大肠癌细胞的原代培养方法

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动物细胞的原代培养

动物细胞的原代培养细胞培养是用无菌操作的方法将动物体内的组织（或器官）取出，模拟动物体内的生理条件，在体外进行培养，使其不断生长、繁殖，人们借以观察细胞的生长、繁殖、细胞分化以及细胞衰老等过程的生命现象。

细胞培养的突出优点，一是便于研究各种物理、化学等外界因素对细胞生长发育和分化等的影响；二是细胞培养便于人们对细胞内结构(如细胞骨架等)、细胞生长及发育等过程的观察。

其特点包括：大量实验材料；单一、纯粹细胞类型培养基的成分可控，即生长条件可控/全合成、无血清培养基；易于观察；易于操作。

细胞培养是探索和指示细胞生命活动规律的一种简便易行的实验技术。

一、实验目的了解动物原代细胞培养的基本方法及操作过程；初步掌握无菌操作方法；观察体外培养细胞的生长特征。

二、实验原理原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，经体外培养后，直到第一次传代为止。

这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官），经消化，分散成单个游离的细胞，在人工培养下，使其不断地生长及繁殖。

直接从身故体内分离的细胞，在体外培养的过程中尚未发生细胞分裂、增殖的细胞即为原代培养细胞；原代培养细胞在一定条件下可以继续增殖，在数量上大量扩增，此时的细胞为继代培养细胞。

细胞培养是一种操作繁琐而又要求十分严谨的实验技术。

要使细胞能在体外长期生长，必须满足两个基本要求：一是供给细胞存活所必须的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度与渗透压的调节。

二是严格控制无菌条件。

三、实验用品1.器材①解剖剪、解剖镊、眼科剪、眼科镊、培养皿、纱布块、移液管、橡皮头、培养瓶、玻璃匀浆器、1.5ml离心管等。

上述器材均需彻底清洗、烤干、包装好，高压灭菌20min，备用。

②倒置显微镜、离心机、酒精灯、酒精棉球、试管架、记号笔、大头针、解剖板等2.试剂完全培养液不完全培养液90%小牛血清10％双抗（链霉素、青霉素）（1万单位/mL）加至约为100单位/mL7.4%NaHCO3调pH至7.0-7.2。

转染原代BMDM细胞技术分享

转染原代BMDM细胞技术分享影响影子：IF:12.40发表期刊:TheranosticsDoi:10.7150/thno.66420原文标题：5-aza-2′-deoxycytidine potentiates anti-tumor immunity in colorectal peritonealmetastasis by modulating ABC A9-mediated cholesterol accumulation in macrophages。

背景：5-aza-2'-脱氧胞丁胺（5AZA），是一种DNA甲基转移酶（DNMT）抑制剂，可激活肿瘤适应性免疫，抑制肿瘤进展。

然而，5Aza调节肿瘤免疫微环境的分子机制仍不完全清楚。

方法：研究了5AZA在结直肠癌（CRC）的腹膜癌（PC）免疫微环境中的作用。

通过流式细胞仪，实时PCR，Western印迹测定法和药物亲和力响应靶标稳定性（DARTS）研究了5AZA对巨噬细胞激活的影响。

5AZA对CRC患者的基质巨噬细胞和T细胞中验证了5AZA对肿瘤免疫力的影响。

结果：5Aza可以刺激巨噬细胞向M1样表型的激活，并随后刺激转移前脂肪组织中T细胞的激活，最终抑制免疫功能小鼠模型中的CRC-PC。

从机制上讲，5Aza刺激原代小鼠巨噬细胞向M1样表型发展，其特征是p65磷酸化和IL-6表达增加。

此外，我们筛选并鉴定了ATP结合盒转运蛋白A9（ABC A9）作为5Aza 的结合靶标。

5Aza以ABC A9依赖的方式诱导胆固醇积累、p65磷酸化和IL-6表达。

NF-κB的药理学抑制或IL-6的遗传耗竭消除了5Aza在小鼠中的抗肿瘤作用。

此外，常规化疗药物5-Fu或OXP协同增强了5Aza的抗肿瘤作用。

最后，我们验证了5Aza在CRC患者基质巨噬细胞和T细胞抗肿瘤免疫中的重编程作用。

结论：综上所述，我们的发现首次表明5AZA通过调节巨噬细胞依赖性的T细胞激活前分散微环境中抑制了CRC-PC，同时抑制了CRC-PC。

原代细胞培养的名词解释

原代细胞培养的名词解释在细胞生物学领域里，原代细胞培养是一种常见的实验技术。

它是通过从一个生物体内分离和培养细胞，使其在体外继续生长和繁殖的过程。

通过原代细胞培养，我们可以研究细胞的生理特性、功能和互作，有助于我们深入了解生物体内组织和器官的基本构成和功能，以及与疾病相关的异常细胞行为。

一、原代细胞的选择和分离方法要进行原代细胞培养，第一步是选择适合的原代细胞。

原代细胞是从组织或器官中分离出来的初代细胞，与体内的细胞相似，具有原始的细胞特性。

常用的原代细胞包括人类和动物的肌肉细胞、皮肤细胞、神经细胞等。

原代细胞的分离通常通过组织分块法或酶处理法进行。

组织分块法是将组织样本切割成小块，然后用细胞培养基将其浸泡，通过适当的培养条件，细胞会从组织中游离出来并生长扩增。

酶处理法则是使用特定的酶来消化组织，使细胞从基质中分离出来。

二、原代细胞培养的技术和条件原代细胞的培养需要提供适合其生长和繁殖的环境。

培养基是最基本的条件，通常包括营养物质、生长因子、补体和抗生素等。

细胞培养基中的成分要根据细胞类型的不同而调整，以满足其特定的营养需求。

细胞培养的环境因素也很重要。

温度、湿度和气体组成是常见的调节参数。

温度需要恒定在37摄氏度左右，以模拟体内的正常生理条件。

湿度的控制可以减少蒸发和细胞表面的沉积。

气体组成通常是5％二氧化碳和95％空气，以稳定酸碱平衡。

在原代细胞培养中，还需要注意细胞的传代。

传代是指将细胞从一个培养皿转移到另一个培养皿中，以保证细胞的生长和更新。

传代时要遵循适当的规程和技术，以确保细胞的稳定和增殖。

三、原代细胞培养的应用原代细胞培养在细胞生物学研究中具有广泛的应用。

通过原代细胞培养，我们可以研究细胞的分化、增殖、凋亡和信号传导等基本生理过程。

这对于揭示细胞发育和组织构建的机制非常重要。

此外，原代细胞培养还可以用于研究疾病的发生机制和治疗方法。

通过比较病变组织和正常组织的原代细胞，我们可以发现细胞中的异常变化，从而揭示疾病的发生和发展规律。

人原代肥大细胞体外诱导和组织分离方法的建立

人原代肥大细胞体外诱导和组织分离方法的建立翟荣荣;蒋金凤;张济;丁永斌;王建华;魏继福【摘要】目的:建立获取和培养人原代肥大细胞的方法,为探讨肥大细胞的免疫调节作用及其机制奠定基础.方法:用重组人源干细胞因子、IL-6和IL-3刺激CD34+造血干细胞使之分化成肥大细胞；Percoll密度梯度离心结合免疫磁珠分选法,分离肠道黏膜肥大细胞.应用免疫荧光染色技术分析所获得的原代肥大细胞表面分子CD117和FcεRⅠ,甲苯胺蓝染色或间接免疫荧光染色检测胞内类胰蛋白酶含量.结果:黏膜肥大细胞及CD34+造血干细胞刺激分化而来的肥大细胞均表达CD117和FcεRⅠ,胞内均含有类胰蛋白酶.结论:这两种方法均可以有效地获得大量纯化的原代肥大细胞,且各有优势,所得细胞适用于肥大细胞在机体免疫调节和病原防御等生理功能的后续研究.%Objective:To establish the technique for generation or isolation of human primary mast cells,and for further studying their roles in regulating host immunity and elucidatingimmunopathogenesis.Methods:CD34 + hemopoietic stem cells were cultured in presence of stem cell factor,IL-6,and IL-3 to generate primary mast cells.Mast cells allocated in human intestinal tissues were isolated through digestion,density gradient centrifugation and purification with specific antibodies-coated magnetic beads.Cell phenotype was monitored by immuostaining of surface markers of CD117 and FcεRⅠ and intracellular tryptase,or cells were identified with Toluidine blue staining.Results:Both of the CD34 + cell-derived and intestinal mast cells expressed CD117 and FcεRⅠ,the specific markers for mast cells,and contained intracellular tryptase.Conclusion:Both methods could providesufficient and purified primary mast cells for further study in regulating host immune response and defence against pathogenic microorganism.【期刊名称】《江苏大学学报（医学版）》【年(卷),期】2013(023)003【总页数】5页(P224-228)【关键词】肥大细胞;肠道黏膜;类胰蛋白酶;诱导【作者】翟荣荣;蒋金凤;张济;丁永斌;王建华;魏继福【作者单位】南京医科大学第一附属医院药学部研究室,江苏南京210029;中国科学院上海巴斯德研究所病毒免疫学实验室,上海200025;中国科学院上海巴斯德研究所病毒免疫学实验室,上海200025;南京医科大学第一附属医院普外科,江苏南京210029;南京医科大学第一附属医院普外科,江苏南京210029;中国科学院上海巴斯德研究所病毒免疫学实验室,上海200025;南京医科大学第一附属医院药学部研究室,江苏南京210029【正文语种】中文【中图分类】R329.2肥大细胞是定位于组织的一类胞质内富含嗜碱性颗粒的细胞［1］，与哮喘、变态反应等疾病的发生密切相关。

细胞培养的过程及注意事项

3 6 细胞培养的过程及注意事项细胞的培养过程及注意事项；根据培养过程中是否需要分割培养物进行再培养而将细；一、原代培养；（一）过程；原代培养的基本过程包括取材、培养材料的制备、接种；1、组织块培养法；（1）基本操作过程；1）、用培养液湿润所取组织材料，并用锋利的眼科剪；2）、用湿润的吸管吸取切碎的组织块，清清吹到培养；3）、将培养瓶翻转，使瓶底朝上，在种植了组织块一；4）、将种植了组织块细胞的培养过程及注意事项根据培养过程中是否需要分割培养物进行再培养而将细胞培养分为原代培养和传代培养。

一、原代培养（一）过程原代培养的基本过程包括取材、培养材料的制备、接种及培养等步骤。

原代培养的方法很多，基本和最常用的是组织块培养法和分离细胞法。

1、组织块培养法（1）基本操作过程1）、用培养液湿润所取组织材料，并用锋利的眼科剪将附在其上的脂肪和结缔组织去除干净。

再用平衡液（PBS）或Hanks 液漂洗；用锋利的眼科弯剪将组织块剪成小块；再用PBS或Hanks 液漂洗多次，直至液体不浑浊、无油滴、清亮为止。

2）、用湿润的吸管吸取切碎的组织块，清清吹到培养瓶皿中，并将其按一定间距均匀放在培养瓶底壁上，量不要过多，要将组织块切面贴在培养瓶底壁上；3）、将培养瓶翻转，使瓶底朝上，在种植了组织块一侧的对侧面加足培养液，勿使组织块与培养液接触，塞紧瓶塞；4）、将种植了组织块的一侧朝上，静置于37℃培养箱中；待组织块贴壁1h到3h 后翻瓶，使贴壁的组织块浸没与培养液中，静置；5）、每隔2到3天更换一次培养液，或者根据培养瓶种颜色的变化确定换液时间。

2、注意事项1）、组织块接种后的前3 天，从组织块向外迁徙的细胞数很少，组织块的黏附不牢固，在观察和移动的过程中，注意不要引起液体的振荡。

要避免经常翻动和振动，否则组织块不易附着于瓶壁上或附着后也会脱落飘起。

2）、加入的培养液不宜过多，避免浸泡的组织块受轻微的波动而脱落下来。

3）、用组织块培养时，要及时观察，当细胞向外迁徙出来后要注意记录并去除漂浮的组织块和残留的细胞，因为已漂浮的组织块和那些细胞碎片已经死亡，它们产生的有毒物质会影响原代细胞的生长，要及时清除。

细胞的原代培养

细胞原代培养【实验目的】1.理解细胞原代培养原理2.熟悉细胞原代培养方法与过程3.了解细胞原代培养的应用4.独立进行细胞原代培养操作【实验原理】1、原代培养实验原理细胞培养是生物学和医学研究中最常用的手段之一，可分为原代培养和传代培养两种。

原代培养是直接从生物体获取组织或器官的一部分进行培养，即组织直接从机体获取后,通过组织块长出单层细胞,或者用酶消化或机械方法将组织分散成单个细胞开始培养,在首次传代前的培养可认为是原代培养。

由于培养的细胞刚刚从活体组织分离出来，故更接近于生物体内的生活状态。

这一方法可为研究生物体细胞的生长，代谢，繁殖提供有力的手段。

同时也为以后传代培养创造条件。

原代培养的过程指动物的组织或器官从机体取出后，经机械法或各种酶类（常用胰蛋白酶）和鳌合剂（常用EDTA)处理，使之分散成单个细胞,加入适量培养基，置于合适的培养容器中，在无菌、适当温度和一定条件下，使之生存、生长和繁殖的过程。

原代培养的方法有：a.组织块法:在平皿中用弯头剪把组织尽量剪碎，每个组织块小于1mm3大小。

用Hanks液洗涤2—3次，自然沉淀。

用吸管吸去上清液。

将组织块贴于培养瓶进行培养。

b.酶消化法:将1mm3大小的组织块放入1个三角瓶内加入10—30ml的0.125%的胰蛋白酶。

370C磁棒搅拌消化20－30分钟。

然后终止消化。

用几层无菌纱布过滤。

取过滤液，离心800rpm 5—10分钟收集细胞。

弃上清，加入带有双抗的培养基，放入培养瓶培养。

【实验仪器、材料、试剂及用品】1.仪器：荧光显微镜，CO2培养箱2.材料：孕鼠3.试剂：(1) 培养液：为DMEM，添加10％新生牛血清(NBS)、青霉素100 u／ ml 、链霉素100ug／ml。

(2)消化液：为0.125％胰蛋白酶—0.02％EDTA 混合消化液。

4.用品：镊子，剪刀，培养瓶，试管，移液管，巴斯德吸管，废液缸，75％酒精棉球，酒精灯、小指管。

【实验步骤】(一)小鼠胚胎的准备:1.取怀孕16～18d的母鼠，断颈处死，置于75%的酒精中。

手术切除的结直肠癌组织中的肿瘤干细胞的培养及鉴定

手术切除的结直肠癌组织中的肿瘤干细胞的培养及鉴定唐娜;周略;成志强;邓永键;丁彦青【摘要】目的获得结直肠癌患者手术切除癌组织的肿瘤干细胞(CSC),培养并鉴定其干细胞特性.方法通过原代培养手术切除结直肠癌组织获得结直肠癌细胞,再通过有限稀释法和无血清培养法筛选结直肠癌CSC,软琼脂集落实验检测CSC和对照组人结直肠癌细胞株SW480的增殖能力;用低数量级细胞裸鼠皮下成瘤实验,检测结直肠癌CSC和SW480的成瘤能力;并运用Western blot及免疫荧光方法,检测CSC和SW480的免疫表型.结果临床结直肠癌标本原代培养的CSC,加入血清培养可使CSC分化.软琼脂集落形成实验结果显示,原代培养的CSC克隆形成率为56.64％和54.45％,对照组人结直肠癌细胞株SW480的克隆形成率为4.41％,CSC 与SW480集落形成率的差异具有统计学意义(P<0.01).裸鼠皮下成瘤实验中,原代培养的CSC皮下注射500个细胞可形成皮下瘤,而SW480皮下注射500个细胞不形成皮下瘤.CSC表达CD133、CD44,不表达CK7;SW480细胞不表达CD133、CD44,表达CK7.结论原代培养的手术切除结直肠癌组织标本获得的肿瘤细胞,再行无血清培养可形成CSC,鉴定具有CSC的自我更新及分化能力.【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2019(039)004【总页数】7页(P415-421)【关键词】肿瘤干细胞;结直肠癌;原代培养【作者】唐娜;周略;成志强;邓永键;丁彦青【作者单位】南方科技大学第一附属医院//深圳市人民医院病理科,广东深圳518020;暨南大学第二临床医学院//深圳市人民医院病理科,广东深圳518020;南方科技大学第一附属医院//深圳市人民医院放疗科,广东深圳518020;南方科技大学第一附属医院//深圳市人民医院病理科,广东深圳518020;南方医科大学南方医院病理科,广东广州510515;南方医科大学基础医学院病理学系,广东广州510515;南方医科大学南方医院病理科,广东广州510515;南方医科大学基础医学院病理学系,广东广州510515【正文语种】中文肿瘤干细胞（CSC）学说认为CSC是肿瘤发生、转移和复发的根源，这群细胞有自我更新能力、无限增殖、多向分化潜能的干细胞特性［1］。

原代细胞培养

二、实体组织材料的分离方法
• 实体组织细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用： • （一）机械分散法 • （二）消化分离法
（一）机械分散法
• 适用组织：纤维成分少的软组织。如脑组织，部分胚胎组织 • 方法： • 采用剪刀剪切、用吸管吹打分散组织细胞 • 将已充分剪碎分散的组织放在注射器内使细胞通过针头压出 • 在不锈钢网内用钝物压挤使细胞从网孔中压挤出。 • 特点：简便、快速，但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差。
细胞培养之
---原代细胞的培养
基本概念
• 来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。 • 能稳定生长传至10~20代以上的细胞可确立为细胞系。
• 经单细胞克隆、纯化，大量扩增后所形成的生物学特性稳定的克隆化细胞群，称之为细胞株。
原代细胞的培养
• 原代细胞的培养是从供体取得组织细胞在体外
第二节原代细胞的分离和制作
• 一、悬浮细胞的分离方法 • 组织来源：血液、羊水、胸水或腹水 • 方法：1000r/min的低速离心10 min→沉淀用无钙、镁PBS洗两次，培养基洗一次→调整适当细胞浓度→分瓶培养 • 若选用悬液中某些细胞，加入细胞分层液，经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层。 • 如：淋巴细胞分离
注意事项
• （1）组织块必须漂洗2-3次以除去组织中的钙、镁离子和血清对胰酶和EDTA的抑制作用。
• （2）胰酶浓度不宜过高，作用时间不能太长，以避免毒性作用。 • （3）消化后组织不仅要尽量弃去消化液，以避免毒性产生，而且动作要轻，以避免膨松的细胞随漂洗而丢失。
第三节原代细胞的培养方法

原代细胞的培养与鉴定方法

1、大鼠骨髓来源肥大细胞原代培养并鉴定：脱颈法处死SD大鼠（体重约200g），75%酒精浸泡消毒3min。

转入超净工作台内操作，剪开后肢皮肤，去除腿部肌肉，暴露出股骨，尽可能将股骨外部肌肉剥离干净，剪下股骨。

剪去股骨两端的股骨头，使用5ml注射器吸取RPMI 1640基础培养基后将骨髓吹打出来，吹打过程中尽可能将骨髓冲洗干净。

使用巴氏吸管将骨髓吹打成单细胞悬液，1000rmp/min离心5min收集细胞如发现收集的细胞中有大量红细胞时需使用红细胞裂解液处理。

使用肥大细胞专用培养基重悬细胞，接种至T25瓶内培养。

培养过程中每2-3天换液一次，当发现有细胞变圆脱落时，收集脱落细胞至新的T25瓶内诱导培养，培养四周时肥大细胞诱导成熟，取成熟的肥大细胞进行甲苯胺蓝染色鉴定；取脱落细胞培养一周、二周、三周、四周的细胞培养上清进行组胺含量检测。

2、小鼠骨髓来源肥大细胞原代培养与鉴定：小鼠经脱颈椎处死，75%酒精消毒后，取完整股骨，用1mL注射器吸取无菌PBS从股骨一端刺入，将骨髓细胞洗出，直到骨髓腔变白。

离心收集细胞，加入3mL红细胞裂解液，室温裂解3min之后，用PBS漂洗2次。

采用现配的原代细胞培养工作液（含青、链霉素各1000U/mL，10% FBS，IL-3 10 ng/mL，SCF 10ng/mL的RPMI-1640培养基培养液）将细胞重悬，按照106个/mL接种于六孔板中，每孔加3mL培养液，置于37℃，5% CO2的培养箱中培养，每7d 将悬浮细胞按照106个/mL转移到新的培养板中，继续培养，4-6周细胞分化成熟。

四周后收集悬浮细胞，部分细胞用于流式检测纯度，部分用含10% FBS的RPMI-1640培养基重新接板。

纯度检测：向诱导分化细胞中按1：200加入肥大细胞表面标志物APC-CD117 ，FITC- FcεRIα，4℃孵育60min ，无菌PBS 漂洗3次，流式检测肥大细胞纯度。

（SCF：Stem cell factor，干细胞因子；又称肥大细胞生长因子MGF）3、大鼠腹腔肥大细胞的分离与培养：选用体重220-250g的SD大鼠。

人大肠癌细胞原代培养方法的改进

ｄｔｃｉｇｔｅｃｌｓｒｃｒｅｉｍｍｕｏｙｏｈｍｉｔ．ｓｌｈｒｃｎｉｏｓｗｅｅｔｅｓｍｅｉｒｖｄＤＭＥＭｄｕ，ｘｌｎｅｅｔｈｅｌｕｆｅｍａｋｒｗｔｉｎａｈｎｃｔｃｅｓｙＲｅｕｔＯｔｅｏｄｔｎｒｈａ，ｍｐｏｅｒｓｉｍｅｉｍｅｐａｔｍｅｈａｄｒｐｉｉｔｎｕｆａｉｎａｐｏｃｗｒｂｔｒｈｎｔｅｓｒｒｃｌｕｔｒｈｄａｉｈａｈｅｅｎｒｔｔｏｄｎｔｓｎｚｉｐｒｉｔｐｒａｈｅｅｅｔｔａｏｈｒ，ｐｍａｙｅｃｌｅａｈｇｃｉｖｍｅｔａｉｙａｏｉｃｏｅｉｌｕ－ＯＩ．ｍｍｕｏｙｏｈｍｉｔｅｅｔｎｓｏｄｔａｃｌｅｅｄｒｅｒｍｐｔｅｉｉｕ．ｎｌｓｏｉｉａｆｃｉｅｗａｏｏｔｉｕｎｃｔｃｅｓｙｄｔｃｉｈｗｅｈｔｅｌｗｒｅｖｄｆｒｏｓｉｏｅｉｌｔｓｅＣｏｃｕｉｎＴｓｓｎｅｅｔｙｔｂａｎｈ・ｈａｓｌｈｖ
功率较高。免疫细胞化学检测培养细胞来源于上皮组织。结论：应用改进的人大肠癌细胞原代培养方法，操作简便，重复性好，可满足实验要求。
［关键词］大肠癌；原代培养；上皮
ＡｎｍｐｏｅｍｅｈｏｏｒｐｒｍａｙｃｌｕｒｆｈｉｒｖｄｔｄｆｉｒｕｔｅｏｕｍａｃｌｒｅａａｅｅｌｎｏｏｅｔｌｃｎｃｒｃｌｓＺＡ —ｑａｇ．ｉｌＳｕ —ｓｕｉＨＮＧｉｎ ‘Ｓｌｈａｉｈａ

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功建立较为合理、高效、稳定的短期大肠癌细胞原代培养模式。
关键词：大肠癌细胞；原代培养；鉴定；黏膜层；胶原酶消化法
中图分类号：７５＋；８３文献标识码：文章编号：０７６４（１） — ３１０Ｒ３．４Ｑ１．ｌ３１Ａ１０ —９８０２４０４ —５２０
层取材组优于浆膜层取材组（Ｐ＜００）胶原酶消化法优于胰酶消化法（．５，Ｐ＜０５，．）胰酶消化法优于机械分离法（＜．）胶原０Ｐ０５，０
酶消化法是最优的人类大肠癌细胞原代培养方法，细胞培养成功率达到６．６％。结论：７通过黏膜层取材的胶原酶消化法可成
例大肠癌（３４且ＣＴ或Ｔ，Ｔ示肿瘤直径＞．ｃ的新鲜肿瘤组织，２０ｍ）随机分为黏膜层取材组与浆膜层取材租，分别采用组织块法、
机械分离法、胰酶消化法、胶原酶消化法进行体外培养大肠癌细胞，对不同方法及培养条件进行比较并加以改进。结果：黏膜
中国中西医结合外科杂志２１年８０２月第１卷第４８期
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大肠癌细胞的原代培养方法
杨磊磊戴岳楚董米连朱敏林雪飞，，，，，廖伟梅，统
摘要目的：探讨大肠癌细胞体外分离培养方法，建立合理、高效、稳定的短期大肠癌细胞原代培养模式。方法：０取６
ｄｉ１．９９．ｓ．０－９８２１．．０ｏ：０３６￣ｉｎ１７６４．０２００４ｓ０４
ＴｈｔｄｎｔｅＰｉａｙＣｕｔｒｅｈｄｆＨｕｅＳｕｙｏｈｒｍｒｌｅＭｔｏｓｏｍａｌｒｃａｎｅｌＹＡＮＧＬｉｌｉＤＡＩｕｎＣｏｏｅｔｌＣａｃｒＣｅｌｓｅ—ｅ，
Ｍｅｈｄ６ａｅｆｃｌｒｃａａｃｒ（３ｏ４ｎＴｓｏｅ：ｔｍｏｉｅ２０ｃｆｆｅｈｔｍｏｉｓｅｔｏｓ０ｃｓｓｏｏｏｅｔｌｃｎｅＴｒＴ，ａｄＣｈｗｄｕｒｓｚ＞．ｍ１ｏｒｓｕｒｔｓｕ
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