克伦特罗残留检测试剂盒条件的优化及其应用
克伦特罗胶体金快检法适用性验证
克伦特罗胶体金快检法适用性验证作者：沈彦苗德升张中堂来源：《科学与财富》2018年第32期摘要：目的验证克伦特罗胶体金快检试剂法的适用性。
方法采用LC-MS方法与克伦特罗胶体金检测市售畜产品中克伦特罗残留量，对比快检方法与实验室传统仪器检测法测定的结果，分析胶体金试剂盒的适用性。
结果通过对90批次的猪牛羊肉中克伦特罗残留量的检测，胶体金快速检测法与LC-MS测定的结果进行分析比较，结果一致性达92%。
结论克伦特罗胶体金快速检测法基本可用于畜产品中克伦特罗残留量的检测。
关键词：克伦特罗；胶体金；快检；验证民以食为天，食以安为先，食品是人类赖以生存和发展的最基本的物质条件。
随着我国经济的快速发展和人民生活水平提高，食品安全问题受到广泛的关注。
食品安全不仅关系到民生，还涉及到我国社会的长治久安。
然而近年来，我国食品频频爆发出质量问题，一些不良企业通过各种方式和渠道，生产出问题食品流通于市面，给人们的健康带来危害。
问题食品经过监管部门的抽样，到检测部门的法定方法检测，再到执法部门依据相关法规判罚，需要一定的周期时间完成，再加上传统的实验室检测方法比较繁琐，耗时，一定程度上增加了食品的检验周期，大大减弱了流程的时效性。
对监督工作带来许多不便，因此催生出了快检技术。
快检技术具有操作简单，快速，省时，省力。
目前市场上快检试剂盒，快检仪器主要用于食品的初步的快速筛查，胶体金快检法是否能够准确的筛查出阳性样品，假阳性率多少，本实验将采用实验室规定的《GB/T22286-2008动物源性食品中-受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法》LC-MS法对样本进行检测，检测结果与胶体金快检法进行对比验证。
1 胶体金快检法1.1 产品简介本产品用于快速检测组织样本中克伦特罗残留，适用于各类企业、检测机构、监督部门的现场快速检测。
1.2 检测限（ug/㎏=ppb）1ug/㎏1.3 适用范围猪、牛、羊肉（精瘦肉为宜）1.4.1 将去脂、绞碎的精肉组织样本4克以上，装入离心管中，拧紧管盖（勿让水进入离心管中），在90℃以上水浴锅中加热10分钟（肉熟透为准）立即取出样品渗透液。
克伦特罗说明书一步法
盐酸克伦特罗酶联免疫检测试剂盒使用说明书一、概要克伦特罗（clenbμterol，CLE）是一种 －肾上腺受体激动剂，此类药品在临床上用于治疗支气管哮喘、慢性支气管炎和肺气肿等疾病。
因为该药可以提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生长，被一些畜牧养殖企业作为养殖促进剂非法使用。
人食用了饲喂克伦特罗作为添加剂的动物所产生的畜产品后，残留的克伦特罗可导致人体肌肉震颤、心悸、神经过敏、头痛、目眩、恶心、呕吐、发烧、战栗等症状，对消费者的健康造成极大危害。
我国农业部第235号文件规定不得检出。
本试剂盒是应用ELISA技术研发的药物残留检测产品,与仪器分析技术比较，能经济、快速地检测出尿样、肌肉、肝脏及饲料等中的克伦特罗。
二、测定原理本试剂盒是利用竞争ELISA方法，在酶标板微孔上预包被抗克伦特罗抗体。
检测时，加入标准品或样品溶液及克伦特罗酶结合物，他们竞争性地与克伦特罗抗体结合，形成抗原抗体复合物；用TMB底物显色；加入反应终止液后在450nm波长酶标仪下进行检测，样品中的克伦特罗浓度与吸收光强度成反比。
三、试剂盒组成酶标板1块(包被抗克伦特罗抗体)标准液6瓶（1ml/瓶）：0、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb。
酶结合物…………………………7ml显色剂A …………………………7ml显色剂B …………………………7ml终止液…………………………7ml10×浓缩洗涤液…………………50ml说明书……………………………1份四、需要但试剂盒中不提供的器材和试剂（1）设备……微孔板酶标仪(450nm)……振荡器……离心机……微量移液器：20μl～200μl,100μl~1000μl……容量瓶：100ml，500ml，1000ml（2）试剂……三氯乙酸……氢氧化钠……叔丁基甲醚色谱级……浓HCl……氯仿……磷酸……Tris……乙酸乙酯……乙腈五、样本前处理步骤样本处理前须知处理任何样本时，都须注意：（1）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。
猪尿和猪肝中克伦特罗ELISA方法的建立及初步应用
将其列入禁用药名单 。然而 ， 由克 伦特罗残 留引起 的人 类食 物 中毒事件时有发生 。 ， 因此灵敏、 快速 、 简便、 实用 的检测 方法是有效监测克伦特罗滥用和残 留的基本手段 。克伦特罗 残 留检测方法 主要有 仪器 方法 和 Ｅ ＩＡ方法 。与 仪器 方法 ＬＳ
［９］ １ 徐社 阳 ， 陈就 记 ， 德榕 ．木醋液 的成 分分 析 ［ ］ 曹 Ｊ ．广州 化学 ，
２ ０ ，ｌ ３ ２ ０ ６ ３ （ ）：８—３ ． １
［８ 李 ２］
红 ， 晓煌 ， 蒋 蒋孟 良， 采 收对竹子 中愈创木 酚含量影 响 等．
的研究 ［ ］ Ｊ ．中国药事 ， １ ， （ ）４ １ ４ ３ ２ ０２ ５ ： — ４ ． ０ ４ ４ ［ ９ Ｃ ａ ｇ ，ｈ ｎ ， ｎ ， ． ｎ ｍｔ ａ ｉ ｔ ｏ ｅ ｅｔ ｌ ２ ］ ｈ ｎ Ｔ Ｃ ｅ Ｆ Ｗａｇ Ｙ ｅ ａ Ａ ｔ ｉ ｔ ｉ ｓｎ ａ Ｓ Ｐ Ｓ ｔ１ ｉ ｅ ｃ ｖｙ ｆ ｓ ｉ ｏ ｄｔ ｉ ｃ ｓｔ ｎ ｏ ａ ａ ｉ ｃｐ ｍ ｒ ｉ ｓ Ｊ ． ｏｒａ ｉａ ｅ ｎｔ ｅ ｔｆ ｍ Ｔｉ ｎ ｙｔ ｅ ｏ ｅ［ ］ Ｊ ｎｌ ｌ ｎ ｈ ｒ ｏ ｉ ｓｒ ｕ ｗ ａ ｒ ｏ ｉｄ ｕ
，
江苏农业科学
２１ 年第 ４ ９． — —２ — —
王帅兵， 左伟勇 ， 洪伟鸣 ， 猪尿和猪肝 中克伦特罗 Ｅ Ｉ 等． ＬＳ Ａ方法的建 立及初 步应用 ［ ］ Ｊ ．江苏农业科 学， １ ， （ ） ２９— ８ ２ ２ ４ １ ：７ ２ ２ ０ ０
猪 尿和猪肝 中克伦特罗 Ｅ ＩＡ方法 的建立及初步应用 ＬＳ
取， 回收率为 ６ ．４ 一１０ ７ ％ ； ８２％ ０ ． ３ 肝脏 用 盐酸 水解 ， Ｋ Ｐ 缓 冲液 （ Ｈ值 ３ ０ 提 取 ， Ｃ８ 净化 ， 加 Ｈ２Ｏ ｐ ．） 过 。 柱 回收 率为 ８ ．５ ～ ８４ ％ ； ０ ４ ％ ９ ．５ 变异系数均小于 ２ ％ ， ０ 尿液和肝脏 中的 Ｌ Ｄ为 ０ ３ ｇＬ ０ ３ Ｏ ． ／ 、 ． ｋ 。用该方 法检测 喂药动物尿 ｇ
畜产品中盐酸克伦特罗残留检测方法优缺点比较
Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ是利用免疫 学抗原抗体特异
性结合反应和酶 的高效催化作用 ， 通过化学方法将植物辣根
作者 简介 ： 王世 山（ １ ９ ６ ３ ￣ ） ， 高级 兽 医师 ， 从 事 畜产品 、 饲料 、
兽 药质 量 监 测 检 验 工 作
过氧化物酶 （ Ｈ Ｒ Ｐ ） 与克伦特罗 （ Ｃ Ｌ ） 结合， 形成酶偶联克伦特
金免疫层 析法 （ Ｇ Ｉ Ｃ Ａ） 因其 不需 要高精仪器 、 操作简便 、 准确 率较高等 ， 适合基层大面积筛查。
１ 检测畜产品中盐酸克伦特 罗残 留采用的主要方法
制了Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ在基层工作 中的应用 。Ｇ Ｉ Ｃ Ａ与 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ相 比不 需 要仪 器设 备 ， 操作 更简单 ， 检测 时 间更 短 ， 试 剂耗 材价值 更 低， 且不需 要高专业 知识 的操 作人员 ， 不仅适 用于基层大 规 模 的检测 活动 ， 也适用于长期 的每次小批量检测活动 。但 是
罗， 将固相载体上已包被的抗体（ 羊抗 兔 Ｉ ｇ Ｇ抗体 ） 与特异性
的抗克伦特罗抗体结合 ， 然后加入待测克伦特罗和酶偶联克
★通讯作者
［ １ 】殷运收． 疏血通注射液 的药理作 用及 临床应用进展［ Ｊ ］ ． 临 床医学工程， ２ ０ １ １ ， ３ ８ （ ３ ） ： ４ ７ ２ — ４ ７ ３ ． 【 ２ 】王萌 ， 等． 疏血通注射液 的质量工艺与用药安全的相关性
有Ｌ Ｃ／ ＭＳ 、 Ｇ Ｃ／ ＭＳ 、 ＨＰ Ｌ Ｃ、 ＣＥ 、 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ和 ＧＩ Ｃ Ａ等 ６种检 测方法 的优 缺点 ， 对Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ和 Ｇ Ｉ Ｃ Ａ 实验原 理、 实验 室操
作步骤 、 样品处理方法 、 特点等进行综合 分析 ， 结论是 用 ＧＩ Ｃ Ａ初 筛， 对检 测结果为 阳性 的样 品用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ进行再次检
猪肉中“瘦肉精”盐酸克伦特罗残留危害及检测方法
猪肉中“瘦肉精”盐酸克伦特罗残留危害及检测方法摘要:本文介绍了盐酸克伦特罗(瘦肉精)的性质、危害性以及主要的检测方法。
关键词:盐酸克伦特罗残留检测方法1 盐酸克伦特罗的性质盐酸克伦特罗(Clenbuterol,CLB)俗称瘦肉精,又名氨哮素、克喘素,化学名为“4-氨基-α-[(叔丁基氨基)甲基]-3,5-二氯苄醇盐酸盐”,常温下为白色或微黄粉末状固体,熔点为170℃～176℃,极易溶于水、甲醇和乙醇,微溶于氯仿,不溶于苯,是一种β2一肾上腺素能激动剂。
20世纪70年代末,美国等发达国家进行了盐酸克伦特罗实用性开发研究工作。
80年代,由于盐酸克伦特罗能促进猪生长,提高瘦肉率,而被作为饲料添加剂广泛应用到猪的生产中。
但是近年来,因食用被盐酸克伦特罗污染的猪肉导致中毒事件屡有发生,且后果极其严重,引起了世界各国的高度重视,为了保证猪肉产品质量安全,保护人类健康,许多国家都禁止在食用动物源性的生产中使用盐酸克伦特罗[1]。
2 危害性2.1 对猪的影响在饲用初期会在短期内出现血压升高、血管扩张、呼吸加剧、体温上升等症状,并出现采食下降、行为动作失调、神经紧张不安甚至全身震颤等症状。
后期会使猪体内糖降解作用不足,导致猪肉品质下降,同时容易发生蹄损伤和跛行,大运动量或高温条件会造成死亡。
2.2 对人的影响人食用含残留盐酸克伦特罗猪肉后对肝、肾等内脏器官会产生毒害作用,出现心悸、头痛、目眩、恶心、呕吐、心率加快、肌肉振颤等症状,特别是对高血压、心脏病、甲亢和前列腺肥大等疾病患者危害更大,严重的可导致死亡。
3 国内外对盐酸克伦特罗的禁用规定由于盐酸克伦特罗对猪具有加强脂肪分解,促进蛋白质合成,实现动物营养再分配,提高胴体瘦肉率,加快猪的生长等作用,盐酸克伦特罗曾作为科研成果推广,从而使多起摄入残留“瘦肉精”的消费者中毒案件发生,严重的甚至导致了死亡。
就国内而言,自1998年以来,每年都有数起类似中毒事件发生。
今年双汇“瘦肉精”事件更是引起了广泛的关注。
盐酸克伦特罗的检测方法
盐酸克伦特罗的检测方法科技信息职教与成教盐酸克伦特骂硇楦测方法河南科技大学林业职业学院刘荣森[摘要]肉食中的盐酸克伦特罗严重危害人体健康.检测盐酸克伦特罗残留常用的方法有气相色谱一质谱联用法,高效液相色谱法,酶标记免疫吸附测定法,毛细管电泳'~--(CE)等,本文分析了各方法的优缺点,指出了今后的研究方向.[关键词]盐酸克伦特罗检测方法研究进展中央电视台2011年3.15晚会上,曝光了一些地方在动物饲养中滥用"瘦肉精"的问题."瘦肉精"是盐酸克伦特罗的俗称,通用名称:Clenbuterol(CLB),化学名称:d一[(叔丁氨基)甲基卜4一氨基一3,5一二氯苯甲醇盐酸盐,分子式:C.:H.C12N20?HC1,结构式:]}H31.l盐酸克伦特罗是一种B:一受体激动剂,具有蛋白同化作用,可以减少脂肪的形成,提高瘦肉和脂肪的比率,因而被滥用于饲养业,造成该药在动物体内蓄积,尤其是肝脏组织中的浓度较高.人类食用含有克伦特罗残留的肉品后会出现头晕,心悸,手指震颇等中毒症状.滥用瘦肉精已成为重大的食品安全问题.中国严禁盐酸克伦特罗等在动物生产中使用.但目前非法使用情况仍非常严重.近几年来,接连发生数起人食用有CLB残留的肉品中毒事件.造成CLB屡禁不止的原因一方面是利益驱使;另一方面是现在检测CLB的方法,手段还不完善,急需建立宰前监测体系和准确,迅速,方便,精确的检测方法.检测CLB残留常用的方法有气相色谱一质谱联用法(GC—MS),高效液相色谱法(HPLC),酶标记免疫吸附测定法(ELISA),毛细管电泳法(CE)等.1.气相色谱一质谱联用法(GC—MS)气相色谱一质谱联用法是我国CLB测定中的确证性方法fNY/T468—2001].是最常用的CLB测定方法,能在多种残留物同时存在情况下对某种特定的残留物进行定性,定量分析.具有灵敏度高,假阳性率低等特点.测定时一般需要柱前衍生,最常用的衍生试剂是双三甲基硅基三氟乙酰氨(BSTFA).本办法具有前处理过程烦琐,检测时间长,需贵重仪器等缺点.吴银良等建立了同时测定动物肝组织中盐酸克伦特罗和盐酸莱克多巴胺残留量的固相萃取一气相色谱一质谱分析方法.样品在碱化条件下经乙酸乙酯和异丙醇混合溶剂提取,浓缩后用乙酸乙酯溶解,经SCX固相萃取(SPE)柱净化,经氮气吹干后用双三甲基硅基三氟乙酰氨(BSTFA)衍生,外标法定量.盐酸克伦特罗的检出限为O.301~g/kg.盐酸克伦特罗添加浓度在1.O～5.01zg/kg范围内,添加回收率为77.4%～88.3%;相对标准偏差(RSD)为3.1%～5.1%.胡明友等[21建立了克伦特罗的测定方法,用甲醇提取,正己烷脱脂净化,然后旋转蒸发冷冻离心浓缩后加0.1mmol/L的盐酸溶解,加样到净化柱上,用4%氨化乙酸乙酯洗脱后氮气吹干,甲苯溶解后加BSTFA衍生,用气相色谱一质谱法进行测定,内标定量.结果表明:添加56~10-9540x10(∞)浓度水平的克伦特罗,方法回收率在89.3%～107%,相对标准偏差为7.3%～16.5%,线性相关系数r为0.998,克伦特罗的最低检测限为2.0xl0f∞).PeterBa—tioens等[31用气相色谱一质谱联用法测定了牛,羊,猪粪便中的盐酸克伦特罗含量,最低检测限为2n.2.高效液相色谱法(HPLC)高效液相色谱法是检测CLB残留常见的分析检测手段之一,适合大批量样品的快速测定.我国已将HPLC法作为检测CLB残留的半确证法.HPLC法中常用的检测器有电化学检测器,紫外检测器;其优点是检测精确度高,其最低检测限范围为1～15ng/g,而且假阳性率低,与GC—MS法相比样品不必衍生;缺点是检测过程繁琐,检测时间长,需贵重仪器,难于操作,价格昂贵.吴庆洁等用高效液相色谱法同时测定畜禽组织中盐酸克伦特罗和4种抗生素(土霉素,四环素,金霉素,氯霉素).用50%的三氯乙酸沉淀蛋白质,通过固相萃取(sPE)小柱进行活化,进行高效液相色谱分析.本法对盐酸克伦特罗的最低检出量为1.25ng.盐酸克伦特罗的回收率85.4%～93.8%.顾国平等用5%HClO超声提取肉样中的盐酸克伦特罗,80%水浴沉淀杂质,然后用固相萃取柱预分离和富集,用高效液相色谱法进行测定,以SunfireCl84.6mX150mm,3.9txm分离柱为固定相,用紫外二极管阵列检测器检测,外标法定量;在该色谱条件下盐酸克伦特罗在6.3rain左右可达到基线分离.方法的回收率在81.6%～103.7%.相对标准偏差在4.76%～7.94%.刘志梅等选用7cm的聚丙烯中空纤维,在样品溶液pH=l1,室温条件下萃取20min后,将有机溶剂在氮气流下吹干,用151xL甲醇溶解,进行液相色谱分析.结果表明:在优化的试验条件下,克伦特罗的富集倍数为78倍,线性范围在30～60001~g/kg 之间,线性相关系数O.9995,检出限2.4l~g/kg.将该方法用于猪肉组织中克伦特罗的测定,低,中,高3种浓度的加标回收率分别为84.9%,91.4%和95.0%,相对标准偏差(RSD)分别为6.3%,5.8%和4.6%.该方法操作简便,环境友好,具有较高的灵敏度,适于猪肉中盐酸克伦特罗残留的检测.高效液相色谱法也经常和质谱联用,实现分析过程的自动化.毛丽莎等171通过液相色谱一质谱以MRM方式检测,同时测定了猪肉组织中沙丁胺醇,莱克多巴胺和克伦特罗.样品用5%高氯酸溶液振荡提取,反相c18小柱净化浓缩,,以D3一沙丁胺醇为内标定量.测定克伦特罗的线性范围均为0.1～10.Oe~L,线性相关系数0.9992,定量检出限为0.5~g/kg,回收率为88-4%～96.2%.该方法简便,灵敏度好,选择性好.3.酶标记免疫吸附测定法(ELISA)ELBA法是检测盐酸克伦特罗较高效的免疫分析法,测定的基础是免疫学抗原抗体特异性结合反应和高效的酶促反应.ELISA法检测限可达0.05r-gs,实际应用中常使用EHSA试剂盒.该方法具有样品不需前处理或前处理简单,一次可检测样品数多,操作简便,快速等特点.但假阳性率较高.杨兴武等8】应用酶联免疫吸附法检测猪尿液中盐酸克仑特罗残留.结果表明,盐酸克仑特罗的线性范围为200～2000ng/kg,最小检出限为100n~L,样品不用前处理可直接检测,1个样品的2个平行样测定时间为45min.该方法回收率在81.9%～106.8%之间,相对标准偏差(RSD)d~ 于9%.李平等(采用直接竞争酶联免疫吸附试验对动物组织中的盐酸克伦特罗残留量进行了快速检测.将CBL与蛋白质载体偶联制备了CBL—BSA和HRP—CBL结合物,以CBL—BSA免疫实验兔获得特异性抗体,并建立了CBL残留直接竞争EHSA检测方法及检测试剂盒.结果表明,检测线性范围0.1～62.5ng/mL,检测低限为0.10ng/mL,尿,肝,肉和饲料的加标回收率为60.3%～l15.O%;相对标准偏差fRSD1为3.4%～7-2%.4.毛细管电泳法(CE)毛细管电泳法测定盐酸克伦特罗残留具有重复性好,操作相对简单,所需样品数量少等特点.高杨菲等峒毛细管电泳法同步分离检测肉制品中"瘦肉精"及其替代物法,整个分离在12min内完成.以90mmol/L的柠檬酸三钠(pH5.6)为电泳缓冲液,8kV分离电压,200nm检测波长,在25~C下可使克伦特罗,沙丁胺醇,特布他林和莱克多巴胺达到分离,分离度分别为1.90,2.73和2.17,回收率为92.4%～102.0%,相对标准偏差(RSD)Ib于3.2%,结果令人满意.王伟宇等…采用小型化毛细管电泳一电化学检测技术测定了猪尿和猪饲料中的克伦特罗及其替代品莱克多巴胺和沙丁胺醇,以直径300~m的碳圆盘电极为工作电极,检测电极电位为+0.95V, 在lOOmmol/L的硼酸盐运行缓冲液中,3种组分在7min内实现了分离. 被测物浓度与峰电流在3个数量级范围内呈良好的线性关系,检测限为1.20x10~-2.06x10-Tg/ml.该方法简单可靠,已成功应用于猪尿和猪饲料样品中3种B一兴奋剂的测定,是一种有效的食品安全分析检测方法5.其他方法樊晓博等采用时间分辨荧光免疫分析建立了简便,快速,灵敏的盐酸克伦特罗检测方法.以自制盐酸克伦特罗单克隆抗体包被96孔微孑L板作为固相抗体,Eu标记抗原与样品中的CBL竞争结合抗体,建立直接竞争荧光免疫分析体系.实验表明:方法灵敏度为0.021xg/L,样品回收率为91%～101%,与沙丁胺醇,莱克多巴胺等结构类似物的交叉反应率均小于1%.方法灵敏度高,特异性强,且操作简单,完全可以满足现有实际检测需求.曾文芳等【'3l建立了用离子色谱一电化学修饰方法l钡0定盐酸克仑特罗.采用离子色谱分离,碳纳米管修饰电极,直流安培检测,DionexAG9一HC保护柱(2mmx50mm),8mmol/L碳酸钠+1O%甲醇为淋洗液测定盐酸克仑特罗.盐酸克仑特罗的检测限是0.0003mg/L;样品测定的回收率分别为96%～103%.陈丽莉等【锻计了一种快速检测猪肉中盐酸克伦特罗的流动注射一化学发光免疫分析方法.采用过氧化脲作为luminol—CH~I20?Hz0z—HRP化学发光体系氧化剂,联苯硼酸作为.--——207...——科技信息.职教与成教增强剂,流动注射化学发光法检测竞争免疫反应后的上清酶标复合物.在最优条件下,测定克伦特罗的线性范围0.05～9~zg/L(r=-0.9959),检出限为0.021~L.该方法已经成功应用于猪肉中克伦特罗残留的检测.胡华军噪用巯基丁二酸作为表面修饰剂,水相法合成水溶性的CdTe/ZnSe核壳量子点,然后在N一羟基琥珀酰亚胺(NHS)的作用下,将CdTe/ZnSe核壳量子点与抗克伦特罗多克隆抗体(Anti—CLBpAb)连接.CdTe/ZnSe—Anti—CLBpAb偶联物能识别克伦特罗一BSA抗原(CLB—BSA).光谱分析表明,量子点与抗体连接后荧光增强,荧光峰位从628nm红移至635nm.将合成的CdTe/ZnSe—Anti—CLBpAb偶联物作为指示克伦特罗(CLB)分子的荧光标记物,制备出一种用于检测CLB的免疫层析试纸条,其最低检测量可达1Ixg/L.现常用的盐酸克伦特罗的检测方法各有优缺点,研究更快速,高效,检测限更低,操作简单,费用低廉的现场检测方法是今后的发展方向.参考文献[1]吴银良,李晓薇,刘素英等.气相色谱一质谱法测定肝脏组织中盐酸克伦特罗和盐酸菜克多巴胺[J]分析化学,2006,34(8):1083—1086 [2]胡明友,邵国建,郭和光.GC—MS测定肝脏中克伦特罗方法的探讨[J]冲国卫生检验杂志,2010(8):1867—1868[3]PeterBatioens',DirkCourtheyn,HuberF,eta1.GasChromato—graphicTandemMassSpectrometricanalvsisofclenbuterolresiduesinfaeces [j]JournalofChromatograF'hyA.1996,750(1—2):133—139[4]吴庆洁,石朝辉,蔡江帆.高效液相色谱法同时测定畜禽组织中4种抗生素及盐酸克伦特罗残留量[I].中国卫生检验杂志,2010(7): 1642—1644[5]顾国平,王森,周亚莲等-固相萃取高效液相色谱法测定猪肉中盐酸克伦特罗残留[1].浙江农业科学,2008(5):624—626[6]刘志梅,陈永艳,杨秀敏等.中空纤维液相微萃取——高效液相色谱法测定猪肉中盐酸克伦特罗残留[I]中国食品,2009,9(2): 171—175[7]毛丽莎,刘红河,陈慧玲.液相色谱一质谱联用法测定猪肉组织中3种B一激动剂[J].中国热带医学,2009,9(7):1356—1358[8]杨兴武,刘振国,周蓉等应用ELISA检测肉猪尿液中盐酸克仑特罗方法的研究lI1.黑龙江畜牧兽医,2003(5):9—10[9]李平,潘荣生,周洪斌等.动物组织中盐酸克伦特罗残留ELISA检测试剂盒的研制[J].免疫学杂志,2006,22(6):178—151[10]高杨菲,许学书毛细管电泳同步分离检测"瘦肉精"及其替代物[J].食品工业,2008(3):71—74[11]王伟宇,张玉莲,邢晓平等.小型化毛细管电泳!电化学检测法测定猪尿和猪饲料中的B一兴奋剂[J]色谱,2()O8,26(2):228—231 [12]樊晓博,杨金易,高秀杰等Eu标抗原盐酸克伦特罗的时间分辨荧光免疫检测[1].食品科学,2010,31(20):307—310[13]曾文芳,陈永欣,吴龙等l离子色谱电化学修饰法测定盐酸克仑特罗I1}冲国卫生检验杂志,2007,17(8):1350—1352[14]陈丽莉,章竹君,付爱华流动注射化学发光免疫分析检测猪肉中的盐酸克伦特罗残留[1].分析实验室,2011,30(2):6-8[15]胡华军,付涛,张明洲等.CdTe/ZnSe核壳量子点免疫层析试纸条检测克伦特罗的研究[T].分析化学,2010,38(12):1727—1731护理学基础实跬教学新搽i刁宝鸡职业技术学院医学分院高丽萍[摘要]护理学基础是一门实践性很强的学科,也是护理专业一门重要学科,要使护生学好掌握好,我们必须改革传统的教学模式,以多元化的教学方式授课,来提高护生的学习兴趣,能力,以适应医学护理事业的发展.[关键词]护理学基础实践教学教学改革护理学基础是护理专业课程的主干课程,是一门实践性应用性学科,可使护生具备从事护理工作所必须的基本知识,基本技能,基本情感的专业基础课.随着社会的发展,医学事业的不断创新,过去的护理医学模式已不再满足于临床工作,这就要求护理教师在临床教学工作中,必须改革传统的教学模式,提高护理教学质量,使大多数护生完成教学目标,强化护生的动手实践能力,做到理论和实践的有机结合.因此,笔者在教学方法上做一下尝试:1,道德素质的培养近代护理学创始人南丁格尔将护理的发展带进新纪元,并提出和实践了护理者必备的职业道德和伦理准则.1973年国际护士节学会修订的《护士伦理学国际法》中规定:护士的基本职责包括"增进健康,预防疾病,恢复健康和减轻痛苦"四个方面.与此相适应,护理道德的实质在于:珍视人的生命,尊重人的尊严和权利,为个人,为家庭,公众提供高质量的健康服务.l】现代医疗护理是一种医生,护士,患者之间帮助与被帮助的关系,护士承担着各种各样的角色,是护理工作的直接参与者,工作中应协调好各方面的关系,才能使医疗护理井然有序,提高质量.以促进人民的健康为宗旨,视患者为亲人.因此,我们要帮助学生树立正确的人生观, 价值观,职业责任感和道德感,树立牢固的专业思想,养成精益求精,一丝不苟的工作作风,有吃苦耐劳的奉献精神,热爱护理事业,以促进患者的健康,视患者为亲人为宗旨,为护理事业奉献一生.2,传统的教学模式在护理学基础的实践教学过程中,传统的教学模式是课前准备一教师示教一学生回复一学生练习一抽查考核.这些教学方法如果重复一二次,学生可能会认真耐心的学习,可长期用此教学方法会让学生厌烦,甚至会觉得是一种填鸭式教学,以至于对本门学科毫无兴趣.如今的护生不同以往的中专生,她们基础好,理解力强,这种单一的教学模式根本无法满足她们的求知欲望.3,改革措施3.1提高教师的综合素质"要想教给学生一滴水的知识,教师必须要有一桶水的知识",这是我院一位老校长的话.为了满足护理事业的发展,教师在授课前坚持集...——208...——体备课和学习,讨论护理理论及操作教学中可能出现的问题及教学改进方法,在教育观念上将应试型转变为创新型,素质型教育观;为保证课堂教学不与临床应用脱节,教师应轮流定期到临床实习,参与临床一作;为了更新,提高知识,应定期在高等学府进行深造学习,来满足专业的需求.3.2教学方法改革3.2.1应用多媒体教学法多媒体教学是一种较先进的辅助教学手段.在《护理学基础》实践教学中应用多媒体技术,有着无可比拟的优势,使实践教学更显生动,直观,精彩.开阔学生视野,诱发学生想象,提高学习效率,增强教学效果.比如无菌技术操作,在教师示教正确方法后应用多媒体教学再次演示,学生的印象更加深刻.3.2.2运用情景设计,角色扮演开展师生互动式教学.在实践操作中设置情景,让护生利用角色扮演进行操作练习.在病员运送法教学中,教师扮演护士,学生扮演患者,进行轮椅运送,一人,二人,三人及四人运送的搬运,示教结束后由学生互相角色扮演,效果相当好,学生兴趣很浓.3.2.3以案例形式进行授课通过训练使学生体会到为病人解决健康问题不只是简单的操作,还需要与病人沟通,评估和研究病人病情, 取得病人的配合,解决病人的问题.在口腔护理实践教学中,首先给出一个有口腔感染的患者,让学生按护理程序进行评估(观察到患者有哪些客观体征),计划(如何护理患者口腔,选择何种簌口液),实施(具体护理措施),评价(口腔护理后感染是否消失或好转),通过此形式的授课,学生会深入教学中,彻底吃透教学内容.3.2.4增加临床见习临床见习在《护理学基础》教学中必不可少,是弥补在校学习无法开展的实践,比如:洗胃法,在校实践教学只能模拟性的操作讲授,尤其是下胃管,缺乏真实感,有时觉得像演戏,学生听后似懂非懂.因此,临床见习提高学习效果.3.2.5比赛式教学法此教学法不仅激发了学生学习的积极性和趣味性,巩固了学生所学知识和技能,使学生以赛促学,达到增强记忆, 激发上进心,熟练掌握技能操作的目的,提高了心理素质及集体荣誉感.铺床法在教学中要求学生快速,正确完成操作,以体现节力的原则. 从教十几年,每届学生铺床法都采用比赛式,深受学生的欢迎.。
农业部新批准8种兽药残留检测试剂盒
3兽医导刊 2009年第4期 总第140期下降，剂量过大能产生过多的高铁血红蛋白而使组织缺氧。
静注一次量，马、牛2 g，猪、羊0.1～0.2 g，以灭菌注射用水溶解成1％溶液缓慢静注。
4-二甲氨基苯酚：该品能使血红蛋白转变为高铁血红蛋白，再与细胞色素氧化酶竞争氰离子，形成氰化高铁血红蛋白，从而恢复酶的活性，解除中毒。
其优点是抗氰效价高、起效快、肌内注射和静脉注射效果相同、稳定性好(注射剂可保存8个月)、不良反应小。
肌内注射可见局部轻度胀痛，面部及指甲出现轻度发绀；静脉注射时有轻度直立性低血压。
硫代硫酸钠(大苏打、海波、次亚硫酸钠)：本品含有活泼的硫原子，在体内转硫酶的作用下，可与CN -结合，形成无毒的硫氰酸盐从尿中排出，因此可用于氰化物中毒的解救。
但其作用发生较慢，故应先用作用快的亚硝酸钠或亚甲蓝，然后应用本品，可显著提高疗效。
但应注意，本品绝不可与亚硝酸钠混合使用。
此外，本品能与砷、汞、铅、铋等结合生成低毒的硫化物；与碘生成无毒的碘化物从尿中排出体外，故也可作这些物质中毒时的解毒药，但疗效不及含巯基的解毒药。
临用前以灭菌注射用水稀释成5％～20％溶液应用，静注或肌注一次量（均以含水物计算）：马、牛5～10 g，猪、羊1～3 g，犬1～2 g。
五、金属与类金属�毒的特异解毒药（一）金属与类金属�毒机制 金属和类金属对机体的毒性主要是它们能与组织细胞中含巯基的酶(如丙酮酸氧化酶、ATP 酶等)结合，抑制了酶的活性而引起中毒。
另外它们中的大多数化合物在大量或高浓度时，能直接腐蚀组织，使组织坏死。
（二）金属与类金属�毒的特异解毒药及应用 金属和类金属中毒的解毒药，多数为络合剂，如二巯基丙醇、二巯基丙磺酸钠、二巯基丁二酸钠、依地酸钙钠、青霉胺以及硫代硫酸钠等。
它们可与多种金属或类金属离子络合，形成低毒或无毒的、几乎不解离的、可溶性金属络合物，从尿排出而解毒。
二巯基丙醇(巴尔)：该品含有两个活泼的巯基，与金属和类金属的亲和力较强，能与它们形成络合物从尿排出，尚可夺取已与酶结合的金属和类金属离子，使酶复活，达到解毒目的。
克伦特罗检测试剂盒使用说明书 Kit CatalogNo BC-3003
克伦特罗检测试剂盒使用说明书Kit Catalog No.BC-3003一、概要:克伦特罗(Clenbuterol)，俗称瘦肉精，是一种β2兴奋剂。
能提高动物体内的瘦肉的比例，并加速动物生长，而被广泛添加于动物饲料中，然而其会残留在动物体内，人类食用后会产生严重的副作用，轻则导致心跳及心率不正常，重则可引发心脏病。
目前，许多国家政府已明令禁止其使用于动物饲料中。
本公司研发生产的克伦特罗检测试剂盒的检测结果准确、稳定，可检测存在于动物的尿液、血清、血浆、组织(肌肉、心脏、肝脏等)、及动物饲料樣本中的克伦特罗。
样品前处理方式简单、方便，适用于各级政府食品安全检测机构、各类屠宰企业、肉类食品加工及饲料生产企业等。
二、检测原理:本试剂盒利用竞争酶联免疫方法，预先在微孔中包被羊抗兔抗体，实验时先后加入克伦特罗标准品，或待测样本，克伦特罗酶标抗原和兔抗克伦特罗抗体。
经过室温温育，反应液中的兔抗克伦特罗抗体与微孔板上的羊抗兔抗体结合，待测样品中的克伦特罗与克伦特罗酶标抗原竞争微孔板上的兔抗克伦特罗抗体。
洗涤后，没有与抗体结合的待测样品中的克伦特罗或酶标抗原被洗去，再加入反应底物，结合的酶标抗原的酶将底物转化为蓝色产物，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色。
反应完成后，样品中克伦特罗含量越多，反应呈色就越浅；反之，样品中克伦特罗含量越少，则呈色越深。
利用标准曲线可计算出样品中克伦特罗含量。
三、试剂盒提供试剂:1.羊抗兔抗体包被的微孔板:96孔。
2.克伦特罗参考标准品:0，0.05，0.25，1.00，2.50，5.00ppb (ng/ml);1.5ml/瓶，一套共6瓶。
3.克伦特罗酶标抗原试剂(1X):7ml/瓶。
4.兔抗克伦特罗抗体:7ml/瓶。
5.样品稀释液：100ml/瓶。
6.显色剂/底物：11ml/瓶。
7.反应终止液：11ml/瓶。
8.洗涤液(20X)：50ml/瓶，使用前稀释20倍。
四、其它试剂和仪器:1.试剂∙盐酸(5mM,10mM )∙氢氧化钠溶液(2.0M )2.仪器∙均质机(Ultra-turrax)∙微孔板酶标仪∙振荡器∙离心机∙氮气吹干仪或旋转蒸发器∙超声波破碎仪∙20µl,50µl,100µl,200µl,及1ml 移液器五、待测样品处理方法:1.尿液将样品在室温(18-25ºC)以4,000转离心10分钟后取上清液或者过滤后取滤液100克伦特罗检测试剂盒使用说明书Kit Catalog No.BC-3003μl,加入样品稀释液400μl （5倍稀释），用于下一步检测。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
克伦特罗残留检测试剂盒条件的优化及其应用
邵红霞!秦爱建"!王宏飞
#扬州大学 江苏省动物预防医学重点实验室!江苏 扬州!$$%&&’(
摘 要)以 *+,-./ 为包被抗原!抗克伦特罗单克隆抗体为一抗!组建检测克伦特罗的竞争 0+12/ 试剂盒3以方阵滴定 确 定 包 被 抗 原 最 佳 浓 度 #&45$678 孔9:(!抗 克 伦 特 罗 单 克 隆 抗 体 #$;:$(最 佳 稀 释 度 #:< $&&&(!并 建 立 0+12/ 标 准 曲 线!确定最小检测量为 &4$%=78>+9:3用该方法检测动物模型仔猪尿样中的盐酸克伦 特 罗!结 果 表 明)停 药 后 第 :? 5 天尿样均为阳性!$周后有少量猪仍为阳性!而阴性对照猪尿样均为阴性3这表明建立的试剂盒对克伦特罗残 留 的 检 测 具有广阔的应用前景3
稀释8 ;:; 单抗稀释液的选择
AV F))) AV K)))
A:A(K ):T((
A:)FA ):(FF
):TK) ):(A4
试 验 结 果 *表 7/表 明@不 同 的 稀 释 液 稀 释 单
抗对检测结果有一定的影响@将阴性样品与以不同稀释液稀释的单抗等体积混合后加入 <=>!? 检测板
中@结果发现以 2E!’+稀释 单抗@阴 性 样品 间 差 异最 小@反应 性也较 +E!’+好@而 +Y"Z’+和 2E!两 种
由 表 B可 计 算 出‘当 标 准 品 含 量为 AWXYZ[\A时‘方法 A的抑制 率 为 HA-He‘方法 H为 HJ-Ie‘方 法 E为 EA-Ae‘可见方法 E所产生 的抑制率明显高于其他两种方法‘ 但考虑到实际操作‘方法 H较实用‘ 且 时 间 短_速 度 快‘当 标 准 品 为 AWXYZ[\A时 抑 制 率 在 同 等 条 件 下也达到 HJ-Ied !-f 间接竞争 NOP.Q标准程序的 确定
稀 释 液 虽 然 反 应 性 好@SCT).$值 高@但 不 同 介 质 溶 液 对 其 有 较 大 的 影 响@因 此 选 定 2E!’+ 为 单 抗 稀
释液8
GD
扬 州 大 学 学 报 "农 业 与 生 命 科 学 版 )
第 HJ卷
$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$
!-K 稀释液 LM 值的影响 分别调单抗及二抗的稀释液的
TU 值 为 J-H_F-B和 C-D‘进 行 a[b;c 测定d结果表明当稀释液的 TU 为 J-H时结果相对稳定‘TU 为 F-B_C-D时 产生的抑制 曲线 不规则 "表 E)d !-$ 样 品 与 单 抗 加 入 次 序 及 作 用 时间的确定
将 包 被 抗 原 以 碳 酸 盐 包 被 液 稀 释 成 一 定 的 浓 度@每 孔 A))B=@CD过 夜&2E!+ 洗 涤 A次&以 F)#GH#IA脱脂奶 粉 满 孔 封 闭JKL@4MD水 浴 作 用 7N&2E!+洗 涤 4次@将 单 抗 与 检 测 样 品 依 次 加 入 到 包 被好的 <=>!? 板上@4MD水浴作用 CF$".&2E!+洗涤后加入工作浓度的 6O2标记羊抗鼠 >#P@每 孔 A))B=@4MD水浴作用 CF$".&经 2E!+洗涤 F次@加入新鲜配置的邻苯二胺*123/底物溶液@每孔 A))B=@4MD水 浴 作 用 7)$".&加 入 7$QRG =IA浓 硫 酸 终 止 显 色 反 应@用 酶 联 免 疫 阅 读 仪 测 定 其 SCT).$值 8 9:U 抗原最佳包被浓度及单抗稀释度的确定
关键词)克伦特罗@间接竞争 0+12/@试剂盒
中 图 分 类 号 )2A%’4AB
文 献 标 识 码 )/
文章编号):C5: BC%$#$&&C(&$ &&BA &B
DEFGHGIJFGKLKMNOPLQRFPSKOTPFPNFGKLUGFJLTHKLGFKSGLV HPFJQKOGWH KMXYMSKH PZEPSGHPLFWJHEOPW
按 上 述 方 法 获 得 最 佳 的 抗 原 包 被 浓 度0包 被 条 件0抗 体 稀 释 倍 数 和 封 闭 剂 等 条 件 进 行 间 接 竞 争 <=>!? 试验@制备标准曲线8 9:h 回收率的测定
用已知浓度的 i=添加到猪的阴性尿液中@根据标准曲线计算其含量@计算回收率8 9:j 样品的测定
稀释液
=>?@<= 9:;
9:;<= =:;<=
表 ! 抗 体 稀 释 液 的 选 择 "#$%&’(值 ) *+,-! ./0/1234’45(4’4104’+0+’23,4676308234’ 9:; 9:;<= =:; =:;<= =>?@ =>?@<= 生理盐水
A-BCD A-EJJ D-IBD D-CJH
第 $5卷第 $期
扬 州 大 学 学 报 #农 业 与 生 命 科 学 版 (
.$54$5M$4$
$&&C年 C月
N$%0=!5$8~!=7"#$%O=&3.0-&+4#/70&1%5+%0!5!=/+&8.21&.=1.0/&+&$=(
N%=4$&&C
PPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPPP
表 K 稀 释 液 LM 值 的 影 响 "#$%&’(值 ) *+,-K N55/12456308234’LM 4’NOP.Q R/S802S
标准品含量 VWXYZ[\A
D
D-A
பைடு நூலகம்
D-G
A-D
G-D
A-EAD D-IGI D-CGF
[\]D \KLV^ZGJ!_‘a ]G^bGJL!c]ad \KLV^MPG
#efghijklmniopqrstfuvfwxfy!ziop{|kr}onu!~!=7"#$%!$$%&&’!*#&=!(
]’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cD)>[)15.=,%+.0$5@1&0+12/@.-+!,5&-#
F 材料与方法
F4F 试剂盒相关试剂 包被抗原#*+,-./(B抗 *+单克隆抗体均为本室自制C%D@盐酸克伦特罗BGHI标记羊抗鼠 17J为
收稿日期)$&&C &B $& 基金项目)江苏省畜禽产品安全性研究重点实验室开放课题 #$&&B &$( 作者简介)邵红霞#:’5A9 (!女!江苏海安人!扬州大学助教B硕士!主要从事畜禽病原微生物及免疫学研究3 " 联系作者!0,>!&5)!&K&!=L4"%4./%41=
第 7期
邵 红 霞 等 \克 伦 特 罗 残 留 检 测 试 剂 盒 条 件 的 优 化 及 其 应 用
CT
""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""