肺炎支原体的分离鉴定与药敏性研究_刘展
肺炎支原体培养及药敏试验结果分析
肺炎支原体培养及药敏试验结果分析摘要：目的对咽拭子标本进行肺炎支原体（MP）培养，分析阳性率及药敏情况，为临床诊治提供依据。
方法随机选取2018年11月至2019年12月医院2186例呼吸科呼吸道感染患者送检的咽拭子标本，将这些标本进行肺炎支原体培养和药敏试验，分析患者MP感染情况，以及采用何种药物治疗效果最好。
结果经肺炎支原体培养和药敏试验，我们发现2186例标本中，肺炎支原体培养结果显示阳性的有303例，阳性检出率为13.9%。
结论经过肺炎支原体培养和药敏试验可以得出，治疗药物中大环内酯类（依托红霉素、红霉素、罗红霉素、阿奇霉素）、克林霉素、克拉霉素对肺炎支原体有较强的抗菌性，喹诺酮类抗菌药物（环丙沙星、左氧氟沙星）耐药性有所增加，而四环素类抗菌药物（强力霉素、美满霉素）耐药情况较为严峻，耐药性逐渐增加，因此临床应根据药敏结果调整用药，首选大环内酯类抗菌药物，加大针对肺炎支原体感染的防控力度。
关键词：肺炎支原体；药敏试验；耐药性肺炎支原体（MP）为临床常见的病原体之一，主要侵犯呼吸系统，导致患者发生肺炎支原体感染，是我国社区获得性肺炎（CAP）的首位致病菌。
MP感染的主要治疗药物为大环内酯类、四环素类等抗菌药物，但随着抗菌药物的滥用及临床用药不规范，逐渐导致MP感染患者出现相应的耐药性。
近年来多名国内外相关学者针对MP感染的耐药性做出多方面的探究，并在临床分离出对大环内酯类抗菌药物耐药的MP耐药菌株，但仍然存在不同地区的耐药菌株具有差异性[2]。
本文通过肺炎支原体培养和药敏试验，分析引起成人呼吸道感染的主要病原体和针对性用药，作以下分析。
1资料与方法1.1标本来源选取2018年11月至2019年12月医院2186例呼吸科下呼吸道感染患者送检的咽拭子标本。
1.2标本采集在患者进行治疗前，采集患者呼吸道咽拭子。
在采集标本前，用生理盐水漱口，用无菌拭子来回擦拭悬雍垂附近数次。
所采集标本应尽快接种，室温放置不得超过4个小时。
绵羊肺炎支原体的分离鉴定与敏感药物试验的研究的开题报告
绵羊肺炎支原体的分离鉴定与敏感药物试验的研究的开题
报告
一、选题背景和意义
绵羊肺炎是由支原体感染引起的一种严重的疾病，主要表现为咳嗽、流涕、发热等症状。
支原体是一种细胞内寄生的病原体，对多种抗生素具有抵抗力，传统的治疗
方法效果较差。
因此，了解绵羊肺炎的病原学特点，从分离鉴定和敏感药物试验方面
进行研究，对于科学地制定有效的预防和治疗策略具有重要的意义。
二、研究内容和目的
1、分离鉴定绵羊肺炎支原体的流程和方法；
2、通过药敏试验了解不同药物对绵羊肺炎支原体的敏感性；
3、加深对绵羊肺炎病原学特点的认识，为制定有效的预防和治疗策略提供依据。
三、研究方法和途径
1、采集患羊分泌物样本，进行分离、复制并纯化；
2、根据形态、生长习性和生物化学特点进行初步鉴定；
3、采用药敏试验法，测定不同药物对绵羊肺炎支原体的敏感性。
四、预期结果和考虑的问题
1、顺利获得绵羊肺炎支原体样本，建立相关试验方法和分离鉴定方案；
2、获得关于不同药物对绵羊肺炎支原体的敏感性数据，为临床治疗提供参考。
考虑到本研究存在样本来源不足、药敏试验影响因素较多等问题，需要在实验过程中多方面谨慎观察和处理，确保结果的可靠性。
五、论文结构和预期成果
本论文主要分为绪论、研究内容与方法、实验结果与分析、结论与展望四个部分。
预期成果为：系统了解绵羊肺炎支原体的病原学特点，获得药敏试验数据，为临床治
疗提供参考价值。
1557例支原体培养鉴定与药敏试验阳性结果的探讨与分析
1557例支原体培养鉴定与药敏试验阳性结果的探讨与分析支原体是目前发现的最小的最简单的原核生物，女性生殖道感染支原体以解脲支原体（Uu）和人型支原体（Mh）最为常见，在非淋菌性尿道炎（NGU）患者中约有30%～40%由解脲支原体（Uu）感染所致[1]。
近年来，支原体感染是引起不孕不育症的原因之一，越来越引起临床的关注[2]。
本人对2946例疑似支原体感染病友的分泌物進行支原体培养和药敏试验，现将结果统计如下：1资料与方法1.1一般资料收集自2013年1月～2014年6月我院妇科门诊及住院病友疑似支原体感染的样本资料2946例，其中男性265例，女性2681例，分别占8.99%和91.01%，男女比为0.098：1。
1.2标本采集样本要求必需在用抗生素药物前采集，尽可能多收集细胞，标本采集后立即接种。
男性标本采集采用男性无菌拭子由前尿道1～2cm处取尿道分泌物；女性标本采集采用宫颈分泌物，应先擦去宫颈口多余粘液，再用另一拭子在宫颈管内1～2cm处取宫颈分泌物，并在宫颈内旋转至少停留20s，以便获得较多的细胞。
1.3检测试剂由珠海迪尔生物工程有限公司生产的支原体（Uu/Mh）分离培养药敏试剂盒（微生物检验法）。
试剂盒对解脲支原体标准株ATCC27813和人型支原体标准株ATCC14027分离培养符合率为100%，药敏符合率≥90%。
1.4方法严格按试剂盒操作步骤说明进行，标本及时接种到培养基中，置35～37℃恒温孵育箱中培养，在24～48h观察结果。
1.5结果判断1.5.1阴阳性结果判定标准黄色或橙黄色示为阴性；清晰透明红色示为阳性；混浊红色示为标本污染。
1.5.2阳性标本敏感度判定标准药敏孔高低浓度均为黄色示为敏感；如低浓度为红色，高浓度孔为黄色则示为中度敏感（中介）；如高低浓度均为红色即示为药物耐药。
2 结果2.1支原体感染情况见表1。
2.2药敏试验结果见表2。
3讨论3.1目前引起生殖道感染的支原体主要有Uu和Mh，调查显示，健康人群支原体携带率为Uu为10.59%，Mh为5.34%，且携带率与性接触的有无和多少有关，随着性伴侣增加而增加[3]。
支原体肺炎的病分离和株鉴定
支原体肺炎的病分离和株鉴定支原体肺炎是一种由支原体引起的呼吸道感染疾病，其主要病原体是支原体肺炎衣原体（Chlamydia pneumoniae）。
在临床上，支原体肺炎可表现为轻度感冒样症状，也可引起较严重的肺炎。
为了准确诊断和研究该疾病，研究人员常采用病原体的分离和株鉴定方法。
一、病原体的分离方法支原体肺炎的病原体分离是根据其对细胞的侵染和繁殖能力进行的。
通常的方法是通过培养患者的感染样本（如咽拭子、痰液或病组织）来分离病原体。
1. 细胞培养法采集患者样本后，将其接种到合适的宿主细胞中，如肺上皮细胞或卵巢细胞，供支原体进行增殖。
经过培养一段时间后，通过染色或PCR等方法观察细胞是否感染，以判断是否成功分离到病原体。
2. 特异性抗原检测法根据支原体的特异性抗原，可选用特异性抗原检测方法，如酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光（IFA）等，来检测患者样本中是否含有支原体。
3. 核酸检测法核酸检测法是目前常用的病原体分离方法之一。
通过提取患者样本中的核酸，并进行PCR扩增，可以检测支原体的存在与否。
此外，也可以通过序列分析，鉴定病原体菌株的亲缘关系。
二、株鉴定方法为了进一步研究支原体的类型和特性，研究人员常采用株鉴定方法，即对不同株系的支原体进行分类和鉴定。
常用的株鉴定方法包括：1. 基因测序法通过对支原体基因的测序，如16S rRNA基因、ompA基因等，可以比较不同菌株间的序列差异，从而确定其分类地位和亲缘关系。
基因测序法具有高分辨率和准确性的优点，被广泛应用于病原体株系研究中。
2. PCR扩增与分型法PCR扩增与分型法是一种快速、简便的株鉴定方法。
通过特异性引物对目标基因进行PCR扩增，然后利用电泳等方法分析PCR产物的大小和差异，从而判断不同株系之间的遗传变异。
3. 血清学鉴定法血清学鉴定法主要通过检测不同株系支原体的抗原性差异，如特异性抗原的存在与否、抗原表位等，来鉴定支原体的株系。
通过相关分离和株鉴定方法，我们可以更好地了解支原体肺炎的病原学特征和流行病学特点，为制定相应的预防措施和临床治疗提供科学依据。
709例肺炎支原体分离培养及其药敏试验结果分析
709例肺炎支原体分离培养及其药敏试验结果分析肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae，MP)是我国急性呼吸道感染的常见病原体，由口、鼻分泌物经空气传播，除引起上呼吸道感染、支气管炎、肺炎等急性呼吸道感染外，还可引起机体多系统多脏器的损害[1]，临床多表现为咳嗽、发热、头痛、咽喉疼痛和肌肉酸痛等，MP肺炎在我国社区获得性肺炎中占有很高的比例，达到了20.7%，已经超过肺炎链球菌，成为获得性肺炎的首要致病原[2]。
MP除引起严重的肺炎外，还可引起严重的肺外并发症和持久的后遗症，甚至危及生命[3] MP对一般治疗肺炎、上呼吸道感染的药物有耐药性，临床常用的β-内酰胺类抗生素治疗无效，故MP肺炎的早期诊断、及时治疗非常重要。
我们对709例儿童肺炎感染患者进行了MP 分离培养鉴定以及药敏试验，现将分析结果报告如下1 材料与方法1.1 标本来源2011年3月～2011年11月我院就诊的疑似MP急性呼吸道感染患儿709例，其中男455列，女254例，患儿按年龄按表1分为4组。
婴儿组（～1岁）529例，幼儿组（～2岁）95例，学前组（～5岁）49例，学龄组（5岁以上）36例。
1.2 方法1.2.1 标本采集所有患儿均于就诊当日由儿科护士无菌采集咽拭子标本，以无菌生理盐水浸湿棉拭子，在患儿口咽喉部捻转数次后，取出并迅速置于已打开盖的MP快速鉴定培养基（购自陕西百盛园生物科技信息有限公司）小瓶中，在瓶内搅动数次后，去除咽拭子瓶外多余部分，盖上瓶塞。
1.2.3 培养及结果判定将培养瓶置于37℃孵箱中，培养24h后观察结果。
结果判断：24 h 后瓶内培养基颜色由原来的红色澄清变成黄色澄清判为阳性，培养基颜色保持不变或变浑浊判为阴性。
MP对9种药物进行了药敏试验，操作及结果判读严格按试剂说明书进行。
9种药物包括：红霉素(ERY)、罗红霉素(ROX)、克拉霉素(CLA)、阿奇霉素(AZI)乙酰螺旋霉素(ACE)、克林霉素(CLI) 、左氧氟沙星(LEV)、加替沙星(GAT)、司帕沙星(SPA)。
肺炎支原体实验室诊断的研究进展
肺炎支原体实验室诊断的研究进展1. 引言1.1 肺炎支原体实验室诊断的重要性肺炎支原体是一种常见的致病菌，导致肺炎、支气管炎等呼吸道感染。
在临床诊断中，正确快速的诊断是确诊和治疗的重要基础。
肺炎支原体实验室诊断的重要性主要体现在以下几个方面：肺炎支原体的症状与其他病原体引起的呼吸道感染相似，如流感病毒、腺病毒等，容易造成临床诊断的混淆。
通过实验室检测，可以准确鉴别病因，避免误诊和漏诊。
肺炎支原体感染对于一些特定人群，如婴幼儿、老年人、免疫功能低下者等，可能引起严重并发症，甚至危及生命。
及时准确的实验室诊断可以帮助医生及时采取有效的治疗措施，降低病情的严重程度和治疗的难度。
肺炎支原体的耐药性问题日益突出，传统的经验性抗生素治疗已经不能满足临床需求。
实验室诊断可以帮助医生了解病原体的耐药情况，避免不必要的药物使用，减少药物的滥用，同时也可以为个体化治疗提供依据。
肺炎支原体实验室诊断的重要性不言而喻，它对于临床诊断和治疗具有重要意义，是提高医疗质量、保障患者生命健康的基础。
1.2 肺炎支原体实验室诊断方法的发展肺炎支原体是引起肺炎和其他呼吸道感染的常见病原体之一，其实验室诊断方法的发展对于准确诊断和有效治疗具有重要意义。
传统的实验室诊断方法包括细菌培养、血清学检测和免疫荧光技术等，但这些方法存在操作繁琐、耗时长、准确性低等缺点。
随着分子生物学技术的不断发展，PCR技术已经广泛应用于肺炎支原体的实验室诊断中。
通过PCR扩增靶基因序列，可以快速、敏感地检测肺炎支原体的存在，从而加快诊断速度，提高诊断准确性。
PCR技术还可以用于检测肺炎支原体的耐药基因，为临床治疗提供重要参考。
免疫学技术在肺炎支原体实验室诊断中也取得了一定的进展。
ELISA技术可以检测患者血清中的特异性抗体水平，帮助确诊肺炎支原体感染。
免疫荧光技术则可直接检测痰液或组织标本中的支原体抗原，有助于快速诊断。
随着肺炎支原体实验室诊断方法的不断发展和完善，诊断的敏感性和特异性得到了提高，为临床医生提供了更多的诊断手段和治疗决策的依据。
肺部感染微生物的分离鉴定及药物敏感性研究
肺部感染微生物的分离鉴定及药物敏感性研究一、引言肺部感染是一种常见的呼吸系统疾病，通常由细菌、真菌或病毒引起。
准确鉴定引起感染的微生物以及对药物的敏感性至关重要，可以帮助医生选择最适合患者的治疗方案。
本文将介绍肺部感染微生物的分离鉴定方法以及药物敏感性的研究。
二、肺部感染微生物的分离鉴定1. 样本采集在进行肺部微生物感染分离鉴定之前，需要进行样本采集。
常见的样本包括痰液、支气管肺泡灌洗液、气管拭子和血液等。
采集的样本需要进行无菌操作，以避免样本被外部微生物污染。
2. 微生物分离将采集的样本进行离心，分离出细菌、真菌或病毒。
离心过程中，需要特别注意离心速度和时间，以确保微生物被均匀分布在离心管的底部。
分离后的微生物可用于后续的鉴定和药物敏感性研究。
3. 微生物鉴定根据微生物形态特征、生理生化反应特性和分子生物学方法等，对分离出的微生物进行鉴定。
常见的鉴定方法包括显微镜观察、培养特性和PCR等。
三、药物敏感性研究1. 药物敏感性试验常用的药物敏感性试验包括药物扩散法、微量比色法和测定最低抑菌浓度法等。
这些试验可以提供不同药物对微生物的抑菌效果和敏感性信息。
2. 抗生素选择根据药物敏感性试验的结果，医生可以选择最合适的抗生素进行治疗。
选择抗生素时，需要考虑到微生物的敏感性、药物的副作用以及患者的个体差异等因素。
3. 多重耐药菌的处理近年来，多重耐药菌的出现给肺部感染的治疗带来了挑战。
对于多重耐药菌感染的患者，应该采取综合治疗策略，包括合理选择抗生素、控制感染源和增强机体免疫力等。
四、新技术在肺部感染微生物研究中的应用1. 基因测序技术基因测序技术可以帮助鉴定微生物的物种和亚种，对于复杂微生物群落的鉴定具有重要意义。
此外，基因测序也可以用于分析微生物基因组的变异和耐药基因的检测。
2. 快速诊断技术传统的微生物鉴定方法需要较长的时间，对于临床治疗来说可能不够及时。
而快速诊断技术可以在较短时间内获得微生物的鉴定结果，有助于加快治疗的进展。
肺炎支原体检测及药敏结果分析
诱 发 低 氧 血 症、 部毛细血管血液和肺 泡 内 之 间 气 体 交 换 障 碍 ， 高碳酸血症等一系列临床症状 ， 呼衰严重影响患者肺通气及肺 换气功能 。 采用常规氧疗往往难以纠正患者缺氧状态 ， 常需 采 用机械通气 。 细致 、 全面 的 系 统 护 理 对 保 证 机 械 通 气 效 果， 促 进患者康复具有重要意义 。
［］ 在我国 ， 约有 １０ ０ ０ 万人遭受 呼 衰 的 困 扰 ８ 。 然 而 大 部 分
生活质量及睡眠质量的影 人并未认识到 呼 衰 对 心 血 管 系 统 、 而忽视了患者 心 响 。 传统护理模式仅仅关注疾病本身的护理 ， 理、 睡眠等生活质量 的 需 求 ， 远 远 不 能 满 足 现 代 护 理 要 求。系 坚持以患者为中心的原 统呼吸护理以 患 者 实 际 需 求 为 导 向 ， 则， 着眼于整体 ， 着手 于 细 节 ， 根 据 患 者 生 理 及 心 理 变 化， 提供 它符 合 现 代 护 理 学 发 展 思 维 ， 对提高患者护 针对性护理服务 ， 理满意度 ， 增进护患关系 ， 不断优化护理流程 ， 提高护理质量 具 有重要意义 。 循序渐进式的放松 锻 炼 ， 可 有 效 改 善 机 械 通 气 效 果， 本组 实施系统呼吸护理的实验 与实施常规护理干预的对照组相比 ， 组肺功能改善更为显著 （ ） 。全面评 估 患 者 一 般 情 况， 犘＜０． ０ １ 密切观察患者病情 变 化 ， 有 助 于 及 时 调 整 护 理 方 案。系 统 化、 阶段性的心理护理 ， 可有 效 性 缓 解 患 者 不 良 情 绪， 增进患者信 任感 ， 安全感 。 针对性的健康睡眠干预 ， 对改善患者睡眠 ， 促进 促进患 者 康 复 ， 改善患者生活质量具有重要意 患者情绪稳定 ， 义 。 本组干预后实验 组 心 理 功 能 评 分 、 社 会 功 能 评 分学与临床 ２ ， ０ １ ４ 年第 １ １ 卷增刊 Ⅱ Ｌ ａ ｂＭ ｅ ｄＣ ｌ ｉ ｎ ２ ０ １ ４， Ｖ ｏ ｌ ． １ １Ｓ ｕ ｌ Ⅱ ｐ ｐ
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Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１２．Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．６ 中国临床医学 ２０１２年１２月 第１９卷 第６期 ·论著· 肺炎支原体的分离鉴定与药敏性研究刘展１＊ 袁春丽１＊ 李青凤２ 汪水城１ 王本旭２（１．北京市怀柔区妇幼保健院，北京 １０１４００；２．北京军区疾病预防控制中心，北京 １０００４２）摘要 目的：探讨肺炎支原体的临床分离株对临床常用药的敏感性。
方法：将临床采集的咽试子标本经过选择性培养基筛选培养，同时进行聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）检测，确定分离到的支原体为肺炎支原体。
将肺炎支原体与不同浓度的临床常用抗生素混合，观察液体培养基颜色的变化，判断肺炎支原体对药物的敏感性。
结果：成功分离到１株肺炎支原体；阿奇霉素、红霉素和头孢呋辛钠浓度分别稀释至３１μｇ／ｍＬ、１２５μｇ／ｍＬ、５００μｇ／ｍＬ时，肺炎支原体抑制；而头孢曲松钠、美洛西林、氨苄青霉素等抗生素对支原体无抑制作用，培养基颜色均由红色变为橙黄色。
结论：肺炎支原体临床分离株对阿奇霉素高度敏感，对红霉素和头孢呋辛钠中度敏感。
关键词 肺炎支原体； 分离鉴定； 药敏性中图分类号 Ｒ７２５．６ 文献标识码 ＡＩｓｏｌａｔｉｏｎ，Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ Ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ＬＩＵ Ｚｈａｎ１ ＹＵＡＮ Ｃｈｕｎｌｉ１ ＬＩＱｉｎｇｆｅｎｇ２ ＷＡＮＧ Ｓｈｕｉｃｈｅｎｇ１ ＷＡＮＧ Ｂｅｎｘｕ２ １．Ｈｕａｉｒｏｕ Ｍａｔｅｒｎａｌ ａｎｄ Ｃｈｉｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０１４００，Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｃｏｍｍａｎｄ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００４２，ＣｈｉｎａＡｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｄｒｕｇ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｓａｍｐｌｅｓｏｆ ｔｈｒｏａｔ ｓｗａｂ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ ｉｎ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ，ａｎｄ ｔｈｅｎ ｔｈｅｙ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＰＣＲ．Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｗｅｒｅｍｉｘｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｑｕａｎｔｉｔｙ ｏｆ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ．Ｉｆ ｏｎｅ ｄｒｕｇ ｃｏｕｌｄ ｋｉｌｌ ｔｈｅ ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ，ｔｈｅ ｃｏｌｏｒ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅｄｉａ ｗｏｕｌｄ ｎｏｔ ｃｈａｎｇｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｏｎｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｔｙｐｅ ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ．Ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａｚｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ，ｅｒｙｔｈｒｏ－ｍｙｃｉｎ ａｎｄ ｃｅｆｕｒｏｘｉｍｅ ｓｏｄｉｕｍ ｗｅｒｅ ｄｉｌｕｔｅｄ ｔｏ ３１μｇ／ｍＬ，１２５μｇ／ｍＬ，５００μｇ／ｍＬ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｗｅｒｅｓｕｐｒｅｓｓｅｄ．Ｃｅｆｔｒｉａｘｏｎｅ ｓｏｄｉｕｍ，ｍｅｚｌｏｃｉｌｌｉｎ ａｎｄ ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ ｈａｄ ｎｏ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ：Ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｒｏａｔ ｓｗａｂ ｓａｍｐｌｅｓ ｉｓ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｅａｓｉｌｙ ｂｙ ａｚｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ．Ｅｒｙｔｈｒｏｍｙｃｉｎａｎｄ ｃｅｆｕｒｏｘｉｍｅ ｓｏｄｉｕｍ ａｌｓｏ ｈａｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ．Ｋｅｙ Ｗｏｒｄｓ Ｍｙｃｏｐｌｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ； Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ； Ｄｒｕｇ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ＊刘展和袁春丽为共同第１作者基金项目：北京市首都医学发展科研基金（编号：２００９３２６７）通讯作者 王本旭，Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｂｅｎｘｕ２０２８＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ 支原体肺炎是肺炎支原体（ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕ－ｍｏｎｉａｅ，ＭＰ）引起的肺炎。
支原体肺炎起病缓慢，患者有发热、阵发性刺激性咳嗽、少量黏液性或黏液脓性痰。
支原体肺炎多发于青少年，患病率占肺炎的１５％～３０％［１］。
目前临床治疗支原体肺炎的常用药物包括阿奇霉素、红霉素等［２］。
本研究旨在通过探讨ＭＰ临床分离株对临床常用抗生素的敏感性，为临床治疗支原体肺炎提供用药依据。
１ 资料与方法１．１ 材料 乳糖酸阿奇霉素（东北制药集团沈阳第一制药有限公司，０．２５ ｇ，２５万Ｕ／瓶），头孢呋辛钠（Ｅｓｓｅｔｉ Ｆａｒｍａｃｅｕｔｉｃｉ ｓ．ｒ．ｌ，Ｉｔａｌｙ，０．７５ ｇ／瓶），头孢曲松钠（上海罗氏制药有限公司，０．５ ｇ／瓶），青霉素（石家庄制药集团有限公司，１ ｇ／瓶）；美洛西林（华北制药有限公司，１ ｇ／瓶）；乳糖酸红霉素（湖南中南科伦药业有限公司，０．２５ ｇ／瓶）；支原体培养基ＣＭ０４０１、ＣＭ０４０３、ＳＲ００５９和ＳＲ００６０Ｃ（Ｏｘｏｉｄ公司，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）；核酸分子量标准ＤＬ２０００ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ（大连宝生物工程有限公司）。
１．２ 研究方法１．２．１ 双向培养基制备 １００ ｍＬ蒸馏水中加入３．５５ ｇ ＣＭ０４０１，１２１℃高压灭菌１５ ｍｉｎ，每个１５ｍＬ培养管中加入１ ｍＬ灭菌后的ＣＭ０４０１培养基，自然凝固。
取１支ＳＲ００６０Ｃ，加入２０ｍＬ蒸馏水溶解。
向每个培养管中加入２ ｍＬ ＳＲ００６０Ｃ，４℃保存备用。
１．２．２ 咽拭子标本选择性培养与鉴定 将咽拭子标本浸入双向培养基中，３７℃培养２周左右。
当培养基颜色由红色转变为橙黄色时，将培养液于ＭＰ固体培养（ＣＭ０４０３＋ＳＲ００５９＋琼脂粉）上划板培养，直至镜下看到“油煎蛋”样菌落长成为止。
挑取菌落于双相培养基中继续培养，观察培养基颜色变化。
１．２．３ ＭＰ的ＰＣＲ鉴定方法 支原体核酸提取方法参照ＤＮｅａｓｙ Ｂｌｏｏｄ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ，Ｃａｔ２２６ 中国临床医学 ２０１２年１２月 第１９卷 第６期 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１２．Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．６Ｎｏ：６９５０４）说明书进行。
引物参照文献［３］设计如下：上游引物为５’—ＧＧＧＡＧＣＡＡＡＣＡＧＧＡＴＴ－ＡＧＡＴＡＣＣＣＴ－３’；下流引物为５’－ＴＧＣＡＣ－ＣＡＴＣＴＧＴＣＡＣＴＣＴＧＴＴＡＡＣＣＴ－３’。
反应条件为９４℃，５ ｍｉｎ；９４℃，３０ ｓ；５５℃，３０ ｓ；７２℃，３０ ｓ；２８个循环；７２℃处理１０ ｍｉｎ。
扩增片断长度为２８０ｂｐ。
以正常双向培养基为阴性对照。
１．２．４ ＭＰ药敏性实验 将ＭＰ分别与终浓度为５ｍｇ／ｍＬ、１ ｍｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ和１μｇ／ｍＬ的阿奇霉素、红霉素、头孢呋辛钠、头孢曲松钠、氨苄青霉素和美洛西林钠共同培养，观察培养基颜色的改变。
待某２个浓度间培养基颜色出现变化后，进一步稀释至合适的药物浓度。
阴性对照不加任何抗生素。
２ 结 果经过多轮特异的选择性的双相培养基筛选，成功分离到１株ＭＰ，该支原体能够特异性地生长在双相培养基中，而且符合双相培养基颜色变化。
提取ＭＰ核酸，经过ＰＣＲ扩增，得到２８０ ｂｐ特异扩增带，与预期结果一致。
见图１。
图１ ＭＰ的ＰＣＲ扩增鉴定结果当阿奇霉素、红霉素、头孢呋辛钠终浓度分别稀释至３１μｇ／ｍＬ、１２５μｇ／ｍＬ、５００μｇ／ｍＬ时，ＭＰ培养基颜色不变，随着抗生素浓度降低，ＭＰ培养基颜色会逐渐由红色变为橙黄色。
而头孢曲松钠、美洛西林钠和氨苄青霉素在不同浓度下培养基颜色都由红色变为橙黄色。
ＭＰ在不同浓度抗生素的双相培养基中颜色的相对变化指示见表１。
表１ ＭＰ于不同浓度抗生素中培养基颜色变化情况项目药物浓度培养基颜色变化情况（＋颜色有变化，－代表颜色无变化）阿奇霉素红霉素头孢呋辛钠头孢曲松钠青霉素美洛西林钠５ ｍｇ／ｍＬ－－－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋２ ｍｇ／ｍＬ－－－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋１ ｍｇ／ｍＬ－－－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋５００μｇ／ｍＬ－－－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋２５０μｇ／ｍＬ－－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋１２５μｇ／ｍＬ－－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋１００μｇ／ｍＬ－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋６２．５μｇ／ｍＬ－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋３１μｇ／ｍＬ－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋１５μｇ／ｍＬ＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋１０μｇ／ｍＬ＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋３ 讨 论ＭＰ是介于细菌与病毒之间的一种微生物，是可独立生活的最小生物个体，可吸附于呼吸道上皮细胞表面并破坏细胞表面，产生过氧化氢引起肺部组织损伤，引发一系列的病理免疫反应［４］。
关于临床治疗支原体肺炎时各种抗生素针对ＭＰ的有效抑制浓度，目前鲜有报告。
分离ＭＰ比较困难，主要原因之一是其生长和增殖速度非常慢，在固体琼脂培养板上需要生长两周以上才能在镜下看到菌落。
本研究采用Ｏｘｏｉｄ公司生产的对ＭＰ具有选择性筛选作用的培养基进行初步培养与筛选，然后通过支原体种属特异性引物进行ＰＣＲ扩增鉴定，分离到了１株ＭＰ临床株。
本研究显示，阿奇霉素对ＭＰ的有效抑制浓度为３１μｇ／ｍＬ，而红霉素最低有效抑制浓度为１２５μｇ／ｍＬ。
这说明该株ＭＰ对阿奇霉素较敏感，对红霉素出现了一定的抗药性，故临床治疗支原体肺炎时应首选阿奇霉素，而非红霉素。
本研究发现，头孢呋辛钠对ＭＰ具有一定的抑制作用，其最低抑制浓度为５００μｇ／ｍＬ。
本研究结果首次证实了头孢呋辛钠能够有效抑制ＭＰ的生长。
但同为β－内酰胺类抗生素的头孢曲松钠、美洛西林以及氨苄青霉素对ＭＰ生长却无抑制作用，其原因有待进一步研究。
参考文献［１］ 陈玲玲，成云改，陈志敏，等．肺炎支原体肺炎患儿混合感染的研究［Ｊ］．中华儿科杂志，５０（３）：２１１－２１５．［２］ 童海燕．重症支原体肺炎５６例治疗分析［Ｊ］．中国临床医学，２０１０，１７（５）：６６１－６６２．［３］ 李淳，吴移谋，朱翠明，等．ＰＣＲ及ＲＴ－ＰＣＲ检测咽拭子标本肺炎支原体的比较［Ｊ］．中国人兽共患病学报，２０１２，２８（２）：１２７－１３０．［４］ 陈志敏．肺炎支原体肺炎的再认识—从发病机制到临床治疗的探讨［Ｊ］．中国实用儿科杂志，２０１２，２７（４）：２５３－２５７．３２６。