病理切片染色
病理片HE染色步骤
病理片HE染色步骤：烤片80度半小时(1)二甲苯（Ⅰ）5min(2)二甲苯（Ⅱ）5 min(3)二甲苯（III）5min(4)100%乙醇（Ⅰ）2min(5)90%乙醇（Ⅱ） 2 min(6)80%乙醇（III）2min(7)70%乙醇（IV）2 min(8) 流水冲洗5min(9) 苏木精液染色5 min(10) 流水稍洗去苏木精液1-3 s(11) 1%盐酸乙醇1-3 s(12)流水过洗至返蓝(13) 0.5%伊红液染色1-3 min(14) 蒸馏水稍洗1-2 s(15) 80%乙醇稍洗1-2 s(16) 95%乙醇（Ⅰ）2-3 s(17) 100%乙醇（Ⅱ）3-5 s(18) 二甲苯（Ⅰ）2 min(19) 二甲苯（Ⅱ）2 min(20) 二甲苯（Ⅲ）2 min(21) 中性树胶封固* 冷冻切片HE染色步骤：（1）冰冻切片固定10～30 s（2）水洗1～2 s（3）苏木精液染色（60℃）30～60 s（4）流水洗去苏木精液5～10 s（5）1%盐酸乙醇1～3 s（6）稍水洗1～2 s（7）促蓝液返蓝（8）流水冲洗15～30 s（9）0.5%曙红液染色30～60 s（10）蒸馏水洗1～2 s（11）80%乙醇1～2 s（12）95%乙醇1～2 s（13）无水乙醇1～2 s（14）石炭酸二甲苯2～3 s（15）二甲苯（Ⅰ）2～3 s（16）二甲苯（Ⅱ）2～3 s（17）中性树胶封固。
H-E染色评定标准：（1）切片完整，厚度4-6微米，厚薄均匀，无皱褶无刀痕；（2）染色核浆分明，红蓝适度，透明洁净，封裱美观。
医院病理科病理切片操作规范
医院病理科病理切片操作规范病理切片是病理科诊断疾病的重要步骤之一，因此，对于病理切片操作应该遵循以下规范：2.标本固定：对于切片需要的组织标本，需要及时进行固定以防止组织脱落和变形。
通常使用10%的中性缓冲福尔马林进行固定，固定时间应根据样本大小和类型进行调整，以确保组织固定充分。
3.标本处理：接受标本后，需要进行适当的标本处理。
对于组织标本，应进行组织去水、蜡浸渍等处理，确保标本组织的切片质量。
对于细胞标本，应进行细胞离解和离心等处理。
4.病理切片制作：对于组织标本，制作病理切片通常采用甩片法或旋片法。
在制作切片之前，需要使用切片机对刀片进行清洗和消毒，并根据需要调整切片机的切片厚度。
确保制作的病理切片的厚度均匀一致。
5.切片染色：病理切片制作完成后，需要进行染色。
常用的染色方法包括苏木精-伊红染色、血液学染色、免疫组化染色等。
染色时，需要严格按照染色试剂的使用说明进行操作，确保染色的质量和结果的准确性。
6.切片质量控制：在病理切片操作过程中，需要进行质量控制以确保切片的质量。
包括检查切片的厚度、颜色、染色效果等。
对于染色不好或有问题的切片，需要重新制作。
7.切片保存和归档：制作完的病理切片需要进行保存和归档。
切片应放置在干燥、阴凉而通风良好的地方，避免切片暴露在阳光下，防止切片变形和褪色。
8.切片质量评估：对于制作的病理切片进行质量评估，包括切片的清晰度、染色的均匀性、细胞结构的完整性等。
评估结果可以作为诊断和治疗的参考。
总结：病理切片操作规范是病理科工作中非常重要的一环，合理规范的操作可以保证病理切片的质量，提高疾病的诊断准确性。
因此，医院病理科应该建立标本接受和登记制度，对标本进行适当处理，制作和染色病理切片，对切片进行评估和保存。
同时，医院病理科还应定期进行切片质量控制，提高切片的质量。
病理制片技1
病理制片技术——常用特殊染色一、六胺银染色1．第一步准备工作：配制六胺银染液，将10％硝酸银2．5ml倒入干净的染色缸内，加入2％硼砂5ml，液体呈乳白色，再加入3％乌洛托品40ml，染液逐渐呈透明状。
2．第二步染色过程：事先把温箱调至60℃备用，切片经脱蜡至水，用1％过碘酸氧化10 min，水洗，然后切片放人六胺银染液放置60℃温箱1 h，染真菌时间要相对短一些，一般情况下肉眼看到染液变色，切片呈棕色时从温箱取出染色缸，倒掉染液，自来水冲洗1min，用0．25％氯化金调色1 min，水洗后，用3％硫代硫酸钠染5min,水洗，用苏木精染液浅染，水洗、分化、冲水返蓝，伊红染10 s，最后经脱水、透明、封固。
3．图示结果：基底膜与毛细血管间质性物质、真菌呈棕黑色，核呈蓝色。
4．注葸事项(1)掌握染色温度和时间，如60℃染1 h，80℃染30～40 min。
(2)真菌类染色时间相对要短，染色时间过长，切片染色过深，可用分色剂处理。
二、黏液卡红染色1．第一步准备工作：配制黏卡染液，将称好的胭脂1 g、氢氧化铝1 g倒入瓶内，加入5 0％L醇100 rnl混合摇匀，再加入氯化铝0．5g，水浴加温逐渐煮沸并搅动液体，使其充分溶解(注意染液容易外溅)，数分钟后，染液由红色变成透明深紫红色，冷却后将液体倒入量筒，再加入50％乙醇至原量，过滤，放人冰箱备用。
2．第二步染色方法：染液使用时原液与蒸馏水比例为1：4稀释.切片厚5 um，脱蜡至水，经苏木精染色2 min、水洗、分化、返蓝后进人黏卡液染色2 h以上，染液可以重复使用多次，但要适当延长染色时间．切片水洗后，脱水、透明、封固。
3．图示结果：黏液为红色，胞核为蓝色．4．注意事项(1)染液使用时比例为1份黏卡原液，4份蒸馏水。
(2)用酶消化对照染色特异性很大，消化时间为20 min。
(3)配制黏卡染液时要防止液体溅出。
三、石碳酸品红染色1．第一步准备工作(1)配制盐基性品红饱和液：盐基性品红溶于乙醇内。
病理切片染色方法
病理切片染色方法
病理切片染色是一种常用的病理学检查方法，可以帮助病理医师观察和诊断疾病。
常用的病理切片染色方法有以下几种：
1. 高尔基染色法：可以染色细胞核为蓝色，细胞质为粉红色，便于观察细胞形态和排列情况。
2. 血液涂片染色：常用的涂片染色方法有吉姆萨染色法、健康那染色法等，可以帮助观察血细胞的类型和数量。
3. 组织切片染色：常用的组织切片染色方法有血红素-伊宁染色法、苏木精-伊宁染色法等，可以染色细胞核和细胞质，以及观察组织结构和病理变化。
4. 免疫组化染色：通过特定抗体与组织中的特定抗原结合，来观察和诊断疾病。
常用的免疫组化染色方法有免疫组织化学染色法、免疫荧光染色法等。
5. 特殊染色：用于染色特定的结构或化合物，例如透明质酸染色、银染色等。
以上是一些常见的病理切片染色方法，根据具体需要和疾病类型，病理医师会选择不同的染色方法来进行诊断和研究。
病理组织切片染色中的常见问题及解决方法
条例 能够 浇实 到位 ，随时检 查监督 。规定凡 是进入 Ｎ Ｉ Ｃ Ｕ的人 员一律
要 先洗手 、更衣 、换鞋 、戴 口罩和 帽子 】 。尤其强调对 手的清洗 和消 毒 ，在每 个 温箱 旁边 都要 放置 一瓶洗 手 消毒剂 ，医生 和护士 在对 患 儿进 行 常规检 查 之前 和检 查之 后一 定要记 得洗 手 消毒 。对每 个 患儿 的 用 品做 到 一婴 一用 一消 毒 ；保 持 空气 清新 ，无 致病 菌生 长 。有 研 究 表 明手 的清洁 和物 体表 面的 清洁 在控 制 医院感 染 中起到 了重要 的 作 用 ，在 常规 的手 清洁和 环境 清 洁的基 础上 适量 使用 消毒 剂 消毒杀 菌 能达 到较 好 的控制 医 院感染 的作 用 。医 院感染 科要 求对 整体 医 院 每 月进 行至 少一 次 以上 的环境 卫生 监测 ，其 中包 括空 气 、物体表 面
程 序 、可 能 出现 的问题 及 相应 的解 决方 法进行 了归 纳总结 ，并 对一 些 实验 步骤 与操 作 方 法进行 了改进 ，使 组织脱 水彻 底 、 固定完 全、 切 片
较 薄、 染 色效果较 好 ，提 高切 片的质 量 水平 。 【 关键 词 】病 理 组织 切 片；染 色 ；常 见问题 ；解 决方 法
中图分类号：Ｒ ３ ６ １ ． ２
文献标识码 ：Ａ
文章编号 ：１ ６ ７ １ － ８ １ ９ ４（ ２ ０ １ ３ ）２ ８ － ０ ５ ７ ８ － ０ ２
应该保 存密封容器 内 ，并且在容 器外贴上 标签 ，及时注 明材料来源 、 固定液 以及 日期等主要信 息。材料 固定 之后 ，除 了乙醇之外 ，其他 固 定液必须冲洗 干净 ，否则残 留在组 织材 料内的 固定 液可能会产生 结晶
病理制片技术――常用特殊染色
病理制片技术――常用特殊染色1．第一步准备工作：配制六胺银染液，将10％硝酸银2．5ml倒入干净的染色缸内，加入2％硼砂5ml，液体呈乳白色，再加入3％乌洛托品40ml，染液逐渐呈透明状。
2．第二步染色过程：事先把温箱调至60℃备用，切片经脱蜡至水，用1％过碘酸氧化10 min，水洗，然后切片放人六胺银染液放置60℃温箱1 h，染真菌时间要相对短一些，一般情况下肉眼看到染液变色，切片呈棕色时从温箱取出染色缸，倒掉染液，自来水冲洗1min，用0．25％氯化金调色1 min，水洗后，用3％硫代硫酸钠染5 min,水洗，用苏木精染液浅染，水洗、分化、冲水返蓝，伊红染10 s，最后经脱水、透明、封固。
3．图示结果：基底膜与毛细血管间质性物质、真菌呈棕黑色，核呈蓝色。
4．注葸事项(1)掌握染色温度和时间，如60℃染1 h，80℃染30～40 min。
(2)真菌类染色时间相对要短，染色时间过长，切片染色过深，可用分色剂处理。
二、黏液卡红染色1．第一步准备工作：配制黏卡染液，将称好的胭脂1 g、氢氧化铝1 g倒入瓶内，加入50％L醇100 rnl混合摇匀，再加入氯化铝0．5g，水浴加温逐渐煮沸并搅动液体，使其充分溶解(注意染液容易外溅)，数分钟后，染液由红色变成透明深紫红色，冷却后将液体倒入量筒，再加入50％乙醇至原量，过滤，放人冰箱备用。
2．第二步染色方法：染液使用时原液与蒸馏水比例为1：4稀释.切片厚5 um，脱蜡至水，经苏木精染色2 min、水洗、分化、返蓝后进人黏卡液染色2 h以上，染液可以重复使用多次，但要适当延长染色时间．切片水洗后，脱水、透明、封固。
3．图示结果：黏液为红色，胞核为蓝色．4．注意事项(1)染液使用时比例为1份黏卡原液，4份蒸馏水。
(2)用酶消化对照染色特异性很大，消化时间为20 min。
(3)配制黏卡染液时要防止液体溅出。
三、石碳酸品红染色1．第一步准备工作(1)配制盐基性品红饱和液：盐基性品红溶于乙醇内。
病理切片的流程
病理切片的流程病理切片是一种常用的医学检查方法，它通过将组织样本切割成极薄的切片，然后染色和显微镜观察，以帮助医生诊断疾病。
下面将详细描述病理切片的流程步骤和流程。
1. 样本获取首先需要从患者身上获取组织样本。
常见的样本来源包括手术切除物、活检、穿刺等。
手术切除物通常是大块的组织，活检则是小块或细针抽吸得到的组织。
2. 样本固定获取到样本后，需要立即进行固定处理，以防止组织腐败和变形。
最常用的固定剂是10%中性缓冲福尔马林（neutral buffered formalin），它可以使组织保持形态和结构不变，并能够杀灭病原体。
将样本完全浸泡在足够量的福尔马林溶液中，并确保其充分渗透进入组织内部。
通常需要固定24小时以上，以确保固定效果达到最佳。
3. 组织处理在固定完成后，需要对样本进行一系列的组织处理步骤，以使其适合切片。
3.1 去水脱脂福尔马林会使组织中的水分增加，因此需要将其去除。
首先将样本从福尔马林中取出，然后放入含有逐渐浓度乙醇的溶液中进行脱水。
常用的脱水级别是70%、80%、95%和100%乙醇。
每个浓度的乙醇溶液中浸泡时间一般为30分钟至1小时。
脱水过程中要轻轻摇晃容器，以确保组织均匀浸泡。
3.2 渗透剂处理在去水脱脂之后，需要将样本置于渗透剂中。
渗透剂通常是芳香烃类物质（如苯），可以与石蜡相互溶解。
渗透剂的作用是将石蜡渗入组织内部，以增加刚性和硬度。
将样本转移到含有石蜡和渗透剂混合物的容器中，并在恒温槽中加热慢慢进行渗透。
通常需要至少3个小时，以确保组织充分渗透。
3.3 石蜡浸渍渗透剂处理完成后，需要将样本浸泡在纯石蜡中，使其充分浸润。
将样本转移到含有熔融石蜡的容器中，并在恒温槽中加热慢慢进行浸渍。
通常需要至少2个小时，以确保组织完全浸润。
此外，还可以使用自动化的石蜡浸渍机来加快浸润过程。
4. 组织包埋组织处理完成后，需要将其包埋到切片所需的形状和大小。
包埋是将组织样本固定在切片机上的过程。
病理切片的结果分析方法
病理切片的结果分析方法病理切片是一种常见的病理学研究方法，它通过对组织标本进行切片、染色和显微观察，进而取得组织结构和细胞形态的信息，从而为疾病的诊断和治疗提供重要依据。
获得病理切片后，需要进行结果分析，从中提取有关疾病性质、进展程度和治疗预后的关键信息。
本文将介绍病理切片结果分析的方法。
1.形态学观察：病理切片结果的首要分析方法就是观察组织和细胞的形态学变化。
包括检查细胞核的大小、形状，染色质的结构，胞浆的数量和质量等。
通过这些观察可以得出疾病的基本性质，如是否恶性，以及病变的类型和分级等。
2.免疫组化染色：免疫组化染色是利用抗体与特定抗原反应的方法，通过染色来检测组织标本中特定蛋白或其他分子的表达情况。
通过免疫组化染色可以确定疾病的种类、鉴定肿瘤的分子亚型，以及预测治疗效果和预后等方面的信息。
3.分子遗传学分析：分子遗传学分析是通过检测DNA、RNA或蛋白质的分子水平上的变异以及基因表达水平，来揭示疾病的发生机制和预后。
常见的分子遗传学分析方法包括PCR、FISH、CISH、基因芯片等。
通过分子遗传学分析可以筛查、确定、预测疾病相关的分子异常，如基因突变、基因拷贝数变化、基因融合等，从而了解疾病分子特征和个体化治疗的可能性。
4.影像学观察：在一些疾病，如肺癌、乳腺癌等，病理切片的观察往往与影像学检查相结合，以获得更全面的疾病信息。
通过对病理切片与影像学结果的对照分析，可以提高疾病的诊断准确性和防治的策略。
5.临床病史分析：在病理切片的结果分析中，临床病史是不可或缺的重要内容。
了解患者的临床病史，如病程、症状、体征等，可以帮助解释病理切片的变化，并提供关于疾病的可能性、预后和治疗策略的信息。
6.疾病分类和分级：根据病理切片的结果，可以对疾病进行分类和分级，如肿瘤的TNM分期、细胞、组织和器官的分类。
疾病的分类和分级对于发病机制的深入理解和治疗决策具有重要意义。
7.数据统计和分析：在病理切片的结果分析中，数据统计和分析是必不可少的。
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病理切片染色★常规病理送检注意事项★1. 手术中切取的组织标本，应立即投入固定液中固定(手术室应备有标本瓶和固定液)。
一般以10％中性福马林为固定液。
固定液的量不得少于标本体积的5～10倍。
标本瓶口宜大，便于标本固定后取出。
标本与瓶壁、瓶底接触影响固定者，以脱脂棉衬垫；浮于液面者，以脱脂棉覆盖。
如为传染性标本，应注意勿污染容器外面。
2. 标本容器上，应贴有患者姓名或送检单联号的标签。
如同一患者同时取有数种组织，或同一组织由不同部位取出，应分装不同容器，并分别注明。
不同患者的标本，不得放在同一容器内。
3．采取标本时，注意勿用有齿镊或钳夹取，勿挤压，以免发生人为的变形，影响诊断。
标本送检前勿剖开，应保持原形全部送检。
必须剖开时，最好邀请病理医师到场，否则应在病理检查申请单内详细描写标本剖开前后情况。
送检的组织不可太小，以免影响诊断。
4．标本如为整个器官或其大部，或体积较大，可不固定，但应尽早送病理科处理(外地或远途标本，可参照第三节的方法处理后送检)。
5．各种体液、穿刺液细胞学检查标本，应立即送检。
若不能立即送检，应随即离心沉淀，将沉渣做成均匀的涂片2～3张，及时放入乙醚和95％乙醇等量混合液或95％乙醇中固定，然后连同固定液，或在涂片表面涂以甘油后送检。
阴道排出物、鼻咽或其他分泌物、穿刺物涂片，应于涂片制成后即放入上述固定液中固定，然后送检。
6. 送检标本时，应逐项详细填写病理检查申请单，字迹要清楚。
临床科有特殊要求时，应在申请单上注明或事先联系。
★组织的脱水透明和浸蜡★(一)工作中注意事项1．标本未经充分固定，不得进入脱水处理的程序。
2. 在处理全过程中，每l标本均应附有编号。
随时注意防止标本间相互混杂。
细小标本应用拭镜纸包裹进行脱水，以免遗失。
3．标本多的单位，可根据标本的性质、大小、分类分批进行脱水，以便按组织的特点安排时间，保证质量，常规标本脱水和透明均应在室温进行。
4．一般以乙醇为组织脱水剂，自低浓度向高浓度渐进并多次更换，组织所含水分才能充分去除，透明、浸蜡才能顺利进行，对保证切片质量甚为重要。
5．组织块在二甲苯中的时间不宜过长，使组织透明即可。
若较长时间后透明度仍不好，应检查原因，如因脱水不充分，应重行脱水。
6．经常注意所用试剂质量减退情况，根据需要及时更换新液，更换时乙醇可降级重复使用。
试剂应经常过滤，以保持清洁，避免混杂。
7．常规制片所用石蜡的熔点，以56℃左右为宜。
在温热的地区或夏季，应用熔点较高的石蜡，在寒冷地区或冬季，则以熔点较低的石蜡为好。
8．硬脂酸-蜡可作为乙醇和石蜡间的中介剂，且可使组织硬度适中便于切片。
9．乙醇、二甲苯等为易燃品，使用过程中2m内不得有明火。
加温脱水及浸蜡全过程，应用隔水温箱或无明火设备，提前一级加温，不得用干烤箱。
熔蜡用水浴，并有专人守护。
贮存品保管于无火源房间内明亮易取处。
实验室应通风良好，备有灭火器及砂箱。
丙酮、乙醚、氯仿、氯乙烷、火棉胶等易燃、易爆物品，均应按上述原则处理。
(二)一般步骤和时间参见表31-2-l。
表31-2-1 不同厚度组织块的脱水、透明与浸蜡的步骤与时间处理步骤不同厚度组织块的处理时间(min)2mm以下2～4mm4～5mm80％乙醇45～60 60～120 120～24095％乙醇I 45～60 60～120 120～24095％乙醇Ⅱ45～60 60～120 120～240无水乙醇I 45～60 60～t20 120～240无水乙醇Ⅱ45～6060～120120～240二甲苯I*或15～303060硬脂酸-蜡(3：2) 120180240二甲苯Ⅱ或15～303060硬脂酸-蜡(2：3) 6090120蜡I**606060～120蜡Ⅱ60120120～240* 使用硬脂酸—蜡时，不需二甲苯透明。
** 有条件单位可负压浸蜡，以提高浸蜡效果，缩短时间。
用时应装压力表和安全瓶。
(三)自动组织处理机的使用和维护1．自动组织处理机产品有多种，其结构和性能各异，使用前应熟悉机器说明书中的使用说明及注意事项，按照说明书中的使用方法和程序操作。
2．组织处理的程序和时间参见表31-2-2。
表31-2-2 组织处理机处理活检组织的程序和时间(min)处理程序处理时间(min)80％乙醇95％乙醇I、Ⅱ、Ⅲ无水乙醇I、Ⅱ、Ⅲ二甲苯I、Ⅱ*蜡I／或硬脂酸-蜡(3：2)蜡Ⅱ／或硬脂酸-蜡(2：3)蜡Ⅲ／蜡60各90各60各6090／18090／12060／60* 用硬脂酸－蜡时不用二甲苯。
3．根据实际工作条件，设计脱水机运行程序、时间和温度等，机器调好后，不要随意变动。
使用过程中，要经常注意运行情况，温度、时间控制是否准确。
4．机器应放置干燥、通风、平稳处，经常做好保洁，按说明书要求做好必要的维护。
出现有故障时应请维修人员修理。
★石蜡切片HE染色法★(一)染色注意事项1．切片脱蜡应彻底，室温较低时更应注意，以切片在二甲苯中呈透明状，或移入乙醇后，片上无白色斑点为佳。
2．特殊染色、组织化学反应、免疫组化染色，按各方法的要求进行组织固定处理，以保证效果。
做酶反应的组织固定更应严格要求。
凡用含升汞固定液固定的组织，于切片脱蜡后，应经脱汞处理，方可染色。
其法为：切片经水洗2min，浸于0.5％碘酊溶液中10min，水洗，0.5％硫代硫酸钠水溶液5min，用水彻底冲洗，经蒸馏水洗后染色。
在脱汞过程中，慎防切片脱落。
3．各种染料试剂一般选用化学纯。
各种染料着色效果常因生产厂和批号不同而异，启用任何新品，均应先试染。
配成的染液、试液应盛于有色试剂瓶内，瓶签应写明名称、含量、配制年月日，顺序保存于避光橱中，必要者放冰箱内。
凡须临用时配制者，配量应适当。
4．染色各步骤所需的时间，常受温度、切片厚度等影响，可根据镜下观察所见酌情予以调整。
但对组织化学反应(尤其是酶)，其时间、温度等因素务必恒定，且应做对照片。
染液着色力显著减退时应更新，染色反应不正常，应检查染液及试剂是否失效或误用。
5．染色过程中，勿使切片干燥，以免影响细胞形态。
染色完毕后用显微镜检查染色结果，是否符合要求，并核对标本种类、号码、数量是否无误。
(二)染色步骤1．二甲苯去蜡(经2次)5～10min。
2．无水乙醇、95％乙醇、80％乙醇、70％乙醇各1～2min，然后蒸馏水洗3min(换数次)。
3．苏木紫液染色约5rain(视染液种类和着色情况增减)。
4．水洗；l％酸性乙醇(盐酸1mI，70％乙醇99m1)，或1％盐酸分化。
显微镜下控制。
5．流水浸洗至少15min，至细胞核呈蓝色。
也可短时水洗后，浸于40℃温水使核变蓝。
显微镜观察，若核染色过深或不足，应再分化或重染。
6．伊红液染1～2min后，95％乙醇2次，无水乙醇2次，每次约1～2min。
7．苯酚二甲苯(1：3)5min。
8．二甲苯2次，每次3～5min。
9．用中性树胶或DPX以盖片封片，贴标签。
大概过程是先取材，脱水，浸蜡，包埋，切片，脱蜡，染色，脱水，透明，封片几个过程。
取材要根据你的实验目的来决定，脱水浸蜡有专门的仪器，包埋是另外的仪器，然后上切片机切片，如果要按区域切片，建议分成几个蜡块包埋。
切片好了要烘片，趁热放进二甲苯、梯度酒精脱蜡直至蒸馏水，然后将脱蜡好了的切片染苏木精，根据苏木精效果，一般染色2-3分钟即可，流水冲洗去除多余苏木精，盐酸酒精酸化15秒，弱碱水蓝化，然后染伊红，再梯度酒精脱水，二甲苯透明，树胶封片。
脱蜡和脱水的不能公用，需要染色缸23个左右。
染色缸用铜制的比较好。
“灌流时组织缩水变形”你是指动物心脏灌注吗？那你注意一下灌洗用的PBS的渗透压和PH值对不对。
实验五病理组织切片染色实验五病理组织切片染色一、实验目的任何切片，不经过染色，在显微镜下只能看到细胞和组织的轮廓，远不能满足观察和诊断的目的。
染色是将染料配制成溶液，将组织切片浸入染色剂内，经过一定时间，使组织和细胞的成分被染上不同的颜色，产生不同的折射率，便于在光学显微镜下进行观察。
因此，染色在组织形态学、病理学诊断、研究工作中，具有非常重要的实用价值。
二、实验原理染色是染色剂和组织细胞的结合过程。
使用不同的染色方法，其原理有差别。
苏木素伊红染色法为病理组织切片最常用的染色方法。
由于它对组织细胞的各种成分都可染出，便于对组织成分的全面观察，且以任何固定液固定的材料，各种切片法都可适用。
用H．E染色的标本，不易褪色可以长期保存。
在常规的苏木素伊红染色中，苏木素经过氧化变成酸性染料苏木红，而苏木红和铝结合形成一种带正电荷的蓝色色精，带正电荷的蓝色色精和带负电荷的脱氧核糖核酸酸根，通过正、负电荷的极性吸着来完成结合，使细胞核染成蓝紫色。
伊红是一种酸性红色胞浆性染料，它们的染色可能是通过渗透作用或弥散作用而完成的，使细胞浆染成红色。
三、主要仪器及试材HE染色全套试剂，染色缸（卧式），摊片盘，搪瓷缸，盖玻片，中性树胶，牙签，显微镜。
四、实验方法与步骤常规石蜡切片H．E染色程序(一)脱蜡至水1．二甲苯Ⅰ5-15分钟2．二甲苯Ⅱ5-15分钟3．无水乙醇3分钟4．95％酒精3分钟5．80％酒精3分钟6．70％酒精3分钟7．自来水洗(二)染色1．Harris苏木素液5-7分钟2．自来水洗5分钟3．1％盐酸溶液分化30秒4．自来水洗5分钟5．1％氨水返蓝10秒6．自来水洗15-20分钟7．95％酒精3分钟8．1％伊红酒精溶液1-2分钟(三)脱水、透明和封固l．95％酒精2分钟2．无水酒精Ⅰ2分钟3．无水酒精Ⅱ2分钟4．二甲苯Ⅰ5分钟5．二甲苯Ⅱ5分钟6．中性树胶封固结果：细胞核呈蓝色，细胞浆呈红色。
五、实验注意事项1．任何石蜡切片必须经过二甲苯进行脱蜡后才能染色，石蜡切片要求平板烘干，以便组织与玻片粘贴牢固。
组织切片脱蜡的好坏，与二甲苯的温度及时间有关，二甲苯使用时间过长，应及时更换。
2．在H．E染色过程中，其成败的关键在于分化，如果分化不当致使应该分化脱色的部分末予脱去，或分化不足致染色不均匀，复染对也不能得到对比鲜明的色彩，另外流水冲洗时间的长短对组织返蓝色彩鲜艳与否也有一定的关系。
须要提及的是，染色的成败除染色技术以外，组织材料的过分陈旧或长期固定在甲醛中的组织，由于过度酸化都会影响染色；或组织固定不当，固定不足组织发生自溶等均会使染色模糊。
3．伊红染色后必须经梯度酒精脱水，特别需要经过无水乙醇，脱水一定要彻底，否则，影响透明。
4．脱水后，经二甲苯进行透明，才能封固。
透明应注意时间充足，才能达到良好效果。
封片时，中性树胶不能滴加太多或太少。
封固好的切片应平放在摊片盘上，及时放置于恒温箱中40-50℃烘烤15小时左右，有利于切片的保存。
六、实验结果处理每人交2-3张质量良好的切片，并描述病理变化。
七、思考题1．病理组织切片染色的原理和意义？2．病理组织切片染色有哪些程序，应注意什么问题？。