微生物无菌取样方法 (2)
手、设备表面微生物取样方法
手、设备表面微生物取样方法一、携带物品：酒精灯、75%酒精棉球若干、不锈钢剪、镊子、棉签、10ml生理盐水、一次性手套。
备注：不锈钢剪、镊子、棉签、10ml生理盐水须经高温蒸汽灭菌；10ml生理盐水根据实际所需准备多支；一次性手套需经辐照灭菌；二、操作方法：1、手取样点燃酒精灯，取样人员戴上一次性手套，用棉签蘸取少许无菌生理盐水涂抹车间人员手正背面，反复两次，在涂抹时要转动棉签，使各部位能均匀。
完成后用不锈钢剪剪去取样人员手持部段，然后将棉签投入10ml生理盐水中，盖上试管盖。
2、设备表面取样点燃酒精灯，取样人员戴上一次性手套，用棉签蘸取少许无菌生理盐水涂抹设备平滑表面（面积自己预先估计一个大概数值，25、50或100cm2等），反复涂抹两次，在涂抹时要转动棉签，使各部位能均匀。
完成后用不锈钢剪剪去取样人员手持部段，然后将棉签投入10ml生理盐水中，盖上试管盖。
三、细菌及大肠菌群的培养（具体操作时以GB4789.2-2010和GB4789.3-2003为准）样液稀释：将放有棉棒的试管充分振摇。
配成1：10样液。
根据污染情况，进行十倍递增稀释，吸取1ml 的1：10样液加9ml无菌生理盐水中，混匀，此液为1：100稀释液，以此类推。
细菌总数：1、以无菌操作，选择1～2个稀释度各取1ml样液分别注入到无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿，及时将冷却至46℃左右的平板计数琼脂培养基倾注平皿，每皿约15-20ml，转动平皿使其充分混合均匀。
2、待琼脂凝固后，将平皿翻转，置36℃±1℃培养48 h后计数。
3、结果报告：报告每25、50或100cm2数食品接触面或每只手的菌落数。
大肠菌群：1、以无菌操作，选择3个稀释度各取1ml样液分别接种到乳糖胆盐发酵管内，每个稀释度接种三管。
2、将乳糖胆盐发酵管置于36℃±1℃培养24±2h。
所有乳糖胆盐发酵管都不，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，根据标准做证实实验。
微生物无菌取样方法
微生物无菌取样方法概述：微生物无菌取样是一种重要的实验操作，用于采集样品中的微生物，并保持其在取样和处理过程中的无菌状态。
本文将介绍几种常用的微生物无菌取样方法，以帮助实验人员正确进行无菌操作。
无菌取样方法：1. 火焰消毒法火焰消毒法是最常见的无菌取样方法之一。
首先，将待取样的工具（如镊子、培养皿等）放置在火焰中，直至工具表面完全变红；然后，将待取样的区域靠近工具焰口，让火焰的热量将其消毒。
在取样前后，务必将工具放回火焰中进行再次消毒，以确保无菌状态的维持。
2. 酒精消毒法酒精消毒法适用于对火焰敏感的材料。
首先，将待取样的工具浸泡在酒精中片刻，使其充分浸润；然后，将工具从酒精中取出，迅速挥发酒精。
在取样前，务必等待工具表面干燥，避免酒精残留对微生物生长的影响。
3. 紫外线消毒法紫外线消毒法利用紫外线的辐射杀灭微生物。
首先，将待取样的工具放置在已配备紫外线灯管的消毒设备中；然后，将设备关闭，开启紫外线灯管。
在一定时间内，让紫外线对工具表面进行照射，以杀灭潜在的微生物。
取样前后，务必使用前述火焰或酒精方法进行消毒。
4. 过滤法过滤法适用于液态样品的无菌取样。
首先，选用0.2微米的微孔过滤膜，将其装配在过滤器上；然后，将待取样的液态样品通过过滤器，使样品中的微生物被截留在过滤膜上。
取样后，将过滤膜移至培养基上，使截留的微生物在培养基上生长，并进行后续分析。
注意事项：1. 取样器具及培养皿等实验工具需提前进行高温高压灭菌，以确保其无菌状态。
2. 取样时要防止被周围空气中的微生物污染，避免把手触碰到取样区域。
3. 在无菌取样过程中，务必避免交叉污染，每次取样前后都要对工具进行消毒。
4. 注意避免取样过程中发生气溶胶扩散，防止微生物通过空气传播。
5. 紫外线辐射对人体有一定危害性，使用紫外线消毒法时要注意安全。
结语：微生物无菌取样是实验操作中的重要步骤，为了得到准确和可靠的实验结果，实验人员需要选择适合的无菌取样方法，并严格遵守操作规程。
微生物检验方法
菌落总数一、菌落总数介绍：菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。
当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。
菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。
按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。
因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。
菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
二、检验方法菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。
基本操作一般包括：样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。
国内外菌落总数测定方法基本一致，从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何明显不同，只是在某些具体要求方面稍有差别，如有的国家在样品稀释和倾注培养进，对吸管内液体的流速，稀释液的振荡幅度、时间和次数以及放置时间等均作了比较具体的规定。
检验方法参见：GB4789.2-94 《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验菌落总数测定》SN0168-92 《中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品菌落计数》三、说明（一）样品的处理和稀释：1．操作方法：以无菌操作取检样25g（或25ml)，放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振要或研磨制成1：10的均匀稀释液。
微生物检测标准
微生物取样方法、微生物检测标准举例一：一、空气采样及检验方法1培养基：普通营养琼脂平板，按GB4789.28中3.7条配制2采样（空气沉降法）2.1布点：面积小于30平方米的车间，设一对角线，在线上取3点，即中心一点，两端在距墙1米处各取一点；面积大于30平方米的车间，设东、西、南、北、中5个点，其中东、西、南、北点均距墙1米。
2.2采样高度：与地面垂直高度80-150厘米。
2.3采样方法；用直径为9厘米的普通营养琼脂平板在采样点上暴露20分钟盖上送检培养。
3培养：于37℃培养24小时。
4检测频率：每周空气质量标准：生车间、熟车间、成品车间：低于100个半成品库、成品库：低于10个二、设备的采样与检验方法根据生产过程所要求的重点卫生部位，实验室对其进行涂抹采样，进行细菌总数检验。
1采样方法1.1涂抹法（适用于表面平坦的设备和工器具产品接触面）取经过灭菌的铝片框（框内面积为50平方厘米）放在需检查的部位上，用无菌棉球蘸上无菌生理盐水擦拭铝片中间方框部分，擦完后立即将棉球投入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。
1.2贴纸法（适用于表面不平坦的设备和工器具接处面）将无菌规格纸（5×5厘米，纸质要薄而软）用无菌生理盐水泡湿后，于需测部分分别贴上两张，两张纸面积共50平方厘米，然后取下放入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。
2检验方法2.1细菌总数的检验将上述样液充分振摇，根据卫生情况，相应地做10倍递增稀释，选择其中2-3个合适的稀释度作平皿倾注培养，培养基用普通营养琼脂，每个稀释度作2个平皿，每个平皿注入1毫升样液，于37℃培养24小时后计菌落数。
结果计算表面细菌总数（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均数×样液稀释倍数/30×22.2致病菌的检验沙门氏菌，参照GB4789.4进行金黄色葡球菌，参照GB7918.5进行4.检验合格标准：细菌总数10－100个∕cm2，5.关键点：细菌总数≤10个∕cm2一般区域：细菌总数≤100个∕cm2三、人员手表面细菌污染情况的检验1. 采样方法：用一支蘸有无菌生理盐水的棉拭子涂擦被检对象手的全部，反复两次，涂擦的时候棉拭子要相应地转动，擦完后，将手接触部分剪去，将棉拭子放入装有10毫升无菌生理盐水的试管内送检培养。
微生物样品的取样方法及取样要求
微生物样品的取样方法及取样要求样品取样的要求1）在取样之前应确认货、证是否相符。
2）取样过程中应避免与水等环境的不良因素影响，防止样品被污染。
3）取样用具（如注射器、采血管、试管、探子、铲子、匙、取样器、剪子、样品袋等）必须是经过灭菌的。
4）对采集的样品一般要求随机取样。
若怀疑最有可能受病原体污染或者带有病原体的样品，可以进行选择取样。
5）根据样品种类（如盒装、袋装、瓶装和罐装），应取完整密封的样品。
如果样品很大，则需用无菌取样器取样；若样品是粉末，应边取边混合；若样品是液体的，通过振摇即可混匀；若样品是冷冻的，应保持冷冻状态（可放在冰内、冰箱的冷盒内或低温冰箱内保存），而非冷冻动物产品须保持在0℃~5℃中保存。
6）取样前或取样后应在盛装样品的容器或样品袋上立即贴上标签，每件样品必须标记清除（包括品名、来源、数量、取样地点、取样人及取样日期）。
7）获取有关取样产品的信息：如样品名称、批量大小、包装类型、包装容器体积、生产线、产品编号或控制号、批量号、标签内容、包装破损状况、产品存放地点或建筑物的基本情况等。
8）当客户对所规定的取样程序有偏离、添加或删节的要求时，应详细记录这些要求和相关的取样资料，并记入包含检测结果的所有文件中，同时告知相关人员。
9）当取样作为检测一部分时，实验室应有程序记录与取样有关的资料和操作。
这些纪录应包括所用的取样程序、取样人的识别、环境条件（如果相关）、必要时有抽样地点的图示或其他等效方法，如果合适，还应包括取样程序所依据的统计方法。
食品微生物学的取样点食品微生物的取样计划中常包括以下取样点：原料、生产线（半成品、环境）、成品、库存样品、零售商店、或批发市场、进口或出口口岸。
原料的取样包括食品生产所用的原始材料、添加剂、辅助材料及生产用水等。
生产线样品是指食品生产过程中不同加工环节所取的样品，包括半成品、加工台面、与被加工食品接触的仪器面以及操作器具等。
对生产线样品的采集能够确定细菌污染的来源，可用于食品加工企业对产品加工过程卫生状况的了解和控制，同时能够用于特定产品生产环节关键控制点的确定和HACCP的验证工作。
公共卫生微生物采样、检测方法总结
一、空气中微生物的检测方法------细菌总数（营养琼脂，121℃高压灭菌20min，培养时间37℃,48h）1.两种方法（1）撞击法(二级或者六级微生物采样器)（2）自然沉降法（暴露5min）采样：梅花布点，高度：1.2~1.5m；离墙：1m。
二、茶具微生物检验方法（一）细菌总数1、生理盐水的制法：将氯化钠（8.5g）溶解于蒸馏水（1000mL）中，分装到试管内，每管10mL，121℃高压灭菌20min。
2、采样：棉拭子湿润生理盐水，在茶具内、外缘涂抹50cm2，即口唇接触处一圈（1~1.5cm），用灭菌剪刀剪去棉签手接触处，将棉拭子放入10mL生理盐水中，4h内送检。
3、检验程序：检样→各1mL加入两块灭菌平皿（若污染严重，可十倍递增稀释）→37℃，48h 培养→菌落计数→报告4、单位：cfu/cm2。
（二）大肠菌群1、培养基：乳糖胆盐发酵培养液（双料的，每管10mL，115℃高压灭菌15min）2、检测方法：发酵法（具体内容课本11页）3、检样（测定细菌总数余下的样品）4、革兰氏染色过程：（阳性菌显紫色，阴性菌显红色）（1）初染：1min，水洗；（2）碘染：1min，水洗；（3）脱色：30s，水洗；（4）复染：1min，水洗，待干，镜检。
5、结果报告：凡乳糖发酵管最终产酸产气，革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，即可报告检出大肠菌群。
三、毛巾、床上卧具微生物检测方法（一）细菌总数1.采样（1）毛巾、枕巾：对折后两面的中央各25cm2；（2）床单、被单：在上下两部中央25cm2来回涂抹；2、检测程序同茶具细菌总数检测3.计算单位：cfu/25cm2。
(二)大肠菌群（检测程序同茶具大肠菌群检测）1.涂抹法：（用测定细菌总数时采集的样品）四、理发用具微生物检验方法（一）大肠菌群1、采样推子：在推子前部上下部分均匀各涂抹三次；理发刀、剪和修脚工具：在使用的刀、剪面的两侧各涂抹一次采样；两个刀或者两个剪为一份样品。
微生物取样方法大全
微⽣物取样⽅法⼤全随着⾼通量技术的发展，我们对微⽣物的认识逐步深⼊，微⽣物在临床以及科研上的应⽤越来越多，⽽微⽣物采样的正确与否直接关系到微⽣物数据的准确性。
因此，微⽣物的采样⽅法就显得格外重要。
⾸先，我们需要在取样的过程中，注意以下⼏个⽅⾯：(1) 所有实验⽤到的取样⽤具必须是经过灭菌的（如样品袋、取样器、采⾎管、试管、铲⼦、匙、⼑类⼯具等）。
(2) 收集样品信息，取样前或取样后应在盛装样品的容器或样品袋上⽴即贴上标签，每件样品必须标记清楚（例如品名、来源、数量、取样地点、取样⼈及取样⽇期等）。
(3) 请尽量将样本分装 3-5 份备份；建议每组取 6 个及以上重复较为合适，⾄少 3 个重复。
(4) ⽤到⾕⽲取样管的实验样品，可以常温运输；如果不⽤取样管，则必须低温-80℃保存，保存期间切忌反复冻融；低温寄送时请将样品置于泡沫箱中，⽤⼲冰寄送。
然⽽样品种类繁多，不同的样品取样有不同的⽅案，下⾯详细介绍每类样品对应的取样⽅案。
环境微⽣物普通⼟壤(1) 去除表⾯浮⼟、凋落物等，根据⼟壤情况，选择是否过2mm筛⽹，每个样品从3个及以上采样点采集并混合⽽成，建议将样本分装 3-5 份备份；注：采样时需注意每个采样点的取⼟深度及采样量应均匀⼀致，⼟样上层与下层的⽐例要相同。
(2) 保存于⽆菌离⼼管中，置于泡沫箱（冰袋或⼲冰）中，0°C以下运回实验室；(3) 如果条件不允许⽴即提DNA，可将样品置于-80°C冰箱中保存，并通过⼲冰寄送⾄公司后提取样品总 DNA。
根际⼟壤根际，是指受植物根系活动影响，在物理、化学和⽣物学性质上不同于⼟体的那部分微域环境。
部分研究是针对⼟壤微⽣物与植物之间的相互关系，因此需要对根际⼟进⾏取样。
(1) 采集植株，去除根周较松散的⼟，仍附着在根系表⾯的视为根际⼟。
将植物置于装有冰袋或⼲冰的保温箱中，避光条件，0℃以下运回实验室；(2) 准备⽆菌容器，将植物根系部分置于缓冲液（PBS或⽣理盐⽔）中震荡，震荡时间和强度依据样本实际情况调整，洗下根际⼟；(3) 将洗涤液进⾏⾼速离⼼，收集⼟壤沉淀，若沉淀较少，也可过滤膜，同⼀样⽅取样的样本进⾏多点等量混合；(4) 将样本分装⾄离⼼管中，密封，标记样本信息后液氮速冻，置于-80℃冰箱保存，⼲冰寄送。
微生物表面取样方法(二)
微生物表面取样方法(二)
微生物表面取样方法
简介
微生物表面取样是一种常用的研究微生物群落的方法。
通过采集表面的微生物样本，可以了解微生物的分布情况、组成结构以及功能特性。
本文将介绍几种常见的微生物表面取样方法。
表面刷样法
•使用无菌棉签或刷子在待采样的表面来回刷动。
•适合采样各种平整表面，如实验室台面、家具等。
表面刮取法
•使用无菌刮板或刮片在待采样的表面轻轻刮取。
•适合采样粗糙表面，如地板、土壤等。
直接印样法
•将无菌培养基或琼脂块直接按压在待采样的表面上。
•待培养基或琼脂凝固后，将其取下，形成微生物样本。
曝露培养法
•将无菌培养基或琼脂块暴露在待采样表面空气中。
•短暂或长时间的曝露，可以采集空气中的微生物。
粉末采集法
•使用无菌刷子将待采样表面的粉末刷入无菌袋中。
•适合采集稀疏微生物的表面，如空调过滤器、尘土等。
静电吸附法
•将带电荷的薄膜或滤纸静置在待采样表面上。
•待采样时间过后，将薄膜或滤纸取下，获取微生物样本。
粘贴法
•将透明胶带或捕捉液粘贴在待采样表面上。
•撕下透明胶带或将捕捉液滴入培养基中，获得微生物样本。
结论
微生物表面取样方法多种多样，选择合适的方法可以有效获取微生物样本。
根据待采样表面的特点，我们可以选择适合的取样方法，以便更好地研究微生物群落的结构和功能。
以上就是一些常见的微生物表面取样方法，希望本文的介绍对您有所帮助！。
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微生物无菌取样方法
在讨论无菌取样的原因与采集方法之前,必须要理解“无菌的”的这一术语,“无菌”一般用于取样中,意味着取样过程中,避免操作引起污染。
一个无菌样品的采集,应该通过这样一种方式,即:在收集过程中,本身应避免污染,然后放入消毒容器中。
一、包装无菌取样的工具:
拥有正确的采取产品或加工过程的无菌取样器械工具就是至关重要的的。
除非使用合适的采集工具,否则样品的完整性会被怀疑,甚至样品毫无意义。
为了避免没有合适的取样工具,建议建立一个无菌取样的分析清单,来收集取样工具。
如果可能盛样品的容器在最初进入加工区之前应当被预先标识,像样品号、取样日期、取样人等。
这样可以使在不同的工厂条件下的样品取样更为方便一些。
附加样品号码一般在样品采集中被正式确定下来,因此不用预先标明。
人员的工具设施,像工作服、发网或消毒处理过的清洁的鞋靴必须具备有助于证明采集者没有污染到食物产品或样品。
二、采样前准备
1、干冰或冰袋:如果使样品在贮运过程中保持冷却,一些种类的制冷剂就是必需的。
检查观瞧
干冰袋子就是否有接触,如果泄漏可能污染样品,您也可以用湿冰,湿冰可以由工厂提供,然而取样前必须清楚这一点,如果想保持样品冷冻,干冰应在检验前获得。
2、灭菌容器及器具:无菌采样袋,袋子必须购买灭菌的,使用时只需撕掉封头,用提供的地方法
张开袋子,将样品放入,然后将袋子顶端卷起,并封口;必要时,取样用镊子,剪子等要灭菌处理。
３、无菌手套:灭菌手套在采样中并非必须启用,如果一个产品在样品收集过程中必须被接触,那么最好让工人来做(加工处理产品的工人),将样品放入收集容器中,既然工人在生产过程中处理接触产品,那么我们就不能认为她们对产品又有附加的污染。
当用手套时必须用一种避免污染的方式戴上,手套的大小必须适合工作的需要。
4、75％酒精棉球以及75%酒精喷壶,一次性帽子,口罩以及白大褂。
当采集无菌样品时,一条最重要的规则就是:千万别污染样品。
三、采样
抽样必须遵循无菌操作程序,抽样工具如整套不锈钢勺子、镊子、剪刀等应当高压灭菌,防止一切可能的外来污染。
容器必需清洁、干燥、防漏、广口、灭菌,大小适合盛放检样。
抽样全过程中,应采取必要的措施防止食品中固有微生物的数量与生长能力发生变化。
确定检验批,应注意产品的均质性与来源,确保检样的代表性。
常见的抽样方法有:
1.直接食用的小包装食品:
尽可能取原包装,直到检验前不要开封,以防污染。
2.桶装或大容器包装的液体食品:
(1)、抽样前摇动或用灭菌棒搅拌液体,尽量使其达到均质;
(2)、抽样时应先将抽样用具浸入液体内略加漂洗,然后再取所需量的样品,装人灭菌盛样容器的量,不应超过其容量的四分之三,以便于检验前将样品摇匀;
(3).取完样品后,应用消毒的温度计插入液体内测量食品的温度,并作记录。
尽可能不用水银温度计测量,以防温度计破碎后水银污染食品;
(4)、如为非冷藏易腐食品,应迅速将所抽样品冷却至0-4℃。
３.桶装或大容器包装的固体与固体食品:
(１).每份样品应用灭菌抽样器由几个不同部位采取,一起放入一个灭菌容器内;
(２)、注意不要使样品过度潮湿,以防食品中固有的细菌增殖。
4、桶装或大容器包装的冷冻食品
(1).对大块冷冻食品,应从几个不同部位用灭菌工具抽样,使之有充分的代表性。
(２).在将样品送达实验室前,要始终保持样品处于冷冻状态。
样品一旦融化,不可使其再冻,保持冷却即可。
无菌采样操作步骤
1.穿白大褂,戴口罩帽子。
2.戴一次性无菌手套,穿戴过程中不能污染手套表面。
3.取样前,再用7５%酒精对一次性无菌手套进行消毒处理,待手套表面干燥后,方能取样。
5.采集样品,如工作人员有盛装工具,用现场的工具采样,如没有,用自备无菌工具采样。
6.采样完毕,无菌袋封口,保证不泄露,不被污染。
7.冷藏或冷冻样品,要相应的保温处理。
采样器具汇总表。