放射免疫分析ria
放射免疫检定法
放射免疫检定法一、引言放射免疫检定法（radioimmunoassay，简称RIA）是一种利用放射性同位素标记物质和抗原抗体相互作用进行定量分析的方法。
它具有高度的灵敏度、特异性和准确性，在生物医学研究和诊断中得到广泛应用。
本文将详细介绍放射免疫检定法的原理、操作步骤及其在临床上的应用。
二、原理放射免疫检定法基于抗原与抗体相互结合的特异性，通过测量标记物质（通常是放射性同位素标记的抗原或抗体）与未标记物质（待测物质）竞争结合的程度，来定量测定待测物质的浓度。
该方法主要包括以下步骤：1.样品准备：待测物质需要提取和纯化，以获得精确的浓度。
2.标记物质制备：将待测物质标记上放射性同位素。
3.抗体制备：获得特异的抗体，可通过动物免疫、体外培养等方法获得。
4.标样制备：准备一系列已知浓度的标准样品。
5.标准曲线绘制：将标准样品与已知浓度相对应的竞争剂量进行测定，得到标准曲线。
6.待测样品测定：将待测样品与抗体、标记物质一起孵育，再与固相支持物接触，随后进行放射计数，得到计数值。
7.计算浓度：根据标准曲线上待测样品的计数值，计算待测物质的浓度。
三、操作步骤放射免疫检定法的操作步骤如下：1.准备所需试剂和设备：包括抗体、放射性同位素、标准样品、试剂盒、储存条件等。
2.标记放射性同位素：将待测物质标记上放射性同位素，使其具有放射性活性。
3.样品准备：通过提取和纯化方法，获得待测物质的准确浓度。
4.孵育：将待测样品与抗体和标记物质搅拌混合，使其充分反应。
5.分离：通过固相支持物将未结合的标记物质与结合物质分离开来。
6.放射计数：将分离后的结合物质放入放射计数器中，进行计数。
7.数据处理：根据标准曲线上待测样品的计数值，计算待测物质的浓度。
四、应用放射免疫检定法在临床医学中有着广泛的应用，主要应用于以下方面：1.肿瘤标志物检测：放射免疫检定法能够对血清或尿液中的肿瘤标志物进行测定，用于肿瘤的早期诊断、疗效评价和复发监测。
免疫放射分析基本原理
免疫放射分析基本原理
免疫放射分析（Radioimmunoassay，简称RIA）是一种常用的生物化学分析方法，通过使用放射性同位素标记的抗体来测量样品中特定物质的含量。
其基本原理如下：
1. 准备试样：需要测量的物质（抗原）存在于待测样品中。
样品可以是血清、尿液、分离得到的纯化物质等。
2. 标记抗体：选择能与待测物质结合的特异性抗体，并将该抗体与放射性同位素标记结合。
常用的同位素标记有^125I和
^3H。
放射性同位素标记的抗体是利用放射性同位素的射线释放特性来进行测量的关键。
3. 反应体系：将标记抗体和待测样品中的抗原加入到一个反应管中，使抗体与抗原发生特异性结合。
这一步骤通常需要一定的时间（通常为数小时）来达到最大的结合效率。
4. 分离无结合物质：通过加入剩余的非标记抗体或其他方法，分离无结合的标记抗体和未结合的物质（无结合物质）。
这一步骤可用于增加测量的灵敏度。
5. 分离被结合的标记抗体：将反应体系分离，常见的方法是利用沉淀或吸附等技术，将被结合的标记抗体与其他成分分离开来。
6. 测量放射活性：通过放射计或闪烁计数仪等设备，测量分离得到的被结合的标记抗体的放射活性。
放射活性与待测物质的
浓度呈正相关关系。
7. 构建标准曲线：使用已知浓度的标准物质重复上述步骤，测量其放射活性，并作为标准曲线的数据点。
通过与标准曲线的比较，可以确定待测样品中物质的浓度。
总之，免疫放射分析是一种利用放射性同位素标记的抗体来测量待测样品中特定物质含量的分析方法。
通过与已知浓度的标准物质进行比较，可以准确地测量待测物质的浓度。
RIA放免法
放射性免疫分析法是80年代以来被日益广泛应用的超微量分析技术，具有灵敏度高和特异性强的突出优点。
它又分为两种方法。
一、竞争性RIA，又称传统RIA基本原理是根据被测定的抗原物质和其标记物（标记抗原）同特异性抗体之间存在着竞争性的结合。
主要特点：标记的是抗原。
其原理：未知抗原Ag+标记抗原Ag +已知定量抗体Ab标记抗原与抗体复合物AgAb+未知抗原与抗体复合物Ag Ab+游离标记抗原Ag （去除）（未知抗原多，标记抗原与定量抗体结合的复合物就少，表现为负相关）。
若以Ag和Ag*分别代表待测抗原和标记抗原，Ab代表抗体，Ag·Ab和Ag*·Ab分别代表非标记的和标记的抗原抗体复合物，则当Ag与Ag*同时存在时，这一系统呈如图所示的平衡关系：在Ab恒定时，由于Ag的存在而使Ag*·Ab的产量减少。
若F代表未结合的Ag*，B代表Ag*·Ab复合物，则B/F与Ag之量存在函数关系。
若以B/F为纵坐标，Ag浓度（ng/ml）为横坐标，则可绘制出剂量反应标准曲线。
测量未知样品时，只需在同样条件下测量B和F 的放射性，即可由标准曲线求出被测样品的浓度，而不需纯化样品。
本方法要求有高纯度的标记抗原，测定标准曲线时要寻找合适的标准品，标准品的免疫活性应与待测样品相当，且不含放射性免疫干扰物。
临床上甲胎蛋白（AFP），癌胚抗原（CEA），8 一微球蛋白（pz—MG ），铁蛋白（Fer），人绒毛膜促性腺激素p亚单位（HCG-13）等的检测都是竞争性RIA法原理。
竞争性RIA法，根据加样顺序与温育次数的区别，反应方式分三种：平衡法，将非标记抗原（被测物与标准品）、抗体、标记抗原依次加入反应管，混匀后一次性温育至反应达到动态平衡，再加分离剂分离B（复合物）与F（游离物）如：AFP，8 一MG，Fer；顺序加样法，先将非标记抗原（被测物与标准品），与抗体在反应管内作第一次温育，待反应达到动态平衡后。
放射免疫分析
放射免疫分析摘要：放射免疫技术（radio immunoassay ,RIA）类型主要包括经典的放射免疫分析(radioimmunoassay, RIA)和免疫放射分析或免疫放射度量分析( immunoradiometric assay，IRMA)。
由于受接触放射性物质，损害操作人员的身体，测定完成后放射性材料的处置等问题的存在,再加上80年代初出现的非同位素标记技术得到了极大的发展和广泛应用，放射免疫技术的应用有下降的趋势。
0引言：放射性核素依衰变方式分α、β、γ三种，用于放射性标记的有β和γ两类;分别用液体闪烁计数器及γ计数器测定。
目前常用的是γ型放射性核素，如125I、131I、51Cr和60Co，以125I最常用；β型放射性核素有3H、14C和32P，以3H最常用。
关键词：结构，原理，临床应用1检测的基本结构原理、结构及其探测原理核射线探测仪器由射线探测器和后续电子学单元两大部分组成。
核射线探测器是个能量转化器，其检测原理是当射线作用于闪烁体，闪烁体吸收了射线的能量而引起闪烁体中的原子或分子激发，当受激的原子或分子退激时，则发出光子进入光电倍增管光阴极，转换为光电子，光电子在光电倍增管电场作用下到达阳极，形成电脉冲。
转换模式是放射能→光能→电能→脉冲。
液体闪烁测量是在闪烁杯内进行的，放射性样品主要被溶剂和闪烁剂分子包围，射线能量先被溶剂分子吸收，受激溶剂分子退激时释放出能量激发闪烁剂，当激发态回到基态时释放出光子到达光阴极，光阴极产生光电子，在光电倍增管的电场作用下，在阳极获得大量电子，形成脉冲信号，输入后读分析电路形成数据信号，最后由计算机数据处理，求出待测抗原含量。
放射性活度测定方法放射免疫分析中经抗原抗体反应和B、F分离后通过检测放射性量来反映待测物的含量。
放射性量的检测需特殊的仪器，放射免疫分析仪实际上就是进行放射性量测定的仪器。
测量仪器有两类，即晶体闪烁计数仪（主要用于检测γ射线，如125I、131I、57Cr等）和液体闪烁计数仪（主要用于检测β射线，如3H、32P、14C等）。
放射免疫分析
二、 (一)标讥抗原和抗体用量最佳化设计。 1、标记抗原用量选择。 2、抗血清的使用滴度选择及其方法。 (二) 1、 2、标准曲线工作范围 (三) (四)
15
(五) 1 、反应容积 缩小反应容积可相应减少 抗体和标记抗原的绝对用量，使非标记 抗原的竞争力相应增强，有利抗原、抗体结合反 应的平衡结合常数K与温度有关必须通过 实验来确定最佳工作条件。 (六)B与F (七)
7
(四)掌握标准曲线的斜率对测定的影响 标 准曲线的斜率对放射免疫分析方法的灵 敏度和精密度均有影响。
1、亲和常数K 2、 3、 ( 五 ) 掌握 Bo( 总结合 ) 、 T( 总管 ) 、 NSB 的概
8
第二节 放射免疫分析方法学 一、掌握建立放射免疫分析方法的必备条件 (一) (1)标准抗朱与待测抗原的免疫性必须一致， 即它们与抗体的亲和力和特异性应相同。 标准抗原与待测抗原所处的介质条件应基 本相同。 (2)抗原必须纯度度。 (3)标准抗原的量必须准确。 (4)标准抗原应有很好的稳定性。
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2、 (1) 双抗法 (Ab2 法 ) ：应用抗 IgG 的第二抗体 来分离B和F的方法称为双抗体法。 双抗体法具有特异、高效、非特异性结合 低、重复性好等优点。在使用此法时，往 往加入适量的第一抗体同种动物血清作载 体。同时第二抗体必须是过量(但也不宜过 大)，且以不影响反应平衡为宜. (2) 固相分离法：将特性抗体 ( 第一或第二 抗体)或抗原结合在固相物质。 (3)金黄色葡萄球菌A蛋白分离法。
第四章
放射免疫分析
目的与要求： 掌握放射免疫分析的基本原理， 实验室配置及质量控制。 内容： 放射免疫分析 (RIA) 是由 Yalow 和Berson于 1960年创建的一种体 外放射分析技术。这是检验专业 学生必须掌握和重点。
放射免疫分析临床应用刘冬
放射免疫分析临床应用刘冬放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA）是一种以放射性示踪剂和免疫反应结合技术来测定生物标志物的一种方法。
该技术已广泛应用于临床医学中用于检测和测量患者体内的一些特定物质含量，如激素、抗体、肿瘤标志物等。
本文将重点介绍放射免疫分析在临床应用中的一些例子。
一、激素测定激素是机体内起调控作用的重要化学物质。
通过测定患者体内激素的水平，可以评估一些疾病的发生和发展，以及患者对治疗的反应。
常见的激素测定项目包括甲状腺激素、生长激素、性激素等。
放射免疫分析可以通过测定血液或尿液中激素的浓度，来帮助医生进行确诊和治疗方案的制定。
例如，对于甲状腺功能亢进患者，可以通过测定血液中的甲状腺素水平来确定是否需要进行手术或药物治疗。
二、肿瘤标志物测定肿瘤标志物是一种可以在肿瘤患者体内检测到的特殊物质。
通过测定血液中的肿瘤标志物的水平，可以帮助医生进行肿瘤的筛查、诊断和监测治疗效果。
放射免疫分析可以对常见的肿瘤标志物，如癌胚抗原（CEA）、前列腺特异性抗原（PSA）等进行快速、准确的检测。
例如，在临床上，对于可能患有肺癌的患者，测定血液中的CEA水平可以帮助医生进行早期诊断和有效治疗。
三、感染性疾病诊断感染性疾病的早期诊断对于患者的治疗和康复至关重要。
通过测定患者体液中的抗体水平，可以判断患者是否被特定的病原体感染。
放射免疫分析可以用来检测和诊断一些常见的感染性疾病，如乙肝、艾滋病等。
例如，对于可能患有乙型肝炎的患者，可以通过测定血液中的乙肝病毒表面抗原（HBsAg）和乙肝病毒表面抗体（HBsAb）来判断患者的感染状态和治疗效果。
综上所述，放射免疫分析技术在医学临床应用中发挥着重要的作用。
通过对患者体内特定物质含量的测定，可以帮助医生进行疾病的早期诊断、有效治疗和预后评估。
随着医学技术的不断发展，放射免疫分析技术在临床应用中的前景将会更加广阔。
放射免疫分析名词解释
放射免疫分析名词解释放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA）是一种用于检测和定量分析生物样品中特定抗原或抗体浓度的方法。
它是将放射性同位素标记于抗原或抗体上，在放射性同位素发出的放射线与样品中的抗原或抗体发生特异性结合后进行测定，从而得出相应物质的浓度。
放射免疫分析的基本原理是免疫反应，即抗原与抗体之间的特异性结合。
在RIA中，通常选择具有放射性的同位素标记物作为追踪试剂。
标记物可以是同位素标记的抗原或抗体，其中最常用的是放射性同位素碘-125（^125I）或碘-131（^131I）。
这些放射性同位素会发出特定能量的射线，可以通过辐射探测器测量。
RIA的步骤包括样品预处理、标记物制备、抗体反应和分离、洗涤、放射测定等。
首先，需要将待测物标记为放射性同位素，常见的方法是用碘-125标记。
然后，将标记物与样品中的抗原或抗体进行相互反应，形成抗原-抗体复合物。
接着，通过分离和洗涤步骤，去除未结合的放射性同位素。
最后，使用辐射探测器测量放射性同位素发出的射线，由此可以得到样品中特定抗原或抗体的浓度。
放射免疫分析的优势在于其高灵敏度和高特异性，可以检测到极低浓度的物质。
它广泛应用于医学、生物学、生物化学等领域，用于检测和量化各种生物分子，如荷尔蒙、抗体、蛋白质、癌标志物等。
RIA还可以用于研究免疫反应、疾病诊断、药物筛选和治疗监测等方面。
然而，放射免疫分析也存在一些问题。
首先，使用放射性同位素会造成辐射危害，对实验操作人员和环境有一定风险。
其次，放射性同位素的半衰期较短，需要定期更换，增加了实验的复杂性和成本。
此外，由于放射性同位素的使用受到严格的监管和限制，一些实验室可能无法获得所需的放射性同位素。
总体而言，放射免疫分析是一种广泛应用的生物分析技术，具有高灵敏度和高特异性。
随着科技的进步，更多无放射同位素的免疫分析方法被开发出来，如酶免疫分析、荧光免疫分析等，逐渐取代了放射免疫分析的应用。
放射免疫分析的原理
放射免疫分析的原理放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA）是一种利用放射性同位素标记抗原或抗体来检测物质浓度的技术。
该技术广泛应用于临床诊断、生物化学研究以及药物筛选等领域，具有高灵敏度和高特异性的特点。
放射免疫分析的原理是基于抗原与抗体之间的特异性结合。
抗原是一种能够诱导免疫系统产生抗体的物质，而抗体是一种能够特异性结合抗原的免疫蛋白。
在放射免疫分析中，通常选择特异性结合抗原的抗体，并利用放射性同位素标记抗原或抗体，以便测定样品中抗原或抗体的浓度。
放射免疫分析的步骤一般包括抗原标记、抗体固定、分离和计数等几个关键步骤。
首先，将抗原标记上放射性同位素，通常使用的同位素有碘-125（125I）、碘-131（131I）、氘-3（3H）等。
标记后的放射性抗原具有相对稳定的放射性，可用于测定抗原的浓度。
然后，将已标记的抗原与待测样品中的抗原进行特异性结合，并通过添加抗体来固定放射标记的抗原。
接着，利用分离技术（如沉淀法、凝胶层析法等）将游离的抗体或抗原分离出来。
最后，通过放射计数器测定标记抗原或抗体的放射性强度，从而计算出待测样品中抗原或抗体的浓度。
放射免疫分析的原理基于放射性同位素的高灵敏度和稳定性，使得其具有极高的检测灵敏度和特异性。
相对于传统的免疫分析方法，如酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）等，放射免疫分析能够在极低的抗原浓度下进行检测，且能够检测复杂样品中的微量物质。
因此，放射免疫分析广泛用于检测激素、生物分子、药物和疾病标志物等各种生物样品中的微量物质。
然而，放射免疫分析也存在一些局限性，主要是由于放射性同位素的使用带来的放射性污染和辐射风险。
为了克服这一局限性，人们提出了许多新的代替技术，如免疫荧光分析（immunofluorescence assay，IFA）、化学发光免疫分析（chemiluminescence immunoassay，CLIA）等。
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概
述
2.类型：（据特异性结合试剂的不同分类）
放射免疫分析（RIA） 1959 竞争性蛋白结合分析（CPBA） 1963 免疫放射分析（IRMA） 1968 放射受体分析（RRA ） 70年代 放射酶学分析 70年代 放射微生物分析
概
述
酶免疫分析（EIA）
其他非放射性标记免疫分析：
到平衡，然后分离并分别测定结合的抗原 抗体复合物放射性（B）和游离抗原放射性 （F）来计算出非标记抗原含量的一种超微 量分析技术。
♣ ♣♣ ♣♣ ♣
RIA基本试剂
1、标记抗原
125I 3H
多数 γ闪 价廉 少数 液闪 费用高
*Ag的质量要求：
标记后不改变原有抗原的生物活性； 标记的放射性核素的t1/2不能太短； 比活度和放化纯度足够高，保证分析 的灵敏度。
的稀释倍数，滴度越高，所需的抗血清量越 少，血清的稀释倍数越高，抗血清中杂质干 扰也少。一般滴度高到1：1000以上，血清 中干扰物质影响就很小。
RIA基本原理
最具代表性的一类检测技术，是建立在抗原抗 体结合的高度特异性和放射性测量的高度灵敏性的 基础上的。 Ag ＋ Ab AgAb ＋ *Ag *AgAb 动态平衡体系中，*Ag与Ag具有同样的免疫活性和结 合反应能力，当*Ag和Ab的量恒定，且Ag+ *Ag的分 子数〉抗体的分子数 ，*Ag与Ag相互竞争同Ab结合， 彼此抑制，待测Ag与*AgAb呈负相关函数关系。
三．免疫放射分析（IRMA） 四. 非放射性标记免疫分析技术
酶免疫分析（EIA） 化学发光免疫分析（CLIA） 时间分辨荧光免疫分析（TrFIA）
概
述
1.历史回顾
1959年Berson、Yalow开创了放射免疫分析。 于1977年荣获诺贝尔生年Miles和Hales建立了免疫放射分析。 近年来化学发光、电子化学发光、荧光时间 分辨等非放射性标记免疫分析自动化技术先 后问世，检测灵敏度提高到了10–15g。
基 本 定 义
半抗原---分子量小于5000的肽类，
需与载体蛋白结合才能引起免疫应 答. 抗体（Antibody,Ab）是由B细胞识 别抗原后增殖分化为浆细胞所产生 的一类能和相应抗原特异性结合的 具有免疫功能的球蛋白。
主 要 内 容
一 . 二 .
概述 放射免疫分析（RIA）
基本试剂 操作过程 质量控制 基本原理 分离技术
化学发光免疫分析（CLIA）
荧光免疫分析（FIA） 时间分辨荧光免疫分析（TrFIA） 颗粒计数免疫分析（PACIA） ……
主 要 内 容
一 . 二 .
概述 放射免疫分析（RIA）
基本试剂 操作过程 质量控制 基本原理 分离技术
三．免疫放射分析（IRMA） 四. 非放射性标记免疫分析技术
125I的特性：
碘元素共有 29 种同位素，其中 23 种放 射性核素，125I最为常用，优点：
半衰期适中（60天），易于商品化和储存， 也利于废物处理； 只发射28keV χ线和35keV γ射线（无β）， 容易测量，辐射自分解少，标记物足够稳定； 化学性质活泼，标记容易，可得到多种标记 物而广泛应用。
1.
2. 3.
样品或标准品 标记物 分离剂 抗血清
混匀 温浴
混匀 立即
1. 加样
2. 加分离剂
3. 离心
4. 去上清分离 5. 测量
RIA分离技术
目的：将游离*Ag 和*AgAb有效分离。 小分子
活性炭吸附法
大分子
沉淀法
Ab
固相法
聚乙二醇
Ag
*Ag
Ab
Bound
Free
B
0.67
F
0.33
B/F
2
0.50
0.50
1
0.33
0.67
0.5
0.17
0.83
0.2
竞争放射分析原理示意图
B/F
B/B0% 100
2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 0 5 10 15 20 0 0 5 10 15 50
剂量-标准抗原浓度
剂量-标准抗原浓度
抗原的概念
基 本 定 义
抗原（antigen,Ag)：是一类能刺激机体免
疫系统发生免疫应答，并能与相应免疫应 答产物（抗体和致敏淋巴细胞)在体内外发 生特异性结合的物质。 抗原的两种特性：免疫原性和抗原性 免疫原性（immunogenicity),能刺激机体 发生免疫应答，产生抗体和致敏淋巴细胞 的能力。 抗原性（antigenicity),能与相应抗体或 致敏淋巴细胞发生特异性结合的能力。
RIA基本试剂
2、标准抗原（标准品）
是已知含量并呈梯度浓度的系列 标准抗原，作标准曲线用。 要求： 保证与被测物具有相同的免疫活 性和相同介质。
RIA基本试剂
3、抗体
RIA使用：多克隆抗体 单克隆抗体
衡量抗体质量的指标是：
亲和力:抗体结合的强度
特异性:不受交叉反应物质影响的程度 滴度:抗体的效价——抗体实际应用时
体外放射分析
山西医科医科大学第一医院核医学科
基 本 定 义
定义：全称体外放射配体结合分 析---指在体外条件下，以放射性核素
标记的配体为示踪剂，以结合反应为基 础，以放射性测量为定量手段，对微量 活性物质进行定量分析的一类检测技术 的总称。
配体---能与结构上某一部位起互补结
合的分子或化合物，如抗体、抗原，受 体、蛋白激素
待测Ag与*AgAb呈负相关函数关系
RIA操作过程
配制已知浓度系列标准抗原（Ag）---现
多由厂家提供已配置好的标准品
加待测抗原（Ag）和抗体（Ab）--温育 加标记抗原（*Ag）和抗体（Ab）--温育 分离复合物*AgAb（B）和游离*Ag（F） 用γ计数器测量放射性计数 根据标准曲线或计算机直接算出
酶免疫分析（EIA） 化学发光免疫分析（CLIA） 时间分辨荧光免疫分析（TrFIA）
放射免疫分析（RIA)
（Radioimmunoassay RIA）
RIA主要内容
基本试剂 基本原理 操作过程 分离技术 质量控制
♣ ♣♣ ♣♣ ♣
RIA定义
是利用标记抗原和非标记抗原竞争结合
其特异抗体，给予充分的时间，使反应达