类肝素酶论文非酒精性脂肪肝论文：类肝素酶在非酒精性脂肪肝模型大鼠肝脏组织中的表达及意义
类肝素酶在非酒精性脂肪肝模型大鼠肝脏组织中的表达及意义
类肝素酶在非酒精性脂肪肝模型大鼠肝脏组织中的表达及意义【摘要】目的: 研究类肝素酶在非酒精脂肪肝大鼠模型肝脏组织中的表达，以探讨类肝素酶在非酒精性脂肪肝发生中的作用，为脂肪肝的临床监测与治疗提供新思路。
方法: 建立正常大鼠模型（30只），非酒精性脂肪肝模型大鼠（30只），采用免疫组化sabc 法测定两组模型肝脏组织中类肝素酶的表达。
实验数据的统计方法：计量资料采用单因素方差分析和t检验；计数资料采用χ2检验。
结果: 在非酒精性脂肪肝大鼠模型肝脏组织中类肝素酶的阳性率高于正常模型肝脏组织，差异有统计学意义（p<0.01）。
结论: 非酒精性脂肪肝模型大鼠肝脏组织中类肝素酶的表达增加，提示类肝素酶与非酒精性脂肪肝的发生有关。
【关键词】类肝素酶；非酒精性脂肪肝【中图分类号】r335【文献标识码】b【文章编号】1005-0515(2011)04-0181-01非酒精性脂肪肝病（nonalcoholic fatty liver disease,nafld）是一种无过量饮酒史、以肝实质细胞脂肪变性和脂肪贮积为特征的临床病理综合征。
随着人们生活方式及饮食习惯的改变，其发病率正在逐年升高，在世界范围内成为慢性肝病的最常见病因之一。
nafld 的发病机制还不十分清楚, 目前被广泛接受的理论是day和james在1998 年提出的二次打击学说。
nafld各种病因引发脂质代谢异常，ffa和甘油三酯在肝内沉积，通过线粒体和过氧化物酶体β氧化及微粒体ω氧化等途径触发氧应激反应，脂质过氧化反应通过上述机制损伤线粒体，激发机体释放炎症介质和细胞因子，导致肝细胞发生变性、凋亡、坏死和纤维化的发生。
因此，炎症介质和细胞因子的产生在非酒精性肝病的发生、发展中居于重要地位。
研究表明, 在nafld 的发生和发展过程中有大量细胞因子产生并参与了疾病的演变过程,目前的研究认为类肝素酶在nafld的发病过程中，由脂代谢异常引起机体释放大量的活性氧和氧自由基，脂质过氧化的终产物和蛋白质结合成复合物，激活机体产生免疫反应而参与肝损害，诱导细胞死亡、炎症和纤维化[9]。
Inflammasome在非酒精性脂肪肝发生中的作用及机制
Inflammasome在非酒精性脂肪肝发生中的作用及机制非酒精性脂肪肝（Non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）是一种常见的慢性肝脏疾病，其发生与炎症的异常调控有关。
近年来，研究者们发现，炎症体（inflammasome）在非酒精性脂肪肝的发生中扮演着重要的角色，通过参与细胞炎症反应和细胞凋亡等关键生物过程，调控NAFLD的发展和进程。
本文将重点介绍inflammasome在非酒精性脂肪肝发生中的作用及其机制。
首先，我们需要了解什么是inflammasome。
Inflammasome是一种多蛋白复合体，存在于细胞质中，主要由一种官能蛋白（sensor protein）、适配蛋白（adaptor protein）和促炎细胞因子前体（proinflammatory cytokine precursors）三部分组成。
在感染、损伤或其他压力刺激下，sensor protein被激活，此时适配蛋白聚集成核心，引发针-促炎细胞因子前体的切割和活化，最终导致炎症反应的发生。
近年来的研究表明，inflammasome在非酒精性脂肪肝的病理过程中发挥重要作用。
一方面，inflammasome参与了细胞炎症反应的调节。
炎症是非酒精性脂肪肝的典型特征，存在大量的炎症细胞浸润，并释放多种促炎细胞因子，如IL-1β和IL-18等。
inflammasome的激活能够促进这些细胞因子的切割和成熟，增加炎症反应的程度和持续时间。
另一方面，在非酒精性脂肪肝中，脂肪堆积引发了细胞内氧化应激和内质网应激反应，这些环境变化也可激活inflammasome。
研究发现，细胞内的脂质代谢异常和游离脂肪酸的堆积可引起线粒体的功能障碍和ROS的产生。
ROS，特别是ROS的过度产生，被认为是inflammasome的活化因子之一。
此外，内质网应激反应也可促进inflammasome的激活，进而导致炎症反应的发生，加重非酒精性脂肪肝的损害。
C57BL6小鼠非酒精性脂肪肝模型的建立研究
tissue steatosis,liver cells swelling,fat cavitation in cytoplasm and liver cells inflammatory change were identified in model group
and model group ( 20 mice each group ) . The control group and model group were fed with the normal feed and high鄄fat feed,
respectively. After 4,8,12 and 16 weeks of feed,the body weight,liver weight and liver tissue homogenate were observed,the serum
蚌埠医学院学报 2018 年 5 月第 43 卷第 5 期
573
[ 文章编号] 1000鄄2200(2018)05鄄0573鄄04
·基础医学·
C57BL / 6 小鼠非酒精性脂肪肝模型的建立研究
江摇 云,高月求,朱明清,李摇 曼,张摇 鑫
[ 摘要] 目的:利用 D12492 高脂饲料建立小鼠非酒精性脂肪肝( NAFLD) 模型,为 NAFLD 的研究提供参考依据。 方法:选用健 康雄性 C57BL / 6 小鼠 40 只,随机分组,正常组 20 只采用普通饲料喂养,模型组 20 只采用高脂饲料喂养,建立 NAFLD 模型。 分别在第 4 周、第 8 周、第 12 周、第 16 周进行体质量、肝质量、肝组织匀浆检测,观察血清丙氨酸氨基转移酶、总胆固醇、低密 度脂蛋白及肝脏三酰甘油等指标变化,并进行肝脏病理学检查。 结果:模型组小鼠体质量从第 4 周开始高于正常组小鼠( P < 0. 05 ~ P < 0. 01) ,而肝脏质量从第 8 周开始高于正常组小鼠( P < 0. 05) ;与正常组小鼠比较,从第 8 周模型组小鼠丙氨酸氨基 转移酶增高( P < 0. 05 ~ P < 0. 01) ;各时间点模型组血清总胆固醇、低密度脂蛋白均高于正常组( P < 0. 05 ~ P < 0. 01) ;从第 12 周模型组小鼠肝组织三酰甘油含量升高( P < 0. 05 和 P < 0. 01) 。 肝组织 HE 染色示:从第 12 周模型组小鼠肝组织见脂肪变, 并散布全肝,肝细胞肿胀,细胞质易见脂肪空泡,肝细胞有炎性改变;至第 16 周模型组小鼠肝脏脂肪变性较前严重,且出现大 量炎细胞的浸润。 结论:通过高脂饮食诱导的非 NAFLD 小鼠模型是理想的动物模型,方法简单,重复性强,可为 NAFLD 的机 制研究及药物治疗提供稳定的动物模型。 [ 关键词] 非酒精性脂肪肝;C57BL / 6 小鼠;高脂饮食;动物模型 [ 中图法分类号] R 575. 5 摇 摇 摇 [ 文献标志码] A摇 摇 摇 DOI:10. 13898 / j. cnki. issn. 1000鄄2200. 2018. 05. 003
肝细胞色素p4501A1在大鼠非酒精性脂肪肝形成中的作用
・论 著・肝细胞色素p4501A1在大鼠非酒精性脂肪肝形成中的作用史洪涛,陈东风,李 陶,熊仁平(第三军医大学大坪医院野战外科研究所消化内科,重庆400042) 摘 要:目的 研究肝细胞色素p4501A1在非酒精性脂肪肝大鼠形成中的作用。
方法 Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组和高脂饲料2、4、8和12周组(其中每组各8只);H E染色光镜观察肝脏组织病理改变;硫代巴比妥酸法测定肝脏组织丙二醛(MDA)的含量变化;免疫组织化学和Western blot方法研究高脂饲料诱导的大鼠脂肪肝形成中肝细胞色素p4501A1表达变化。
结果 高脂饲料组大鼠肝脏内MDA含量明显高于对照组,随着脂肪肝程度的加重,MDA含量逐渐增强,肝细胞色素p4501A1蛋白表达亦明显增强。
结论 非酒精性脂肪肝大鼠肝细胞色素p4501A1表达变化与脂肪肝引起的脂质过氧化损伤程度密切相关。
关键词:非酒精性脂肪肝;丙二醛;细胞色素p450中图分类号:R365.575文献标识码:A文章编号:167128348(2005)0420528202E ffect of hepatocyte cytochrome p4501A1in nonalcoholic steatosis ratsS H I Hong2tao,C H EN Dong2f eng,L I T ao,et al.(De partment of Gast roenterolog y,Daping Hos pital,the T hi rd Military Medical Universit y,Chongqing400042,China) Abstract:Objective To study the effect of hepatocyte cytochrome p4501A1expression in rat nonalcoholic steatosis model. Methods Fourty Wistar rats were randomly divided into control group and high2fat diet group,and high2fat diet group was divided into4subgroup s(2,4,8and12weeks).Each subgroup had8rats.The expression of hepatocyte cytochrome p4501A1antigen in rat nonalcoholic steatosis model induced by high fat diet was detected with immohistochemistry and Western blot.Meanwhile,lev2 els of malondialdehyde(MDA)in liver tissue were detected by using thio2barbituric acid.R esults Levels of MDA in liver tissue and the expression of hepatocyte cytochrome p4501A1antigen in rat nonalcoholic steatosis model induced by high fat diet were sig2 nificantly increased than those in normal.There were significant positive correlation between those and degree of nonalcoholic steatosis.Conclusion Nonalcoholic steatosis induced liver damage was associated with a generalized induction of hepatocyte cyto2 chrome p4501A1and lipid peroxidation.K ey w ords:nonalcoholic steatosis;MDA;cytochrome p450 细胞色素p4501A1(cytochrome p4501A1,C YP1A1)参与机体多种前致癌物和致突变剂的代谢过程,是反映化学致癌作用的有效指征[1],随着人们生活方式的改变,饮食结构的变化,非酒精性脂肪肝的发病率正逐年上升,严重的可导致肝硬化和肝癌的发生[2]。
类胡萝卜素在非酒精性脂肪性肝病中的作用研究进展
类胡萝卜素在非酒精性脂肪性肝病中的作用研究进展季梦遥;袁磊;董卫国【摘要】Non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) is a kind of disease that excludes alcohol and other factors damaging liver cells, leading to diffuse steatosis and necrosis in liver cells.In NAFLD, occurrence and development of liver steatosis and inflammation are included.And change of disease course experiences from the development of simple fatty liver to non-alcoholic steatohepatitis, at last to liver fibrosis or cirrhosis.The current study on the pathogenesis of NAFLD is not clear, a large number of studies have indicated that NAFLD is closely related to obesity, type 2 diabetes, metabolic syndrome and hyperlipidemia.The role of carotenoid in the occurrence and development of NAFLD is summarized in this paper.%非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是一种排除酒精和其他明确导致肝细胞损伤因素外,导致肝细胞弥漫性大泡性脂肪变性坏死为主要特征的疾病.NAFLD的发生、发展与肝脏组织中脂肪变性程度和炎症的情况密切相关,经历了从单纯性脂肪肝发展到非酒精性脂肪肝炎,再到肝纤维化或肝硬化的病程变化.目前有关NAFLD的发病机制尚不明确,大量研究表明,NAFLD与肥胖、2型糖尿病、代谢综合征及高脂血症密切相关.本文就类胡萝卜素在NAFLD的发生、发展中所起的作用作一概述.【期刊名称】《胃肠病学和肝病学杂志》【年(卷),期】2017(026)008【总页数】4页(P952-954,958)【关键词】非酒精性脂肪性肝病;类胡萝卜素;吸收;转运;代谢机制;功能【作者】季梦遥;袁磊;董卫国【作者单位】武汉大学人民医院消化内科,湖北武汉 430060;武汉大学人民医院消化内科,湖北武汉 430060;武汉大学人民医院消化内科,湖北武汉 430060【正文语种】中文【中图分类】R575非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)是一种排除酒精和其他明确导致肝细胞损伤因素外，导致肝细胞弥漫性大泡性脂肪变性坏死为主要特征的疾病。
非酒精性脂肪肝病患者血清脂联素水平及其在肝脏组织中的表达情况的研究
脂联 素在 Ｎ Ｆ Ｄ ＡＬ
【 关键词 】 非酒精 性脂肪肝病 ；脂联 素
【 中图分类号】Ｒ５５ 【 文献标识码】Ａ 【 ７ 文章编号】１０ ～ ５２【０２ １ ０７ — ３ ０７ ９７ ２１ ）０ — ２３ ０
Ｔ ｅ Ｓ ｕ ｙ ｏ ａ ｇ ｓｏ ｅ ｕ ｉ ｏ ｅ ｔ ｖ ｌ ｎ ｈ ｐ ｅ ｓｏ ｆＡｄ ｐ ｎ ｃｉ ｔ ｎ ｓｗｉｈ Ｎｏ ａｃ ｈ ｌ ａ ｔ ｈ ｔ ｄ ｆＣｈ ｎ ｅ ｆＳ ｒ ｍ Ａｄ ｐ ｎ ｅ ｉ Ｌｅ ｅ ｄ ｔ ｅＥｘ ｒ ｓ ｉｎ ｏ ｉ ｏ ｅ ｔ ｉ Ｐａ ｉ ｔ ｔ ｎ ｌｏ ｏ ｉ Ｆ ｔｙ ｎ ａ ｎ ｎ ｅ ｃ
ｄ ｅｓ （ Ａ Ｌ ）ｔｒ ｇ ｅ ｃ ｎ ｈｎｅ ｆ ｅ ｍ ａｉｏｅｔ ｖｌ ｎ ｅｅｐｅｓ ｎｏ ｉｏｅｔ Ａ Ｌ ． ｅ ｏ ｉ ａｅ Ｎ Ｆ Ｄ ｈｏ ｈｄｔ ｔ ｇｃａｇｓ ｒ ｄｐｎｃ ｎｌ ｅ ａ ｄ ｈ ｘｒｓｉ ｆ ｄｐｎｃｉ ｉ Ｎ Ｆ Ｄ Ｍ ｔ ￣ ｓ ｕ ｅｉ ｏｓ ｕ ｉ ｅ ｔ ｏ ａ ｎｎ ｈ ３ Ａ Ｌ ａｉ ｔ ａ ｄ３ ａｉ ｔ ｗｔ ｏ ｅ ｄｓａｅ ｅ ｃ ｄｄｉ ｅｓ ｄ ． ｏｙｍ ｓ ｉｄｘ （ ＭＩ ，ｆｓｎ ｌｏ ｌ— ０Ｎ Ｆ Ｄ ｐｔ ｎｓ ｎ ０ｐｔ ｎｓ ｉ ｔ ｒ ｉ ｓｓ ｒ ｉ ｌ ｅ ｔ ｔ ｙＢ ｄ ａｓ ｎｅ Ｂ ） ａｔ ｇｂｏｄｇｕ ｅ ｅ ｈ ｈ ｅ ｗ ｅｎ ｕ ｎｈ ｕ ｉ
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非酒精性脂肪性肝病患者肝脏脂肪的来源与去路
・综述・非酒精性脂肪性肝病患者肝脏脂肪的来源与去路邵幼林范建高【摘要】非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是由于高脂高糖的膳食打破了肝脏脂肪输入、生成、消耗与输出的平衡，导致脂质在肝脏堆积而引发的疾病。
肝脏脂肪主要来源于游离脂肪酸(FFA)酯化、肝脏脂质从头合成(DNL)和饮食摄入，其中以果糖为原料的DNL在NAFLD发病中至关重要，此外脂肪酸*氧化和极低密度脂蛋白(VLDL)输出也是NAFLD发病的重要影响因素。
该文综述了肝脏脂肪的来源和去路以及NAFLD的发病机制。
【关键词】非酒精性脂肪性肝病；脂肪酸酯化；脂质从头合成；脂肪酸*氧化；极低密度脂蛋白DOI：10.3969#.issn.1673534X.2019.05.003由于高脂高糖的膳食、多坐少动的生活方式的流行，目前全球范围内非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的发病率高于25%1。
以橄榄油、鱼、坚果、谷物、水果和蔬菜为主的地中海饮食与NAFLD 发病率呈负相关，而以软饮料、果糖、肉和饱和脂肪酸为主的西方饮食与NAFLD发病率呈正相关，提示饮食成分与NAFLD相关2。
肝脏生成的脂肪以极低密度脂蛋白-三酰甘油(VLDL-TG)的形式输出肝脏，如肝外脂肪池充足或肝脏输出通路受损，可导致肝脏脂肪累积。
高脂高糖的膳食打破了肝脏脂肪输入、生成、消耗与输出的平衡，从而促进NAFLD发生,但也有研究显示高脂肪摄入者的肝脏炎性反应发生风险相对较低，而高碳水化合物摄入者的风险较高3-本文就NAFLD患者肝脏脂肪的来源和去路作一综述。
I NAFLD患者肝脏脂肪的来源II脂肪和糖的摄入连续1周每日至少2次快餐饮食可导致健康人群的TG和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平升高4。
小鼠模型和人体研究均显示高脂饮食(HFD)可诱导NAFLD发生，甚至进展为非酒精性脂肪性肝炎基金项目:国家科技部精准诊疗课题(2017YFC0908903)&国家自然科学基金(81470840.81873536)作者单位:213001常州市第三人民医院肝病科(邵幼林& 200092上海交通大学医学院附属新华医院消化内科(范建高)通信作者:范建高，Email:fattyliver2004@ (NASH)，而限制HFD可改善NAFLD56*。
探讨非酒精性脂肪肝机制的实验研究
探讨非酒精性脂肪肝机制的实验研究摘要】目的：观察非酒精性脂肪肝大鼠PI3K/Akt-mTOR信号通路相关指标、IL-1β、NF-κBp65变化，探讨上述指标在非酒精性脂肪肝发病中的作用。
方法：30只SPF级♂SD大鼠，按体重随机分为正常组、模型组，采用改良高脂餐法制备脂肪肝模型。
应用光镜、透射电镜等技术观察大鼠肝脏组织形态学变化，应用Real-time PCR技术检测PI3K/Akt-mTOR信号通路相关指标、IL-1β、NF-κBp65 mRNA表达。
结果：光镜下见模型组大鼠肝细胞脂变，以中央静脉周围为主，胞浆内充满大量脂肪空泡，形成脂肪细胞，100%存在小叶内炎症，以单核细胞、淋巴细胞浸润为主；电镜下见模型组线粒体增大、肿胀、线粒体内嵴脱落，减少，基质变淡，部分细胞坏死，胞浆内充满脂滴。
模型组P85、P-Akt、mTOR、IL-1β、NF-κBp65 mRNA表达均呈高表达变化，与正常组比较，有统计学意义（P＜0.05）。
结论：炎症状态下PI3K/Akt-mTOR信号通路过度活化介导肠源性内毒素血症在非酒精性脂肪肝的发生、发展中占据重要地位，提示阻断PI3K/Akt-mTOR通路可能为非酒精性脂肪肝的防治提供新的思路。
【关键词】PI3K/Akt-mTOR信号通路；肠源性内毒素血症；非酒精性脂肪肝【中图分类号】R295【文献标识码】B【文章编号】1005-0515(2011)10-0407-02非酒精性脂肪肝（nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD）是指对肝脂类输入或合成和其输出或氧化之间平衡具有调控作用的局部或系统性因素的改变，导致甘油三酯在肝内堆积超过肝脏湿重5%，使肝脏对此后的损害变得易感，最终导致肝细胞炎症和纤维化的一种疾病［1］。
1980 Ludwig首次提出NAFLD病名，迄今30余年［2］。
流行病学调查发现NAFLD现己成为仅次于慢性病毒性肝炎、酒精性肝病的重要肝硬化前期病变之一［3］，目前该病确切机制尚未阐明，医学界比较公认是“二次打击学说”，即胰岛素抵抗（insulin resistance,IR）所致甘油三酯堆积看作是对肝脏第一次打击，而在肝脏脂肪沉积基础上所发生的氧应激和脂质过氧化则形成二次打击。
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类肝素酶论文非酒精性脂肪肝论文：类肝素酶在非酒精性脂肪肝模型大鼠肝脏组织中的表达及意义
【摘要】目的: 研究类肝素酶在非酒精脂肪肝大鼠模型肝脏组织中的表达，以探讨类肝素酶在非酒精性脂肪肝发生中的作用，为脂肪肝的临床监测与治疗提供新思路。
方法: 建立正常大鼠模型（30只），非酒精性脂肪肝模型大鼠（30只），采用免疫组化sabc法测定两组模型肝脏组织中类肝素酶的表达。
实验数据的统计方法：计量资料采用单因素方差分析和t检验；计数资料采用χ2检验。
结果: 在非酒精性脂肪肝大鼠模型肝脏组织中类肝素酶的阳性率高于正常模
型肝脏组织，差异有统计学意义（p<0.01）。
结论: 非酒精性脂肪肝模型大鼠肝脏组织中类肝素酶的表达增加，提示类肝素酶与非酒精性脂肪肝的发生有关。
【关键词】类肝素酶；非酒精性脂肪肝
非酒精性脂肪肝病（nonalcoholic fatty liver disease,nafld）是一种无过量饮酒史、以肝实质细胞脂肪变性和脂肪贮积为特征的临床病理综合征。
随着人们生活方式及饮食习惯的改变，其发病率正在逐年升高，在世界范围内成为慢性肝病的最常见病因之一。
nafld 的发病机制还不十分清楚, 目前被广泛接受的理论是day 和james在1998 年提出的二次打击学说。
nafld各种病因引发脂质代谢异常，
ffa和甘油三酯在肝内沉积，通过线粒体和过氧化物酶体β氧化及微粒体ω氧化等途径触发氧应激反应，脂质过氧化反应通过上述机制损伤线粒体，激发机体释放炎症介质和细胞因子，导致肝细胞发生变性、凋亡、坏死和纤维化的发生。
因此，炎症介质和细胞因子的产生在非酒精性肝病的发生、发展中居于重要地位。
研究表明, 在nafld 的发生和发展过程中有大量细胞因子产生并参与了疾病的演变过程,目前的研究认为类肝素酶在nafld的发病过程中，由脂代谢异常引起机体释放大量的活性氧和氧自由基，脂质过氧化的终产物和蛋白质结合成复合物，激活机体产生免疫反应而参与肝损害，诱导细胞死亡、炎症和纤维化[9]。
免疫系统的大量细胞和体液成分都贮存在血管内，在免疫反应的过程中，它们要通过血管内皮进入炎性反应部位的细胞外基质、（extracellular matrix，ecm）。
目前研究更倾向于强调ecm 成分的改变对免疫反应的影响。
本实验着重了解肝素酶是否参与非酒精性脂肪肝的发生发展。
1 材料与方法
1.1 标本来源:实验动物：清洁级雄性wistar大鼠60只，体重180－220g，由山西医科大学实验动物中心提供。
1.2 实验方法:
1.2.1 实验分组造模：wistar雄性大鼠60只，随机分
为两组，正常组30只,模型组30只。
对照组：饲以普通饲料和自来水；模型组：采用高脂饮食致大鼠非酒精性脂肪性肝：高脂饮食配方：普通饲料84％、猪油14％、胆固醇2％；分别在第8、10周末每组各取6只隔夜禁食处死大鼠采集标本，留取肝组织待检,12周取18只隔夜禁食处死大鼠采集标本，留取肝组织待检(预试验表明类肝素酶和tgf-β1在8,10周肝组织中表达不明显)。
1.2．2 肝脏组织he染色及脂肪肝判断标准：取部分肝右叶放于10％中性福尔马林液中固定，石蜡包埋，5μm切片，并he染色后在显微镜下观察。
1.3 标本处理:所有标本连续切片5张，厚为4μm，置于经多聚赖氨酸（poly-l-lysin）处理过的玻片上，58℃烤片2h后4℃保存。
再各取石蜡标本10μm 3张，置于1.0ml 无菌eppendorf管中，4℃保存备用。
1.4 类肝素酶的免疫组化检测:采用免疫组织化学方法,将组织切片与兔抗鼠类肝素酶抗体共孵化,4 ℃过夜,生物素标记的羊抗兔免疫球蛋白g( igg) 处理后,滴加sabc ,dab 显色,苏木素轻度复染,脱水、透明、封片。
类肝素酶表达免疫组化阳性信号为棕黄色,结果判断标准:在放大400 倍下,每张切片随机选取10 个视野,通过灰度计算阳性面积以及
阳性面积占总面积的百分比（即阳性率）。
1.5 结果判断:细胞浆内含有棕黄色颗粒者为类肝素酶和tgf-β1阳性表达。
在放大400 倍下,每张切片随机选取10 个视野,通过灰度计算阳性面积以及阳性面积占总面积
的百分比（即阳性率）。
6 统计方法
采用spss13.0系统软件包，计量资料结果以x±s表示，采用t检验和单因素方差分析；计数资料采用χ2检验。
以p<0.05为显著性差异指标。
对所采集数据用excell2003软件手工辅助进行制图。
2 结果
两组模型的阳性表达
2.1 非酒精性脂肪肝模型大鼠(12周)的类肝素酶的阳
性表达高于正常模型大鼠的类肝素酶的阳性表达，两组比较有统计学意义( p = 0.0052, p < 0.01)。
2.2 类肝素酶在非酒精性脂肪肝模型大鼠肝脏组织中
的表达:类肝素酶阳性染色主要定位于细胞浆，呈棕黄色颗粒，灶状、巢状或散状分布。
3 讨论
3.1 非酒精性脂肪性肝病(nafld):非酒精性脂肪性肝
病(nafld)是指临床病理上从仅出现单纯性脂肪肝、到发生非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic
steatohepatitis,nash)、和进一步演变为肝纤维化、肝硬
化的一种疾病。
范建高等用普通饲料加2％胆固醇、10％猪油给大鼠食用24周后，其体重、肝指数显著高于正常对照组，8周进展为单纯性脂肪肝，12－24周表现为脂肪性肝炎，即在单纯性脂肪肝的基础上出现小叶内和汇管区的炎症，程度进行性加重，24周所有造模大鼠均出现窦周纤维化。
本课题主要对非酒精性单纯性脂肪肝和非酒精性脂肪性肝炎两
个阶段进行研究。
3.2 类肝素酶与非酒精性脂肪肝的关系:类肝素酶在非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,nash)的发生发展中的作用：目前的研究认为在nash的发病过程中，有脂代谢异常引起机体释放大量的活性氧和氧自由基，脂质过氧化的终产物和蛋白质结合成复合物，激活机体产生免疫反应而参与肝损害，诱导细胞死亡，炎症和纤维化[9]。
免疫系统的大量细胞和体液成分都贮存在血管内，在免疫反应的过程中，它们要通过血管内皮进入炎性反应部位ecm。
目前研究更倾向于强调ecm成分的改变对免疫反应的影响。
类肝素酶通过降解ecm中的成份，尤其是ⅳ型胶原为炎症介质的迁移开拓道路，同时类肝素酶在水解胶原的同时释放一部分炎症介质，如：mmps等，加剧炎症反应的发生。
目前的研究认为在nash的发病过程中，有脂代谢异常引起机体释放大量的活性氧和氧自由基，脂质过氧化的终产物和蛋白质
结合成复合物，激活机体产生免疫反应而参与肝损害，诱导细胞死亡、炎症和纤维化[9]。
免疫系统的大量细胞和体液成分都贮存在血管内，在免疫反应的过程中，它们要通过血管内皮进入炎性反应部位的细胞外基质（extracellular matrix，ecm）。
目前研究更倾向于强调ecm成分的改变对免疫反应的影响。
类肝素酶通过降解ecm中的成份，尤其是ⅳ型胶原为炎症介质的迁移开拓道路，同时类肝素酶在水解胶原的同时释放一部分炎症介质，如：mmps等，加剧炎症反应的发生。
本实验的研究结果显示:类肝素酶在非酒精性脂肪肝病大鼠模型肝脏组织中的表达高于正常组,提示非酒精性脂肪肝病的发生与类肝素酶的异常表达有关。
参考文献
[1] 钟岚，范建高.非酒精性脂肪肝动物模型.国外医学消化系统疾病分册，1999，19（3）175－178
[2] 孙大裕.脂肪肝动物模的研究进展.中华消化杂志2002，22（5）：305－306
[3] 钟岚，范建高，王国良，等，肥胖、高脂血症性脂肪性肝炎模型的建立.实验动物科学与管理.2000，17(2)：16-20
[4] 陈世清,刘杞,等.脂肪肝胰岛素抵抗大鼠模型的建立.中华肝脏病杂志.2005,13(2):105-108
[5] marchesini g,brizi m,bianchi g,et
al.nonalcoholic fatty liver disease:a feature of the metabolic syndrome[j].diabetes,2001,50:1844-1850。