环境微生物检测——采样方法 剧本
医院环境微生物采样方法
我院使用的
正视结果，不要盲目 的重复采样
细菌学数据超标
回忆采样过程 是否存在污染
到一线去查看设施和 每个操作环节，询问 相关人员的日常操作 方法，检查操作记录
判断是否存在问题
重复采样
否
采取措施改进操作流程
是
否
是
环境卫生学监测结果分析流程
空气微生物消毒方法
紫外线灯照射 静电吸附 空气过滤 ……
采样时间：在消毒处理后进行采样。 采样面积：被采面积＜100cｍ2取全部表面；采样面积≥100 cｍ2，取100cｍ2 采样方法：棉拭子法：用5×5cm的标准灭菌规格版，放在被检物体表面，用浸有含有相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子，在规格板内横竖往返均匀涂抹5次，并随之转动棉拭子，可连续采样1～4个规格板面积。剪去手接触部分，并将棉拭子放入装有10ml含相应中和剂的试管内，立即送检。
医院环境微生物采样方法及注意事项
院感科
卫医发[2000]431号《医院感染管理规范》 第三十一条 环境卫生学监测：包括对空气、物体表面和医护人员手的监测。 医院应每月对手术室、重症监护病房／室（ICU）、产房、母婴室、新生儿病房、骨髓移植病房、血液病房、血液透析室、供应室无菌区、治疗室、换药室等重点部门进行环境卫生学监测。当有医院感染流行，怀疑与医院环境卫生学因素有关时，应及时进行监测。
添加标题
护病房、新生儿室、母婴室、血液透析病房、烧伤
添加标题
医疗机构应每季度对手术室、产房、导管室、层流
添加标题
病房、 感染疾病科、口腔科等部门工作的医务人员
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手进行消毒效果的监测；当怀疑医院感染暴发与医
添加标题
务人员手卫生有关时，应及时进行监测，并进行相
医院环境微生物采样方法及注意事项概要
第三十六条 消失医院感染流行或爆发趋势时，应实行以下 掌握措施：
一、临床科主必需准时查找原回，帮助调查和执行掌握措施。 二、医院感染治理科必需准时进展流行病学调查处理，根本 步骤为； 1、证明流行或爆发 2、查找感染源：对感染病人、接触者、可疑传染源、环境、 物品、医务人员及陪护人员等进展病原学检查。 3、查找引起感染的因素 4、制定和组织落实有效的掌握措施 5、分析调查资料 6、写出调查报告。
3、人在时的空气消毒方法，可选用循环风消毒机或静电等空气消毒器进 展连续动态消毒处理。使用这种空气消毒方法时，应结合室内外表的 卫生清洁处理或先用消毒剂对污染外表进展消毒，以保证空气消毒效 果。
空气消毒留意事项
1、对物品的腐蚀，过氧乙酸、臭氧等消毒剂对物品有不同 程度的损坏，使用时浓度不宜过高、喷量不宜过大，必要 时，消毒后应准时用清水擦洗。
紫外线灯
物理除菌
• 无毒、经济、有效、便利 • 照射30min至1h根本能使室内空气达Ⅲ类环境标准。
2h达Ⅱ类环境标准，照射后3h内空气仍达Ⅲ类标 准。 • 而罩式、车式及固定贴墙式均因其罩反面空气阻 挡了20％～40％的紫外线照射，而降低了杀菌效 果和维持时间。 • 要强调最正确安装方式、合理安排消毒间隔时间， 照射时保持室内清洁枯燥、灯管无尘，温度<20℃， 相对湿度>60％时适当延长照射时间是保证消毒效 果所必需的。
是 实行措施改进操作流程
空气微生物消毒方法
空气消毒
Hale Waihona Puke 物理消毒紫外线灯照射 静电吸附 空气过滤
……
化学消毒
消毒剂熏蒸，如过氧乙酸熏蒸 喷雾，如用含氯消毒剂、过氧 乙酸进展超低容量喷雾消毒， 用一些消毒器械即时产生的化 学因子进展消毒，如可以用臭 氧进展空气消毒。
医院环境微生物标本的采集方法与质控要求
医院环境微生物标本的采集方法与质控要求复旦大学附属中山医院高晓东医院环境表面微生物污染与HAI关系•Maki等（1982年）利用新院址搬迁（1979年）开展前瞻性研究，对比两个院址的空气、物表和污染物品与HAI之间关系。
结果强力提示，医院环境物表微生物污染与HAI无关，环境污染可以忽略不计；认为开展环境微生物常规培养没有成本效益，不推荐实施Maki DG，et al：N Engl J Med1982;307:1562–1566医院环境卫生学采样原则A、在医疗机构避免随意对未直接接触微生物的空气、水、和环境表面进行采样。
IB类B.有迹象显示，作为流行病学调查的一部分对环境微生物进行采样以查明污染源和评估减轻危害措施。
IB类C.限制以下用于质量控制目的的微生物采样：1）灭菌过程的生物监测；2）每月对透析机的透析水和透析液的培养；3）感染控制措施实施或方法改变后短期的评价。
IB类卫生保健机构环境感染控制指南2003·CDC＆HICPAC 四种状况进行环境卫生学采样一是当环境中的宿主或媒介物被认为在疾病传播中有流行病学意义时，提供疾病或感染暴发的依据。
第二种情况是在研究过程中进行适当的环境采样。
第三种情况是为了监测潜在的危险环境条件，确认有害的化学或生物因素的存在，并验证危险因素的成功消除。
第四种情况是为了质量保证（QA）而采样，以评估改变感染控制措施取得的效果或是确保设施或系统按照规范和预期结果执行。
卫生保健机构环境感染控制指南2003·CDC＆HICPAC各类环境空气、物体表面采样时机•手卫生：快速手消毒剂消毒后•空气：空气消毒后•物体表面：消毒后•……评价点：消毒效果？日常污染？A1 采样和检查原则✐采样后应尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过4h；若样品保存于0℃～4℃时，送检时间不得超过24h。
✐不推荐医院常规开展灭菌物品的无菌检查，当流行病学调查怀疑医院感染事件与灭菌物品有关时，进行灭菌物品的无菌检查。
生产环境微生物取样与检测
生产环境采样与测试方法一、空气采样与测试方法1. 样品采集在动态下进行。
室内面积不超过３０ｍ2，在对角线上设里、中、外三点，里、外点位置距墙ｌ米；室内面积超过３０ｍ2设东、西、南、北、中５点，周围４点距墙１米。
采样时，将含营养琼脂培养基的平板直（径９ｃｍ）置采样点约（桌面高度），打开平皿盖，使平板在空气中暴露５分钟。
2. 细菌培养在采样前将准备好的营养琼脂培养基置于３５０Ｃ士２０Ｃ培养２４ｈ，取出检查有无污染，将污染培养基剔除。
将已采集的培养基在６小时内送实验室，于３５０Ｃ士２０Ｃ培养４８ｈ观察结果，计数平板上细菌菌落数。
3. 菌落计算y1=A×50000 / S1×t式中：y1--空气中细菌菌落总数，cfu/m3；Ａ--平板上平均细菌菌落数；S1--平板面积，ｃｍ2；t--暴露时间，min.二、工作台表面与工人手表面采样与浏试方法1. 样品采集工作台：将经灭菌的内径为５ｃｍＸ５ｃｍ的灭菌规格板放在被检物体表面，用一浸有灭菌生理盐水的棉签在其内涂抹１０次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含１０ｍＬ灭菌生理盐水的采样管内送检。
工人手：被检人五指并拢．用一浸湿生理盐水的棉签在右手指曲面，从指尖到指端来回涂擦１０次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放人含１０ｍｌ灭菌生理盐水的采样管内送检。
2. 细菌菌落总数检测将已采集的样品在６ｈ内送实验室，每支采样管充分混匀后取１ｍＬ样液，放人灭菌平皿内，倾注营养琼脂培养基．每个样品平行接种两块平皿，置３５℃士２＇Ｃ培养４８ｈ，计数平板上细菌菌落数。
Y2=A/S2×10 Y3=A×10式中：Ｙ２--工作台表面细菌菌落总数，cfu/m2Ａ--平板上平均细菌菌落数；Ｓ--采样面积，ｃｍ2；Ｙ3--工人手表面细菌菌落总数，cfu/只手。
三、生产环境卫生指标标准1.装配与包装车间空气中细菌菌落总数应≤2500cfu/m3.2.工作台表面细菌菌落总数应≤２０cfu/m23. 工人手表面细菌菌落总数应≤300cfu/只手，并不得检出致病菌。
环境卫生监测现场实践熟悉细菌培养本的采集方法
环境卫生监测现场实践熟悉细菌培养本的采集方法
环境卫生监测中，常用的细菌培养样品采集方法如下：
1. 确定采样位置：根据监测的需要，确定采样点位，选择具有代表性的区域进行采样。
2. 选择采样工具：常用的采样工具包括无菌的棉拭子、无菌的擦拭棉签、无菌的采样袋等。
3. 采样前的准备：在采样前，务必进行手部消毒，并穿戴好相应的个人防护用品，例如无菌手套、口罩等。
4. 擦拭采样：使用无菌的棉拭子或擦拭棉签，从被监测区域擦拭或刮取样品。
对于水体等容易流动的样品，可使用无菌的容器进行收集。
5. 采样标识：采集样品后，务必在采样容器上进行标识，记录采样时间、采样地点等相关信息。
6. 样品保存：采集的样品尽量封存保存，并尽快送往实验室进行分析，避免长时间保存导致菌落数量变化。
需要注意的是，采样过程中要严格遵守无菌操作规范，以避免外界污染对样品分析结果的影响。
此外，根据具体的监测要求，还可以采用其他适用的采样方法。
在进行任何环境卫生监测时，都应该严格遵守相关法律法规，并由专业人员指导和操作。
医院环境微生物采样方法及注意事项概要
医院环境微生物采样方法及注意事项概要一、采样方法：1.选择采样位置：根据医院的不同区域，选择采样位置。
通常包括手术室、病房、走廊、洗手间等。
2.准备采样工具：准备好采样所需的工具，如支持培养基、无菌刷子、无菌容器等。
3.采样方式：根据采样位置的不同，采用不同的采样方式。
(1)空气采样：通常使用空气采样器采集空气中的微生物。
将空气采样器放置在所需采样的位置，进行一定时间的采样，然后将采样器送往实验室进行分析。
(2)表面采样：借助无菌刷子或无菌棉签，在需要采样的表面轻轻擦拭，将采样物放入无菌容器中。
(3)液体采样：如水样、洗手液等，将液体放入无菌容器中。
4.样品处理：将采集到的样品送往实验室进行分析。
二、注意事项：1.严格遵循无菌操作规范：采样时要注意无菌操作，避免污染样品。
2.选择合适的采样工具：采样工具要选择合适，能够有效采集到微生物。
每次采样时要更换新的刷子或棉签。
3.采样时间和距离：采样时间不宜过短或过长，通常为15-30分钟。
空气采样器与采样位置之间的距离不宜过远或过近，一般为1-2米。
4.避免交叉污染：采样时应注意避免与周围环境接触，避免交叉污染。
5.采样点位选择：采样点位的选择要代表该区域的整体情况。
通常选择在易污染、难清洁的区域进行采样。
6.标注样品信息：每个样品都应有详细的标注，包括采样位置、时间、采样者等信息，方便后续分析和比对。
7.采样频率：根据需要确定采样频率。
不同区域的采样频率可以有所不同，一般为每1-3个月进行一次。
总之，医院环境微生物采样是一项重要的工作，可以为医院提供科学依据，制定有效的污染控制策略。
采样时要严格遵守操作规范，选择合适的采样工具和采样方法，并注意采样时间、距离、点位选择等因素。
采样后要及时送往实验室进行分析，并进行详细的标注信息，确保采样结果的准确性和可靠性。
环境卫生微生物标本正确采集
消毒效果监测标本采集规范主要内容一、规范采样方法空气、物表、手、使用中消毒液、管道、血液透析水质监测二、存在问题与改进事项监测项目及频次科室监测项目监测周期ICU、手术室、产房、介入室、科室附属手术室空气培养每季度物表培养手培养供应室空气培养每季度物表培养手培养其他：按供应室规范执行一、采样方法科室监测项目监测周期血透室空气培养每季度物表培养手培养透析用水监测细菌培养每月一次；内毒素监测每季度一次内镜中心空气培养每季度一次物表培养手培养软式内镜抽检各临床科室空气培养每半年一次输血科储血冰箱空气培养每月一次（一）空气消毒效果监测（空气培养）监测频次？普通病房——半年监测一次对与错暴露时间？1、洁净手术室、洁净病房：暴露30分钟；2、ICU、非洁净手术室、导管室、产房、器官移植病房、血液病病区、烧伤病房：暴露15分钟；3、其余病区：暴露5分钟紫外线测试卡的使用监测紫外线灯强度：每季度一次。
空气消毒机不监测•监测频次：每季度（移动紫外线灯）•空气消毒机：不监测，但需记录启用时间，每天开机频次，定期更换紫外线灯（二）物表消毒效果监测可以监测规则或不规则的物表；作菌落计数或目标细菌检测物表采样方法被采物表≥100cm2取100cm2：用5cmx5cm灭菌规格板放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样4个规格板面积，剪去手接触部分，将棉拭子放入装有5ml生理盐水的试管中送检。
被采表面＜100cm2：取全部表面：如门把手等小型物体则采用，棉拭子直接涂抹物体表面采样，剪去手接触部分，将棉拭子放入装有5ml生理盐水的试管中送检。
备注：规范是10ml洗脱液，我院是5ml生理盐水（三）手消毒效果监测采样方法被检者五指并拢，用浸有生理盐水的棉拭子在双手指曲面从指根到指端往返涂擦2次，涂擦过程中同时转动棉拭子；将棉拭子接触操作者的部分剪去，投入5ml生理盐水的试管内，及时送检。
医院环境微生物采样方法及注意事项
四、使用中消毒液染菌量测定
（一）采样时间：采取更换前使用中的消毒剂与灭菌器械保 存液；
（二）采样量及方法：在无菌条件下，用无菌吸管吸取 1.0ml被检样液，加入9.0ml含相应中和 剂的采样管内混 匀；
（三）结果判断： 使用中消毒液染菌量≤100cfu/ml,不得检出致病菌；无
菌物品保存液应无菌生长。
精品课件
三、物品和环境表面消毒效果监测
（一）采样时间：在消毒处理后进行采样。 （二）采样面积：被采面积＜100cｍ2取全部表面；
采样面积≥100 cｍ2，取100cｍ2 （三）采样方法：棉拭子法：用5×5cm的标准灭菌
规格版，放在被检物体表面，用浸有含有相应中 和剂的无菌洗脱液的棉拭子，在规格板内横竖往 返均匀涂抹5次，并随之转动棉拭子，可连续采样 1～4个规格板面积。剪去手接触部分，并将棉拭 子放入装有10ml含相应中和剂的试管内，立即送 检。
精品课件
步骤： （在25cm2规格板内横竖往返均匀涂抹各5次，连续采4个规格
板面积）
精品课件
精品课件
（四）结果判断
标准值
环境 类别
范围
Ⅰ类 层流洁净手术室、层流洁净病房
菌落 总数 cfu/c
m2
致病 菌＊
≤5
不得பைடு நூலகம்出
Ⅱ类
普通手术室、产房、婴儿室、早产儿室、烧伤病房、供 应室无菌区
≤5
不得检出
注Ⅲ：类＊致儿 治科 疗病病 室菌房 、指化、溶验妇室产血、科性供检链应查球室室清、菌洁注、区射金、室黄各、类色急普葡诊通室萄病、球房和换菌房药。间室母、婴同≤室10 、早产不得儿检室出、 Ⅳ类婴儿传室染、病新科及生病儿房室及儿科病房的物体表面不得检出沙≤门1氏5 菌。不得检出
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《环境微生物检测——采样方法》场景剧本题目：环境微生物检测——采样方法
主题曲、插曲待定
影片主要角色：
男1号梁总，25岁，业务主管（西装革履）
男或女2号小李，20岁，采样组组长（休闲）
女3号小黄，20岁，前台靓女（时尚的靓女）
男3号** 客户，25岁，（带领的衣服）（演成搞笑的土豪人物）
男或女4号：小王，19岁，某学校的顶岗实习生
第一场：
场景：公司前台（汇标公司的前台，甲在埋头做报表，乙在打电话和客户沟通，前台靓女在接水）
时间：上午
人物：前台靓女、客户，前台靓女以及同事两三个。
从门外来了一个大约25岁男性在张望。
前台靓女赶紧走出来打开门。
前台靓女：您好。
客户：这里是汇标检测公司吗？
前台靓女：是啊，有什么可以帮到您？
客户：我是来自大中国建筑集团有限公司的××。
最近我们一个大楼要竣工验收，需要对水质进行检测，你们能做吗？我们不差钱。
前台靓女指引客户坐下，倒一杯水。
前台靓女：这些业务我们做过很多。
我们是第三方检测公司，有对该项目进行检测的资质，严格按照国家标准做的。
客户：对水质都监测什么呀？
前台靓女：《建筑给水排水及采暖工程施工质量验收规范》GB50242-2002中明文规定：
“4.2.3 生活给水系统管道在交付使用前必须冲洗和消毒，并经有关部门取样检验，符合国家《生活饮用水标准检验方法》方可使用。
生活饮用水标准检验方法GB/T5750 – 2006，具体包括13个分项。
包括水样采集和保存、感官性状和物理指标、有机物指标、消毒副产品指标、金属指标和微生物指标等等。
对建筑工程竣工验收水质检测，我们一般取pH、色度、浑浊度、臭味、肉眼可见物、总游离氯、耗氧量、菌落总数、大肠菌群等指标。
客户：听起来很专业，好！我信赖你们公司。
前台靓女：那麻烦您去我们主管办公室对签订合同有关事宜进行协商。
第二场：
场景：办公室
时间：某上午
人物：业务主管梁总、采样组组长小李
梁总：小李，这里刚接和大中国建筑集团有限公司签了一个合同。
这可是一个大客户，你们要认真对待。
你赶紧安排人过去采样吧。
小李：好的。
我会尽快安排人过去采样。
您放心吧。
第三场：
场景：公司走廊
时间：某上午
人物：采样组组长小李，实习生小王
小李：小王，我们明天要去广州海珠区琶洲那边对一个大楼的自来水进行采样，你准备一下。
小王：好的。
我会马上去做。
第四场：
场景：实验室
时间：任意
人物：小李
准备10个已经包扎好的采样瓶、样品箱、标签纸、记号笔、签字笔、采样记录表、小李准备采样前东西。
（拍两遍。
一遍是小李对着镜头说。
一遍是小李整理器材）。
对着镜头自白：准备工作很重要。
对于生活饮用水的检测一般分为两类：一类是理化指标，一类是微生物指标。
理化指标***（随便说点啥，后期处理是快进）。
对于微生物指标，我们要考虑在哪里采样，采什么样品，怎么采样和样品怎么保存的问题。
去哪里采样就要考虑交通方式，因为对于微生物样品的保存时间只有4个小时。
选取合适的交通方式，并且预约车辆。
采什么样品。
对于饮用水的微生物检测一般考虑水样是自然水源还是末梢水。
自然水源包括河流、湖泊、泉水和井水等。
末梢水一般是水龙头水。
针对不同样品采用不同的方法。
比如。
对于微生物指标选取采样瓶是玻璃材质，且灭过菌，灭菌不能超过两周。
样本选取很重要。
对于本项目来说，采样点的选择是选取中高层，随机采8-10个样品。
样品采完后，把采样瓶放进低温箱里，尽快带回实验室进行检测。
第五场：
场景：某个大楼的卫生间内（准备在学生宿舍的卫生间内，找个干净点的宿舍）
人物：小李和实习生
小李：小王，你在学校有没有学过怎么样采水样？
小王：这太简单了，我们全部都学过的。
小李：我们对同一水源，同一时间采集几类检测指标水样时，应该采集供微生物学指标检测的水样。
这里有采样瓶等，你就采个样给我看看吧。
小王：好的。
小王直接用手拿一个采样瓶，打开，直接接了半瓶水，荡洗，倒掉，又接了一瓶水（手指不小心接触到瓶口）。
盖上。
搞定。
小李在一遍看。
小李：你在采样中犯了7个错误？
小王：啊？不会吧。
好歹我的环境微生物技术这门课考了90多分呢。
小李一遍说一遍示范。
首先你需要用酒精把手消毒，避免手上的细菌污染水源。
（擦酒精）
其次，要用酒精或者用灼烧的方法对水龙头进行消毒，然后拧开水龙头5-10分钟。
这三个步骤你都没有做。
在准备采样瓶的时候，我特意准备了加1.5% Na2S2O3和不加Na2S2O3的，你在使用采样瓶前没有仔细检查，偏偏拿了一个没有加Na2S2O3的。
小王：奥。
我知道了。
加Na2S2O3是为了出去自来水中的氯气，因为自来水中的氯气会杀死微生物。
小李：对了。
因为氯气会影响微生物，那么在培养的时候有些微生物长不起来。
最后检测结果就偏小了。
小王一边听一边点头。
小李：采水前我看到你用水样荡洗，这样做是不对的。
小王：不会呀。
我明明记得有次做实验采水样的时候需要荡洗的呀。
小李：你肯定记错了。
对生活饮用水的理化指标（油类除外）进行采样前，需要用水样对荡洗采样器、容器和塞子2-3次的。
但是，对于微生物学指标是不需要的，并且要避免手指和其他物品对瓶口的沾污。
小王：（一遍挠头，一遍不好意思笑了）奥，原来是这样。
是我自己记错了。
小李：另外，采水的时候，三角瓶倾斜，以免水溅出。
采样体积为采样瓶体积的80%即可。
盖上塞子，把牛皮纸重新包扎上。
最后，在标签纸上写上采样时间采样地点采样人等信息，把标签纸贴在采样瓶上。
以上这些步骤你也没有做。
小王一边听一遍佩服地点头：“我会好好努力的”。