分子诊断检测项目介绍 分子诊断检测项目介绍
分子诊断室收费标准
1190.7
新鲜组织 / 270700003 石蜡组织 / 腹水 270700004 S-1 270700003 270700005 S-2
828
5~6 工作 日
212.4 414 1710 5~6 工作 日 4~5 工作 日
荧光定 量 PCR
详见“西妥昔单抗检测意义”
新鲜组织/ 石蜡组织/ 胸水
270700004 S-1
774.9
4~5 工作 日
270700003
828
5~6 工作 日 4~5 工作 日
KRAS 突变在我国 NSCLC 中约占 KRAS 基因 12,13 号 10%，KRAS 突变与 EGFRTKI 靶 密码子突变 向药物耐药或疗效不佳相关。 用于治疗既往接受 过化学治疗或不适 于化疗的局部晚期 EGFR 基因拷贝数 或转移性非小细胞 肺癌(NSCLC) EGFR 基因 20 号外 显子 T790M 突变 MET 基因扩增 EGFR 基因拷贝数变异与 EGFR 突变或蛋白表达相关，可能与 EGFR TKI 疗效相关。 EGFR-TKI 的主要耐药机制之一。 MET 基因扩增与 NSCLC EGFR TKI 继发性耐药相关。
IGH/c-myc 染色体易位检测 IGH/CCND1 染色体易位检测
API2/MALT1 染色体易位检测
第一部分肿瘤个体化用药分子检测
1、肿瘤个体化用药——靶向药物篇
吉非替尼、 表皮生长因 厄洛替尼、 子受体酪氨 酸激酶抑制 埃克替尼、 剂 (EGFR-TKI) 阿法替尼 肿瘤多基因突变分 型 BIM 基因 2 号内含子 片段缺失
靶向药物 药物性质 适应证 检测项目 检测意义 检测 方法 适用样本 省物价局 编码 收费 标准 报告 周期
分子诊断知识科普
分子诊断知识科普分子诊断是一种基于分子生物学和遗传学原理的诊断方法，通过分析个体的基因、蛋白质或其他分子水平的信息，来判断其是否患有某种疾病或具有某种特定的遗传变异。
分子诊断可以通过检测基因突变、基因表达水平、蛋白质标记物等来识别疾病的存在或发展状态。
与传统的疾病诊断方法相比，分子诊断具有更高的准确性和灵敏度。
传统的诊断方法主要依靠临床症状、体征和影像学检查等，但这些方法往往无法提供足够的信息来进行准确的诊断。
而分子诊断则可以直接检测疾病相关的分子标记物，从而提供更为准确的诊断结果。
一、分子诊断的基本原理分子诊断的基本原理是通过检测和分析个体的基因组、转录组和蛋白质组等分子信息，来确定是否存在某种疾病或病理状态。
这种方法通常需要从患者的血液、体液或组织样本中提取并分析分子，并与正常个体或已知疾病个体的分子信息进行比对。
分子诊断的核心技术包括基因测序、PCR(聚合酶链式反应)、核酸杂交等。
其中，基因测序是一种通过测定DNA序列来获取个体基因信息的方法。
PCR是一种通过扩增DNA片段来增加检测灵敏度的方法。
核酸杂交则是一种通过将目标序列与一段互补的DNA或RNA序列结合来检测目标序列的方法。
通过这些技术，分子诊断可以检测到包括遗传疾病、感染病、肿瘤等在内的多种疾病。
例如，通过检测BRCA1和BRCA2基因的突变可以判断一个人是否患有乳腺癌或卵巢癌的遗传风险。
通过检测某种病原体的DNA或RNA可以确定感染者的感染状态。
通过检测肿瘤细胞中的特定基因突变可以确定肿瘤的类型和治疗策略。
二、分子诊断的应用领域分子诊断在医学领域有着广泛的应用。
下面将介绍一些常见的应用领域。
1. 遗传疾病诊断：分子诊断可以通过检测个体的基因突变来确定遗传疾病的存在和风险。
例如，通过检测孩子的基因突变可以确定其是否患有遗传性疾病，如先天性心脏病、遗传性失聪等。
2. 传染病诊断：分子诊断可以通过检测病原体的DNA或RNA来确定感染病的存在和类型。
分子诊断简介介绍
要点二
公共卫生
分子诊断在传染病监测、疫情调查和预测等方面具有重要 作用，有助于及时采取防控措施，保障公众健康。
04
分子诊断在食品安全领域的应用
食品中的有害物质检测
01
02
03
农药残留检测
通过分子诊断技术可以检 测出食品中残留的农药成 分，确保食品的安全性。
毒素检测
分子诊断技术可以检测出 食品中的毒素成分，如黄 曲霉素等，从而避免食品 中毒的发生。
灵敏度
分子诊断技术需要不断提高检测灵敏度，以 便更早、更准确地检测出疾病或病原体。
特异性
为避免误诊，分子诊断技术需具备更高的特 异性，以准确区分不同的疾病或病原体。
实现多目标同时检测和鉴定
多目标检测
同时检测多种疾病或病原体，提高诊断效率。
鉴定与分型
对疾病或病原体进行鉴定和分型，有助于更准确地判断 病情和治疗方案。
反向分子杂交技术
反向分子杂交技术是一种基于DNA-DNA杂交的技术，通过使用特异性设计的 DNA探针，能够检测样本中是否存在与探针互补的DNA序列，实现对基因多态 性的分析。
基于生物芯片的技术
DNA芯片技术
DNA芯片技术是一种高通量的DNA检测技术，通过在芯片表 面固定大量的DNA探针，能够同时检测样本中是否存在与探 针互补的DNA序列，实现对多种病原体的快速检测。
肿瘤的诊断与预后判断
肿瘤标志物检测
分子诊断可检测肿瘤标志物，如癌胚抗 原、甲胎蛋白等，辅助诊断肿瘤并评估 病情进展。
VS
基因突变与预后判断
分子诊断可检测肿瘤细胞的基因突变，有 助于判断患者的预后和治疗效果，为制定 个性化治疗方案提供依据。
其他疾病的应用前景
要点一
分子生物学检测技术简介
分子生物学检测技术简介分子生物学诊断技术是现代分子生物学与分子遗传学取得巨大进步的结晶，是在人们对基因的结构以及基因的表达和调控等生命本质问题的认识日益加深的基础上产生的。
近年来，分子生物学诊断技术的方法学研究取得了很大进展，先后建立了限制性内切酶酶谱分析、核酸分子杂交、限制性片段长度多态性连锁分析等方法。
1985年由美国Cetus公司人类遗传学研究室Mullis等创立并随后迅速发展起来的DNA体外扩增技术（PolymeraseChainReaction,PCR）,以及90年代发展起来的DNA芯片技术（DNAChip）,又将分子生物学诊断技术提高到一个崭新的阶段。
一、核酸分子杂交（一）概述：具有一定互补序列的核甘酸单链在液相或固相中按碱基互补配对原则缔合成异质双链的过程叫核酸分子杂交。
应用该技术可对特定DNA或RNA序列进行定性或定量检测。
到目前为止，分子杂交技术在基因诊断中仍占重要地位，它按反应支持物可分为固相杂交和液相杂交两种，前者应用较广，有Southern印迹杂交、点杂交、夹心杂交（三明治杂交）、原位杂交和寡核甘酸探针技术等。
核酸分子杂交主要涉及两个方面：待测的DNA或RNA,以及用于检测的DNA或RNA探针。
探针标记的好坏决定检测的敏感性。
1、Southern印迹杂交是最经典和应用最广泛的杂交方法。
根据基因探针与待测DNA限制酶酶解片段杂交的带谱，可以直接确定宿主基因的缺陷所在或病原体的存在状态。
2、Northern印迹杂交基本原理与Southern印迹杂交相同，不同的是它检测mRNA而不是DNA,因此可分析和了解基因的表达状态。
由于mRNA比DNA更易受到各种因素的降解，所以整个操作过程须特别小心。
3、斑点杂交将待测DNA或细胞裂解物变性后直接点在硝酸纤维素膜上（无需限制酶酶解），与探针进行杂交反应。
该技术对于基因拷贝数多的样品很适合，具有简捷快速的特点，一次可做大批量样品的筛查，适于流行病学调查和感染性疾病外源性致病基因的检测。
分子诊断及其临床应用
22
分子信标 molecular beacon）
分子信标是一种茎环结构的双标记寡核苷酸探针。 分子信标的茎环结构中，环一般为 15-30 个核苷酸长， 并与目标序列互补；茎一般 5-7 个核苷酸长，并相互配对 形成茎的结构。荧光基团连接在茎臂的一端，而淬灭剂则 连接于另一端。 在此结构中，位于分子一端的荧光基团与分子另一端 的淬灭基团紧紧靠近。此时，荧光基团与淬灭基团形成 FRET结构，致荧光淬灭。 在变性后退火复性过程中，分子信标与靶DNA结合， 茎环结构打开成链状，荧光基团与淬灭基团分开，产生荧 光。
…
遗传性疾病 基因突变：单基因病 遗传风险因素
感染性疾病
病原微生物鉴定，定 量，分型，耐药检测
肿瘤
诊断，分型，治疗 检测，耐药
临床常用的分子诊断技术：
PCR扩增（临床最常用） 探针杂交技术 测序技术 片段分析技术 等
分子诊断技术：
实时荧光定量PCR技术 PCR-探针杂交技术 PCR-测序技术
临床科研常用
常规PCR技术： 对PCR扩增反应的终产物进行半定量 及定性分析
普通PCR
荧光定量PCR
定量PCR技术： 对PCR扩增反应中每一个循环的产物进行定量及定性分析
实时荧光（定量）PCR荧光示踪方法
• 荧光染料法：SYBR Green 1 ，EB
• 荧光探针法：基于FRET(荧光共振能量转移) 技术 Taqman(水解探针) Hybridization probe(杂交探针) Molecular Beacon(分子信标)
Taqman 探针（水解探针）
R
Q
R Reporter Q Quencher
5’端标记荧光基团，3’端标记淬 灭基团，探针完整时，没有荧光，探 针断裂后，在激发光的作用下，荧光 基团产生荧光；
分子诊断
发展趋势
世界各国高度重视分子诊断技术的发展，基因芯片将成为新一代分子诊断试剂开发的主流。基因芯片是分子生物学、微电子、计算机等多学科结合的结晶，综合了多种现代高精尖技术，被专家誉为“诊断行业的终极产品”。基因芯片具有同时能够检测多个靶点的功能，具有快速有效的特点。因而基因芯片成为新一代分子诊断试剂的主要开发方向，但其成本高、开发难度大，目前产品种类很少，只用于科研和药物筛选等用途。目前基因芯片的大规模临床应用还存在尚未克服的技术缺陷，主要是由于芯片诊断特异性和灵敏度低、芯片诊断成本高昂和芯片诊断配套仪器价格昂贵等原因。目前全球，虽然只有少数的芯片可用于临床诊断，但国内基因芯片技术已经处于世界领跑的地位。基因芯片技术将是荧光定量PCR 检测技术最具挑战的潜在对手，主要是：荧光定量PCR 技术一次只能检测一个或几个目标基因，而基因芯片技术可以实现对大量目标基因的同时检测。随着人类基因组计划的进展，基因芯片在国内外已成为研发热点。若基因芯片技术迅速成熟并大规模产业化，将对荧光定量PCR 检测产生较大的冲击。不过，目前基因芯片的大规模临床应用还存在尚未克服的技术缺陷，主要是由于芯片诊断特异性和灵敏度低、芯片诊断成本高昂和芯片诊断配套仪器价格昂贵等原因，预计荧光定量PCR 检测技术在今后5 到10 年内可保持领先。
5.组织标本
如果无法获得血液或口腔黏膜细胞（如患者死亡），或者组织标本的基因型同血液或口腔黏膜细胞不同，或者组织为某些潜在感染物质核酸的唯一来源时，可采用组织标本。通常最佳的组织量为1-2g，但由于各种组织所含的DNA和RNA的量不同，采集组织的量也因组织而异。多细胞组织如骨髓、淋巴结、脾适用于基因组DNA检测，需要的组织量较少。少细胞标本如肌肉、纤维、脂肪组织不是基因组DNA的最佳来源，采集量最好大于1-2g。通常，如果没有广泛脂肪浸润，大于10mg的组织至少获得10μg的RNA或DNA。不同组织的蛋白质的量和类型各不相同，核酸分离方法也因组织而异。按照特定来源的组织，根据厂家建议分离DNA或RNA。
分子细胞遗传学诊断技术简介
技术优势
➢ 重复性好、稳定；
➢ 高灵敏性及特异性；
➢ 可用于间期细胞，不需要细胞培养；
目前，FISH已成为一种常见检测手段，国外广泛地用 于产前、产后遗传病诊断及血液肿瘤、实体瘤等方面的
检测。在欧美发达国家应用FISH产前诊断检测染色体 异常占30-40%。
技术原理与方法
产前诊断检测非整倍体需要21、13、 18、X和Y染色体上的五种探针。其中21 号和13号染色体检测探针列为一组，为 位点特异探针，分别用Rhodamine (红 色和FITC (绿色)标记。18号、X和Y染色 体探针列为一组，为染色体着丝粒特异性 重复序列探针,分别用DEAC(蓝色) FITC (绿色)和Rhodamine (红色)标记。
➢ 试剂及设备成本高。
aCGH快速检测间期细胞全基 因组拷贝数
Байду номын сангаас
21世纪细胞遗传学的革命 – aCGH
简称：aCGH
英文名：array-comparative genomic hybridization； Microarray based Comparative Genomic Hybridization ）
SpectralWare® software provides a visual representation of the data generated from the microarray
Targeted aCGH
对已知病症提供清晰的信号
避免实验室反复用FISH 方法来 进行实验诊断
结果易懂 将错失不覆盖区域的基因缺失
因。 生育过先天性心脏病患儿父母进行检测，
可以预测下一胎儿患先心病的可能性。
光谱核型分析技术检测染色体异常
分子诊断室项目介绍
例数 HBsAg HBcIgG HBcIgM HBeAg HBeAb HBsAb PCR 阳性率(％) ──────────────────────────────────── ８６ ＋ ３４ ３９.５３ ４５ ＋ ＋ １９ ４２.２２ ４２ ＋ ５ １１.９０ ２８ ＋ ＋ ＋ ２７ ９６.４３ ２９ ＋ ＋ ＋ ２９ １００ １０ ＋ ＋ １０ １００ ２８ ＋ １ ３.５７ ３７ ＋ ＋ ３ ８.１１ １０ ＋ ０ ０ １０ ＋ ＋ ０ ０ ────────────────────────────────────
9
Ct值与起始模板的关系
每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的 对数存在线性关系，起始模板数越多，Ct 值越小，利用已知起始拷贝数的标准品作 出标准曲线，只要获得未知样品的Ct值， 即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷 贝数。
10
荧光定量的标准曲线
Target
log (F2/F1)
未知标本
n
Crossing Point (Cycles) n log (copy number)
38
log (F2/F1)
标准曲线
11
荧光检测模式
（1）SYBR Green I 染料 （2）水解探针（Taqman） （3）杂交探针（Hybridization Probes） （4）分子信标（molecular beacon) 发夹引物（sunrise primer) 蝎状引物（scorpion primer) 复合探针（complex probes)
分子诊断室项目介绍
内 容
1.HBV-DNA荧光定量PCR 2.流式基本应用 3.染色体核型分析
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分子诊断检测项目介绍
前言
天津万盖得门诊部是一家由海外归国人员为主体创办的股份制民营医疗机构, 以引进、开发和推广新的医学检验技术为主要经营内容。
万盖得三字来自英语“Vanguard”的音译，其意译为前哨或尖兵的意思，这表明了创办者“敢为天下人先”的意愿。
希望能够凭借自身的知识、技术、信息和观念优势，为国内医学检验方面的技术进步以及医疗体制的改革做出贡献。
万盖得将以严肃、严谨和科学的态度开展各项业务，为医院和社区提供高质量的医疗和检验服务。
分子诊断是我们首先开展的实验诊断服务，这是一个全新的、被称之为实验诊断一场革命的领域，因为分子技术的临床应用已经使很多用常规技术根本无法检测的病理变化可以被精确的测到。
我们首先开展的用细胞DNA定量分析系统进行肿瘤的早期诊断，处于世界领先地位，这项技术已使脱落细胞的检查成为一项客观、准确、自动化和高通量的肿瘤筛查和早期诊断的技术平台。
我们自主开发的多重PCR 检测性病病原、病毒和难以培养的细菌性病原，将给感染性疾病的诊断和治疗带来新的突破性进展。
在医疗服务方面，我们计划引入发达国家中行之有效的家庭医生服务模式，为中等收入以上的家庭和个人提供个体化和优质的医疗和保健服务，引导我们的服务对象建立起防病重于治病的观念，主动地提高自身的保健意识。
与同等规模的医疗机构，保持一种即竞争又合作的新型关系。
与大型综合医院和专科医院，我们希望能建立起互补和互利的协作关系。
我们相信，万盖得在各级领导和医务界同仁的关怀和支持下，定能发展壮大。
万盖得首席科技顾问
临床微生物学博士
吴尚为
2006年元月
分子诊断目录
细胞分子生物学检测
细胞DNA定量分析系统简介
细胞DNA定量分析的基本原理
细胞DNA定量分析的临床应用价值
不同DNA指数（DI）在宫颈癌普查中的临床意义
宫颈癌和宫颈癌的早期诊断
宫颈癌筛查和常规宫颈细胞学检查
宫颈细胞学检查的方法
宫颈细胞DNA定量分析
细胞DNA定量分析的其他用途
核酸检测技术
基本概念
多聚酶链反应-PCR
人类乳头状瘤病毒的检测
人类乳头状瘤病毒
人类乳头状瘤病毒与宫颈癌
人类乳头状瘤病毒对宫颈癌的“预警”作用
万盖得宫颈癌筛查—预警—监测和早期诊断系统宫颈标本采集、送检注意事项
慢性生殖道感染和性传播疾病病原的检测慢性生殖道感染和性传播疾病
引起慢性生殖道感染和性传播疾病的常见病原
诊断困难造成对发病率统计的困难
实验检测方法及优、缺点
分子扩增技术的应用促进了对性病的了解
PCR已成为检测性病病原的金标准
万盖得多重PCR检测性病病原
脑脊液中感染病原的检测
中枢神经系统感染和诊断
人类疱疹病毒与中枢神经系统感染
脑脊液中检测病毒的困难
万盖得多重PCR检测脑脊液中的疱疹病毒
细菌性中枢神经系统感染
PCR检测脑脊液中细菌的优越性
万盖得多重PCR检测脑脊液中的致病菌
呼吸道感染病原的检测
呼吸道感染
呼吸道感染病原的检测
PCR检测法的优越性
万盖得多重PCR检测细菌性非典型肺炎病原
PCR是检测病毒非典型肺炎病原的最好方法
万盖得多重RT-PCR检测病毒性非典型肺炎病原
细胞分子生物学检测
细胞DNA定量分析
细胞DNA定量分析系统简介
1、系统组成：数码显微镜、自动送片机、计算机和先进的软件系
统（自动化控制软件和DNA定量分析软件）。
2、Feulgen染色中细胞核着色深浅度与DNA的含量正相关。
细胞
DNA的定量检测是通过逐一检测每一个细胞核的积分光密度值（IOD）实现的。
因此IOD代表细胞核DNA的含量。
显微镜拾取细胞涂片的光学信号后，被数码相机转化为模拟电信号，在经模—数转化成为数字信号，经计算机处理，将运算产生的各种参数、储存的图像和数据进一步分析诊断。
3、对照设置：A. 染色对照:准备一批已知DNA含量的细胞涂片,
每次染色
取一张对照, 染色结果的IOD值要在对照片均
值±10%以内。
B．内对照细胞: 检测同一切片上100个
正常细胞作照。
4、工作效率：A：扫描时间:10~15分/例，24小时自动扫描诊断; B: 细胞病理学医生仅对＜10%的可疑病例进行复查。
细胞DNA定量分析的基本原理
每一个正常的细胞核内均有23对染色体，并有固定数量不变
的DNA含量（7pg）。
占人体90%的细胞处于细胞周期总的静止
期（Go），其DNA指数（DI）为1。
只有当细胞增殖时才有DNA
含量的增加。
G1期是细胞增殖周期中的第一个阶段，此时细
胞尚未开始增殖，DI仍为1。
S期为DNA复制期， DNA倍增，
DI为1~2。
G2为有丝分裂期，DI为2（14pg）。
M期为有丝分
裂期，细胞分裂为二个子细胞，DNA含量又恢复到7pg。
DNA
是细胞生长、分化和繁殖的基础。
致癌因子引起基因的突变，
导致DNA含量和信息的改变，即使DNA仅有2%的变化，都可
被现代的DNA图像分析系统所检出。
细胞形态学改变如核增
大、染色质染色加深、核形态不规则等外在表现均提示细胞
DNA的变化。
细胞DNA定量分析的临床应用价值
1、提高细胞学诊断的准确性：80~90%的实体肿瘤细胞其DNA为非
整倍体，即异倍体。
DNA异倍体细胞的出现是提示恶性细胞的
标志。
细胞恶变过程中，出现DNA含量的改变较形态学改变要
早, 而且前者为量化诊断,更客观。
2、肿瘤的预后评估：整倍体系列的肿瘤其预后较非整倍体好。
3、指导肿瘤的治疗：经放、化疗治疗后，异倍体细胞是否消失直
接反映抗癌治疗的疗效好坏。
宫颈癌和宫颈癌的早期诊断
中国是宫颈癌高发生率和高死亡率的国家
宫颈癌是女性的主要恶性肿瘤之一，每年全世界有50余万新发病例，其中大约1/3来自中国。
在中国，宫颈癌造成的死亡率也很高，以省市为单位的死亡率为3/10万（西藏）到20.5/10万（山西）。
中国宫颈癌的平均死亡率（9.9/10万），甚至高于一些发达国家的宫颈癌发病率，如加拿大为3/10万。
全球不同国家或地区宫颈癌新发病数
（WHO上世纪80年代中期的资料）
中国以省市为单位的死亡率统计（1/10万）
宫颈癌如能早期发现是可以治愈的
早期发现
正常癌前病变浸润癌。