实验诊断-临床血液学检测：溶血性贫血的实验室检测
2017年主管检验技师考试临床血液学检验讲义第十二章自身免疫性溶血性贫血及其实验诊断
第十二章自身免疫性溶血性贫血及其实验诊断一、自身免疫性溶血的检验及其应用二、自身免疫性溶血性贫血的实验诊断一、自身免疫性溶血的检验及其应用1.免疫性溶血性贫血的定义和分类免疫性溶血性贫血是由抗体参与的溶血反应所致的贫血。
这类免疫反应是由于红细胞表面抗原，或与外来的抗原（如药物等）相结合，在相应抗体（IgG或IgM）作用下，或激活补体的参与，导致红细胞凝集或破坏而发生溶血；或在脾或肝脏内的单核-巨噬细胞的吞噬作用下被破坏。
免疫性溶血性贫血的分类见下表。
免疫性溶血性贫血的分类2.抗人球蛋白试验包括直接（DATG）法和间接（IATG）法。
（1）原理：用于检测自身免疫性溶血性贫血的自身抗体（IgG）。
分为检测红细胞表面有无不完全抗体的直接抗人球蛋白试验（DAGT）和检测血清中有无不完全抗体的间接抗人球蛋白试验（IAGT），以前者最常用。
直接试验应用抗人球蛋白试剂[抗IgG和（或）抗C3d]与红细胞表面的IgG分子结合，如红细胞表面存在自身抗体，出现凝集反应。
抗人球蛋白直接试验原理示意图及结果观察（玻片法）间接试验应用Rh（D）阳性O型正常人红细胞与受检血清混合孵育，如血清中存在不完全抗体，红细胞致敏，再加入抗人球蛋白血清，可出现凝集。
抗人球蛋白间接试验原理示意图及结果观察（试管法）结果：健康人直接和间接抗人球蛋白试验均为阴性。
（2）临床意义：阳性见于自身免疫性溶血性贫血、冷凝集素综合征、阵发性寒冷性血红蛋白尿、药物致免疫性溶血性贫血、输血引起溶血性贫血和新生儿同种免疫性溶血性贫血。
阴性不能排除免疫性溶血性贫血。
3.冷凝集素试验（1）原理：冷凝集素为IgM类完全抗体，在低温时可使自身红细胞、O型红细胞或与受检者血型相同的红细胞发生凝集。
凝集反应的高峰在0～4℃，当温度回升到37℃时凝集消失。
参考值：正常人血清抗红细胞抗原的IgM冷凝集素效价＜1:32（4℃）。
（2）临床意义：阳性见于冷凝集素综合征（＞1:1000），支原体肺炎、传染性单核细胞增多症、疟疾、肝硬化、淋巴瘤及多发性骨髓瘤者亦可增高，但不超过1:1000。
2.3溶血性贫血的实验室检查
1．血浆游离血红蛋白测定 血浆游离血红蛋白测定： 【参考值】 ＜40mg ／L 【临床意义】 血管内溶血时血浆游离血红 蛋白明显增高。血管外溶血时血浆游离血红蛋 白正常或仅轻度增高。
2．血清结合珠蛋白测定 血清结合珠蛋白测定：
【参考值】0.8～2.7g/L(免ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ火箭电泳法) 【临床意义】 （1）结合珠蛋白减低 各种溶血时结合珠蛋白均 结合珠蛋白减低： 可 减低，以血管内溶血减低为显著，严重者可明显减 低，甚至测不出（血浆游离血红蛋白超过1.3g /L时）。 巨幼细胞贫血、严重肝病、口服避孕药、先天性无结 合珠蛋白血症等也可减低或消失。
（二）血浆游离血红蛋白增高的有关检验 血浆游离血红蛋白增高的有关检验
血管内溶血时， 大量血红蛋白游离至血浆中，使血 浆游离血红蛋白增高 游离血红蛋白增高。血浆中的游离血红蛋白需与结合 珠蛋白（haptoglobin，Hp）结合后被输送至肝分解，故 使血浆结合珠蛋白减低 结合珠蛋白减低。通常每升血液中结合珠蛋白的 1.3g 含量可以结合1.3g 游离血红蛋白。当血浆中的游离血红 蛋白量超过结合珠蛋白的结合能力时, 血浆中结合珠蛋 白便被消耗殆尽。剩余的游离血红蛋白有一部分可转变 为高铁血红蛋白，与血浆中清蛋白结合形成高铁血红素 高铁血红素 清蛋白（methemalbumin），在血浆中出现。 清蛋白
三、临床分类 按发病和病情可分为： 临床分类 1．急性溶血 急性溶血：红细胞在血管内以溶解方式 破坏。破坏数量多、速度快，临床症状常较为明 显，并伴有高血红蛋白血症 血红蛋白尿或含铁 高血红蛋白血症、血红蛋白尿或含铁 血黄素尿。 血黄素尿 2．慢性溶血 慢性溶血：红细胞多在脾脏被破坏，破 坏数量较少、速度较慢，临床症状一般较轻，血 中游离血红蛋白轻度增高，不伴有血红蛋白尿或 含铁血黄素尿。
临床血液学检验：溶血的检验
1.骨髓幼红细胞增生 2.网织红细胞增高 3.外周血出现幼稚红细胞 4.红细胞形态异常：多染性、Howell-Jolly小体、cabot环、红
细胞碎片
红细胞破坏原因红细胞膜结构的破坏血红蛋白分子结构异常外部因素作用于红细胞溶血性贫血概念红细胞破坏加速而骨髓造血功能代偿不足时发生的一类贫血如要骨髓能够增加红细胞生成足以代偿红细胞的生存期缩短则不会发生贫血这种状态称为代偿性溶血性疾病溶血性贫血的临床表现1急性溶血性贫血
溶血的检验
病例
➢ 女，36岁，因“中期妊娠、重度贫血”入院。
2016-01-13
1.08
63
12.8
118.5
58.3
2016-02-23
1.26
58
16.0
124.6
46
2016-02-29
0.96
54
14.0
145.7
56
• 网织红细胞比率:3.18%，未成熟网织红细胞:0.09%，平均网织RBC体积 :157.4fL
诊断
1.孕2产1宫内妊娠23周+5 2.重度溶血性贫血? 3.高龄孕妇
血清结合珠蛋白测定
• 原理：Hp与Hb 结合形Fra bibliotekHp-Hb 复合物，通 过电泳将Hp-Hb 复合物与未结合Hb分开，测 定复合物含量
• 参考范围：0.5-1.5g/L • 临床意义：
1.减低：溶贫、尤其是血管内溶血 2.增高：创伤、肿瘤等
尿含铁血黄素
• 原理：尿中含铁血黄素是不稳定的铁蛋白 聚合体，其中的铁3+离子与亚铁氰化钾作用
溶血的部位
1血管内溶血 红细胞在循环血液中溶破,血红蛋白直接
释入血浆。多见于PNH，G－6PD缺乏，冷抗 体型自体免疫性溶血性贫血，以及药物、理 化、感染等因素所致之溶血性贫血 2血管外溶血
溶血性贫血的诊断标准
溶血性贫血的诊断标准
溶血性贫血是一种由于红细胞寿命缩短、破坏速度增加而引起的贫血症状。
溶
血性贫血可以分为遗传性和后天性两种类型，临床上常见的有遗传性溶血性贫血、自身免疫性溶血性贫血、感染性溶血性贫血等。
针对不同类型的溶血性贫血，其诊断标准也有所不同。
首先，对于溶血性贫血的诊断，临床医生需要充分了解患者的病史，包括家族史、药物过敏史、疾病史等。
遗传性溶血性贫血患者往往有家族史，而自身免疫性溶血性贫血患者可能有自身免疫性疾病的病史。
此外，对于感染性溶血性贫血患者，需要了解患者的感染史，特别是对于曾经发生过溶血性贫血危象的患者，需要重点排查感染的可能。
其次，临床医生需要进行相关的实验室检查，以确定溶血性贫血的诊断。
常规
的血液检查包括血红蛋白浓度、红细胞计数、血小板计数、血涂片检查等。
此外，还需要进行网织红细胞检测、血清胆红素测定、血清LDH测定等实验室检查，以
评估溶血的程度和类型。
另外，对于遗传性溶血性贫血患者，还需要进行相关的遗传学检查，以确定病因。
例如，对于地中海贫血患者，可以进行地中海贫血基因突变的检测，以确定病因和遗传方式。
最后，临床医生还需要排除其他引起贫血的疾病，例如缺铁性贫血、再生障碍
性贫血等，以确保溶血性贫血的诊断准确性。
在进行诊断时，还需要考虑患者的临床表现、实验室检查结果以及病史等综合因素，以确定溶血性贫血的诊断。
总之，溶血性贫血的诊断需要综合考虑患者的病史、临床表现和实验室检查结果，排除其他引起贫血的疾病，以确保诊断的准确性。
针对不同类型的溶血性贫血，其诊断标准也有所不同，临床医生需要根据具体情况进行诊断，并进行个体化治疗。
2012-3-26溶血性贫血实验室检查2012-3-262-PPT文档
4、G6PD荧光斑点试验和活性测定
原理: G6PD 使NADP还原成NADPH, 后者在紫外线 照射下发出荧光
6-磷酸葡萄糖
白 G-6PD
NADP
6-磷酸葡萄糖酸
NADPH
参考值： 正常人强荧光； 酶活性 5 U/gHb
GSH GSSG
H202
氧合血红蛋
H20
高铁血红蛋白
1. Coombs试验（抗人球蛋白试验）
目的：检查红细胞表面的或血清中游离的不完全
抗体，用于诊断AIHA。
原理：不完全抗体(IgG)，无法架接两个邻近的红细胞，而只
能和一个红细胞抗原相结合。 抗人球蛋白抗体是完全抗体,可与多个不完全抗体的Fc
段相结合,导致红细胞凝集现象,称为抗人球蛋白试验阳性。
直接Coombs Test(+)说明病人RBC表面上包被有不完全抗体 间接Coombs Test(+)则说明病人血清中存在着不完全抗体
什么叫溶血性贫血？
hemolytic anemia----指各种原因导 致红细胞生存时间缩短、破坏增多或加 速，骨髓代偿造血功能不足时所发生的 一类贫血。
什么叫溶血性疾病？
指骨髓代偿能力尚足以补偿红细胞 的损耗而不出现贫血。
溶血性贫血的分类(病因和发病机制)
1、RBC内在缺陷所致的溶贫 （1） RBC膜缺陷：遗传球 PNH （2） HB结构异常：海洋性贫血 （3）RBC内酶缺陷：G-6PD缺乏症
红细胞寿命测定
方法：51Cr标记红细胞，检测其半衰期 正常红细胞半衰期25—32天 溶血性贫血者半衰期小于15天 确定溶血性贫血的可靠方法
溶血性贫血筛查
血浆游离血红蛋白测定
参考值：＜50mg/L(1-5mg/dl) 临床意义：
临床医学检验临床血液技术：溶血性贫血的实验诊断考试资料五
临床医学检验临床血液技术：溶血性贫血的实验诊断考试资料五1、单选在血管内溶血的实验室指标中，最敏感的是（）A.高铁血红蛋白还原试验阳性B.血浆血红素结合蛋白减低C.血浆结合珠蛋白减低D.尿隐血试（江南博哥）验阳性，镜检未见红细胞E.血清胆红素增高正确答案：C2、单选男性，30岁，黄疸、贫血4年，偶见酱油色尿。
检验：红细胞2.15×1012/L，血红蛋白68g/L，白细胞2.3×109/L，血小板63×109/L，网织红细胞计数6.7%；总胆红素44.46μmol/L（2.6mg/dl），直接胆红素3.42μmol/L （0.2mg/dl），ALT正常；骨髓检查示增生正常偏低，粒红比为1：1.92。
要正确诊断最需要做下列哪项检查（）A.Coombs试验B.血清免疫球蛋白测定C.Ham试验D.尿隐血试验E.HbsAg正确答案：C参考解析：阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者体内存在对补体敏感的红细胞。
Ham 试验阳性主要见于PNH，某些自身免疫性溶血性贫血发作严重时可呈阳性。
3、单选与血管外溶血不符合的是（）A.常为慢性经过B.脾不肿大C.常为先天性D.破坏的红细胞被单核－巨噬系统吞噬E.黄疸正确答案：B参考解析：血管外溶血常表现为：贫血、黄疸、肝、脾大。
4、单选溶血性贫血时外周血中常可见到，但除外（）A.点彩红细胞B.网织红细胞C.红细胞寿命缩短D.有核红细胞E.红细胞缗钱状形成正确答案：E5、单选泵岛销售的商品，订货时通常要适当（），保证最低的陈列量。
A、增加订量B、减少订量C、下调订量D、按最小配送量订货正确答案：A6、单选不符合急性溶血性贫血的是（）A.发热，酱油色尿可伴休克B.急性贫血伴黄疸C.肾衰竭D.出现左肘关节肿胀E.溶血早期Rous试验可呈阳性正确答案：D7、单选男，13岁，面色苍白半年。
体检：中度贫血貌，巩膜轻度黄染，脾肋下3cm；检验结果：血红蛋白81g／L，白细胞及血小板正常，网织红细胞13%；Coombs试验（－）；红细胞渗透脆性试验，初溶为58%氯化钠溶液，全溶为46%氯化钠溶液本例溶血性贫血发病机制为（）A.获得性红细胞膜缺陷B.遗传性红细胞膜缺陷C.红细胞磷酸己糖旁路中的酶缺陷D.珠蛋白肽链合成减少E.红细胞自身抗体产生正确答案：B8、单选血浆游离Hb测定哪项错误（）A.在pH7.6左右B.在pH5.6左右C.于530nm处测吸光度D.正常参考值<50mg／LE.颜色变化是绿－蓝－紫红正确答案：A9、单选提示慢性血管内溶血的实验室检查是（）A.Rous试验B.铁染色C.MCHCD.HCBE.HCT 正确答案：A参考解析：Rous试验即尿含铁血黄素试验。
溶血实验报告
溶血实验报告溶血实验报告引言：溶血实验是一种常用的生物学实验方法，用于检测物质对红细胞的溶解能力。
通过此实验可以评估物质对血液系统的影响，对于疾病的诊断和治疗具有重要意义。
本文将对溶血实验的原理、方法和结果进行详细介绍，并探讨其在临床应用中的意义。
一、实验原理溶血实验基于红细胞膜的特殊结构和功能。
红细胞膜由磷脂双分子层构成，其中的膜蛋白负责维持细胞的形态和稳定性。
当外界因素（如物理、化学因素）破坏了红细胞膜的完整性，细胞内的血红蛋白会释放出来，导致溶血现象的发生。
溶血实验通过观察红细胞的溶解程度，可以评估物质对红细胞膜的破坏能力。
二、实验方法1. 实验材料准备：需要准备一定浓度的溶液样品、新鲜的血液样本和生理盐水。
2. 实验步骤：a. 取一定量的新鲜血液样本，离心分离红细胞，洗涤后制备红细胞悬液。
b. 将红细胞悬液分装到不同试管中，每个试管加入相同体积的不同浓度的溶液样品。
c. 混匀后放置一定时间，观察红细胞的溶解情况。
d. 根据红细胞的溶解程度，评估溶液样品对红细胞的溶解能力。
三、实验结果实验结果根据红细胞的溶解程度来评估样品的溶解能力。
通常可以分为以下几种情况：1. 完全溶解：红细胞完全溶解，溶液呈现透明状态。
2. 部分溶解：红细胞溶解程度不完全，溶液呈现混浊状态。
3. 无溶解：红细胞完全未溶解，溶液呈现正常状态。
四、实验意义溶血实验在临床应用中具有重要意义。
它可以用于以下方面：1. 诊断疾病：某些疾病（如溶血性贫血、自身免疫性溶血性贫血等）会引起红细胞膜的破坏，通过溶血实验可以帮助医生对这些疾病进行诊断。
2. 评估药物毒性：某些药物可能对红细胞膜产生损伤作用，通过溶血实验可以评估药物的毒性，指导临床用药。
3. 检测食物安全：一些食物中可能含有对红细胞有溶解作用的物质，通过溶血实验可以对食物安全进行评估，保障公众的健康。
结论：溶血实验是一种重要的生物学实验方法，通过评估物质对红细胞的溶解能力，可以对疾病的诊断和治疗提供有力支持。
溶血性贫血的检验操作规程
溶血性贫血的检验操作规程
红细胞渗透脆性试验
【标本】
1. 简易法，静脉血为宜。
2. 比色法，用肝素抗凝管，抽取静脉血1.0~1.5ml，混匀。
【方法及操作与试剂】
1. 简易法：用配有6号针头的干燥无菌注射器取静脉血1.0~1.5ml，立即滴入试管架上含有不同量的NaCL及蒸馏水的各管中，每管１滴，贫血患者可加2滴，摇匀，静置，室温2h，观察结果。
详见《临床实验诊断学上册》。
2. 比色法：见《临床实验诊断学上册》。
【附注】
1. 简易法：
（1）试剂配制要准确，每次配制量不宜过大，1~2个月内需更换1次试剂。
（2）如取耳垂血要使血液流出畅通，如静脉血要求注射器干燥。
（3）如用抗凝血，以去纤维蛋白或肝素抗凝血为合适。
（4）如开始及完全溶血的结果不易判断时，可离心后观察。
（5）地中海贫血的渗透脆性降低，需作低浓度NaCL液检测。
2. 比色法：
（1）如在室温下实验，需在2小时内比色结束。
（2）血与NaCL缓冲液的PH值及温度对检查结果均有一定影响。
红细胞自体溶血试验
本试验是测定患者的红细胞在自体血清中经孵育后，自发发生的溶血程度。
【试剂】
1. 100g/L葡萄糖（无菌）；
2. 等渗盐水（无菌）；
3. HiCN稀释液；
4. 0.4mol/L ATP生理盐水无菌液。
【方法与操作】
见《全国临床检验操作规程》第二版。
【附注】
应严守无菌操作规程。
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实验诊断-临床血液学检测：溶血性贫血的实验室检测溶血性贫血的实验室检测溶血性贫血的实验室检测一、溶血性贫血的筛查检测（一）血浆游离血红蛋白测定1.参考值<50mg/L（1～5mg/dl）2.临床意义（1）血管内溶血时血浆游离血红蛋白明显增高；（2）血管外溶血时血浆游离血红蛋白不增高；（3）自身免疫性溶血性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血可轻度增高。
（二）血清结合珠蛋白测定1.参考值0.7～1.5g/L（70～150mg/dl）2.临床意义（1）各种溶血时血清结合珠蛋白均有减低，血管内溶血时减低显著；（2）肝脏病、传染性单个核细胞增多症、先天性无血清结合珠蛋白血症等可减低或消失；（3）感染、创伤、恶性肿瘤、系统性红斑狼疮、糖皮质激素治疗等可有结合珠蛋白增高。
（三）血浆高铁血红素清蛋白测定 1.检测方法生化法、电泳法 2.正常值阴性 3.临床意义阳性表示为严重血管内溶血（四）含铁血黄素尿试验（Rous试验）1.原理铁离子在酸化的亚铁氰化钾溶液中生成蓝色的亚铁氰化铁，即普鲁士蓝反应。
2.正常值阴性3.临床意义（1）慢性血管内溶血可呈现阳性，并持续数周；（2）常见于阵发性睡眠性血红蛋白尿症，在溶血初期可阴性。
（五）红细胞寿命测定1.原理用51Cr标记红细胞检测红细胞半衰期。
2.正常值正常红细胞半衰期为25～32天。
3.临床意义溶血性贫血时常小于15天，这是确定溶血性贫血的可靠方法。
二、红细胞膜缺陷的检测（一）红细胞渗透脆性试验1.原理红细胞在低渗氯化钠溶液中细胞逐渐膨胀甚至破裂而溶血。
2.参考值Ø开始溶血：0.42%～0.46%（4.2～4.6g/L）NaCl溶液Ø完全溶血：0.28%～0.34%（2.8～3.4g/L）NaCl溶液3.临床意义（1）脆性增高：遗传性球形细胞增多症、温抗体型自身免疫性溶血性贫血、遗传性椭圆形细胞增多症等；（2）脆性减低：海洋性贫血、缺铁性贫血、某些肝硬化及阻塞性黄疸等。
（二）红细胞孵育渗透脆性试验1.原理红细胞孵育过程中，葡萄糖的消耗增加，贮备的ATP减少，导致红细胞膜对阳离子的主动传递受阻，钠离子在红细胞内集聚，细胞膨胀，渗透脆性增加。
2.参考值未孵育：50%溶血为4.00～4.45g/L NaCl 37℃孵育24h：50%溶血为4.65～5.9g/L NaCl3.临床意义（1）脆性增加：遗传性球形细胞增多症、遗传性椭圆形细胞增多症、遗传性非球形细胞溶血性贫血等；（2）脆性减低：珠蛋白生成障碍性贫血、缺铁性贫血、镰形细胞贫血等。
（三）自身溶血试验及纠正试验1.原理红细胞内酶缺陷，葡萄糖酵解障碍，不能提供足量ATP，以维持红细胞内的钠泵作用。
病人红细胞无菌条件下在自身血浆中温育48小时，使ATP储备减少，钠泵作用减弱，导致溶血增强。
在孵育过程中，分别加入葡萄糖和ATP作为纠正物，并以氯化钠溶液为对照，观察溶血是否能被纠正。
2.参考值Ø正常人红细胞经孵育48小时后，仅轻微溶血、溶血度<3.5%Ø加葡萄糖和加ATP孵育，溶血明显纠正，溶血度均<1%3.临床意义（1）遗传性球形细胞增多症时，孵育后溶血明显增强，加入葡萄糖及ATP后均得到明显纠正。
（2）Ⅰ型先天性非球形细胞性溶血性贫血（G6PD缺陷症）时自身溶血加重，加葡萄糖和ATP均可部分纠正。
（3）Ⅱ型先天性非球形细胞性溶血性贫血（丙酮酸激酶缺陷症）自身溶血明显增强，加葡萄糖不能纠正，加ATP才能纠正。
三、红细胞酶缺陷的检测（一）高铁血红蛋白还原试验1.原理在被检血液中加入亚硝酸钠使血红蛋白变成棕色的高铁血红蛋白，当血液中有足量还原型辅酶Ⅱ（NADPH）时，棕色的高铁血红蛋白又被还原成亚铁型的血红蛋白。
2.参考值高铁血红蛋白还原率>75%；高铁血红蛋白0.3～1.3g/L。
3.临床意义减低：蚕豆病和伯氨喹型药物溶血性贫血病人由于G6PD缺陷，高铁血红蛋白还原率明显下降。
（二）氰化物-抗坏血酸试验1.原理Ø抗坏血酸钠与HbO2反应产生H2O2，氰化钠能抑制过氧化氢酶使H2O2不被分解，于是H2O2与还原型谷胱甘肽（GSH）发生反应，产生氧化型谷胱甘肽（GSSG），NADPH使GSSG再还原为GSH。
Ø如红细胞中催化NADPH形成的G6PD酶缺陷，则GSH产生减少，蓄积的H2O2会把亚铁型的HbO2氧化成棕色的高铁血红蛋白。
2.参考值（1）正常人血液要在4小时以上才变成棕色；（2）纯合子G6PD缺陷的血液变成棕色，在2小时内即变色，杂合子者要3～4小时变色。
（三）变性珠蛋白小体生成试验1.原理ØG6PD缺陷可致红细胞内的还原型谷胱甘肽（GSSG）含量减少，高铁血红蛋白增高，最后形成变性珠蛋白小体（Heinz bodies）。
Ø取G6PD缺陷者血液，然后加乙酰苯肼于被检血样及对照标本中，37℃温育2～4小时，推薄血片，用1%煌焦油蓝染色。
计算含5个或更多珠蛋白小体的红细胞百分率。
2.参考值 <30%3.临床意义 G6PD缺陷病、不稳定Hb、HbH病等Heinz bodies常高于45%。
（四）葡萄糖-6-磷酸脱氢酶荧光斑点试验和活性测定1.原理G6PD使NADP还原成NADPH，后者在紫外线照射下会发出荧光。
NADPH的吸收峰在波长340nm处，可通过单位时间生成NADPH的量来测定G6PD活性。
2.参考值正常人有甚强荧光3.临床意义（1）G6PD 缺陷者荧光很弱或无荧光；（2）杂合子或某些G6PD变异体者则可能有轻到中度荧光。
（五）丙酮酸激酶荧光筛选试验和活性测定1.原理在ADP存在条件下，PK催化烯醇式磷酸丙酮酸变为丙酮酸，在NADH存在情况下，丙酮酸被LDH作用转变成乳酸，此时有自发荧光能力的NADH变为NAD，荧光消失。
2.参考值 PK活性正常，荧光在20分钟内消失。
酶活性（15.1±4.99）U/gHb。
3.临床意义（1）PK 严重缺陷（纯合子）荧光60分钟不消失（2）杂合子者荧光25～60分钟消失四、珠蛋白生成异常的检测（一）血红蛋白电泳1.原理在一定的PH缓冲液中，缓冲液的PH大于Hb等电点，其带负电，在电场中向阳极移动；反之向阴极移动。
2.参考值正常人的电泳图谱显示4条区带，最靠阳极端的为量多的HbA，其后为量少的HbA2，再后为两条量更少的红细胞内的非血红蛋白成分（NH1和NH2）。
3.临床意义（1）HbA2增高是诊断β轻型地中海贫血的重要依据（2）HbA2减低缺铁性贫血及铁粒幼细胞贫血HbA2减低（二）胎儿血红蛋白酸洗脱试验1.原理HbF抗酸能力较HbA强。
把经固定后的血涂片置酸性缓冲液中保湿一定时间，只有含HbF的红细胞不被洗脱，再用伊红染色而呈鲜红色。
2.临床意义（1）脐带血、新生儿、婴儿阳性，成人小于1%（2）地中海贫血病人轻型者（杂合子）仅少数红细胞呈阳性，重型者阳性红细胞明显增多（三）胎儿血红蛋白测定或HbF碱变性试验1.原理在碱性溶液中，HbF不易变性沉淀，其他Hb在碱性溶液中可变性被沉淀。
测定其滤液中Hb含量，即HbF含量。
2.参考值成人<2%。
新生儿55%～85%，1岁左右同成人。
3.临床意义增高：β地中海贫血明显增高，重型者高达80%～90%。
急性白血病、再生障碍性贫血、纯红白血病、淋巴瘤等也可轻度增高。
（四）HbA2定量测定1.参考值 1%～3.2%2.临床意义同血红蛋白电泳（五）限制性内切酶谱分析原理:从白细胞、胎儿的绒毛或羊水细胞提取高分子量DNA，用适当的限制性内切酶降解。
经琼脂糖电泳分级，用Southern印迹法把DNA转移到硝酸纤维素膜上，再与同位素标记的基因探针杂交后放射自显影。
根据病人DNA限制性内切酶图谱的变化或限制性内切酶降解DNA片段长度的多态性，来分析是否存在珠蛋白基因的突变、缺失等缺陷。
五、自身免疫性溶血性贫血检测（一）抗球蛋白试验1.原理抗球蛋白抗体可与多个不完全抗体的Fc段相结合起链接或桥接作用，导致红细胞凝集可被观察到，称为抗球蛋白试验（Coombs test）阳性。
Ø直接Coombs试验阳性说明红细胞表面已结合有不完全抗体。
Ø间接Coombs试验阳性则说明病人血清中存在着不完全抗体。
2.参考值直接、间接抗球蛋白均呈阴性反应。
3.临床意义（1）阳性：新生儿溶血病、自身免疫性溶血性贫血、SLE、类风湿关节炎等。
（2）温抗体与冷抗体：AIHA大多属于温抗体型（3）抗体亚型：AIHA大多为IgG型抗体（4）间接Coombs试验：主要用于Rh或ABO妊娠免疫性新生儿溶血病、母体血清中不完全抗体的检测。
（二）冷凝集素试验1.原理冷凝集素是一种可逆性抗体，在低温时可与自身红细胞、“O”型红细胞或与病人同型红细胞发生凝集，当温度增高时，凝集现象又消失。
2.参考值效价<1∶40，反应最适温度为4℃。
3.临床意义某些AIHA病人的冷凝集素效价很高，有的效价可达64000或更高。
（三）冷热溶血试验1.原理阵发性寒冷性血红蛋白尿症（PCH）病人的血清中有特殊溶血素，在0～4℃时，溶血素与红细胞结合并吸附补体，但不溶血，当升温至30～37℃则发生溶血。
2.参考值阴性3.临床意义（1）阳性见于PCH。
（2）某些病毒感染如麻疹、流行性腮腺炎、水痘、传染性单个核细胞增多症也可有阳性反应。
六、阵发性睡眠性血红蛋白尿症有关检测（一）蔗糖溶血试验1.原理蔗糖溶液离子浓度低，经孵育可加强补体与红细胞膜的结合，使PNH病人的红细胞膜上形成小孔，遂使蔗糖进入红细胞而导致溶血。
2.参考值阴性3.临床意义（1）PNH常为阳性。
（2）轻度阳性亦可见于部分巨幼细胞贫血，AA，AIHA和遗传性球形细胞增多症。
（二）酸化溶血试验1.原理PNH病人的红细胞对补体敏感性增高，在酸化的血清中（pH6.6～6.8），经37℃孵育，会发生溶血。
2.参考值阴性3.临床意义阳性主要见于PNH，某些AIHA发作严重时也可阳性。
（三）蛇毒因子溶血试验Ø蛇毒因子是以眼镜蛇毒中提取的一种分子量为144 000蛋白质，它能直接激活血清中的补体C3，通过旁路途径激活补体系统，使PNH的红细胞溶血。
Ø本试验为特异性PNH试验。
考试无捷径、学习有方法。