高效液相色谱-检测器
高效液相色谱法所用的检测器
高效液相色谱法所用的检测器
高效液相色谱法通常使用以下检测器：
1. 紫外光吸收检测器（UV检测器）: 这是最常用的检测器之一。
它利用样品分子在特定波长下吸收的紫外光的数量来检测分离出来的化合物。
2. 荧光检测器:此检测器利用分离出来的化合物的荧光强度来检测分离出来的化合物。
这可以使它有效地检测探测极小浓度的化合物。
3. 电导检测器: 此检测器通过检测样品中离子的电导率来检测分离出来的化合物。
这种检测器通常用于离子交换色谱。
4. 质谱检测器（MS检测器）：在某些情况下，需要识别和定量化合物。
在这种情况下，使用质谱检测器非常有用。
它将化合物的分子质量与一个反应谱库进行比较，以进行准确的定量和鉴定。
5. 折射率检测器（RI检测器）: 检测样品分子与溶剂的差异折射率。
该检测器对于不具有紫外吸收或荧光的化合物是很有用的。
不同液相检测器的区别
不同液相检测器的区别公司标准化编码 [QQX96QT-XQQB89Q8-NQQJ6Q8-MQM9N]高效液相色谱仪的常用检测器有哪几种，有什么区别高效液相色谱仪常用检测器种类及分析检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变化转化为可供检测的信号，常用检测器有紫外吸收、荧光、示差折光、化学发光等。
1.紫外可见吸收检测器(ultraviolet_visibledetector,UVD)紫外可见吸收检测器(UVD)是HPLC中应用最广泛的检测器之一，几乎所有的液相色谱仪都配有这种检测器。
其特点是灵敏度较高，线性范围宽，噪声低，适用于梯度洗脱，对强吸收物质检测限可达1ng，检测后不破坏样品，可用于制备，并能与任何检测器串联使用。
紫外可见检测器的工作原理与结构同一般分光光度计相似，实际上就是装有流动地的紫外可见光度计。
(1)紫外吸收检测器紫外吸收检测器常用氘灯作光源，氘灯则发射出紫外-可见区范围的连续波长，并安装一个光栅型单色器，其波长选择范围宽(190nm-800nm)。
它有两个流通池，一个作参比，一个作测量用，光源发出的紫外光照射到流通池上，若两流通池都通过纯的均匀溶剂，则它们在紫外波长下几乎无吸收，光电管上接受到的辐射强度相等，无信号输出。
当组分进入测量池时，吸收一定的紫外光，使两光电管接受到的辐射强度不等，这时有信号输出，输出信号大小与组分浓度有关。
局限：流动相的选择受到一定限制，即具有一定紫外吸收的溶剂不能做流动相，每种溶剂都有截止波长，当小于该截止波长的紫外光通过溶剂时，溶剂的透光率降至10%以下，因此，紫外吸收检测器的工作波长不能小于溶剂的截止波长。
(2)光电二极管阵列检测器(photodiodearraydetector，PDAD)也称快速扫描紫外可见分光检测器，是一种新型的光吸收式检测器。
它采用光电二极管阵列作为检测元件，构成多通道并行工作，同时检测由光栅分光，再入射到阵列式接收器上的全部波长的光信号，然后对二极管阵列快速扫描采集数据，得到吸收值(A)是保留时间(tR)和波长(l)函数的三维色谱光谱图。
高效液相色谱仪的操作步骤
高效液相色谱仪的操作步骤高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分离和分析技术。
它利用液体流动相和固定相之间的相互作用，将样品中的混合物分离出来，并通过检测器进行定量分析。
本文将介绍高效液相色谱仪的具体操作步骤。
1. 准备工作在进行高效液相色谱仪的操作之前，首先需要进行一些准备工作。
检查色谱柱是否安装正确，确保色谱柱是干净的，并检查流动相的配制是否准确。
2. 样品制备根据需要分析的物质，准备好待测样品。
样品制备可以包括溶解样品、过滤样品等步骤，以确保样品的纯净度和稳定性。
3. 仪器开机将高效液相色谱仪接通电源，打开仪器的电源开关。
等待仪器初始化，并确保仪器各个部分正常工作。
4. 设置参数在仪器上设置分析所需的参数。
包括选择适当的检测器类型和检测波长、设置流量、温度等。
5. 启动系统启动高效液相色谱仪系统，等待系统稳定。
通常需要一段时间使得流动相在管路中充分平衡，并确保流量稳定。
6. 校正进行色谱柱的校正。
校正过程包括流量校正、波长校正等。
通过校正可以保证仪器输出结果的准确性和可靠性。
7. 注射样品将样品通过注射器引入色谱柱中，控制样品的注射量，通常在微升至毫升的量级。
确保样品的注射量稳定和准确。
8. 分离分析开始运行高效液相色谱仪系统，进行样品的分离与分析。
在此期间，流动相通过色谱柱，将样品中的化合物根据它们与固定相之间的相互作用进行分离。
9. 监测结果通过检测器对分离后的化合物进行监测。
根据检测器的信号，可以得到每个化合物的峰面积、保留时间等数据。
10. 数据处理将监测到的信号输入到数据处理软件中，进行结果的计算和分析。
通常可以得到各个化合物的峰高、峰面积等数据，从而实现对样品的定量分析。
11. 关机分析结束后，关闭高效液相色谱仪的电源开关，并进行必要的清洗和维护工作。
确保仪器的正常运行，并延长其使用寿命。
总结：高效液相色谱仪的操作步骤涵盖了仪器准备、样品制备、仪器设置、校正、样品注射、分离分析、结果监测和数据处理等多个方面。
中药制剂高效液相常见的色谱柱类型及其检测器类型
中药制剂高效液相常见的色谱柱类型及其检测器类型中药制剂高效液相常见的色谱柱类型包括C18、C8、Phenyl、CN、NH2等。
其中C18属于常规的反相色谱柱，适用于大多数化合物的分离；C8柱的分离效果较C18柱略差，但可以用于分离易失活的化合物；Phenyl柱可以增加由于芳香环与反相胶体间的作用而引起的选择性；CN柱比C18柱对亲水性化合物更为灵敏，适合分离极性化合物；NH2柱与CN柱相似，适于极性化合物的分离。
常见的检测器类型包括UV检测器、荧光检测器、电化学检测器和质谱检测器。
UV检测器是常见的检测器类型，根据样品吸收UV光谱特征进行定量或者鉴定；荧光检测器则根据荧光光谱特征进行检测，其对于化合物的灵敏度一般高于UV 检测器；电化学检测器包括阳极和阴极两种类型，可用于检测电化学反应产生的电信号，最常用的电化学检测器是电化学荧光检测器；质谱检测器则可以对化合物的结构进行进一步的确认和鉴定，其灵敏度和选择性都比较高。
高效液相色谱仪紫外检测器原理
高效液相色谱仪紫外检测器原理
高效液相色谱仪紫外检测器是一种常用的色谱检测器。
它基于紫外光的吸收特性，对样品进行定量分析。
其原理是：样品在流动相中随着溶液流动进入检测器中，通过紫外灯激发发生吸收，从而测量出样品的吸光度值。
在检测过程中，紫外灯照射流动相，使样品中的化合物吸收紫外光能量，形成一个吸收峰。
然后，检测器通过光电二极管将吸收峰转换成电信号，并经过放大和滤波后，通过计算机处理和分析，得到样品中化合物的浓度。
高效液相色谱仪紫外检测器的检测范围为200-600nm，其中
254nm和280nm是常用的波长。
不同的化合物在不同波长下的吸收峰也不同，因此可以通过选择合适的波长，来检测不同种类的化合物。
另外，紫外检测器的检测灵敏度和线性范围也是影响检测效果的关键因素，通常采用不同波长下的标准溶液，来确定灵敏度和线性范围。
总之，高效液相色谱仪紫外检测器是一种可靠、灵敏、准确的色谱检测器，可以用于快速、准确地检测各种化合物的浓度。
- 1 -。
液相色谱检测器的介绍-实验室
S
R
20/32
示差折光（RI ）检测 的原理
原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试 样各组分浓度。 优点：通用型检测器
缺点：
1）对温度压力变化敏感
2）不能用于梯度检测
3）灵敏度低，ug级检测
4）平衡时间长
21/32
示差检测器的应用
示差折光检测器是通用型检测器,如果选择合适的 溶剂，几乎所有的物质都可以检测 特别适用于检测没有紫外吸收的化合物,例如糖类, 醇类,酯类以及脂肪酸等 高分子化合物GPC,GFC分析以及复杂样品纯化
•使用目的基本相同。价格也差不多（30-40万RMB). •不太适合对天然物质和生物样品的分析（选择性不够）。 •适合对化学产品的纯度分析等，尤其是工业上的应用。
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新的通用型检测器
（Nano Quantity Analyte Detector）
纳克级（水凝粒子）激光计数检测器
一般来说，选泽性和灵敏度是检测器最重要的两个要素。NQAD是通用型、高灵 敏度检测器，适用于几乎所有物质（挥发性物质除外）的检测。
的检测原理
（Water-based Condensation Particle Counter） （水凝聚粒子计数器）
喷雾 汽化
使用空气（或氮气）通过雾化器进行喷雾。 流动相和其他挥发性成分在蒸发器中汽化 剩下的不挥发、难挥发物质颗粒进入到
凝縮
WCPC 。在水蒸气饱和环境下，以该颗粒 为核，水分凝聚体生成，并长大到微米水
13/32
优点：灵敏度比紫外检测器高，噪音 低，线性范围宽，对流速和温度的 波动不灵敏，适用于梯度洗脱及制 备色谱 局限：对紫外吸收差的化合物灵敏度 很低，紫外吸收大的溶剂不能做流 动相
高效液相色谱-检测器
D
氘灯
光门
波
暗盒
长
调
节
杆
凹面光栅
半透镜
光电池（测量） 流通池
光电池（参比）
《紫外/可见光检测器系统原理图》
单
光源
色
器 步进电机
半透反光镜
变压器
交流电源
键盘
直流 电源
冷却风机
显示屏
检测池
参比池
光 /电转换
CPU
前置放大器
A/D
时钟
并行口
讯号输出 (积分/记录)
局限：对紫外吸收差的化合物如不含不饱和键 的烃类等灵敏度很低。
➢1、特点： 灵敏度比紫外检测器高 ，噪音 低 ，线性范围宽 ，对流速和温度的波动不 灵敏，适用于梯度洗脱及制备色谱。
原理与结构：检测器的接收是由一组光电二极管（数量由 35～1024个不等）接收，并转换为电信号。光电二极管的 排列（数字分辨）和狭缝宽度（光学分析）决定了检测器的 全波长分析能力。还能获得色谱分离组分的三维光谱色谱图。
原理与结构：由光源发出的光，经激发光单色 器后，得到所需波长的激发光。通过检测池的 激发光部分被样品吸收，并使其被激发后发射 出荧光。在经选择发射波长的单色器分光后， 单一波长的发射光被送至光电检测器进行检测。 由于吸光强度与激发光强度成正比，光源应具 有高强度、连续、平滑、稳定的辐射输出功能。
结构图
流动相的选择受到一定限制，紫外吸收大的溶 剂不能做流动相。每种溶剂都有截止波长，当 小于该截止波长的紫外光通过溶剂时，溶剂的 透光率降至10%以下，因此，流动相的截止波 长不能大于紫外吸收检测器的工作波长。
光电二极管阵列检测器
(photodiode array detector， PDA )
高效液相色谱检测器的种类及特点
一、概述高效液相色谱（HPLC）是一种常用的分析化学技术，广泛应用于化学、生物、医药和食品等领域。
在HPLC技术中，检测器是至关重要的一部分，它负责检测样品中化合物的浓度，并将其转化为可读的信号输出。
本文将对HPLC检测器的种类及特点进行详细介绍。
二、紫外-可见光（UV-Vis）检测器1. 原理：UV-Vis检测器利用化合物中的紫外或可见光吸收特性来检测化合物。
2. 特点：1）广泛适用：UV-Vis检测器适用于大多数有机化合物和许多无机化合物的分析。
2）灵敏度高：对于绝大多数有机化合物，UV-Vis检测器的灵敏度较高。
3）简单易用：UV-Vis检测器的操作相对简单，适合实验室常规分析。
三、荧光检测器1. 原理：荧光检测器利用化合物在受激光照射下产生荧光的特性来检测化合物。
2. 特点：1）高灵敏度：荧光检测器对于有荧光活性的化合物具有极高的灵敏度。
2）特异性强：由于荧光本身具有较高的特异性，荧光检测器可以用于分析中对混杂物的忽略。
3）应用广泛：在生物学、医学和环境领域，荧光检测器得到了广泛的应用。
四、蒸发光散射检测器1. 原理：蒸发光散射检测器通过样品与蒸发后的溶剂之间的差异来检测化合物。
2. 特点：1）通用性强：蒸发光散射检测器对于大多数非吸收性化合物都具有较好的检测能力。
2）无需色谱柱：相比于其他检测器，蒸发光散射检测器可以不需要色谱柱，适用于高分子化合物的检测。
3）灵敏度较低：蒸发光散射检测器的灵敏度通常较低，需要较高浓度的样品才能进行检测。
五、质谱检测器1. 原理：质谱检测器通过将化合物转化为离子，并对离子进行质量分析来检测化合物。
2. 特点：1）高分辨率：质谱检测器具有极高的分辨率，可以准确确定化合物的质荷比。
2）特异性强：质谱检测器对于复杂混合物的成分分析具有很强的特异性。
3）操作复杂：相比于其他检测器，质谱检测器的操作和维护较为复杂，需要专业的操作人员。
六、综述HPLC检测器种类繁多，每种检测器都有其特定的适用场景和优势。
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通用型检测器。
1、特点：任何挥发性低于流动相的样品均能
被检测。敏度高，对温度变化不敏感，基线稳定， 适合与梯度洗脱液相色谱联用。能检测不含发色 团的化合物，如：碳水化合物、脂类、聚合物、 未衍生脂肪酸和氨基酸、表面活性剂、药物(人参 皂苷、黄芪甲苷)，并在没有标准品和化合物结构 参数未知的情况下检测未知化合物 。
D
波 长 调 节 杆 暗盒
氘灯 光门
光电池（测量） 流通池
凹面光栅
半透镜
光电池（参比）
《紫外/可见光检测器系统原理图》
单 色 器
光源
步进电机
变压器
直流 电源 键盘
交流电源
冷却风机
半透反光镜
显示屏
检测池
参比池
光 /电转换
CPU
A/D
时钟
并行口 讯号输出 (积分/记录)
前置放大器
3、局限：对紫外吸收差的化合物如不含不饱和键 的烃类等灵敏度很低。 流动相的选择受到一定限制，紫外吸收大的溶剂不 能做流动相。每种溶剂都有截止波长，当小于该截 止波长的紫外光通过溶剂时，溶剂的透光率降至 10%以下，因此，流动相的截止波长不能大于紫外 吸收检测器的工作波长。
1、特点： 灵敏度极高 ，能达到 10-12g/ml ，有选
择性，可检测能产生荧光的化合物。某些不发荧光的 物质可通过化学衍生法生成荧光衍生物，适用于痕量 分析。
2、原理与结构：由光源发出的光，经激发
光单色器后，得到所需波长的激发光。通过检 测池的激发光部分被样品吸收，并使其被激发 后发射出荧光。在经选择发射波长的单色器分 光后，单一波长的发射光被送至光电检测器进 行检测。由于吸光强度与激发光强度成正比， 光源应具有高强度、连续、平滑、稳定的辐射 输出功能。
是一种浓度型通用检测器，对所有溶质都有 响应，应用较广。可分为反射型（根据 Fresnel定律）、折射型（根据Snell定律） 和干涉型三种类型。
1、特点：灵敏度高、噪声小、运行高度
稳定、折射率范围宽、 操作简单、方便。
、原理与结构：此检测器是基于连续 测定样品流路和参比流路之间折射率的变 化来测定样品的含量。光从一种介质进入 另一种介质时，由于两种物质的折射率不 同就会产生折射。只要样品组分与流动相 的折光指数不同，就可被检测，二者相差 愈大，灵敏度愈高，在一定浓度范围内检 测器的输出与溶质浓度成正比。
高效液相色谱
检测器
侯建军
检测器
是高效液相色谱仪 的核心部件，他负责把从色谱 柱分离出来的各组分快速、准 确的检测出来，实现定性、定 量分析。
检测器的分类
紫外可见吸收检测器(UV) 2 、光电二极管阵列检测器 ( PDA) 3 、荧光检测器( FD) 4 、示差折光检测器( RID) 5 、电化学检测器( ED) 6 、化学发光检测器( CD) 7 、蒸发光散射检测器(ELSD)
化学发光 含卤、硫、氮化合物具有高 选择和 高灵敏度 具有氧化还原活性的或某些 没有氧
电导
是离子性物质的通用检测器；不能 用于有机溶剂体系。 易受流动相pH值和杂质的影响； 稳定性较差。
电化学
化还原活性的物质经 过衍生化后也
能进行检测
蒸发光散射
任何挥发性低于流动相的样 品均能 被检测
可检测所有物质。
结构图
固定波长紫外检测器 可变波长紫外检测器
紫外/可见光检测器的光路系统，由氘灯提供190nm～600nm 宽带光谱，光线径直射到全息凹面光栅上，衍射的单色光射到 半透射反光镜，被分成两束光线，一束经流通池后照射到测量 光电池上，另一束经参比池照射到参比光电池上，光电池把光 能量转换成微小电流信号，光栅由一台微机控制的步进电机精 确地驱动以改变波长。如图所示：
1、
紫外可见吸收检测器
(ultraviolet－visible detector，UV)
紫外可见吸收检测器(UVD)是HPLC中应用最广泛的 检测器，几乎所有的液相色谱仪都配有这种检测器。 属于选择性检测器。
1 、特点：灵敏度较高，线性范围宽，噪声低，波长 可选，对流动相的流速和温度变化不敏感，适用于梯 度洗脱，对强吸收物质检测限可达10-9g/ml以下，检 测后不破坏样品，可用于制备，并能与多种检测器串 联使用。工作原理与结构同一般分光光度计相似，也 就是装有流通池的紫外可见分光光度计。
氘灯
消色差透镜
斩光器
载液
流通池
全息光栅
三维谱图
3、局限：对紫外吸收差的化合物灵敏度很 低。流动相的选择受到一定限制，紫外吸收 大的溶剂不能做流动相。二极管阵列少的话 波长分辨率和灵敏度较低，商品价格也较贵。
荧光检测器
(fluorescence detector， FD) 一般包括激发光源、选择激发波长的单色器、检测 池、选择发射波长的单色器及检测发光强度的光电 转换系统等基本组件。可分为固定波长荧光检测器 （用多个率光片作单色器）和荧光分光检测器（用 光栅作单色器）两大类。
2、原理及结构：
检测分为三个步骤： （1）用惰性气体雾化 洗脱液 （2）流动相在加热管 （漂移管）中蒸发 （3）样品颗粒散射光 后得到检测。
结构图
HPLC柱
喷雾气体
样品液滴
蒸发漂移管
散射室
激光光源 光二极管检测器
几种检测器特性比较
示差折光 应用范围 可否梯度淋洗 线性范围 最小检测量 对温度敏感度 溶剂使用情况 通用 不可 104 10-6g 敏感 无限制 紫外 选择性 荧光 电导 选择性 不可 104 10-9g 敏感 受限制
此，溶液和电极间发生电荷转移，形成电流， 该电流符合法拉第定律，即电流大小与待测 物浓度成正比。记录电流随时间的变化，得 到电泳谱图。
结构图
接参比电极 和对电极
接色谱柱
塑 料 块
Teflon
1 cm
工作电极 (Pt, Au, 碳糊)
安培检测器
局限：流动相必须含有电解质，且呈化
学隋性。只能检测具有电活性的物质。
原理及结构：基于离子性物质的溶液具有导电性
，利用离子在电场中迁移导电进行检测，其电导率与 离子的性质和浓度相关。 当向电导池的两个电极施 加电压时，溶液中的阴离子向阳极移动，阳离子向 阴极移动。在电解质溶液中的离子数目和离子的移 动速率决定溶液的电阻大小，离子的迁移率或单位 电场中离子的速率取决于离子的电荷及其大小、介 质类型、溶液温度和离子浓度。离子的迁移速率取 决于施加电压的大小。所施加的电压既可以是直流 电压，也可以是正弦波或方波电压。当施加的有效 电位确定后，即可测量出电路中的电流值，即能测 出电导值。
化学反应，生成处于激发态势反应中间体 或反应产物，当它们从激发态返回基态时， 就发射出光子。物质激发态的能量是来自 化学反应。当分离组分从色谱柱中洗脱出 来后，立即与适当的化学发光试剂混合， 引起化学反应发光，通过光电倍增管将光 信号变成电信号，进行检测。其光强度与 该物质的浓度成正比。
蒸发光散射检测器2结构图示差折光检测器原理图
3、局限：不如紫外检测器敏度、对温
度敏感、不能用于梯度洗脱测器宽。
电化学检测器
(electrochemical detector， ED)
包括电导、安培、库仑、极谱和介电常数 检测器检测器等。
1
、电导检测器：
特点：高灵敏度、高选择性、结构简单、
操作成本低、线性范围宽（可达106） 、死 体积小、选择性检测器。 是离子色谱中必 备的检测器。
极谱库、仑检测器结构图
库 仑 检 测 器 极谱检测器
化学发光检测器
(Chemiluminescence detector， CD)
该检测器是一种新型检测器。
1、特点：快速、灵敏的新型检测，最
小检出量可达10-12g/ml, 设备简单、价廉、 线性范围宽等。
2、原理与结构：某些物质在常温下进行
示差折光
对所有溶质都有响应
可检测所有物质；不适合微量分析
其它检测器
质谱检测器 放射性同位素检测器
激光检测器
红外检测器
离子选择电极检测器
旋光检测器
柱后反应检测器
介电常数检测器
圆二色谱检测器
等等
2、结构与原理：紫外吸收检测器常用氘灯作光
源，氘灯则发射出紫外-可见区范围的连续波长， 并安装一个光栅型单色器，其波长选择范围宽 (190nm～800nm)。 它有两个流通池，一个参比池，一个测量池。光 源发出的紫外光照射到流通池上，若两流通池都 通过纯的均匀溶剂，则它们在紫外波长下几乎无 吸收，光电管上接受到的辐射强度相等，即无信 号输出。当组分进入测量池时，吸收一定的紫外 光，使两光电管接受到的辐射强度不等，即有信 号输出，输出信号大小与组分浓度有关。
高选择 性
可 103 10-12g 低 受限制
可
105
10-9g
低
受限制
检测器
紫外-可见光 都可以检测
应用范围
有紫外吸收的物质；80%的 有机物
主要特点
池体积可制作得很小；检测后不破 坏样品，可用于制备
荧光
自身发荧光的物质或荧光衍 生物
易受背景荧光、pH和溶剂的影响；
适用于痕量分析。 发光试剂受限制；易受流动相组成 和脉动的影响。
1、特点：
2、原理与结构：检测器的接收是由一组光电 二极管（数量由35～1024个不等）接收，并 转换为电信号。光电二极管的排列（数字分 辨）和狭缝宽度（光学分析）决定了检测器 的全波长分析能力。还能获得色谱分离组分 的三维光谱色谱图。
《 二极管阵列检测器光路示意图》
二极管阵列检测器在结构上的主要特点是用光电二极管阵 列同时接收来自流通池的全光谱透过光，因此在光路安排上 与普通紫外/可见光检测器有重要的区别，它让光线先通过样 品流通池，然后由一系列分光技术，使所有波长的光在接收 器同时被检测，其光学系统又称多色仪，其光学系统被称为 “倒光学”系统。