡有着密切的关系【4】。
对于兴奋性细胞【能够接受刺激并且产生动作电位的细胞】来说，位于细胞膜上的通过电压调控的Ca2+通道【VDCC】是细胞外Ca2+流入细胞的主要途径；但是大部分非兴奋性细胞没有VDCC，CRAC通道是迄今为止所发现的非兴奋性细胞中细胞外Ca2+流入细胞内的主要途径【5-6】◎，而细胞膜上持续的Ca2+流保证了信号的正常传播【7】。
钙敏感受体在大鼠心肌肥大中的作用及相关机制的开题报告
钙敏感受体在大鼠心肌肥大中的作用及相关机制的开题报
告
一、研究背景和意义
心肌肥大是一种心脏病理状态，表现为心肌细胞体积增大、基质积累和心肌功能降低等症状。
慢性心肌肥大是导致心力衰竭的主要因素之一，对于心脏的健康和长寿
具有重要意义。
钙敏感受体是一种位于肌细胞膜上的重要蛋白质，能够调节细胞内钙
离子浓度，参与调控心肌肥大的机制尚不清楚。
因此，对于钙敏感受体在心肌肥大中
的作用及其调节机制的研究，对于心力衰竭的预防和治疗具有重要意义。
二、研究目的
本研究旨在探究钙敏感受体在大鼠心肌肥大中的作用及相关机制，为心力衰竭的治疗和预防提供理论依据。
三、研究内容和方法
本研究将使用大鼠心肌肥大模型，观察不同剂量钙敏感受体抑制剂对心肌肥大程度、心脏功能和细胞信号途径的影响。
实验中，将通过慢性压力负荷对大鼠心肌进行刺激，诱发心肌肥大。
然后，将使用不同剂量的钙敏感受体抑制剂，观察心肌肥大程度、心脏功能以及信号通路的变化。
同时，将使用分子生物学技术分析心肌细胞内相关蛋白质的表达及信号途径的变化。
四、预期结果和意义
通过本研究，预计能够揭示钙敏感受体参与心肌肥大的作用及其调节机制。
这将有助于阐明心肌肥大的病理机制，提高对心力衰竭的治疗和预防水平。
人心肌细胞缺血再灌注损伤后ERK、Akt的表达以及黄芪多糖的干预作用
人心肌细胞缺血再灌注损伤后ERK、Akt的表达以及黄芪多糖的干预作用范宗静;谢连娣;崔杰;吴旸;蔡玲玲【摘要】Objective To investigate observe the expression of protein kinase B(PKB or Akt) and extracellular signal-regulated kinase 1/2(ERK1/2)in human cardiomyocytes during ischemia-reperfusion injury and its relationship with cell apoptosis,so as to explore the protective mechanism of Astragalus Poly-saccharides on myocardial cells. Methods The human cardiac microvascular endothelial cells(HCMEC) were cultured. The myocardial ischemia-reperfusion injury model was established by the hypoxia and reoxy-genation to stimulate cellular damage. Then APS was used to intervene. The model rats were divided into HCMEC normal control group (control group), HCMEC injury group (injury group), HCMEC injury group + low concentration drug (low drug group), HCMEC injury group + medium concentration drug (medium group),HCMEC injury group + high concentration drug (high drug group). The expressions of ERK,p-ERK,Akt were detected by western blot, flow cytometry was used to analyze cell cycle and cell apoptosis. Results Flow cytometry results showed that the apoptosis rate of control group was 5.43%;the apoptosis rate of injury group was 92.88% which was the most obviously;apoptosis rate of high drug group was 29. 78%; apoptosis rate of low drug group and medium drug group was 12. 15% and 6. 08% respectively. Western Blot results showed that: compared with the control, the phosphorylationlevels of p-ERK,ERK,and Akt were significantly decreased in each group (P<0.05); compared with the injury group,the phosphorylation levels of p-ERK, ERK, and Akt in low drug group, medium drug group and high drug group were increased(P<0.05);compared with low drug,the phosphorylation levels of p-ERK, ERK,and Akt in the medium group were increased (P<0.05). Conclusion Astragalus polysaccharides can improve the activity of ERK and Akt after ischemia reperfusion injury in human heart muscle cells and reduce apoptosis.%目的观察人心肌细胞在缺血再灌注损伤过程中蛋白激酶B(protein kinase B,PKB)又称Akt,与细胞外信号调节激酶1/2(extracellar signal-regulated kiase,ERK1/2)的表达规律及其与细胞凋亡的关系,以探索黄芪多糖产生心肌保护作用的机制.方法培养原代人心脏微血管内皮细胞(human cardiac microvascular endothelial cells,HCMEC),通过缺氧再复氧刺激细胞损伤,模拟缺血再灌注损伤的实验技术平台,建立缺血再灌注损伤模型,继而采用黄芪多糖进行干预,随机分为:HCMEC正常对照组(对照组)、HCMEC损伤组(损伤组)、HCMEC损伤组+低浓度的药物(低药物组)、HCMEC损伤组+中浓度的药物(中药物组)、HCMEC损伤组+高浓度的药物(高药物组),进而采用Western Blot方法检测ERK、p-ERK、Akt蛋白表达情况,采用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡情况.结果从流式细胞仪结果显示:对照组为5.43%;损伤组细胞凋亡程度增高最明显,为92.88%;高药物组次之,为29.78%;低药物组及中药物组细胞凋亡程度较轻,生存状态较佳,分别为12.15%和6.08%.Western Blot结果显示:与对照相比较,p-ERK、ERK及Akt磷酸化水平在各组中表达均显著下降(P<0.05);与损伤组相比,低药物组、中药物组和高药物组三组p-ERK、ERK及Akt磷酸化水平升高(P<0.05);与低药物组相比,中药物组中p-ERK、ERK及Akt磷酸化水平升高(P<0.05).结论黄芪多糖可提高人心肌细胞缺血再灌注损伤后ERK、Akt的活性,减少细胞凋亡.【期刊名称】《环球中医药》【年(卷),期】2018(011)002【总页数】4页(P207-210)【关键词】黄芪多糖;缺血再灌注损伤;细胞凋亡;ERK;Akt【作者】范宗静;谢连娣;崔杰;吴旸;蔡玲玲【作者单位】100078 北京中医药大学东方医院心血管内科;100078 北京中医药大学东方医院心血管内科;100078 北京中医药大学东方医院心血管内科;100078 北京中医药大学东方医院心血管内科;100078 北京中医药大学东方医院皮肤科【正文语种】中文【中图分类】R285.5心肌缺血再灌注损伤(myocardial reperfusion injury，MRI)是药物溶栓、经皮冠状动脉成形术、冠状动脉旁路移植术后严重并发症之一，以往许多研究显示，缺血的心肌再灌注后，不仅功能没有恢复，反而使心肌细胞代谢障碍及结构损伤进一步加重，包括心肌顿抑、再灌注心律失常和增加心肌梗死面积等，近年来国内外学者研究发现，MRI与一些心肌细胞的信号转导通路密切相关，许多药物的心肌保护作用都是通过这些信号转导通路来实现的，在MRI过程中发挥着重要的保护作用[1-3]。
心肌缺血时钙调蛋白信号转导途径的变化与对心脏的影响_王文广
＊ 国家自然科学基金资助课题 (编号 :30470714) 作者单位 :华中科技大学同 济医学 院附属 同济医 院心内 科 (湖 北武
汉 430030) 作者简介 :王文广 (1978 - ), 男 (汉族 ), 山东聊 城人 , 硕士研 究生 , 主要研究方向为心脏电生理 。
急性 心梗 死后 2个 月 , 缺 血引 起的 L型钙 电流 (ICa, L) 的下降逐渐恢复 , 但由于 钾通道 活性的 降低 , 可导 致动作 电 位时程相对延长 , ICa, L在激活 和失 活的 重叠区 形成 “窗 流 ”, 引起震荡电位 ;另外 , ICa, L的下降减少了钙 离子对 SR的 钙调 节作用 , 造成 细胞 内 钙离 子 积聚 , Ca2 +-CaM复 合 物生 成 增 加 , 易导致早期后除极和 晚期后 除极 , 从而更 易于 诱发触 发 活动所致的室性心律 失常 [ 5, 11] 。
Meerson等 [ 15] 在离体大鼠 缺血再灌 注心脏上证 实 , CaM 抑制剂比钙通道阻滞 剂能更 好地抑 制心肌 缺血时 室性心 律 失常的发生 :CaM抑制 剂 TFP缩 短室 性心 律失 常的 发生 时 间达 5倍 , 而维拉帕米只缩短 2.5倍 ;TFP在再 灌注时 减少 室性心动过速 (简称室速 )和心室颤动 (简称室颤 )的发 生分 别为 2倍和 35倍 , 而维拉帕米对这类心律失常无效 。 Barron 等 [ 16] 在麻醉的大鼠 上观察 到用 TFP和 W-7 均 能减 轻冠 扎 5 min所致的室颤 , 说明 CaM在心肌缺血引起的心律失常 中发 挥重要作用 。
钙敏感受体参与MAPK通路诱导细胞凋亡信号传导通路的机制研究
时 Ｃ Ｒ的 表 达 情 况 ； ａ ＭＴ 法 和 流 式 细 胞仪 观 察 细 胞 凋 亡 ； ｓｅｎＢｏ 检 测 心 肌 组 织 ， 时 还 检 测 了 Ｔ Ｗｅｔｒ ｌｔ 同 培 养 心 肌 细 胞 中磷 酸化 Ｊ ＮＫ 和 ｐ ８的 表 达 。结 果 心 肌 缺 血 ／ 灌 注 和 加 入 Ｃ Ｒ激 动 剂 时 Ｃ Ｒ 的 表 ３ 再 ａ ａ
ｔ Ｓ ６０ ２ ｔ Ｐ ０ １ ５孵 育 ３ ｎ后 ， 理 同 Ｇ Ｃ３ Ｍ ０ｍｉ 处 ｄ １ ＋Ｎｉ １ Ｃ２
Ｗｉ ａ 仔 鼠（ ｓ ｒ ｔ 出生 １ ３ ） ～ 天
＋ Ｃ Ｃ２ ， Ｐ ０ １ ５为 Ｊ Ｋ１Ｊ ｄ １组 Ｓ ６０ ２ Ｎ 、ＮＫ２的 抑 制 剂 ； ） ５ Ｓ ２ ３８ Ｂ ０ ５ ０组 ： 处 理 ３ ｉ 入 １ｔ Ｓ ２ ３ ８ 孵 在 ０ｒ ｎ加 ａ Ｍ Ｂ ０ ５ ０ ｔ
培 养心肌 细胞数 达 １ Ｏ ×１ 时 ， 正常 培 养 液换 成无 将 血 清无糖 的培 养液 并 通 入 ９ 的 Ｎ ５ 。和 ５ Ｃ ４ Ｏ。 ０ ａ ｎ 然后 再更 换成 正 常培 养 液 ， 入 Ｃ 孵 箱继 续 ｒｉ 。 放 Ｏ。 培 养 ２ｈ ３ Ｇ Ｃ 。 ； ） ｄ １＋Ｎｉ１＋Ｃ Ｃ ２ ： 理 同 Ｎｉ１ Ｃ２ ｄ １组 处 Ｃ２
【 键 词 】 钙 敏 感 受体 缺 血 一 再 灌 注 损 伤 细 胞 凋 亡 来自细 胞 色素 Ｃ Ｊ 关 ＮＫ
钙敏感 受 体 （ａｃ ｍ—ｓｎ ｉｇ ｒｃ ｔｒ Ｃ Ｒ） ｃｌ ｕ ｉ ｅ ｓ ｅｅｏ ， ａ 具 ｎ 有七 个跨 膜 区 的 Ｇ 蛋 白耦联 受体 ， 它通 过激 活 Ｐ Ｃ Ｌ 系统 引起肌 浆 网释 放 钙 从 而 引起 细 胞 内钙 的 升 高 。 缺血 心肌恢 复血供 后 ， 可引起 心 肌缺 血 再灌 注 损伤 ， 其发 生 机 制 尚未 完 全 清 楚 。心 肌 缺 血 再 灌 注 损 伤 时 ， ａ 的表 达 有 何变 化 ？Ｃ Ｒ在 心 肌 缺血 再 灌 注 ＣＲ ａ
SOC通道的重要元件Orai蛋白在T淋巴细胞中的作用
SOC通道的重要元件Orai蛋白在T淋巴细胞中的作用摘要】钙离子在许多类型的细胞中作为第二信使，包括T淋巴细胞。
细胞中的基因转录、蛋白质合成与分解以及细胞的生长与凋亡等等都与钙离子的活动有关。
钙库操控Ca2+通道（SOC：store-operated calcium）是细胞中介导胞外Ca2+进入细胞内的重要通道之一。
在2005年和2006年，Stim1蛋白和Orai1蛋白相继被发现，人们知道了SOC通道主要由位于内质网上的能感受Ca2+浓度变化的Stim蛋白和细胞膜上Orai蛋白共同构成。
【关键词】SOC Orai T淋巴细胞【中图分类号】R39 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）32-0201-02在T淋巴细胞中，静息状态下细胞浆的钙离子浓度较低，当受抗原刺激后激活PLC（磷脂酶C）。
PLC将PIP2（磷脂酰肌醇-4、5-二磷酸）分解为IP3（肌醇-1，4，5-三磷酸）。
IP3受体位于内质网表面，激活后可释放钙离子进入细胞浆。
以上过程被称为“内钙消耗”，转而激活细胞膜上的SOC通道使外钙内流。
1．Orai蛋白Orai1是一个32.7kD的小分子蛋白有四个跨膜结构域，氨基，羧基末端朝向细胞浆。
通过生化分析、免疫共沉淀和定点突变等试验证实了Orai1通过同源低聚物形成CRAC通道的孔道。
进一步的实验证明了一个有功能的CRAC通道需要Orai形成四聚物。
一个研究团队利用化学分子交联技术用绿色荧光蛋白标记Orai1，显示Orai1在静息转态下以二聚体形式存在。
当Orai1与Stim1结合后引起Orai1二聚体的再次二聚化，形成具有活性的CRAC四聚体通道。
Orai1有两个同源家族Orai2和Orai3，那么Orai2和Orai3是否也在T淋巴细胞中形成功能性的CRAC呢？在体外过表达系统中，Orai2和Orai3都能够引出Orai电流。
在T细胞发育和分化过程中可能不同家族的Orai蛋白的表达和功能具有一定差异。
钙调神经磷酸酶活化T细胞核因子信号通路在心血管发育中的作用
促进冠状血管、成熟的心脏纤维基质形成的异源群体，是普 氏纤维分化和心肌细胞胶原合成的必要条件。Ｇｉｔｔｅｎｂｅｒｇｅｒ— ｄｅＧｒｏｏｔ等＂１‘研究发现ＥＰＤＣ功能障碍与成人心脏病有关， 如三尖瓣下移畸形、心律失常、心肌病。ＥＰＤＣ在缺血性损 伤后，有潜在的再活化基因表达发育和帮助新生血管形成、 心肌细胞存活的作用１ ３２］。ＮＦＡＴｃｌ在小鼠和鸡胚的心外问 皮缅跑（ｐｒｏｅｐｌｃａＭｉｕｍ。ｒＥ）表达。ＰＥ是覆盖在小鼠横膈或 鸡静脉窦上的一Ｃ，）Ｉ－问皮细胞的产物，它能转移入心肌形成心 外膜。心外膜细胞的亚型经过ＥＭＴ，侵入心外膜层和心肌 层成为ＥＰＤＣ。ＮＦＡＴｃｌ在心内膜垫内皮纽胞表达，经过 ＥＭＴ移人心内膜垫。ＥＰＤＣ有助于形成的冠状血管和胶原
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胞。由于心内膜垫是形成心脏房室隔及瓣膜的前体结构，因 此ＮＦＡＴｃｌ敲除小鼠会出现心脏室间隔缺损及主肺动脉瓣 的严重缺陷。从而胚胎在Ｅ１３．５后由于心力衰竭而流产。 ＮＦＡＴｃｌ基因敲除的小鼠胚胎将在Ｅ１４．５由于缺乏心内膜垫
增长和重塑而死亡。
四、ｃａＮ／ＮＦＡＴｃｌ信号通路与血管内皮细胞的发育 ＮＦＡＴｃｌ介导心脏心内膜ＶＥＧＦ信号传导通路，与心内 膜垫的形成有关口“。研究表明，在心脏正常发育过程中血 管生成前ＶＥＧＦ便开始起作用【２６ｊ，而在心内膜垫形成区域 表达ＶＥＧＦ的内皮细胞是惟一的内皮细胞向问质细胞转化 的细胞类型。２“，而且通过转基因动物的研究发现，转基因小 鼠导致其ＶＥＧＦ表达增加或减少均可以引起先天性心脏病 的发生。钙离子信号、ＶＥＧＦ／ＮＦＡＴｃｌ表达被证明是在心内 膜内皮细胞向间质细胞转化过程中起重要作用、２…。 ＮＦＡＴｃｌ可在胚胎期的外周血管组织中表达，调控血管 平滑肌细胞和血管肉皮细胞的发育。ＮＦＡＴｃＩ敲除的裸鼠往 往表现出血管组织的分解和血管壁的不完整性，从而导致其 在胚胎期的死亡”Ｊ。在ＶＥＧＦ对血管内皮细胞的作用中， ＮＦＡＴｃｌ也起着关键作用，ＶＥＧＦ作用于内皮绍胞后，ＮＦＡＴｃｌ 进人细胞核内，与环氧化酶一２（ＣＯＸ一２）启动子上的特定位点 相结合，激活ＣＯＸ一２的转录，而ＣＯＸ一２是前列腺素合成的关 键酶，前列腺素在血管内皮的迁移和血管形成过程中是一种 必不可少的物质。 五、ＣａＮ／ＮＦＡＴｃｌ信号通路与冠状血管、成熟的心脏纤 维基质形成 Ｚｅｉｎｉ等¨叫研究证明ＣａＮ／ＮＦＡＴｃｌ信号通路在血管丛形 成期间，是冠状血管发生的必要条件。ＮＦＡＴｃｌ促进心外膜