细胞传代实验报告
细胞的传代实验报告
一、实验目的1. 了解细胞传代培养的基本原理和操作步骤。
2. 掌握细胞传代培养的基本技术，包括细胞消化、计数、接种和观察等。
3. 观察细胞在不同代数的生长情况，分析细胞传代过程中的变化。
二、实验原理细胞传代培养是指在原代培养的基础上，将细胞从培养瓶中取出，通过消化、计数、接种等步骤，将细胞转移到新的培养瓶中继续培养。
细胞传代培养的目的是为了获得足够数量的细胞，满足后续实验的需求。
细胞传代培养可分为原代培养和传代培养。
原代培养是指从组织或细胞中直接获取细胞进行培养；传代培养是指将原代培养的细胞进行消化、计数、接种等操作，转移到新的培养瓶中继续培养。
三、实验材料1. 培养基：DMEM培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素、胰蛋白酶。
2. 培养器具：细胞培养瓶、培养皿、移液器、吸管、无菌操作台、显微镜等。
3. 试剂：生理盐水、75%乙醇、碘伏、双氧水、氯化钠等。
四、实验步骤1. 原代培养（1）取适量组织或细胞，用生理盐水清洗，然后用剪刀剪碎。
（2）将剪碎的组织或细胞放入培养皿中，加入适量胰蛋白酶，37℃消化5-10分钟。
（3）消化结束后，用吸管轻轻吹打培养皿，使细胞分散。
（4）将细胞悬液转移到细胞培养瓶中，加入适量DMEM培养基，37℃、5%CO2培养箱中培养。
2. 传代培养（1）待细胞生长至80%-90%融合时，用胰蛋白酶消化细胞。
（2）消化结束后，用吸管轻轻吹打细胞，使细胞分散。
（3）将细胞悬液转移到计数板中，用生理盐水洗涤计数板，计数细胞数量。
（4）根据计数结果，调整细胞悬液浓度，将细胞接种到新的细胞培养瓶中。
（5）将细胞培养瓶放入培养箱中，继续培养。
3. 观察细胞生长情况（1）每天观察细胞生长情况，记录细胞形态、生长速度等。
（2）通过显微镜观察细胞在不同代数的生长情况，分析细胞传代过程中的变化。
五、实验结果与分析1. 细胞传代培养成功，细胞生长情况良好，细胞形态正常，生长速度较快。
2. 随着细胞传代次数的增加，细胞生长速度逐渐减慢，细胞形态逐渐发生变化，部分细胞出现老化现象。
细胞传代培养实验报告
一、实验目的1. 掌握细胞传代培养的基本操作流程。
2. 熟悉细胞传代培养过程中的注意事项。
3. 了解细胞传代培养在生物科学研究中的应用。
二、实验原理细胞传代培养是指将已经生长到一定阶段的细胞，通过特定的方法进行分离、洗涤、消化、计数和稀释等步骤，将细胞转移到新的培养容器中继续培养的过程。
细胞传代培养是维持细胞生长、扩大细胞数量和保持细胞特性的重要手段。
三、实验材料1. 细胞：HeLa细胞2. 培养基：DMEM/F12培养基（含10%胎牛血清）3. 试剂：0.25%胰蛋白酶、10%FBS、PBS缓冲液、酒精4. 仪器：超净工作台、倒置显微镜、细胞培养箱、离心机、移液枪、培养瓶/皿、吸管等四、实验步骤1. 准备阶段（1）将HeLa细胞从培养瓶中取出，用PBS缓冲液轻轻洗涤一次，去除残留的培养基。
（2）准备胰蛋白酶工作液，将其置于37℃水浴中预热。
（3）准备含有10%FBS的培养基，将其置于37℃水浴中预热。
2. 分离细胞（1）用移液枪吸取适量胰蛋白酶工作液，滴加到细胞培养皿中的细胞层上。
（2）将培养皿置于37℃、5%CO2的培养箱中消化2-3分钟。
（3）倒置显微镜下观察细胞，当大部分细胞变圆且亮时，加入等体积含有10%FBS的培养基终止消化。
（4）用移液枪轻轻吹打细胞，使其成为细胞悬液。
3. 计数（1）取适量细胞悬液，使用细胞计数仪或显微镜配合琼脂滴定法计数。
（2）根据计数结果，调整细胞密度至所需的浓度，一般为每毫升105-106个细胞。
4. 传代（1）向含有预热的培养基的离心管中加入细胞悬液，并轻轻混匀。
（2）离心管离心，在1500 rpm速度下离心3-5分钟，以沉淀细胞。
（3）弃去上清液，保留沉淀的细胞。
（4）加入适量的新鲜培养基，将细胞重新悬浮。
（5）将细胞悬液转移到新的培养瓶中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
五、实验结果1. 成功完成细胞传代培养，观察到细胞在新的培养瓶中继续生长。
2. 细胞生长状态良好，细胞密度符合预期。
细胞的传代实验报告
细胞的传代实验报告细胞的传代实验报告细胞的传代实验是生物学研究中常用的一种实验方法，通过观察细胞在不同代数中的变化，可以了解细胞的生长、分裂和遗传特性等方面的信息。
本次实验旨在观察细胞在连续传代过程中的生长情况，并探讨细胞的传代对细胞特性的影响。
实验材料和方法：1. 实验材料：细胞培养基、细胞培养器具、显微镜等。
2. 实验方法：取一定数量的细胞，接种于含有适宜培养基的培养皿中，定期观察细胞的生长情况并记录。
实验过程：1. 第一代细胞接种：将细胞接种于培养皿中，加入适宜培养基，放置于恒温培养箱中，控制培养条件。
2. 观察细胞生长：每隔一段时间，取出培养皿，使用显微镜观察细胞的生长情况，包括细胞数量、形态和颜色等。
3. 细胞传代：当细胞达到一定密度时，将细胞进行传代，即将细胞分散到新的培养皿中，继续培养。
4. 连续传代：重复第2和第3步，观察细胞在连续传代过程中的变化。
实验结果：经过连续传代，观察到以下几个方面的变化：1. 细胞数量的增加：随着传代的进行，细胞数量逐渐增多。
初始接种的细胞数量较少，但随着细胞的分裂和生长，细胞数量呈指数增长。
这表明细胞具有较高的增殖能力。
2. 细胞形态的变化：在连续传代过程中，观察到细胞形态发生了一定的变化。
初始接种的细胞通常呈现典型的形态特征，如细胞核清晰可见，细胞质丰满。
但随着传代的进行，细胞形态逐渐变得不规则，细胞核变得模糊，细胞质出现空泡等。
3. 细胞生长速度的变化：在连续传代过程中，观察到细胞的生长速度逐渐减慢。
初始接种的细胞生长迅速，但随着传代的进行，细胞的生长速度逐渐减缓。
这可能是由于细胞在长时间培养中逐渐丧失了一些生长因子或细胞自身的功能受到了限制。
4. 细胞特性的变化：通过观察细胞在连续传代过程中的变化，可以发现细胞的特性也发生了一定的改变。
例如，细胞的分化程度可能发生变化，细胞的功能可能受到调控等。
这些变化可能与细胞的遗传特性和环境因素有关。
结论：细胞的传代实验结果表明，细胞在连续传代过程中会发生一系列的变化。
传代细胞培养实验报告单
实验名称：传代细胞培养实验实验日期：2023年4月10日实验者：张三一、实验目的1. 掌握哺乳动物细胞原代培养与传代培养的基本操作过程。
2. 熟悉细胞传代过程中所需的无菌操作技术。
3. 了解细胞传代对细胞生物学研究的重要性。
二、实验原理细胞培养是一种在人工条件下模拟体内生理环境，使细胞生长、繁殖或传代的技术。
细胞培养技术可以让我们直接观察活细胞，避免体内实验的复杂因素，为生物学研究提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象。
细胞培养分为原代培养和传代培养。
原代培养是指从生物体中取出组织或细胞进行首次培养，而传代培养则是在原代培养基础上，将细胞从一个容器转移到另一个容器中扩大培养。
传代培养的累积次数即为细胞的代数。
三、实验材料1. 培养基：DMEM培养基（含10%胎牛血清、1%青链霉素双抗）2. 细胞：小鼠成纤维细胞3. 工具：超净台、移液器、吸管、培养皿、离心机、显微镜、无菌操作箱、消毒剂等四、实验步骤1. 培养基配制：按照说明书配制DMEM培养基，加入胎牛血清和青链霉素双抗。
2. 细胞复苏：将冻存细胞从-80℃冰箱取出，放入37℃水浴中解冻，轻轻摇匀后移入离心管，1000 rpm离心5分钟，弃上清，加入适量DMEM培养基重悬细胞。
3. 细胞接种：将重悬细胞接种于培养皿中，放入培养箱中培养，保持细胞密度在80%-90%。
4. 细胞传代：当细胞密度达到80%-90%时，进行细胞传代。
具体操作如下：a. 吸除旧培养基，用PBS缓冲液清洗细胞2-3次。
b. 加入适量胰蛋白酶，37℃水浴消化细胞，显微镜下观察细胞变圆、收缩，待大部分细胞脱离培养皿底面时，立即终止消化。
c. 加入适量DMEM培养基终止消化，用吸管轻轻吹打细胞，使其分散均匀。
d. 将细胞接种于新的培养皿中，放入培养箱中继续培养。
5. 细胞观察：在显微镜下观察细胞生长状态，记录细胞形态、生长速度等指标。
五、实验结果1. 细胞在培养皿中生长良好，细胞形态正常，呈梭形。
细胞传代实习报告
实习报告：细胞传代实验一、实验背景及目的随着生物学研究的不断深入，细胞培养技术在科研和临床应用中发挥着越来越重要的作用。
细胞传代培养是细胞培养过程中的一种常见操作，其目的是保持细胞的生长活力，获得大量具有相同生物学特性的细胞。
本次实习报告主要介绍了细胞传代培养的基本步骤、注意事项及实验结果。
二、实验材料与设备1. 实验材料：细胞培养瓶、细胞培养皿、细胞株、胰蛋白酶、DMEM高糖培养基、PBS缓冲液、抗生素-双抗等。
2. 实验设备：CO2培养箱、细胞培养振荡器、显微镜、移液器、酶标仪等。
三、实验步骤1. 细胞培养：将细胞株接种至细胞培养瓶中，加入适量DMEM高糖培养基，放入CO2培养箱中培养。
2. 细胞观察：在细胞培养过程中，定期使用显微镜观察细胞生长状况，记录细胞密度、形态等特征。
3. 细胞传代：当细胞生长至80%~90%融合度时，取出细胞培养瓶，轻轻吹打细胞，使细胞分散。
4. 胰蛋白酶消化：将分散的细胞加入适量的胰蛋白酶，轻轻摇晃，使细胞充分消化。
5. 细胞计数：使用移液器将消化后的细胞转移到细胞计数板中，进行细胞计数。
6. 细胞稀释：根据实验需求，将细胞稀释至适宜的密度。
7. 接种：将稀释后的细胞接种至新的细胞培养瓶中，加入适量DMEM高糖培养基。
8. 放入CO2培养箱：将接种后的细胞培养瓶放入CO2培养箱中继续培养。
四、实验结果与分析1. 实验结果：通过细胞传代培养，我们成功地将细胞株继续培养，并获得了大量生长良好的细胞。
2. 结果分析：细胞传代培养的关键在于掌握好消化时间、细胞密度和稀释比例。
本次实验中，我们严格控制了这些条件，使得细胞传代成功率较高。
五、实验总结与展望1. 实验总结：通过本次实习，我们掌握了细胞传代培养的基本步骤、注意事项，并成功进行了细胞传代实验。
2. 实验展望：在今后的实验研究中，我们将进一步优化细胞培养条件，提高细胞传代成功率，为生物学研究提供更多优质的细胞资源。
细胞传代的实验报告
一、实验目的1. 理解细胞传代培养的基本原理和操作步骤。
2. 掌握细胞传代培养的方法，提高细胞培养的纯度和活力。
3. 分析细胞传代过程中可能遇到的问题及解决方法。
二、实验原理细胞传代培养是指将培养的细胞从原代培养瓶中取出，通过胰蛋白酶消化分散成单个细胞，再将其转移到新的培养瓶中进行培养的过程。
细胞传代培养的目的是为了获得更多的细胞，并保持细胞的生长活力和纯度。
细胞传代培养的基本原理是利用细胞增殖的特性，将原代培养的细胞分散成单个细胞，再进行培养。
细胞传代培养过程中，需要注意以下几点：1. 细胞传代频率：细胞传代频率过高会导致细胞生长活力下降，过低则可能引起污染。
2. 胰蛋白酶浓度：胰蛋白酶浓度过高会损伤细胞，过低则难以将细胞分散成单个细胞。
3. 细胞密度：细胞密度过高会导致细胞之间竞争营养物质，过低则会影响细胞生长速度。
三、实验材料1. 细胞：原代培养的细胞（如人胚胎肾细胞、小鼠成纤维细胞等）。
2. 培养基：DMEM培养基、胎牛血清、胰蛋白酶。
3. 仪器：无菌操作台、超净工作台、培养箱、显微镜、移液器、培养瓶等。
四、实验步骤1. 将原代培养的细胞从培养瓶中取出，用移液器加入适量的胰蛋白酶，置于37℃水浴锅中消化。
2. 观察细胞消化情况，待细胞完全分散成单个细胞时，立即加入等量的胎牛血清终止消化。
3. 将细胞悬液转移至新的培养瓶中，加入适量的培养基，混匀。
4. 将培养瓶置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
5. 每隔一定时间（如3-5天）观察细胞生长情况，待细胞长满培养瓶底时，重复上述步骤进行细胞传代。
6. 观察细胞生长活力和纯度，分析细胞传代过程中可能遇到的问题及解决方法。
五、实验结果与分析1. 细胞生长活力：通过观察细胞在培养瓶中的生长情况，可以判断细胞传代培养的成功与否。
细胞生长活力高的细胞在培养瓶中生长迅速，细胞形态正常。
2. 细胞纯度：通过观察细胞在显微镜下的形态，可以判断细胞纯度。
纯度高的细胞形态一致，无杂质。
细胞传代实验报告
细胞传代实验报告一、实验目的细胞传代培养是细胞培养过程中的一项重要操作，旨在保持细胞的良好生长状态、增加细胞数量，并为后续的实验研究提供足够的细胞材料。
本次实验的主要目的是熟练掌握细胞传代的基本技术和操作流程，确保细胞在传代过程中保持活性和正常的生物学特性。
二、实验原理细胞在培养瓶中生长到一定密度后，由于营养物质的消耗、代谢产物的积累以及空间的限制，细胞的生长会受到抑制。
通过传代操作，将细胞从原培养瓶中取出，以适当的比例重新接种到新的培养瓶中，为细胞提供新的生长环境和充足的营养，使其能够继续生长和增殖。
细胞传代的关键在于轻柔操作，避免对细胞造成机械损伤，同时要严格控制无菌条件，防止细胞受到污染。
三、实验材料与设备1、细胞株：本次实验选用的是_____细胞株。
2、培养基：＿____培养基，添加了_____%的胎牛血清和_____%的双抗（青霉素和链霉素）。
3、试剂：胰蛋白酶消化液、PBS（磷酸盐缓冲液）。
4、实验设备：超净工作台、CO₂培养箱、倒置显微镜、移液器、离心管、培养瓶等。
四、实验步骤1、实验前准备开启超净工作台，通风 15 20 分钟，并用 75%的酒精擦拭台面。
将所需的培养基、PBS、胰蛋白酶消化液等试剂放入超净工作台中预热。
将培养瓶从 CO₂培养箱中取出，在倒置显微镜下观察细胞的生长状态和密度。
2、细胞消化吸去原培养瓶中的培养基，用 PBS 轻轻冲洗细胞 2 3 次，以去除残留的培养基和代谢产物。
加入适量的胰蛋白酶消化液，使其覆盖细胞表面，放入 37℃培养箱中消化2 5 分钟（具体消化时间根据细胞的类型和生长状态而定）。
在倒置显微镜下观察细胞的形态变化，当细胞回缩变圆、细胞间隙增大时，立即终止消化。
3、细胞收集加入适量的含血清的培养基，终止胰蛋白酶的消化作用，并轻轻吹打培养瓶的底面，使细胞从瓶壁上脱落下来，形成细胞悬液。
将细胞悬液转移到离心管中，进行离心（1000 rpm，5 分钟）。
细胞传代实验报告
细胞传代实验报告一、引言细胞传代是指将细胞培养液中的细胞进行连续传递培养的实验方法。
通过细胞传代，可以研究细胞的生长特性、生长速率以及细胞衰老等现象。
本次实验旨在观察细胞在不同代数下的形态变化和生长情况，并分析不同代数下细胞传代的规律。
二、材料与方法1.材料：①HEK293细胞株② 培养基：DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）培养基、FBS（Fetal Bovine Serum）胎牛血清③杯底培养瓶、培养皿、离心管、吸管等2.方法：1）准备工作：①消毒实验台、各种培养器皿和材料。
②消毒培养箱，并预热至37℃。
2）细胞接种：①将细胞株取出并加入培养基中，进行离心，去除培养液。
②加入新鲜的细胞培养基，分散均匀后分装于培养皿中。
③放入预热的培养箱中培养。
3）细胞传代：① 将培养皿中的细胞培养液倒入离心管中，离心3000rpm，收集细胞沉淀。
②去除上清液，加入新鲜的培养基，分散均匀后分装于培养皿中。
③放入培养箱中培养。
三、结果与讨论1.形态变化观察：通过显微镜观察发现，细胞在不同代数下的形态发生了一定的变化。
初始细胞形态呈长椭圆形，细胞体积较大，呈单层排列。
经过传代培养，细胞在第5代开始形成更明显的丛状结构，并且细胞体积较小。
随着代数的增加，细胞簇的数量也逐渐增加。
这说明细胞在连续培养中会发生增殖，细胞数量逐渐增加。
2.细胞生长情况观察：每代细胞的生长情况如下表所示：代数细胞数（个）11×10522×10534×10548×105516×105通过观察实验数据①细胞呈指数增长；②细胞传代的代数越高，细胞数增加的速度越快。
3.细胞传代规律分析：通过细胞传代实验的结果分析，可以看出细胞在连续培养中会不断增殖，但增殖速率随着代数的增加而减缓。
这是由于细胞在连续培养中会持续分裂，细胞数量呈指数增长，但由于培养条件的限制，包括有限的营养物质和空间，导致细胞生长速度逐渐减慢。
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细胞传代培养一.实验目的初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本操作过程，为生物技术在医学上的应用打下基础。
二、原理从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代，这一过程称为细胞培养。
细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与体内实验互为补充，可同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象，耗费少，比较经济，因此成为生物学研究的重要手段。
细胞培养可分为原代培养和传代(继代)培养。
直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。
细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。
所有离体细胞的生长都受温度、渗透压、ph值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的规范和要求，特别是无菌操作是细胞培养成败的关键。
三、材料和试剂1、细胞：293细胞株2、试剂：0.25％胰酶、1640培养基（含10％小牛血清）3、仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、电动枪，培养板，吸液枪，5ml玻璃吸管、酒精灯等四、操作步骤1、将长满细胞的培养板中原来的培养液吸去。
2、加入1~2ml 0.25％胰酶溶液，使板底细胞都浸入溶液中。
3、马上吸走胰酶液，再次加入2ml左右的胰酶，同样马上吸去，再加入几滴胰酶放入培养箱中消化几分钟4、用吸管将贴壁的细胞反复吹打成悬液，再按照观察的生长情况确定的传代比例传代5.根据确定的比例来取需要的量（剩余的细胞拿来做细胞计数），加入4ml左右的培养液6.前后左右的来回震荡使细胞分散均匀后，将培养板放入培养箱7.收拾整理超净台附：消化液配制方法：称取2.5克胰酶蛋白酶，加入100ml10xpbs+纯水溶解到1l，滤器过滤除菌，4℃保存，用前可在37℃下回温。
10x pbs配方：na2hpo4(14.2g) kh2po4(2.32g) nacl(80g) kcl(2.02g) (调至ph=7.4）五、实验结果传代后的细胞在2小时左右就能附着在培养瓶壁上，2天左右就在瓶内形成单层，达到七八成满。
这时需再次传代六、讨论与反思无菌操作中的注意事项在无菌操作中，一定要保持工作区的无菌清洁。
为此，在操作前要认真地洗手并用75％乙醇消毒。
操作前20～30分钟起动超净台灭菌。
培养瓶要在超净台内才能打开瓶塞，打开之前和加塞前瓶口都要在酒精灯上烧一下，打开瓶口后的操作全部都要在超净台内完成。
操作完毕后，加上瓶塞，才能拿到超净台外。
使用的吸管在从消毒的铁筒中取出后要手拿末端，将尖端在火上烧一下，戴上胶皮乳头，然后再去吸取液体。
总之，在整个无菌操作过程中都应该在酒精灯的周围进行。
每天观察细胞形态，掌握好细胞是否健康的标准：健康细胞的形态饱满，折光性好，生长致密时即可传代。
多做，熟能生巧篇二：细胞生物学实验传代培养一、【实验目的】1、了解动物细胞传代培养的基本原理。
2、掌握动物细胞传代培养的基本操作，并对hela细胞进行传代培养。
二、【实验原理】hela 是henrietta lacks的简称，henrietta lacks 是一位患有子宫颈癌的美国妇女的名字，在她死后，该细胞走被广泛散发到各研究机构，并无限次地繁殖分裂下去。
培养细胞的特性：贴附生长：必须贴附于支持物表面才能生长。
见于各种实体瘤细胞。
悬浮生长：于悬浮状态下即可生长，不需要贴附于支持物表面。
见于各种造血系统肿瘤细胞。
每代贴附生长细胞的生长过程：1、游离期细胞接种后在培养液中呈悬浮状态．也称悬浮期。
此时细胞质回缩，胞体呈圆球形。
10分钟一4小时2、贴壁期细胞附着于底物上，游离期结束。
细胞株平均在10分钟一4小时贴壁。
3、血清中有促使细胞贴壁的冷析球蛋白和纤粘素、胶原等糖蛋白（生长基质），这些带正电荷的糖蛋白的促贴壁因子先吸附于底物上，悬浮细胞再与吸附有促贴壁因子的附着。
4、潜伏期此时细胞有生长话动，而无细胞分裂。
细胞株潜伏期一般为6～24小时。
5、对数生长期细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳，最适合进行实验研究。
6、停止期（平台期）细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分裂细胞传代方法1、悬浮生长细胞传代离心法传代：离心（1000转/分）去上清，沉淀物加新培养液后再混匀传代。
直接传代法：悬浮细胞沉淀在瓶壁时，将上清培养液去除l／2一2／3，用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代。
2.悬浮生长细胞传代（hela细胞）此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可用直接吹打法使纫胞从瓶壁脱落下来，进行传代。
3、贴壁生长细胞传代采用酶消化法传代。
常用的消化液有0.25％的胰蛋白酶液。
细胞培养用液的配制1、d-hanks原液试剂配方氯化钠 80.0g 磷酸氢二钠（na hpo ·2h o） 0.6g 氯化钾 4.0g 磷酸二氢钾 0.6g 三蒸水 1000ml2、d-hanks工作液试剂配方d-hanks原液 100ml 三蒸水 896ml 0.5% 酚红液 4ml 3、消化液：胰蛋白酶作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的肽健，除去细胞间粘蛋白及糖蛋白，影响细胞骨架，从而使细胞分离。
胰蛋白酶液浓度越高，作用越强，但超过一定限度会损伤细胞。
胰蛋白酶是一种黄白色粉末，用无ca2+、mg2+的pbs缓冲液配制常用的胰蛋白酶液浓度是0.25％。
用滤器过滤除菌。
胰蛋白酶液消化时间：2-10分钟。
用含血清培养液终止其对细胞的消化作用完全培养基的组成基础培养基 80％一95％血清 5％一20％（一般加10％）碳酸氢钠 2.0 g/l 青、链霉素各100卑位／毫升血清质量好坏是实验成败的关键。
常用血清有胎牛血洁、新生牛血清、小牛血情、兔血清、马血清等，其中以胎牛血清质量最好。
优质血清的标准：透明，淡黄色，无沉淀物，无细菌、支原体、病毒污染。
血清的灭活（消除补体活性）：56 ℃，30 分钟血清的消毒：过滤除菌三、【实验材料】实验用具：离心管（2支），移液枪（每个台面一把），枪头，吸管（4根），培养皿（每组2个）实验药品：0.25％胰酶，d－hanks，1640培养基四、【实验操作】1. 用75%乙醇擦手，取离心管一个，打开超净台（照明、风机），把离心管置于架子上。
然后用75%乙醇擦一下台面，点燃酒精灯。
取尖吸管、吸量管各一支，套好吸球，放置在专用的架上。
2．从冰箱中取出0.25％胰酶、d－hanks、培养基。
可以把胰酶和d－hanks的瓶盖打开或者拧松。
3.取待传代的细胞，用尖吸管弃去旧的培养基，加入d－hanks。
轻轻摇动后将hanks弃掉。
4.用尖吸管吸取适量胰酶加入，加入的量以覆盖整个细胞培养面为宜，轻轻摇动。
2－5分钟后迅速将消化液吸出。
消化时间长短是实验成败的关键，宁可短消化，不能过消化。
否则细胞会变死。
在倒置显微镜下观察，当细胞质回缩，胞间间隙加大为消化适宜。
5．取培养基加入细胞，反复轻轻吹打培养皿壁，制备细胞细胞悬液。
吹打的部位均匀，从上到小，从左到右，顺序进行吹打，保证各个部位的培养细胞均能吹打到，成片的细胞已经分散成小的细胞团或者单细胞便停止吹打。
吹打时用力不要过猛，尽量不要出现气泡，以免损伤细胞。
6．至所有细胞从培养皿底部脱落下来，然后吸取至离心管中。
1000 rpm离心5分钟。
（无需准确计数时离心可略）7．细胞离心毕，尖吸管弃去上清，吸取培养基适量，加入离心管，将细胞重悬、吹匀。
（无需准确计数时离心可略）8．吸量管吸取适量培养基1.5ml加入新的培养皿中。
细胞悬液0.5ml加入新的培养皿中，培养密度为1×105－×106/ml。
显微镜下观察，摇匀，放入37度c02培养箱孵育。
9．待培养基（本身为红色），当ph值降低，培养基呈偏淡红色时，一般2天以后，将旧的培养基吸掉，更换新鲜培养基继续培养。
五、【实验现象】培养基：rm1640培养基＋10%胎牛血清六、【实验讨论】注意事项1．传代培养时要注意无菌操作并防止细胞之间的交叉污染。
所有操作要尽量靠近酒精灯火焰。
每次最好只进行一种细胞的操作。
每一种细胞使用一套器材。
培养用液应严格分开。
2．每天观察细胞形态，掌握好细胞是否健康的标准：健康细胞的形态饱满，折光性好，生长致密时即可传代。
3．如发现细胞有污染迹象，应立即采取措施，一般应弃置污染的细胞，如果必须挽救，可加含有抗生素的bss或培养基反复清洗，随后培养基中加入较大量的抗菌素，并经常更换培养基等篇三：原代细胞培养实验报告实验：细胞培养1.实验目的初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本操作过程，为生物工程在医学上的应用打下基础。
2.实验原理从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代，这一过程称为细胞培养。
细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与体内实验互为补充，可同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象，耗费少，比较经济，因此成为生物学研究的重要手段。
近年来，在体细胞遗传、分化、胚胎发生、肿瘤发生、免疫学、细胞工程、放射生物学以及老年学等一系列的研究领域中得到广泛的应用，并取得了丰硕的成果。
细胞培养可分为原代培养和传代(继代)培养。
直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。
细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。
所有离体细胞的生长都受温度、渗透压、ph值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的规范和要求，特别是无菌操作是细胞培养成败的关键。
3.实验用品3.1 材料和标本乳兔、hela细胞(人宫颈癌细胞) 3.2 器材和仪器手术器械、平皿、培养瓶、吸管、离心管(灭菌后备用)、酒精灯、烧杯、超净工作台、二氧化碳培养箱、倒置显微镜。
2.3 试剂含有5％小牛血清的mem培养液、0.01mol／l pbs，0.25％胰蛋白酶一0.02％edta混合消化液、75％乙醇。
4.实验方法4.1 原代细胞培养4.1.1 原理细胞培养(cell culture)是模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。
近年来，广泛地应用于分子生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、细胞工程等领域，发展成一种重要生物技术，并取得显著成就。