液质联用测定甘油三酯结构
GC-MS分析食用油中甘油三酯的研究进展
GC－MS分析食用油中甘油三酯的研究进展管方方，何卓琼，方燕，许旭【摘要】摘要:介绍了GC－MS分析食用油中甘油三酯的几种情况，包括高温气相色谱(＞300℃)直接进样，将甘油三酯进行甲酯化处理的非高温气相色谱(＜300℃)非直接进样。
并介绍了GC－氢离子火焰检测器直接进样和非直接进样技术。
指出了这些技术在食用油甘油三酯的分析上取得的进展和存在的一些问题。
【期刊名称】中国油脂【年(卷),期】2014(000)005【总页数】5【关键词】关键词:GC－MS;甘油三酯;食用油甘油三酯，又称三酰甘油，是由一个甘油分子和三个脂肪酸分子缩合而成，是食用油中最主要的成分。
甘油三酯对人体的重要性使得科学家们逐渐重视对其的研究。
传统的油脂中甘油三酯的分析主要是先用胰脂水解酶将油脂水解［1］，再使用薄层色谱(TLC)将其分离，最后经甲酯化后用气相色谱测定脂肪酸组成。
还有采用高效液相色谱对甲酯化后的油脂脂肪酸进行测定［2］，这一技术省去了水解后再使用TLC技术分离的过程。
Komoda等以聚合甘油三酯为原料，使用体积排阻色谱对其进行分析测定，然而这一技术无法将每种化合物很好地区分开来，从而导致了定性分析的困难。
现代分析技术中，主要使用联用技术测定甘油三酯，如气质联用、液质联用、高分辨质谱技术等。
近年来，随着气质联用技术的迅速发展，使其逐渐成为甘油三酯分析与鉴定的新方法。
本文介绍了GC－MS分析食用油中甘油三酯的几种情况，包括高温气相色谱(＞300℃)直接进样，非高温气相色谱(＜300℃)非直接进样，以及其他技术手段。
1 GC－MS联用技术1.1 高温气相色谱直接进样高温气相色谱直接进样是指色谱柱柱温高于300℃样品不经过前处理直接进入GC－MS联用仪分析。
它省去了传统的甲酯化处理步骤，但是由于样品进入色谱柱需要汽化，因此它对柱温要求较高。
Ruiz－Samblás等［4］将56 种橄榄油样品溶于三氯甲烷后配成0.2%的样品溶液，选用VARIAN GC 3800 GC－VARIAN 4000离子阱MS进行分析测定。
十三血清甘油三酯的测定血清甘油三酯测定方法较多但主要
十三血清甘油三酯的测定血清甘油三酯测定方法较多但主要血清甘油三酯（TG）的测定方法较多，主要可以分为光度测定法、酶法、高效液相色谱法（HPLC）和质谱法等。
下面将对其中几种常用的测定方法进行详细介绍。
1.光度测定法光度测定法是通过测量样品中TG与其中一试剂反应生成的有色产物的吸光度来确定TG浓度。
常用试剂有酚氨法、儿茶酚法和浮选酶法等。
这些方法简单、灵敏度高，但可能会受其他物质的干扰，如胆固醇、胆汁酸等。
2.酶法酶法是利用氧化酶来催化TG水解产生的氢过氧化物与试剂发生比色反应来测定TG浓度。
常用的试剂包括脂肪酶、过氧化氢酶和色氨酸等。
此类方法操作简便，测定结果准确可靠，但可能会受到干扰物质的影响。
3.高效液相色谱法（HPLC）HPLC是一种高效的分离和定量分析方法，常用于测定血清中各种代谢产物，包括TG。
一般使用反相色谱柱，流动相通常为乙腈-水或甲醇-水体系，通过在不同条件下分离目标化合物，并通过检测器进行定量分析。
该方法具有灵敏度高、特异性好的特点，但需要较复杂的设备和操作，且耗时较长。
4.质谱法质谱法是一种非常准确和灵敏的方法，可以用于测定血清中TG的浓度。
常用的质谱方法有气相色谱-质谱联用（GC-MS）和液相色谱-质谱联用（LC-MS）。
这些方法可以通过比较样品与内标物的质荷比来确定TG的浓度。
质谱法具有高灵敏度、高分辨率和高特异性等优点，但设备和操作成本较高。
综上所述，血清甘油三酯的测定方法较多，每种方法都有其优缺点。
在选择测定方法时，需要根据实验目的、样本特点以及实验条件来综合考虑，选择最适合的测定方法。
实验四甘油三酯测定ppt课件
1
测量误差:是测量结果减真值之差。 误差和准确度属于不同概念，两者之间不能划等号。
2
不准确度的数字表达是不确定度 (标准差和置信区间的半宽度表示)。 可以理解为测量结果与约定真值之差的范围。
妊娠、口服避孕药、酗酒等。
31
临床意义 富含TG的脂蛋白是CHD的独立危险因子，TG增加表明患者存在代谢综合症，
需进行治疗。 TG降低比较少见，甲状腺功能亢进、肾上腺皮质功能减退和肝功能严重损
伤时可见。
32
磺酸盐 Mg2+
26
计算TG的含量 甘油三酯浓度（mmol/L)=A样/A标×标准液浓度
(2.26mmol/L) 单位换算：
甘油三酯mmol/L×88.5=甘油三酯mg/dL
27
实验操作(自动分析）
空白管 校准管 质控管 样本管
试剂1 （ul） 240
240
240
240
蒸馏水（ul） 3
—— ——
13
TG的生物化学 二 TG又称中性脂肪，由3分子脂肪酸和1分子甘油酯化而成，是体内能量的主要
来源。TG处于脂蛋白的核心，在血中以脂蛋白形式运输。
14
除TG外，外周血中还存在甘油二酯、甘油一酯（两者总和不足TG的3%）和游离 甘油（FG）。各种脂蛋白中，乳糜微粒（CM）、极低密度脂蛋白（VLDL） 及其残粒中，TG含量高，被统称为富含TG脂蛋白（TRL），也称残粒样脂蛋 白（RLP）
3
生化分析相关概念 正确度 大量测量的均值与真值的接近程度。用偏倚表示不正确度 。 偏倚值(Bias=Xi-x),
甘油三酯(TG)含量检测试剂盒说明书__微量法UPLC-MS-4399
甘油三酯（TG）含量检测试剂盒说明书微量法货号：UPLC-MS-4399规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件试剂一液体160mL×1瓶（自备）4℃保存试剂二液体10mL×1瓶4℃保存试剂三液体20mL×1瓶4℃保存试剂四液体5mL×1瓶4℃保存试剂五液体15mL×1瓶4℃保存试剂六液体15mL×1瓶4℃保存标准品粉剂×1瓶4℃保存溶液的配制：1、试剂一：自备玻璃空瓶，正庚烷和异丙醇按体积比1:1混合，盖紧后混匀；2、标准品：临用前加5mL试剂一，即1mg/mL甘油三酯标准溶液，4℃保存。
产品说明：TG是长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，不仅是细胞膜的主要成分，也是重要呼吸底物。
测定原理：用异丙醇抽提取TG，KOH皂化TG后水解生成甘油及脂肪酸，过碘酸氧化甘油生成甲醛，在氯离子存在下甲醛与乙酰丙酮缩合生成黄色物质，在420nm有特征吸收峰，其颜色的深浅与TG含量成正比。
技术指标：最低检出限：0.0372mg/mL线性范围：0.0625-3mg/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、研钵/匀浆器、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴锅、可调式移液枪、正庚烷、异丙醇、蒸馏水、玻璃空瓶。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清待测。
2、细胞、细菌：先收集400-500万细胞或细菌到离心管内，离心弃上清，加1mL试剂一，超声波破碎1min（强度20%，超声2s，停1s），8000g，4℃离心10min，取上清待测。
实验十四 血清甘油三酯(TG)的测定
实验十二血清甘油三酯（TG）的测定血清甘油三酯测定方法较多，但主要包括提取、吸附、皂化、氧化，还原及显色等步骤。
近年发展的酶学方法测定操作步骤虽然简单，但要许多纯酶制剂，此外还有光散射测定法，亦需要特点器材，故不易推广使用，现介绍两种常用的方法：一、酶法测定甘油三脂【原理】甘油三酯经脂肪酶水解为甘油和脂肪酸，甘油和ATP在甘油激酶（GK）的作用下生成3－磷酸甘油和ADP，3－磷酸甘油经磷酸甘油氧化酶作用生成磷酸二羟丙酮和过氧化氢。
过氧化氢、4－氨基替吡啉和苯酚在过氧化物酶（POD）的微化生成红色的醌类化合物，颜色的深浅与含量成正比。
反应过程如下：1、TG 甘油＋脂肪酸2、甘油＋ATP 3－磷酸甘油＋ADP3、3－磷酸甘油＋O2磷酸二羟丙酮＋H2O24、H2O2＋4－氨基安替吡啉＋苯酚红色醌类化合物【试剂】TC酶试剂盒（商品）【操作】取三支试管，按下表操作：标准管测定管空白管血清（μl）—20—TG标准液（μl）（2mg/ml）20——TG酶工作液（ml） 1.0 1.0 1.0H2O（μl）——20混匀，37℃水浴15分钟，保温结束后，以空白管调零，520nm处比色测定光密度。
【计算】TG（mg%）×2×0.02×正常值：50－150mg％【注意事项】1、清晨空腹血清为好。
2、干粉配成酶工作液后，在2—8℃条件下可保存7天。
【临床意义】血清TG随进食脂肪后即见上升并出现混浊。
空腹脂肪餐后2—4小时内，血清混浊度及甘油三酯含量达高峰，8小时后，基本恢复空腹水平。
血清TG有随年龄而上升的趋势，体重超过标准者也往往偏高。
家庭性脂质代谢紊乱、糖尿病、肾病综合症、粮原累积病、动脉粥样硬化、酒精中毒、垂体、甲状腺功能低下者、胰腺炎等疾病TG可增高。
原发性β－脂蛋白缺乏、甲状腺机能亢进、肾上腺皮质机能不全等疾病TG均可降低。
二、乙酰丙酮法【原理】血清中甘油三酯经正庚烷一异丙醇混合溶剂抽提后，用氢氧化钾溶液皂化成甘油，并进一步用过碘酸氧化成甲醛，在NH4＋的存入下，甲醛与乙酰丙酮反应生成3,5—二乙酰—1,4—二氢二甲基吡啶，后者为带荧光的黄色物质。
甘油三酯(TG)检测
甘油三酯（TG）检测甘油三酯（Triglyceride, TG）由甘油和3个分子长链脂肪酸所形成的脂肪分子，是脂质的组成成分，主要功能是供给与储存能源，还可固定和保护内脏。
血清甘油三酯测定是血脂分析的常规项目。
迪信泰检测平台采用液质联用(LC-MS)和生化法，可高效、精准的检测甘油三酯的含量变化。
对于脂肪酸代谢过程中所需的酶类物质，迪信泰检测平台可提供定制检测或结合试剂盒采用生化法进行检测。
此外，我们还提供试剂盒产品以及其他脂肪酸代谢检测服务，以满足您的不同需求。
样品制备：脂肪酸代谢物提取方法（此部分涉及到公司的核心工艺，以下提供常规的提取工艺）。
1）称量约0.1 g的固体样品；2）液氮研磨至粉末；3）加入1.5 mL含0.1% BHT冰甲醇；4）涡旋0.5 min；5）超声提取10 min；6） 12000 rpm离心5 min；7）收集上清液；8）剩余沉淀有1.5 mL冰甲醇(含0.1% BHT)重新悬浮；9） 12000 rpm离心5 min；10）合并两次上清液；11）加入1 M醋酸钠缓冲液；12）0.45 μm的微孔滤膜过滤；用HPLC-MS检测。
LC-MS测定甘油三酯样本要求：1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周。
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：1. 实验步骤（中英文）。
2. 相关质谱参数（中英文）。
3. 质谱图片。
4. 原始数据。
5. 甘油三酯含量信息。
迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。
2021食用油中甘油三酯的分离分析化学方法范文2
2021食用油中甘油三酯的分离分析化学方法范文 1引言 三脂肪酸甘油酯（甘油三酯）由 1 个甘油分子与 3 个脂肪酸分子结合成酯而成，是食用油的主要成分。
根据碳链的长度以及不饱和度，脂肪酸的种类可高达 800 余种。
动物及植物油脂主要集中在含有0 ~ 3 个双键的 C8~ C26的直链脂肪酸，同时由于结合位置的不固定，导致了甘油三酯的种类相较脂肪酸更趋向于复杂多样[1].但常见动物油和植物油中主要存在的仅是含有 C16和 C18的甘油三酯，如脂肪酸为棕榈酸（C16∶ 0,P）、硬脂酸（C18∶ 0,S）、油酸（C18∶ 1,O）、亚油酸（C18∶ 2,L）、亚麻酸（C18∶ 3,Ln）的甘油三酯。
其它脂肪酸的甘油三酯含量普遍较低。
目前，在世界范围内广泛存在着食用油掺杂的问题，在中国尤以地沟油掺杂问题备受关注[2~4],甘油三酯作为食用油的主要成分，对其进行分离分析是一个值得关注的研究方向。
高效液相色谱-质谱联用技术（ LC-MS）在分离分析甘油三酯方面具有独特的优势，不同的液相色谱柱可以对甘油三酯形成不同程度的分离，高灵敏质谱检测器为分离后的定性识别与定量分析提供了重要条件。
目前，用于分析甘油三酯的质谱离子源有 ESI 与 APCI 两种离子源。
ESI 源适用于检测中等极性以及强极性的化合物，在使用 ESI 源时可利用多级质谱通过将甘油三酯分子打碎后得到的子离子峰，获得对甘油三酯更好的定性分析结果[5,6].通常使用 ESI 源时需要在流动相中加入盐类才会有好的离子化效果[7 ~9].APCI 源适用于弱极性化合物的检测，甘油三酯在 APCI 源中主要形成 3 种类型的碎片离子：酰基离子（ RCO）+、单酰基甘油离子（ M + H - RCOOH - RCO）+和二酰基甘油离子（ M + H - RCOOH）+,根据这些碎片离子峰的特征，可以确定甘油三酯的结构[10 ~13]. 本实验使用串联长柱建立了超高效液相色谱-质谱联用（UPLC-MS）分析食用油中甘油三酯组成的方法。
甘油三酯测定 ppt课件
工作液（ml） 1.5
1.5
1.5
甘油三酯测定
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2 、 将 样 品 混 匀 后 ， 置 于 37℃ 水 浴 箱 中 水 浴 10min。
3、用分光光度计在波长546nm处，以空白管O 调零，分别读取两管吸光度值，记录测定管T、标 准管S的吸光度值AT、AS 。
甘油三酯测定
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五、实验结果计算及分析
A=K·C·L
(K为吸收系数，对同一物质来说为一常数)
甘油三酯测定
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使用方法：
1.检查 ：指针位于“0”。 2.打开电源，打开比色皿暗箱盖，预热20分钟。
3.加样：夹毛面，擦干。 4.放置好比色皿，选择波长、调灵敏度。
甘油三酯测定
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5.反复调0、调100至稳定。 6.合盖，读数，记录，取样，清洗，关闭仪器。
4
微量五档可 调移液器 使用方法：
1.将吸嘴套在移液器头上轻轻转动，以保证密封。
No Image
2.使用前应先将移液器吸液和排液几次，润洗吸嘴和保持 腔内外气压一致。
3.选择量程。
4.垂直地握住移液器，将按钮按到第一停止点，然后把吸 嘴浸入到液面下2～3mm，再缓慢放松按钮，使之复位，等 待1～2秒后，从液体中取出，并避免碰撞任何物体。
（二）实验试剂
1、血清（样本） 2、蒸馏水 3、工作液 4、甘油三酯标准液（标本）：2.26 mmol/L
甘油三酯测定
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四、实验内容和操作过程
1、取3支干净试管，分别标明测定（T）、标准（S） 和空白管（O），然后按表加入试剂：
加入物
测定管T 标准管S 空白管O
血清（ml）
15
标准液（ml）
15
计算公式： 甘油三酯（mmol/L）= 测定管吸光度AT
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液质联用测定甘油三酯结构
一、
1 仪器设备：SFC：超临界液相色谱Q-TOF-MS：飞行时间质谱
2 条件：本研究中使用Waters Xevo G2-S Q-TOF质谱仪（沃特斯Waters，USA）与Waters Acquity Ultra Performance Convergence Chromatography（UPC2，Waters，USA）联用。
SFC系统配备了二元溶剂泵，自动进样器，柱管理器和主要包含背压调节器的汇流管理器。
在1500psi的恒定背压下，在50℃下在Acquity UPC2 BEH-2EP柱（100mm×3.0mm×1.7lm，Waters，USA）上进行分离步骤。
洗脱液A是超临界CO 2，洗脱剂B是甲醇：乙腈：甲酸（50:50:0.1，v / v / v）的混合溶剂。
洗脱梯度基于我们研究组以前的研究，并在本研究中进行了优化：将0.1％B的等度洗脱保持2分钟，然后洗脱液B的比例在6分钟时线性增加至1％，在9分钟时增加2％并保持6分钟，之后，在20分钟时线性上升至7％，24分钟时上升至20％。
最后，在0.5分钟内回到初始梯度并保持0.5分钟。
运行期间流速维持在1.0 mL / min，注射体积为1.0 μL。
Q-TOF质谱仪的优化参数如下：采用m / z 50-2000采集范围的MS E采集方法，采用正离子电喷雾电离（ESI +）模式进行数据采集。
脱溶剂气体为气体流量800L / h的氮气，碰撞气体为氩气。
源温度和去溶剂化温度分别为120℃和450℃。
毛细管电压为3.0kV，锥形电压为25V。
锥形气体流量为20L / h。
低碰撞能量设定在4 eV，而高斜坡碰撞能量设定在20-60 eV。
亮氨酸脑啡肽（0.4ng / μL）用作实时校准的内标（每30秒）。
3 参考文献中结果如图：
二、
1 仪器设备：HPLC-ELSD：高效液相色谱-蒸发光散射检测器
2 条件：采用1100系列液相色谱仪（Agilent Technologies，Waldbronn，Germany），该仪器配有四元泵、脱气机、恒温柱室，自动采样器和联机到Agilent 385-ELSD 的UV-vis二极管阵列检测器。
使用Kinetex C18100A柱（150mm×4.6mm，2.6μm; Phenomenex，Torrance，CA，USA）进行分离。
优化的分离条件如下：用80:20 乙腈/正戊醇混合物等度洗脱45分钟，然后在20分钟内使乙腈/正戊醇
的比例梯度降低至达60:40；柱温，10℃;流速1.0 mL / min;注射量10μL。
UV 检测在波长205±10nm（参照360±60nm）进行。
ELSD参数如下：蒸发和雾
化温度55℃;气体流量，1.2标准升/分钟（SLM）;增益因子1。
对于TAG识别，通过大气压化学电离（APCI）源将UPLC二元泵系统（Acquity，Waters，Milford，MA，USA）连接到三重四极杆质谱仪（TQD，Waters，Manchester，UK）接口上。
MS工作条件如下：探头温度600℃; 电晕放电电流，20μA; 源温度，120°C; 去溶剂气流量800 L h-1; 锥形气流，60 L h-1。
干燥以及雾化气
体是氮气（Praxair，Valencia，Spain）。
质谱仪在m / z 150-1000范围内以正
电离模式扫描，每秒扫描一次。
3参考文献中结果如图：
三、
1 仪器：
2 条件：流动相A为异丙醇: 乙腈(9:1，v/v)含10mM甲酸铵、0.1%甲酸，流动相B为乙腈:水(7:3，v/v)含10mM甲酸铵、0.1%甲酸；选用BEHC18柱(1.7μm，
2.1mmID×100mm，waters)，柱温设为60°C；洗脱条件如下:0min用30%A 洗脱，2min用43%A洗脱, 2.1min用50%A洗脱，10min用54%A洗脱，11min 用30%A洗脱并维持1min，流速为0.4mL/min。
质谱条件
4500QTrap质谱參数设置如下：气帘气(CUR)25，碰撞气(CAD)中等，离子源气1(GS1)45，离子源气2(GS2)50，电喷雾电压5500V，温度500°C，选用正离子模式进行检测；设置MRM-IDA-EPI检测模式，去簇电压(DP)为80，入口电压(EP)为10，出口电压为(CXP)为13，增强子离子(EPI)模式中碰撞能量(CE)为30，碰撞能量散布(CES)15；数据相关采集(IDA)临界值设置为500频数每秒(cps)。
3 参考文献中结果：。