手、设备表面微生物取样方法
手术部位微生物采样方法
手术部位微生物采样方法①分泌物常规检查＋革兰染色的操作方法：先用无菌生理盐水擦拭切口2遍，再用含生理盐水的无菌棉签取分泌物放入无菌试管中，塞上试管塞，送检。
②细菌培养的操作方法：先用无菌生理盐水擦拭切口2遍，再用含生理盐水的无菌棉签用力擦拭病灶边缘或浓腔囊避后放入无菌试管中，塞上试管塞，送检。
但厌氧培养时应吸取深部标本而不能擦拭表面，同时切记要使用厌氧培养基进行培养。
③采样注意事项：采样时不能用干棉签取样，一定要用无菌盐水蘸湿棉签再取样并及时送检。
送检标本时要注明采集标本的解剖部位，必须区分表浅切口还是深部切口。
如革兰染色出现上皮细胞提示标本已受皮肤正常菌群污染妇产科手术切口感染38例李秀琦王完英为了解妇产科手术切口感染的原因，有效控制切口感染的发生，笔者对3年医院妇产科收治的手术住院病历进行调查。
1. 资料与方法对2001年6月~2004年6月，我院妇产科收治的628例手术患者进行了回顾性调查分析。
参照《医院感染学》医院感染的诊断标准。
2. 结果2.1 各类手术与切口感染的关系调查妇产科收治的各类手术628例，手术后切口感染38例，切口感染率为6.05%，其中Ⅰ类手术感染率为 1.28%，Ⅱ类手术感染率为90.60%，Ⅲ类手术感染率为16.66%。
2.2 急诊手术急诊手术感染率为3.48%，非急诊手术感染率为1.68%，两者差异有显著性(P<0.05)。
2.3 手术时间手术时间<150 min，感染率为4.06%，手术时间≥150 min，感染率为13.68%。
2.4 环境因素对切口感染的影响（1）病房大小：住单人房间感染率为0.60%；住3人房间的感染率为6.78%；住4人房间的感染率为9.37%。
（2）接台手术：调查中发现38例切口感染的手术患者，手术时接台26例中感染有6例，占23.07%。
剖宫产手术切口感染率为7.88%，高于其他妇产科手术。
(3)季节变化：冬季切口感染率高于秋季，春夏季次之。
微生物表面取样方法
微生物表面取样方法引言：微生物是一类极其微小的生物体，存在于各种环境中，包括土壤、水体、空气中以及生物体的表面等。
研究微生物对于了解生物界的多样性、生态系统的功能以及人类健康等具有重要意义。
然而，微生物的研究面临着一个重要的问题，即如何有效地采集微生物样品。
本文将介绍几种常用的微生物表面取样方法。
一、刷拭法刷拭法是最常用的微生物表面取样方法之一。
该方法适用于采集微生物富集在固体表面的样品，如建筑物、设备表面等。
操作步骤如下：1. 选择一把消毒过的刷子，并将其浸入含有适当缓冲液的容器中。
缓冲液的选择应根据研究的目的而定，常见的有PBS缓冲液、生理盐水等。
2. 将刷子沿着被采样表面来回刷拭，以保证样品的均匀采集。
3. 将刷子放入含有缓冲液的试管中，并进行震荡或振荡，以使微生物从刷子上脱落到缓冲液中。
4. 取出试管，将液体倒入试管中，并进行后续分析。
二、擦拭法擦拭法是一种适用于平滑表面的微生物采样方法。
常见的应用场景包括医院、实验室等地的台面、玻璃器皿等。
操作步骤如下：1. 选择一块消毒过的无纺布或棉签，并将其浸入含有缓冲液的容器中。
2. 将布或棉签沿着被采样表面来回擦拭，以保证样品的均匀采集。
3. 将布或棉签放入含有缓冲液的试管中，并进行震荡或振荡，使微生物从布或棉签上脱落到缓冲液中。
4. 取出试管，将液体倒入试管中，并进行后续分析。
三、粘贴法粘贴法适用于采集微生物富集在不规则表面或微小孔隙中的样品，如土壤、植物叶片等。
操作步骤如下：1. 准备一块消毒过的胶片或胶带，并将其贴在采样区域上。
2. 将胶片或胶带撕下，并放入含有缓冲液的试管中。
3. 进行震荡或振荡，使微生物从胶片或胶带上脱落到缓冲液中。
4. 取出试管，将液体倒入试管中，并进行后续分析。
四、切割法切割法适用于采集微生物富集在固体样品表面的样品，如食品、植物组织等。
操作步骤如下：1. 准备一把消毒过的刀具，并将其切割在需要采样的区域。
2. 将切割下来的样品放入含有缓冲液的试管中。
微生物检测标准
微生物取样方法、微生物检测标准举例一：一、空气采样及检验方法1培养基：普通营养琼脂平板，按GB4789.28中3.7条配制2采样（空气沉降法）2.1布点：面积小于30平方米的车间，设一对角线，在线上取3点，即中心一点，两端在距墙1米处各取一点；面积大于30平方米的车间，设东、西、南、北、中5个点，其中东、西、南、北点均距墙1米。
2.2采样高度：与地面垂直高度80-150厘米。
2.3采样方法；用直径为9厘米的普通营养琼脂平板在采样点上暴露20分钟盖上送检培养。
3培养：于37℃培养24小时。
4检测频率：每周空气质量标准：生车间、熟车间、成品车间：低于100个半成品库、成品库：低于10个二、设备的采样与检验方法根据生产过程所要求的重点卫生部位，实验室对其进行涂抹采样，进行细菌总数检验。
1采样方法1.1涂抹法（适用于表面平坦的设备和工器具产品接触面）取经过灭菌的铝片框（框内面积为50平方厘米）放在需检查的部位上，用无菌棉球蘸上无菌生理盐水擦拭铝片中间方框部分，擦完后立即将棉球投入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。
1.2贴纸法（适用于表面不平坦的设备和工器具接处面）将无菌规格纸（5×5厘米，纸质要薄而软）用无菌生理盐水泡湿后，于需测部分分别贴上两张，两张纸面积共50平方厘米，然后取下放入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。
2检验方法2.1细菌总数的检验将上述样液充分振摇，根据卫生情况，相应地做10倍递增稀释，选择其中2-3个合适的稀释度作平皿倾注培养，培养基用普通营养琼脂，每个稀释度作2个平皿，每个平皿注入1毫升样液，于37℃培养24小时后计菌落数。
结果计算表面细菌总数（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均数×样液稀释倍数/30×22.2致病菌的检验沙门氏菌，参照GB4789.4进行金黄色葡球菌，参照GB7918.5进行4.检验合格标准：细菌总数10－100个∕cm2，5.关键点：细菌总数≤10个∕cm2一般区域：细菌总数≤100个∕cm2三、人员手表面细菌污染情况的检验1. 采样方法：用一支蘸有无菌生理盐水的棉拭子涂擦被检对象手的全部，反复两次，涂擦的时候棉拭子要相应地转动，擦完后，将手接触部分剪去，将棉拭子放入装有10毫升无菌生理盐水的试管内送检培养。
微生物样品的取样方法及取样要求
微生物样品的取样方法及取样要求样品取样的要求1）在取样之前应确认货、证是否相符。
2）取样过程中应避免与水等环境的不良因素影响，防止样品被污染。
3）取样用具（如注射器、采血管、试管、探子、铲子、匙、取样器、剪子、样品袋等）必须是经过灭菌的。
4）对采集的样品一般要求随机取样。
若怀疑最有可能受病原体污染或者带有病原体的样品，可以进行选择取样。
5）根据样品种类（如盒装、袋装、瓶装和罐装），应取完整密封的样品。
如果样品很大，则需用无菌取样器取样；若样品是粉末，应边取边混合；若样品是液体的，通过振摇即可混匀；若样品是冷冻的，应保持冷冻状态（可放在冰内、冰箱的冷盒内或低温冰箱内保存），而非冷冻动物产品须保持在0℃~5℃中保存。
6）取样前或取样后应在盛装样品的容器或样品袋上立即贴上标签，每件样品必须标记清除（包括品名、来源、数量、取样地点、取样人及取样日期）。
7）获取有关取样产品的信息：如样品名称、批量大小、包装类型、包装容器体积、生产线、产品编号或控制号、批量号、标签内容、包装破损状况、产品存放地点或建筑物的基本情况等。
8）当客户对所规定的取样程序有偏离、添加或删节的要求时，应详细记录这些要求和相关的取样资料，并记入包含检测结果的所有文件中，同时告知相关人员。
9）当取样作为检测一部分时，实验室应有程序记录与取样有关的资料和操作。
这些纪录应包括所用的取样程序、取样人的识别、环境条件（如果相关）、必要时有抽样地点的图示或其他等效方法，如果合适，还应包括取样程序所依据的统计方法。
食品微生物学的取样点食品微生物的取样计划中常包括以下取样点：原料、生产线（半成品、环境）、成品、库存样品、零售商店、或批发市场、进口或出口口岸。
原料的取样包括食品生产所用的原始材料、添加剂、辅助材料及生产用水等。
生产线样品是指食品生产过程中不同加工环节所取的样品，包括半成品、加工台面、与被加工食品接触的仪器面以及操作器具等。
对生产线样品的采集能够确定细菌污染的来源，可用于食品加工企业对产品加工过程卫生状况的了解和控制，同时能够用于特定产品生产环节关键控制点的确定和HACCP的验证工作。
洁净区表面微生物检测操作流程
洁净区表面微生物测试操作流程
1.洁净区表面微生物测试必须在动态下监测。
2.从冷藏柜中取出接触碟，并恢复至室温。
3.将接触碟传送至洁净间，打开外包装，并标记取样地点（部位）、取样日期和取样人。
洁净区取样：每个房间检测1个墙壁1个台面；四联体和分体洁净服取样四个点：额头、胸前、左手腕、右手腕；左手或右手的五个手指。
4.取样：打开碟盖，将平板倒印在物体表面上，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀充分接触，计时1min，再盖上碟盖。
5.取样后，需要立即用适当的消毒剂擦拭被取样表面，以除去残留琼脂。
6.将接触碟传送出洁净间，于35~37℃倒置培养24~48h（设置空白对照）。
7.计算菌落数并记录。
微生物涂抹方法及标准
微生物涂抹方法及标准 Company number：【0089WT-8898YT-W8CCB-BUUT-202108】工作台（机械器具）表面与工人手表面采样与测试方法样品采集：(1)取样频率：a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行擦拭检验，以便了解车间卫生清扫消毒情况。
b)全厂统一放长假后，车间生产前，进行全面擦拭检验。
c)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间可疑处进行擦拭，如有检验不合格点，整改后再进行擦拭检验。
d)实验新产品，按客户规定擦拭频率擦拭检验。
e)对工作表面消毒产生怀疑时，进行擦拭检验。
f)正常生产状态的擦拭，每周一次。
（2）采样方法：a) 工作台（机械器具）：用浸有灭菌生理盐水的棉签在被检物体表面（取与食品直接接触或有一定影响的表面）取25cm2的面积，在其内涂抹10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。
b) 工人手：被检人五指并拢，用浸湿生理盐水的棉签在右手指曲面，从指尖到指端来回涂擦10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。
（3）采样注意事项：擦拭时棉签要随时转动，保证擦拭的准确性。
对每个擦拭点应详细记录所在分场的具体位置、擦拭时间及所擦拭环节的消毒时间细菌·大肠菌群的检测培养:样液稀释：将放有棉棒的试管充分振摇。
此液为1：10稀释液。
如污染严重，可十倍递增稀释，吸取1ml 1：10样液加9ml无菌生理盐水中，混匀，此液为1：100稀释液。
细菌总数：（1）以无菌操作，选择1～2个稀释度各取1ml样液分别注入到无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿（平行样），将已融化冷至45℃左右的平板计数琼脂培养基倾入平皿，每皿约15ml，充分混合。
（2）待琼脂凝固后，将平皿翻转，置36℃±1℃培养48 h后计数。
（3）结果报告：报告每cm2食品接触面中或每只手的菌落数（4）细菌菌落总数检测将已采集的样品在6h内送实验室，每支采样管充分混匀后取1m L样液，放人灭菌平皿内，倾注营养琼脂培养基.每个样品平行接种两块平皿，置35℃士2'C培养48 h，计数平板上细菌菌落数。
微生物涂抹方法及标准
微生物涂抹方法及标准Last revision on 21 December 2020工作台（机械器具）表面与工人手表面采样与测试方法样品采集：(1)取样频率：a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行擦拭检验，以便了解车间卫生清扫消毒情况。
b)全厂统一放长假后，车间生产前，进行全面擦拭检验。
c)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间可疑处进行擦拭，如有检验不合格点，整改后再进行擦拭检验。
d)实验新产品，按客户规定擦拭频率擦拭检验。
e)对工作表面消毒产生怀疑时，进行擦拭检验。
f)正常生产状态的擦拭，每周一次。
（2）采样方法：a) 工作台（机械器具）：用浸有灭菌生理盐水的棉签在被检物体表面（取与食品直接接触或有一定影响的表面）取25cm2的面积，在其内涂抹10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。
b) 工人手：被检人五指并拢，用浸湿生理盐水的棉签在右手指曲面，从指尖到指端来回涂擦10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。
（3）采样注意事项：擦拭时棉签要随时转动，保证擦拭的准确性。
对每个擦拭点应详细记录所在分场的具体位置、擦拭时间及所擦拭环节的消毒时间细菌·大肠菌群的检测培养:样液稀释：将放有棉棒的试管充分振摇。
此液为1：10稀释液。
如污染严重，可十倍递增稀释，吸取1ml 1：10样液加9ml无菌生理盐水中，混匀，此液为1：100稀释液。
细菌总数：（1）以无菌操作，选择1～2个稀释度各取1ml样液分别注入到无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿（平行样），将已融化冷至45℃左右的平板计数琼脂培养基倾入平皿，每皿约15ml，充分混合。
（2）待琼脂凝固后，将平皿翻转，置36℃±1℃培养48 h后计数。
（3）结果报告：报告每cm2食品接触面中或每只手的菌落数（4）细菌菌落总数检测将已采集的样品在6h内送实验室，每支采样管充分混匀后取1m L样液，放人灭菌平皿内，倾注营养琼脂培养基.每个样品平行接种两块平皿，置35℃士2'C培养48 h，计数平板上细菌菌落数。
表面微生物检测标准操作规程
目的：建立洁净室（区）中表面微生物测试标准操作规程，保证药品在规定洁净级别内进行生产。
范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。
职责：质量管理部、QA检测员内容：1、测试方法:擦拭法2、仪器、设备、培养基培养皿：Φ90mm×15mm 培养皿培养基：营养琼脂培养基生化培养箱：必须定期对生化培养箱进行校验。
自动台式灭菌器：使用时应严格按照仪器说明书操作。
3、采样位置和采样点数根据洁净区内设施、设备等表面对产品和洁净室环境的影响程度，通常将表面分为三类：关键表面（与产品、容器及密封件直接接触或暴露于产品、容器及密封件的表面）、一般表面（如设备的外表面、墙壁等）和地板。
表面微生物监测的取样点数依据下列因素确定：3.2.1洁净区（室）的大小；3.2.2设备、管路等的复杂程度；3.2.3生产活动的重要性；3.2.4易受污染的部位。
如关键功能间的门、地面、墙面、生产设备的关键部位等。
不宜每次固定在同一点取样，应在取样点附近的不同位置取样，使测试结果更具代表性。
4、采样量：表面微生物取样面积宜控制在25cm2左右。
5、测试状态及时间：动态测试。
6、测试依据测试区域的取样点数，按照《培养基配制标准操作规程》制备适量的营养琼脂培养基。
将灭菌的棉签用灭菌注射用水润湿（棉签容易脱落纤维，故在使用前应先用注射用水预先清洗，以免纤维遗留在取样表面），并将其靠在瓶上挤压以除去多余的水分。
将棉签按在取样物表面上，用力使其稍弯曲，平稳而缓慢地擦拭取样表面约25cm2，擦拭过程应覆盖整个表面。
翻转棉签，让棉签的另一面也进行擦拭。
但与前次擦拭移动方向垂直。
擦拭方法如图：擦拭完成后，将棉签放入无菌试管中并密封，检测时，加入15ml灭菌生理盐水，充分振荡混匀，取1ml样液注入到培养平皿中，加入约15ml配置好的营养琼脂培养基充分混匀，待培养基凝固。
7、培养：取样结束后将平皿复倒置于生化培养箱内35℃培养72小时，并以未采样的营养琼脂平皿作对照皿。
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手、设备表面微生物取样方法
一、携带物品：
酒精灯、75%酒精棉球若干、不锈钢剪、镊子、棉签、10ml生理盐水、一次性手套。
备注：不锈钢剪、镊子、棉签、10ml生理盐水须经高温蒸汽灭菌；10ml生理盐水根据实际所需准备多支；一次性手套需经辐照灭菌；
二、操作方法：
1、手取样
点燃酒精灯，取样人员戴上一次性手套，用棉签蘸取少许无菌生理盐水涂抹车间人员手正背面，反复两次，在涂抹时要转动棉签，使各部位能均匀。
完成后用不锈钢剪剪去取样人员手持部段，然后将棉签投入10ml生理盐水中，盖上试管盖。
2、设备表面取样
点燃酒精灯，取样人员戴上一次性手套，用棉签蘸取少许无菌生理盐水涂抹设备平滑表面（面积自己预先估计一个大概数值，25、50或100cm2等），反复涂抹两次，在涂抹时要转动棉签，使各部位能均匀。
完成后用不锈钢剪剪去取样人员手持部段，然后将棉签投入10ml生理盐水中，盖上试管盖。
三、细菌及大肠菌群的培养（具体操作时以GB4789.2-2010和GB4789.3-2003为准）
样液稀释：将放有棉棒的试管充分振摇。
配成1：10样液。
根据污染情况，进行十倍递增稀释，吸取1ml 的1：10样液加9ml无菌生理盐水中，混匀，此液为1：100稀释液，以此类推。
细菌总数：
1、以无菌操作，选择1～2个稀释度各取1ml样液分别注入到无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿，及时将冷却至46℃左右的平板计数琼脂培养基倾注平皿，每皿约15-20ml，转动平皿使其充分混合均匀。
2、待琼脂凝固后，将平皿翻转，置36℃±1℃培养48 h后计数。
3、结果报告：报告每25、50或100cm2数食品接触面或每只手的菌落数。
大肠菌群：
1、以无菌操作，选择3个稀释度各取1ml样液分别接种到乳糖胆盐发酵管内，每个稀释度接种三管。
2、将乳糖胆盐发酵管置于36℃±1℃培养24±2h。
所有乳糖胆盐发酵管都不，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，根据标准做证实实验。
3、结果报告：按乳糖胆盐发酵管产气管数，查MPN表报告每25、50或100cm2食品接触面或每只手的大肠菌群数值。
四、记录
1、记录要尽量详实，对所能得到的数值都要做书面记录。
在车间取样时，取样日期，取样时间，设备上具体的取样点，取样地点，车间人员，取样时温度，湿度等。
2、要对操作过程中出现的状况进行记录，总结调整。
五、注意事项及状况处理
1、不锈钢剪及镊子如遭污染或需重复使用，需用75%酒精棉球擦拭后再经酒精灯灼烧。
2、点燃酒精灯的作用是使酒精灯附近小范围成为一个无菌区域，在操作过程中，尽量合取样人员，工作人员及物品处于该区域附近。
3、取样人员携带的无菌物品要放置在无菌袋内带入车间，以避免途中污染。
4、在取样过程中可能会有各种状况出现，所需的物品可以自己多带备份并多做总结。
5、设备取样表面必须是平滑表面。
6、从取样到化验时间尽量控制在六小时内。