微生物无菌取样方法
手术部位微生物采样方法
手术部位微生物采样方法①分泌物常规检查＋革兰染色的操作方法：先用无菌生理盐水擦拭切口2遍，再用含生理盐水的无菌棉签取分泌物放入无菌试管中，塞上试管塞，送检。
②细菌培养的操作方法：先用无菌生理盐水擦拭切口2遍，再用含生理盐水的无菌棉签用力擦拭病灶边缘或浓腔囊避后放入无菌试管中，塞上试管塞，送检。
但厌氧培养时应吸取深部标本而不能擦拭表面，同时切记要使用厌氧培养基进行培养。
③采样注意事项：采样时不能用干棉签取样，一定要用无菌盐水蘸湿棉签再取样并及时送检。
送检标本时要注明采集标本的解剖部位，必须区分表浅切口还是深部切口。
如革兰染色出现上皮细胞提示标本已受皮肤正常菌群污染妇产科手术切口感染38例李秀琦王完英为了解妇产科手术切口感染的原因，有效控制切口感染的发生，笔者对3年医院妇产科收治的手术住院病历进行调查。
1. 资料与方法对2001年6月~2004年6月，我院妇产科收治的628例手术患者进行了回顾性调查分析。
参照《医院感染学》医院感染的诊断标准。
2. 结果2.1 各类手术与切口感染的关系调查妇产科收治的各类手术628例，手术后切口感染38例，切口感染率为6.05%，其中Ⅰ类手术感染率为 1.28%，Ⅱ类手术感染率为90.60%，Ⅲ类手术感染率为16.66%。
2.2 急诊手术急诊手术感染率为3.48%，非急诊手术感染率为1.68%，两者差异有显著性(P<0.05)。
2.3 手术时间手术时间<150 min，感染率为4.06%，手术时间≥150 min，感染率为13.68%。
2.4 环境因素对切口感染的影响（1）病房大小：住单人房间感染率为0.60%；住3人房间的感染率为6.78%；住4人房间的感染率为9.37%。
（2）接台手术：调查中发现38例切口感染的手术患者，手术时接台26例中感染有6例，占23.07%。
剖宫产手术切口感染率为7.88%，高于其他妇产科手术。
(3)季节变化：冬季切口感染率高于秋季，春夏季次之。
手、设备表面微生物取样方法
手、设备表面微生物取样方法一、携带物品：酒精灯、75%酒精棉球若干、不锈钢剪、镊子、棉签、10ml生理盐水、一次性手套。
备注：不锈钢剪、镊子、棉签、10ml生理盐水须经高温蒸汽灭菌；10ml生理盐水根据实际所需准备多支；一次性手套需经辐照灭菌；二、操作方法：1、手取样点燃酒精灯，取样人员戴上一次性手套，用棉签蘸取少许无菌生理盐水涂抹车间人员手正背面，反复两次，在涂抹时要转动棉签，使各部位能均匀。
完成后用不锈钢剪剪去取样人员手持部段，然后将棉签投入10ml生理盐水中，盖上试管盖。
2、设备表面取样点燃酒精灯，取样人员戴上一次性手套，用棉签蘸取少许无菌生理盐水涂抹设备平滑表面（面积自己预先估计一个大概数值，25、50或100cm2等），反复涂抹两次，在涂抹时要转动棉签，使各部位能均匀。
完成后用不锈钢剪剪去取样人员手持部段，然后将棉签投入10ml生理盐水中，盖上试管盖。
三、细菌及大肠菌群的培养（具体操作时以GB4789.2-2010和GB4789.3-2003为准）样液稀释：将放有棉棒的试管充分振摇。
配成1：10样液。
根据污染情况，进行十倍递增稀释，吸取1ml 的1：10样液加9ml无菌生理盐水中，混匀，此液为1：100稀释液，以此类推。
细菌总数：1、以无菌操作，选择1～2个稀释度各取1ml样液分别注入到无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿，及时将冷却至46℃左右的平板计数琼脂培养基倾注平皿，每皿约15-20ml，转动平皿使其充分混合均匀。
2、待琼脂凝固后，将平皿翻转，置36℃±1℃培养48 h后计数。
3、结果报告：报告每25、50或100cm2数食品接触面或每只手的菌落数。
大肠菌群：1、以无菌操作，选择3个稀释度各取1ml样液分别接种到乳糖胆盐发酵管内，每个稀释度接种三管。
2、将乳糖胆盐发酵管置于36℃±1℃培养24±2h。
所有乳糖胆盐发酵管都不，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，根据标准做证实实验。
微生物无菌取样方法
微生物无菌取样方法概述：微生物无菌取样是一种重要的实验操作，用于采集样品中的微生物，并保持其在取样和处理过程中的无菌状态。
本文将介绍几种常用的微生物无菌取样方法，以帮助实验人员正确进行无菌操作。
无菌取样方法：1. 火焰消毒法火焰消毒法是最常见的无菌取样方法之一。
首先，将待取样的工具（如镊子、培养皿等）放置在火焰中，直至工具表面完全变红；然后，将待取样的区域靠近工具焰口，让火焰的热量将其消毒。
在取样前后，务必将工具放回火焰中进行再次消毒，以确保无菌状态的维持。
2. 酒精消毒法酒精消毒法适用于对火焰敏感的材料。
首先，将待取样的工具浸泡在酒精中片刻，使其充分浸润；然后，将工具从酒精中取出，迅速挥发酒精。
在取样前，务必等待工具表面干燥，避免酒精残留对微生物生长的影响。
3. 紫外线消毒法紫外线消毒法利用紫外线的辐射杀灭微生物。
首先，将待取样的工具放置在已配备紫外线灯管的消毒设备中；然后，将设备关闭，开启紫外线灯管。
在一定时间内，让紫外线对工具表面进行照射，以杀灭潜在的微生物。
取样前后，务必使用前述火焰或酒精方法进行消毒。
4. 过滤法过滤法适用于液态样品的无菌取样。
首先，选用0.2微米的微孔过滤膜，将其装配在过滤器上；然后，将待取样的液态样品通过过滤器，使样品中的微生物被截留在过滤膜上。
取样后，将过滤膜移至培养基上，使截留的微生物在培养基上生长，并进行后续分析。
注意事项：1. 取样器具及培养皿等实验工具需提前进行高温高压灭菌，以确保其无菌状态。
2. 取样时要防止被周围空气中的微生物污染，避免把手触碰到取样区域。
3. 在无菌取样过程中，务必避免交叉污染，每次取样前后都要对工具进行消毒。
4. 注意避免取样过程中发生气溶胶扩散，防止微生物通过空气传播。
5. 紫外线辐射对人体有一定危害性，使用紫外线消毒法时要注意安全。
结语：微生物无菌取样是实验操作中的重要步骤，为了得到准确和可靠的实验结果，实验人员需要选择适合的无菌取样方法，并严格遵守操作规程。
微生物检验样品的采集步骤
微生物检验样品的采集步骤样品的采集是微生物检验的重要组成部分，用于检验的样品数量和状况具有重要意义。
这对取样人员和制样人员提出了很高的专业要求，既要保证样品的代表性和一致性，又要保证整个微生物检验过程在无菌操作的条件下进行。
微生物检验样品的采集大致分为取样、包装密封、标识、样品的运输、接收、保存几个环节。
一、样品的取样取样是指在一定质量或数量的产品中，取一个或多个代表性样品，用于感官、微生物和理化检验的全过程。
首先在取样之前应确认货、证是否相符。
其次取样工具要达到无菌的要求，对取样具和一些试剂材料应提前准备、灭菌。
如果使用不合适的采集工具，可能会破坏样品的完整性，甚至使样品采集毫无意义。
应根据不同的样品特征和取样环境，对取样物品和试剂进行事先准备和灭菌等操作。
另外要保证样品能够代表整批产品，其检测结果应具有统计学有效性，样品到达实验室时的状况应能反映出取样时产品的真实情况。
取样时应根据不同的产品类型、产品状态等选择不同的取样方法和标准。
①包装食品：对于直接食用的小包装食品，尽可能取原包装，直到检验前不要开封，以防污染。
对于桶装或大容器包装的液体食品，取样前应摇动或用灭菌棒搅拌液体，尽量使其达到均质；取样时应先将取样用具浸入液体内略加漂洗，然后再取所需量的样品，装入灭菌容器的量不应超过其容量的3/4，以便于检验前将样品摇匀；取完样品后，应用消毒的温度计插入液体内测量食品的温度，并作记录。
尽可能不用水银温度计测量，以防温度计破碎后水银污染食品；如为非冷藏易腐食品，应迅速将所取样品冷却至0～4℃。
对于大块的桶装或大容器包装的冷冻食品，应从几个不同部位用灭菌工具取样，使样品具有充分的代表性；在将样品送达实验室前，要始终保持样品处于冷冻状态样品一旦融化，不可使其再冻，保持冷却即可。
②生产过程中的取样：划分检验批次，应注意同批产品质量的均一性；如用固定在贮液桶或流水作业线上的取样龙头取样时，应事先将龙头消毒；当用自动取样器取不需要冷却的粉状或固体食品时，必须履行相应的管理办法，保证产品的代表性不被人为地破坏。
微生物操作流程
微生物操作流程及注意事项
一、培养基及生理盐水的配制及使用：
1. 要求培养基及生理盐水配完及时灭菌，灭菌过程有效；
2.要求每批灭菌的培养基及生理盐水都要贴上编号，按先配先用的原则使用；
3.培养基不可放于水浴中保温超过4小时，也避免培养基多次加热与凝固，最多三次，故要根据需要做的微生物量来决定使用培养基的量，配制时可配100ml、200ml、300ml几个容量；
二、车间取样：
1.要求取样用具无菌（粉类：用密实袋直接取样；酱类：用已灭菌的勺子采样）；
2.要求采样人员手部保证清洁无菌；
3.采样过程要防止一切可能的外来污染。
三、检样
1.无菌室及操作台在使用前要求先开紫外灯消毒；
2.使用的有关器具及手部操作前要用酒精棉消毒；
3.生理盐水、培养皿及样品等进入无菌室的物品要先经传递窗消毒后再进入或在无菌室消毒前放入；
4.要求每次使用的每批培养基及生理盐水、培养皿都要做空白试验对照；
5.操作过程要注意无菌，保持个人卫生和整洁，防止人为污染样品；
6.培养基的倾注温度为46±1℃，每皿加入20ml培养基，如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后覆盖一层薄的琼脂培养基。
四、培养
待琼脂凝固后，经平板翻转，放入培养箱中培养，培养时，平板不要堆积高于6个，并不要放在最上层风口处培养。
微生物检测标准
微生物取样方法、微生物检测标准举例一：一、空气采样及检验方法1培养基：普通营养琼脂平板，按GB4789.28中3.7条配制2采样（空气沉降法）2.1布点：面积小于30平方米的车间，设一对角线，在线上取3点，即中心一点，两端在距墙1米处各取一点；面积大于30平方米的车间，设东、西、南、北、中5个点，其中东、西、南、北点均距墙1米。
2.2采样高度：与地面垂直高度80-150厘米。
2.3采样方法；用直径为9厘米的普通营养琼脂平板在采样点上暴露20分钟盖上送检培养。
3培养：于37℃培养24小时。
4检测频率：每周空气质量标准：生车间、熟车间、成品车间：低于100个半成品库、成品库：低于10个二、设备的采样与检验方法根据生产过程所要求的重点卫生部位，实验室对其进行涂抹采样，进行细菌总数检验。
1采样方法1.1涂抹法（适用于表面平坦的设备和工器具产品接触面）取经过灭菌的铝片框（框内面积为50平方厘米）放在需检查的部位上，用无菌棉球蘸上无菌生理盐水擦拭铝片中间方框部分，擦完后立即将棉球投入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。
1.2贴纸法（适用于表面不平坦的设备和工器具接处面）将无菌规格纸（5×5厘米，纸质要薄而软）用无菌生理盐水泡湿后，于需测部分分别贴上两张，两张纸面积共50平方厘米，然后取下放入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。
2检验方法2.1细菌总数的检验将上述样液充分振摇，根据卫生情况，相应地做10倍递增稀释，选择其中2-3个合适的稀释度作平皿倾注培养，培养基用普通营养琼脂，每个稀释度作2个平皿，每个平皿注入1毫升样液，于37℃培养24小时后计菌落数。
结果计算表面细菌总数（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均数×样液稀释倍数/30×22.2致病菌的检验沙门氏菌，参照GB4789.4进行金黄色葡球菌，参照GB7918.5进行4.检验合格标准：细菌总数10－100个∕cm2，5.关键点：细菌总数≤10个∕cm2一般区域：细菌总数≤100个∕cm2三、人员手表面细菌污染情况的检验1. 采样方法：用一支蘸有无菌生理盐水的棉拭子涂擦被检对象手的全部，反复两次，涂擦的时候棉拭子要相应地转动，擦完后，将手接触部分剪去，将棉拭子放入装有10毫升无菌生理盐水的试管内送检培养。
微生物样品的取样方法及取样要求
微生物样品的取样方法及取样要求样品取样的要求1）在取样之前应确认货、证是否相符。
2）取样过程中应避免与水等环境的不良因素影响，防止样品被污染。
3）取样用具（如注射器、采血管、试管、探子、铲子、匙、取样器、剪子、样品袋等）必须是经过灭菌的。
4）对采集的样品一般要求随机取样。
若怀疑最有可能受病原体污染或者带有病原体的样品，可以进行选择取样。
5）根据样品种类（如盒装、袋装、瓶装和罐装），应取完整密封的样品。
如果样品很大，则需用无菌取样器取样；若样品是粉末，应边取边混合；若样品是液体的，通过振摇即可混匀；若样品是冷冻的，应保持冷冻状态（可放在冰内、冰箱的冷盒内或低温冰箱内保存），而非冷冻动物产品须保持在0℃~5℃中保存。
6）取样前或取样后应在盛装样品的容器或样品袋上立即贴上标签，每件样品必须标记清除（包括品名、来源、数量、取样地点、取样人及取样日期）。
7）获取有关取样产品的信息：如样品名称、批量大小、包装类型、包装容器体积、生产线、产品编号或控制号、批量号、标签内容、包装破损状况、产品存放地点或建筑物的基本情况等。
8）当客户对所规定的取样程序有偏离、添加或删节的要求时，应详细记录这些要求和相关的取样资料，并记入包含检测结果的所有文件中，同时告知相关人员。
9）当取样作为检测一部分时，实验室应有程序记录与取样有关的资料和操作。
这些纪录应包括所用的取样程序、取样人的识别、环境条件（如果相关）、必要时有抽样地点的图示或其他等效方法，如果合适，还应包括取样程序所依据的统计方法。
食品微生物学的取样点食品微生物的取样计划中常包括以下取样点：原料、生产线（半成品、环境）、成品、库存样品、零售商店、或批发市场、进口或出口口岸。
原料的取样包括食品生产所用的原始材料、添加剂、辅助材料及生产用水等。
生产线样品是指食品生产过程中不同加工环节所取的样品，包括半成品、加工台面、与被加工食品接触的仪器面以及操作器具等。
对生产线样品的采集能够确定细菌污染的来源，可用于食品加工企业对产品加工过程卫生状况的了解和控制，同时能够用于特定产品生产环节关键控制点的确定和HACCP的验证工作。
食品微生物检验的采样方案取样方案有
×××××采样单
样品编号：━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 产品名称（商品名）______规格型号__________注册商标_____________ 生产厂家_______________通讯地址__________邮政编码□ □ □ □ □ □ 受检地点_______________通讯地址__________邮政编码 □ □ □ □ □ □ 采样地点_______________采样日期__________采样基数______________ 生产日期_______________批 号__________产品依据标准__________ 有效成分及含量 ____________________________________________________________ 检验目地________________检测项目_____________________________
采样前调查→现场观察→确定采样方案 →采样 →样品封存 →开具采样证明
（3）采样的要求
1、严格遵守样品采集的操作规程。 2、所采样品必须具有代表性。 3、采样操作要防止污染，防止变质、损坏、 丢失。 4、不得加入防腐剂、固定剂等。 5、样品采集和现场测定必须有二人以上参 加。
（4）食品微生物检验的采样方案
一、微生物检验的工作流程
检验前准备 样品的采集及样品的送检 样品的预处理方法 样品的检验 检验结果的报告
（一）.检验前的准备
1. 2. 准备好所需的各种仪器。 按技术要求将各种玻璃仪器进行清洗、烘干、包扎、灭菌，冷 却后送无菌室备用。 准备好所用的各种试剂，做好普通营养琼脂或其他选择必培养 基。 做好无菌室或超净工作台的灭菌工作，提前1h灭菌30~60min. 工作衣、鞋、帽、等灭菌后备用。 工作人员进入无菌室后，实验没有完成之前不得随便出入无菌 室。
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精心整理
抽样必须遵循无菌操作程序，抽样工具如整套不锈钢勺子、镊子、剪刀等应当高压灭菌，防止一切可能的外来污染。
容器必需清洁、干燥、防漏、广口、灭菌，大小适合盛放检样。
抽样全过程中，应采取必要的措施防止食品中固有微生物的数量和生长能力发生变化。
确定检验批，应注意产品的均质性和来源，确保检样的代表性。
常见的抽样方法有：
1．直接食用的小包装食品：
尽可能取原包装，直到检验前不要开封，以防污染。
2．桶装或大容器包装的液体食品：
（1）．抽样前摇动或用灭菌棒搅拌液体，尽量使其达到均质；
（2）．抽样时应先将抽样用具浸入液体内略加漂洗，然后再取所需量的样品，装人灭菌盛样容器的量，不应超过其容量的四分之三，以便于检验前将样品摇匀；
（3）．取完样品后，应用消毒的温度计插入液体内测量食品的温度，并作记录。
尽可能不用水银温度计测量，以防温度计破碎后水银污染食品；
采样器具汇总表。