免疫系统的免疫原性分析
免疫系统的免疫原性分析
免疫系统是人体内一个非常重要的系统，它可以识别并攻击各种不同类型的病原体，包括病毒、细菌等等。
为了更好地了解这个系统的工作原理，我们需要进行免疫原性分析。
所谓免疫原性分析，就是通过一系列的实验技术，来识别和描述不同抗原的免疫反应特性。
在这个过程中，我们可以探究抗原与免疫系统之间的相互作用，以及免疫系统如何进行攻击。
首先，我们需要了解什么是抗原。
抗原是一种具有生物学活性的分子，可以引起免疫反应。
抗原的特异性主要由其分子结构决定，包括其化学性质、大分子量、复杂性等等。
当机体内出现抗原后，免疫系统会开始产生抗体或者细胞介导的免疫反应，来攻击并消灭这些抗原。
现在我们来介绍几种常见的免疫原性分析技术。
第一种是ELISA技术。
ELISA 技术指的是酶标记免疫吸附测定法，通过在微孔板上固定特定的抗原或抗体分子，并使用酶标记来进行检测。
这种技术可以进行对多种抗原或抗体的检测，并且非常敏感和特异性。
第二种是流式细胞术。
流式细胞术是一种通过激光光束扫描流过单个细胞的方法来进行细胞的鉴定和分析。
通过使用特定的荧光染色剂，可以使不同类型的细胞发出不同的荧光信号，从而识别并分离它们。
这种技术可以精确地分析免疫细胞的特异性和灵敏性，并且可以进行高通量分析。
第三种是免疫印迹技术。
免疫印迹技术是一种用于检测蛋白质的方法，通过在聚丙烯酰胺凝胶上电泳分离蛋白质，再使用抗体进行特定的检测。
这种方法可以检测特定的蛋白质，可以用于确定抗原的分子量、表达量和空间构型等等。
最后，我们需要了解一些免疫原性分析的应用。
免疫原性分析相对于传统的免疫学实验，具有快速、高通量、自适应等优势。
它可以被广泛应用于医学诊断、新
药研发、生物制品生产等领域。
例如，在疫苗研究中，可以通过对病原体特定蛋白质的免疫原性分析，来确定有效的疫苗成分，提高疫苗的生产质量和免疫效果。
总之，免疫原性分析作为研究免疫系统的重要方法之一，在医学领域中具有广泛的应用前景。
未来，随着技术的不断进步，我们相信免疫原性分析将会变得更加高效、准确和便捷。
临床免疫学基础
免疫试剂常用术语
9、开瓶有效期
概念：某试剂在开瓶后，能用于正常检测的时间段。
例：某试剂开瓶后在30天内都能正常使用，那该试剂开 瓶有效期为30天。
校准常用术语
1、校准品
概念：通过参考方法或者参考物质而获得具体浓度值的物质。
用途：对检测系统进行修正。
校准常用术语
2、溯源
概念：通过一条具有规定不确定度的不间断比较链,使测量结果 或计量标准的值能够与规定的参考标准,通常是国家计量基(标) 准或国际计量基(标)准联系起来的特性。
校准常用术语
2、溯源
研
国际单位
究
机
一级参考物质
构 二级参考物质
参
考
实
工厂主校准品
验
试剂盒内校准
室
品
医
院
常规样本
检
验 科
结果
一级参考方法 二级参考方法
工厂选定的 检测方法 工厂标准检测法
医院常规检测法
不确定度
质控常用术语
1、靶值
概念：移除无关值后,参与的全部试剂反应的平均值。
2、标准差
概念：总体各单位标准值与其平均数离差平方的算术平 均数的平方根。它反映组内个体间的离散程度。
• 免疫学基础知识
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免疫分析的基本原理
抗原
抗体
Y
免疫分析是根据抗体与特异性的抗原结合的原理进行定性/ 定量检测的技术。
免疫反应核心：抗原抗体反应
抗原
抗原（antigen）：能够刺激机体产生免疫应答， 并能与免疫应答产物抗体等在体内外发生特异性免疫 反应的物质。其具有诱导免疫应答的能力（免疫原性） 和与免疫应答产物特异性反应的能力（抗原性）。常 见的抗原包括细菌、病毒、异种动物血清、粉尘、花 粉等。
免疫原性名词解释
免疫原性名词解释免疫原性是指一种物质（免疫原）引起机体免疫反应的能力。
免疫原性是免疫系统识别外来物质并作出相应应答的基础。
免疫原是指能够激发免疫系统产生抗原特异性免疫应答的物质，通常是由多个化学基团组成的大分子。
免疫原可以分为两类：自身免疫原和异种免疫原。
自身免疫原是指机体内部产生的物质，如肿瘤抗原、试剂抗原等。
异种免疫原是指来自其他物种的物质，如病原微生物的蛋白质、细胞表面分子等。
免疫原可以进一步分为完整免疫原和不完整免疫原。
完整免疫原是指能够诱导机体产生免疫应答的免疫原，如病原微生物的细胞表面蛋白质。
不完整免疫原是指需要通过结合其他分子才能诱导机体产生免疫应答的免疫原，如抗原肽和抗原多糖。
免疫原性是免疫系统识别免疫原的能力，通常通过适应性免疫系统的抗原呈递和抗原递呈细胞来实现。
抗原呈递是指将免疫原分解为小片段，并通过与适应性免疫系统中的特异性受体结合，将其展示给免疫系统中的淋巴细胞。
抗原递呈细胞主要包括树突状细胞、巨噬细胞和B淋巴细胞，它们表面有与适应性免疫系统中的受体结合的分子，如MHC分子。
当适应性免疫系统中的淋巴细胞与抗原呈递细胞结合时，免疫反应就会被激活，这将导致免疫细胞增殖和分化，以及抗体产生等一系列免疫应答。
免疫原性是免疫系统识别免疫原的重要特征，但并不是所有物质都具有免疫原性。
许多化学物质和低分子量物质不具有免疫原性，因为它们无法激活适应性免疫系统。
此外，有些物质具有过敏原性，即能够引起过敏反应。
过敏原是指能够激发机体异常免疫反应，导致过敏症状发生的物质。
过敏原通常是与免疫系统中的特异性抗体结合，并引发机体异常的免疫反应，如过敏性鼻炎、荨麻疹等。
总之，免疫原性是指一种物质引起免疫反应的能力和特性。
免疫原通过与免疫系统中的特异性受体结合，诱导机体产生免疫应答。
免疫原性在理解免疫系统的正常功能和研究疾病的发生发展方面具有重要的意义。
三种hib结合疫苗的免疫原性的分析的分析研究
４
重庆医科大学硕士研究生学位论文
ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ４ ｗｅｅｋｓ ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｌａｓｔ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ（Ｐ＜Ｏ．０１）．Ｃｏｍｐａｒｅｄ
重庆医科大学硕士研究生学位论文
三种Ｈｉｂ结合疫苗的免疫原性研究
摘要
目的：以大鼠为模型，对市场上常见的三种Ｈｉｂ结合疫苗的免疫原 性进行研究，比较三种疫苗产生的抗体水平，了解几种疫苗之间免疫原 性是否具有差别，为儿童选择接种Ｈｉｂ疫苗提供可靠的依据，为将Ｈｉｂ疫 苗纳入计划免疫提供一定的基础。
方法：选择ＳＰＦ级５天龄的ＳＤ大鼠共１２８只，清洁级动物间母乳 喂养，２１天龄左右离乳。将５ｄ龄乳鼠随机分组，共四组。包括实验组 ３组（贺新立适组、安尔宝组、云南玉溪组），３５只／组，对照组（生理 盐水组）１组，２３只／组。在５ｄ，１９ｄ，２６ｄ龄时给予相应疫苗（生理盐 水）２０９ｌ皮下免疫注射。获得初次免疫前及末次免疫后ｌ周，２周，４ 周的血清。使用ＥＬＩＳＡ法测定各组血清中Ｈｉｂ ＩｇＧ抗体。比较每组注射 疫苗前后的抗体水平，比较各组间的抗体水平。
ａｎｔｉｂｏｄｙ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｇｒｏｕｐｓ：ｔｈｅｒｅ ｉｓ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｇｒｏｕｐｓ ｂｅｆｏｒｅ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ（ｐ＞Ｏ．ｏ １）．１ ｗｅｅｋ ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｌａｓｔ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｒｏｕｐｓ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ（Ｐ＜Ｏ．０ １），ＨＩＢＥＲＩＸ ｇｒｏｕｐ ｈａｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｗａｓ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｗｉｔｈ ＡＣＴ－ＨＩＢ ｇｒｏｕｐ（ｐ＞ Ｏ．０１），ｂｕｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｅ Ｙｕｎｎａｎ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜Ｏ．０１），ＡＣＴ－ＨＩＢ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ Ｙｕｎｎａｎ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｓｉｍｉｌａｒ（ｐ＜Ｏ．０１）．２ ｗｅｅｋｓ ａｎｄ ４ ｗｅｅｋｓ ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｌａｓｔ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ，ＨＩＢＥＲＩＸ ｇｒｏｕｐ ｓｔｉｌｌ ｈａｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｃｏｎｃｅｎｔｒｍｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｇｒｏｕｐｓ（ｐ＜Ｏ．０ １），ＡＣＴ－ＨＩＢ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ Ｙｕｎｎａｎ ｗｅｒｅ ｓｔｉｌｌ ｈａｄ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（ｐ＜Ｏ．０１）．
7.免疫分析1
20
免疫应答的动力学
当抗原引入动物的有关组织时最初引起淋巴细胞的分化，
特别是在淋巴结和脾脏中的淋巴细胞。然后，一种称之为浆
细胞的抗体生成细胞便会增加。在注射入抗原和在血清中发
现抗体之间存在一个潜伏期，之后抗体的浓度增加到最大，
而后开始降低。如果抗原对动物是全新的，动物则表现出慢
的响应(初次应答)．但若动物以前遇到过这种抗原，则会出
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五种免疫球蛋白的比较
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抗体的制备
多克隆抗体：从特定的抗原免疫动物中提取的含有抗体的 血清称之为抗血清。在许多分析应用中并不需要把抗体从 血清中分离出来。这种抗血清会因不同动物，甚至是同种 动物的不同的个体由于遗传性的差异，而导致所得抗体并 非均一物质，特别是抗体的特异性及亲和力几乎每批产品 都不相同，通常称这类抗体为多克隆抗体。
除了上述考虑之外，任何一种分离方法都应简单、快速、 耗费低、易于自动化，并且适用于较多的分析对象。
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8.2.2 分离方法的分类
免疫分析中常用的分离方法
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二抗
抗动物种的二抗是在20世纪70年代末80年代初开 始使用的， 二抗是专门针对-球蛋白的一种抗体， 也称为抗抗体。二抗的使用，使免疫分析得到了巨 大的进步。
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(3)抗原的免疫原性还与免疫原的分子表层基团有关， 对蛋白质抗原。它还与氨基酸的组成相关。例如， 多聚赖氨酸无免疫原性，在其外层接上一层丙氨酸 或甘氨酸，它仍无免疫原性，但若外层接的是酪氨 酸，则它会表现出免疫原性．由此可见，带芳香环 氨基酸，或者说结构较为复杂的氨基酸对免疫原性 有重要的贡献。
择哪一种方法与抗体的用途、对抗体纯度的要求、 及抗体的种类和来源有关，如抗体可以来源于血清， 培养上清液或腹水。
暨大普通生物学-11免疫系统与免疫功能
9. 单克隆抗体是实验室和临床中的强有 力的工具
单 克 隆 抗 体 技 术
（三）免疫系统的功能异常——免疫 系统疾病
1. 免疫系统的过度反应
（1）过敏反应（变态反应） 可分4种类型，常见的为速发型： 打喷嚏，哮喘，风疹等。 过敏源：花粉，地毯灰尘，食物中某些 蛋白质，蜜蜂刺蛰。
组胺的释放引起一系列过敏反应
（2）自身免疫病 系统性红斑狼疮 类风湿性关节炎 依赖胰岛素的糖 尿病综合症 硬化病 肌无力症
系统性红斑狼疮
2. 免疫系统功能减退
（1）先天性免疫缺陷病
婴儿缺乏B淋巴细胞或T淋巴细胞。
这个名 叫David的 男孩已近 10岁了， 他生下来 就在隔离 室中长大。
（2）艾滋病（AIDS）
AIDS — 获得性免疫缺乏综合症 Acquired Immune Deficiency Syndrome
★ 补体的特点： ► 存在于体液中（包括血清） ► 一系列的蛋白质分子： C1 ~ C9； B因子（酶原分子）； D因子（酶原分子） ► 不是抗体（不含Ig） ► 正常情况下无活性
补体反应
补体可通过2条途径激活：经典途径和 旁路活化途径，最后形成破膜复合体 （ C5b - C6，7，8，9 ）。
补体（无活性） 与细胞性（细菌）抗原或抗体结合
补体激活
补体互相结合(极复杂的过程，级联反应)
破膜复合体
► 破膜复合体可使靶细胞溶解
（3）干扰素（interferon， IFN） 为机体细胞所产生的能抵抗病毒感染的
一组蛋白质。因具有干扰病毒复制的作用 而得名。可分为 α、β、γ3种类型。
型
型
什么是受体？ 识别和结合 转导信号 产生相应的生物效应
抗原受体： ► 淋巴细胞表面均有 ► 能与抗原决定簇互补、结合(特异性 ) ► 种类很多（数以百万计）
免疫
免疫（immunity）是机体识别“自己”, 排除“异己（非己）”过程中所产生的生物学效应的总和，正常情况下是维持内环境稳定的一种生理性防御功能。
免疫学（immunology）研究机体免疫系统结构和功能的独立学科免疫原性（immunogenicity）指能刺激机体产生免疫应答（诱导产生抗体或效应T细胞）的特性。
免疫反应性指与抗体或效应T细胞发生特异性结合的能力。
免疫防御（immune defense）指机体对外来微生物及其毒素的免疫保护作用；应答过强或持续过长→超敏反应；应答过低或缺如→免疫缺陷病。
免疫自稳(immune homeostasis)免疫系统通过调节网络实现免疫系统功能相对稳定；自稳机制发生异常（应答过强或过弱）→自身免疫病。
免疫监视（immune surveillance）指免疫系统识别畸变和突变细胞并将其清除的功能；免疫监视功能异常→肿瘤发生或持续病毒感染。
抗原(antigen) 可被T、B淋巴细胞识别，启动特异性免疫应答，并可与应答产生的抗体和效应细胞特异性结合的物质。
完全抗原：同时具有免疫原性和抗原性的物质。
半抗原(hapten) PG仅具有抗原性而无免疫原性的物质。
载体(carrier) 与半抗原结合而赋予其免疫原性的物质。
抗原决定基（antigenic determinant,AD）又称表位（epitope）, 是抗原分子中的特殊化学基团，其性质、数目和空间构型决定了抗原特异性。
是抗原与TCR/BCR抗体特异性结合的基本单位。
超抗原（superantigen,SAg）某些抗原物质，极低浓度即可激活机体2％－20％T细胞克隆产生极强的免疫应答，此抗原为超抗原。
免疫佐剂：指与抗原同时或预先注入机体后，能增强该抗原的免疫原性或改变机体免疫应答类型的物质，简称佐剂。
常用弗氏佐剂。
胸腺依赖性抗原（thymus dependent antigen, TD-Ag）：由B细胞表位（半抗原）和T细胞表位（载体）组成，绝大多数蛋白质抗原属此类。
生物技术药物免疫毒性和免疫原性
额外的免疫毒性试验方法
• 免疫功能检测
hypersensitivity 目前预测IV型变态反应
autoimmunity host resistance
Buehler试验、豚鼠最大化试验 （GPMT）、小鼠耳肿胀试验、小鼠局部 淋巴结试验(LLNA)
PLNA（报告抗原TNP-Ficoll、TNPOvalbumin）
%
免疫细胞表型检测
—CD4/CD8比例
CD4/CD8
1.8 1.6 1.4 1.2
1 0.8
比 0.6 例
0.4 0.2
0
对照组
低剂量
中剂量
高剂量
图 猕猴iv 4周 LHRHA-PE38后外周血CD4/CD8比例
免疫毒性试验结果分析
• 统计学意义与生物学意义（尤其单一指标） • 变化程度 • 与剂量/暴露关系 • 与拟用临床剂量的关系 • 疗程关系 • 涉及动物种属数量和受影响的终点 • 可能继发于其他因素 (e.g., stress,） • 可能的细胞靶点和（或）作用机制 • 引起这些变化的剂量与产生其他毒性的剂量关系 • 可逆性
• 放射免疫沉淀法（RIP） 液相法，中等或高通量水平
• 表面等离子体共振 液相法，不需结合物（酶标记抗体），能检测到 不同亲和力的抗体和各亚型抗体
• 电化学发光法 液相法，可检测各种抗体亚型
抗体检测方法考察
• 方法学考察
—灵敏度：500-1000ng/ml，低滴度抗体检出 —受试物干扰：如有文献报道，如血清中受试物 浓度大于0.15µg/ml，则难以检测到抗受试物抗体。 一般从1：10开始稀释或对样品进行处理。长效? —精确度：利用阳性对照品重复测量 —阴性对照血清一般需从15只动物或50人中抽取
免疫原名词解释免疫学
免疫原名词解释免疫学
免疫学是研究生物体对抗原物质免疫应答性及其方法的生物-医学科学。
免
疫应答是机体对抗原刺激的反应，也是对抗原物质进行识别和排除的一种生物学过程。
中文名免疫学外文名 immunology学科性质理工科原意免除税收、免于疫患释义免疫学是研究生物体对抗原物质免疫应答性及其方法的生物医学科学学科代码18022。
免疫学是机体识别“自身”与“非己”抗原，对自身抗原形成天然免疫耐受，对“非己”抗原产生排斥作用的一种生理功能。
正常情况下，这种生理功能对机体有益，可产生抗感染、抗肿瘤等维持机体生理平衡和稳定的免疫保护作用。
在一定条件下，当免疫功能失调时，也会对机体产生有害的反应和结果，如引发超敏反应、自身免疫病和肿瘤等。
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荧光和化学发光免疫分析方法
荧光和化学发光免疫分析方法免疫分析是利用抗原抗体反应进行的检测方法，即利用抗原与抗体的特异性反应，应用制备好的抗原或抗体作为试剂，以检测标本中的相应抗体或抗原。
由于免疫的特异性结合，免疫分析方法具有很好的选择性，荧光免疫分析和化学发光免疫分析是其中典型的两种。
本文将对这两种免疫分析方法进行详细的介绍。
一、免疫免疫是指机体免疫系统识别自身与异己物质，并通过免疫应答排除抗原性异物，以维持机体生理平衡的功能。
免疫是人体的一种生理功能，人体依靠这种功能识别“自己”和“非己”成分，从而破坏和排斥进入人体的抗原物质，或人体本身所产生的损伤细胞和肿瘤细胞等，以维持人体的健康。
特异性免疫系统，是一个专一性的免疫机制，针对一种抗原所生成的免疫淋巴细胞（浆细胞）分泌的抗体，只能对同一种抗原发挥免疫功能。
而对变异或其他抗原毫无作用。
1、抗原1.1抗原的定义抗原：是一类能刺激机体免疫系统使之产生特异性免疫应答（免疫原性），并能与相应抗体在体内或体外发生特异性结合的物质（免疫反应性）。
抗原一般为大分子物质，其分子量在10kD以上。
1.2抗原的分类完全抗原：同时具有免疫原性和免疫反应性的抗原，如细菌、病毒、异种动物血清等。
半抗原：仅具有与相应抗原或致敏淋巴细胞结合的免疫反应性，而无免疫原性的物质。
如大多数的多糖、类脂及一些简单的化学物质，它们本身不具免疫原性，但当与蛋白质大分子结合后形成复合物，便获得了免疫原性，1.3抗原的性质决定簇是指抗原分子表面的基团，它直接决定免疫学反映的特异性。
抗原通过抗原决定簇与相应淋巴细胞表面抗原受体结合，从而激活淋巴细胞，引起免疫应答，抗原也藉此与相应抗体或致敏淋巴细胞发生特异性结合。
因此，抗原决定簇是被免疫细胞识别的靶结构，也是免疫反应具有特异性的物质基础。
2、抗体2.1抗体的定义抗体：是机体受抗原刺激后，由淋巴细胞合成的一类能与相应抗原发生特异性结合的球蛋白。
2.2抗体的结构抗体是机体受抗原刺激后，由淋巴细胞特别是浆细胞合成的一类能与相应抗原发生特异性结合的球蛋白，因其具有免疫活性故又称作免疫球蛋白。
免疫系统主要功能及表现
1免疫系统主要功能及表现免疫防御：生理：抗感染免疫作用清除病原微生物及其他抗原病理：超敏反应性疾病免疫缺陷病免疫监视：清除突变细胞（包括肿瘤细胞）清除病毒感染细胞发生肿瘤病毒持续性感染免疫自稳：对自身成分处于耐受状态对非己抗原产生适度免疫应答清除衰老或损伤细胞自身免疫性疾病超敏反应性疾病2补体三条激活的途径比较：经典激活途径3：激活物：抗原-抗体（IgG1~3和IgM)复合物参与的补体成分：C1，C4，C2，C3 ，C5~C9 所需离子：钙离子镁离子C3转化酶：C 4b2b C5转化酶：C 4b2b3b 起始分子：C19生物学作用：协助抗体产生免疫效应，在感染中/晚期发挥作用MBL途径2：激活物：病原体表面甘露糖，岩藻糖，N氨基半乳糖参与的补体成分：MBL.MASP1,2,C4,C2,C3,C5~9 所需离子:镁离子C3转化酶：C 4b2b C5转化酶：C 4b2b3b 起始分子：MASP生物学作用：参与非特异性免疫，在感染早期发挥作用旁路激活途径1：激活物：G-菌，脂多糖，葡聚糖，酵母多糖，凝聚的IgA参与的补体成分：C3,B因子，D因子，P因子，C5~C9 所需离子:镁离子C3转化酶：C 3bBbP C5转化酶：C 3bBb3b 起始分子:C3生物学作用:参与非特异性免疫，在感染初期发挥作用3抗原的种类：根据诱导抗体产生是否需要T细胞参与：✍胸腺依赖性抗原：绝大多数是蛋白质抗原产生的主要抗体：IgG 可引起细胞免疫，体液免疫可产生免疫记忆✍胸腺非依赖性抗原：多糖类物质含多个重复排列的B细胞表位IgM 不引起细胞免疫应答不产生免疫记忆根据抗原与机体的亲缘关系：异种抗原自身抗原异嗜性抗原同种异型抗原根据抗原是否在抗原提呈细胞内合成分：内源性抗原外源性抗原4各类免疫球蛋白的主要特征和功能IgG1.血清含量最高，分子量最小，半衰期23天。
2.出生3个月开始合成，3-5岁达成人水平。
3.可活化补体，介导调理吞噬和ADCC作用。