放射免疫分析
放射免疫分析技术(1)
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一、放射免疫技术－原理及分类
放射免疫
RIA
以标记抗原与反 应系统中未标记 抗原竞争结合特 异性抗体来测定 待检样品中抗原
量。
免疫放射
IRMA
以过量标记抗体 与抗原非竞争结 合，采用固相免 疫吸附载体分离 游离和结合标记
抗体。
其它 ➢放射受体分析 RRA(标记受体检测抗原)
➢放射配体结合 分析RBA
白，沉淀物放射性占待测样品总放射线的百分率）
➢应大于95% ➢也是观察标记物脱碘程度的重要指标
免疫活性
➢标记物与抗体结合的能力 ➢标记物与过量抗体反应，与抗体
结合的标记物的放射性与加入标
记物的总放射线的百分比
➢该值越大, 标记物免疫活性好，应大于
80%
➢完整反版映课被件p标pt 记物免疫活性受损情况
结合率与测值成正比
待测抗原
大小分子
二抗原决定簇
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放射免疫分析技术的应用
放射免疫分析技术的灵敏度高、特异性强、精密度好, 常用于各种激素、微量蛋白质、肿瘤标志物和药物等微 量物质的测定。但由于放射污染和危害，常用核素半衰 期短，试剂盒稳定期不长等诸多不足, RIA将逐渐被取 代。
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思考题
1.放射免疫技术的核心是什么？ 2.制备放射性125I标记物的基本原理是什么？有哪些方法？ 3.评价125I标记物质量的指标有哪些？ 4.用于放射免疫技术的抗体应满足哪些质量标准？ 5.放免分析中标记/未标记抗原、抗体的用量特点及与免疫复合物的
量变关系？
6.反应结束后，如何将免疫复合物与游离标记物分离开？ 7.放射免疫分析实验中，如何确定待测抗原的含量？ 8.免疫放射分析与放射免疫分析的反应原理有何不同？ 9.γ闪烁计数器记录的信号即是放射核素的衰变吗？ 10.灵敏度、特异性和测定范围，免疫放射分析与放射免疫分析有
放射免疫分析
放射免疫分析文章目录*一、放射免疫分析的基本信息1. 定义2. 专科分类3. 检查分类4. 适用性别5. 是否空腹*二、放射免疫分析的正常值和临床意义1. 正常值2. 临床意义*三、放射免疫分析的检查过程及注意事项1. 检查过程2. 注意事项*四、放射免疫分析的相关疾病和症状1. 相关疾病2. 相关症状*五、放射免疫分析的不适宜人群和不良反应1. 不适宜人群2. 不良反应放射免疫分析的基本信息1、定义放射免疫技术为一种将放射性同位素测量的高度灵敏性、精确性和抗原抗体反应的特异性相结合的体外测定超微量(10-9-10-15g)物质的新技术。
广义来说,凡是应用放射性同位素标记的抗原或抗体,通过免疫反应测定的技术,都可称为放射免疫技术,经典的放射免疫技术是标记抗原与未标抗原竞争有限量的抗体,然后通过测定标记抗原抗体复合物中放射性强度的改变,测定出未标记抗原量。
它可以分为两类:竞争性RIA(adioimmunoassay)和非竞争性RIA,也称为免疫放射分析。
2、专科分类生长发育检查3、检查分类内分泌检查4、适用性别男女均适用5、是否空腹空腹放射免疫分析的正常值和临床意义1、正常值常规免疫:mg~μg(10-3~10-6 g);荧光免疫酶免疫: μg~ng(10-6 ~10-9 g);放射免疫,发光免疫:ng~pg(10-9 ~10-12 g);PCRpg~fg(10-12 ~10-15 g)。
2、临床意义激素类检测:在垂体性腺激素卵泡刺激素(FSH),黄体生成激素(LH),睾丸酮(T),雌二醇(E2),孕酮(P),催乳素(PRL),人生长激素(HGH),人绒毛膜促性腺激素(HCG),人胎盘催乳素(HPL)等。
甲状腺腺激素。
肿瘤类检测:甲胎蛋白(AFP),癌胚抗原(CEA),糖蛋白抗原(CA19-9),糖蛋白抗原(CA-125,CA15-3),β2微球蛋白(β2-MG), 铁蛋白放射免疫分析(SF),前列腺特意抗原(PSA)。
放射免疫分析法
放射免疫分析（radioimmunoassay，RIA）是以放射性核素为标记物的标记免疫分析法。
于1960年由美国学者Yalow和Berson创立，并首先用于糖尿病患者血浆胰岛素含量的测定。
这是医学和生物学领域中方法学的一项重大突破，开辟了医学检测史上的一个新纪元。
它使得那些原先认为是无法测定的极微量而又具有重要生物学意义的物质得以精确定量，从而为进一步揭开生命奥秘打开了一条新的道路，使人们有可能在分子水平上重新认识某些生命现象的生化生理基础。
此后30年，内分泌学科的飞速进展充分证明了这一超微量分析技术的巨大推动力。
1977年，这项技术的发明者荣获诺贝尔生物医学奖。
随后这一崭新的技术迅速渗透到医学科学的其他领域，如病毒学、药理学、血液学、免疫学、法医学、肿瘤学等，以及与医学生物学相关的学科，如农业科学、生态学及环境科学等。
放射免疫分析的物质，由激素扩大到几乎一切生物活性物质。
我国放射免疫分析研究起步于1962年，并迅速发展与普及，对我国生物医学的进展起了很大的促进作用。
放射免疫分析由于敏感度高、特异性强、精密度高、并可测定小分子量和大分子量物质，所以在检验医学中应用极为广泛，常用于测定各种激素（如甲状腺激素、性激素、胰岛素等）、微量蛋白质、肿瘤标志物（如AFP、CEA、CA—125、CA—199等）和药物（如苯巴比妥、氯丙嗪、庆大霉素等）等。
各种检测项目均有试剂盒供应，而且仪器设备并不昂贵，所以在国内被广泛采用。
但由于核素的放射性对人体有一定的危害性，必须加以防护，核素实验室的建设须经防疫部门的监督，操作人员须经过特殊训练。
另外，由于核素有半衰期，试剂盒的货存期较短，因而放射免疫分析在应用中有诸多不便之处。
特别是近年来其他标记免疫分析技术如酶免疫分析、发光免疫分析等在技术上有飞跃的进展，高级仪器的自动化程度已可与生化自动分析仪相媲美，因此从长远前景看，放射免疫分析有被取代的趋势。
但在目前，从所需的设备和检测的费用上，放射免疫分析还有一定的优越性，还将在一定时期内被医学检验实验室所采用。
放射免疫分析临床应用刘冬
放射免疫分析临床应用刘冬放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA）是一种以放射性示踪剂和免疫反应结合技术来测定生物标志物的一种方法。
该技术已广泛应用于临床医学中用于检测和测量患者体内的一些特定物质含量，如激素、抗体、肿瘤标志物等。
本文将重点介绍放射免疫分析在临床应用中的一些例子。
一、激素测定激素是机体内起调控作用的重要化学物质。
通过测定患者体内激素的水平，可以评估一些疾病的发生和发展，以及患者对治疗的反应。
常见的激素测定项目包括甲状腺激素、生长激素、性激素等。
放射免疫分析可以通过测定血液或尿液中激素的浓度，来帮助医生进行确诊和治疗方案的制定。
例如，对于甲状腺功能亢进患者，可以通过测定血液中的甲状腺素水平来确定是否需要进行手术或药物治疗。
二、肿瘤标志物测定肿瘤标志物是一种可以在肿瘤患者体内检测到的特殊物质。
通过测定血液中的肿瘤标志物的水平，可以帮助医生进行肿瘤的筛查、诊断和监测治疗效果。
放射免疫分析可以对常见的肿瘤标志物，如癌胚抗原（CEA）、前列腺特异性抗原（PSA）等进行快速、准确的检测。
例如，在临床上，对于可能患有肺癌的患者，测定血液中的CEA水平可以帮助医生进行早期诊断和有效治疗。
三、感染性疾病诊断感染性疾病的早期诊断对于患者的治疗和康复至关重要。
通过测定患者体液中的抗体水平，可以判断患者是否被特定的病原体感染。
放射免疫分析可以用来检测和诊断一些常见的感染性疾病，如乙肝、艾滋病等。
例如，对于可能患有乙型肝炎的患者，可以通过测定血液中的乙肝病毒表面抗原（HBsAg）和乙肝病毒表面抗体（HBsAb）来判断患者的感染状态和治疗效果。
综上所述，放射免疫分析技术在医学临床应用中发挥着重要的作用。
通过对患者体内特定物质含量的测定，可以帮助医生进行疾病的早期诊断、有效治疗和预后评估。
随着医学技术的不断发展，放射免疫分析技术在临床应用中的前景将会更加广阔。
简述放射免疫分析方法的基本流程图解
简述放射免疫分析方法的基本流程图解下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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放射免疫分析
202043;
+
+
+
+
+
Ag
Ab
+
Bound
Free
标准曲线
• 标准曲线又称为剂量反应曲线， 以一系列递增浓度的Ag及一定 量的Ag*与恒定量限量的Ab竞 争结合反应而得，是对待测物进 行定量分析的基础。
2020/11/3
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标准曲线实例
2020/11/3
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标准曲线:
① 配制一系列已知浓度的标准抗原，分别向其中加入固定 量的标记抗原和抗体，反应平衡后，分离抗原的结合部分和 游离部分，测定*Ag-Ab的放射性B。 ②B0为标准抗原浓度=0时的放射性值。
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第三章 放射免疫分析
放射免疫分析法 免疫放射分析法 临床应用
2020/11/3
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放射免疫分析法 （Radioimmunoassay，RIA）
• 1959年，Yalow和Berson创立了放射 免疫分析法（RIA），并因此于1977 年获得诺贝尔生物医学奖。
• 这种方法结合了放射性核素测量的 高灵敏性和免疫抗原-抗体反应的高 特异性两大特点，开创了生物活性 物质微量测定技术的先河。
• 3．滴度 （效价）高：指将血清稀释时能与抗原
发生反应的最高稀释度。它反映抗血清中有效抗 体的浓度。稀释倍数越高，滴度(titer)越高，表 示抗体的效价越高。
• 4．稳定性好：能长期保存，化学性质、效价稳
定。 2020/11/3
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• b. 抗血清的制备：
• 1.大分子物质可直接免疫动物诱导抗体产生，但 是小分子物质为半抗原，必须与载体结合制成人 工抗原（半抗原-蛋白质），才能进行免疫。
放射免疫分析名词解释
放射免疫分析名词解释
放射免疫分析（RIA）是一种检测技术，可以用来测定多种体内物质，包括激素、细胞因子、蛋白质和抗原。
它可以应用于动物和人体，并且具有灵敏度高、可操作性好的优点，被广泛应用于临床和科研领域。
放射免疫分析由以下几个步骤构成：首先，将样本中待测物质结合到放射抗体中。
放射抗体是一种特异性抗体，能够特异性结合待测物质，避免其他物质干扰检测结果。
放射抗体可以是膜抗原抗体、非膜抗原抗体或者多肽抗体。
其次，将样本和放射抗体制成滴定曲线，测定放射抗体结合待测物质的含量。
最后，通过计算放射抗体浓度滴定曲线的相关系数来计算样本中的待测物质的含量。
放射免疫分析为临床和科研提供了许多方便，特别是在生理学方面，其应用极为广泛。
它可以用来检测各种激素、蛋白质和细胞因子的表达水平，对疾病的研究有重要意义。
放射免疫分析也可以检测各种抗原，为临床诊断疾病提供有力的支持。
放射免疫分析由于具有高灵敏度和特异性，可以很好地检测微量物质，在临床和科研领域具有重要的应用价值。
近年来，放射免疫分析在药物研发和食品质量检测方面也越来越受到重视，为科学研究和技术创新提供重要的技术支持。
综上所述，放射免疫分析是一种重要的检测技术，它不仅在临床检测中具有重要的应用价值，而且也受到越来越多科学研究和技术创新的重视。
它也可以帮助我们更准确、更早期地诊断疾病，为患者身
体健康提供有力的支撑。
简述放射免疫分析方法的基本流程图
简述放射免疫分析方法的基本流程图English Answer：Radioimmunoassay (RIA) is a technique used to measure the concentration of a specific antigen or antibody in a sample. The basic procedure of RIA involves the following steps:1. Preparation of radiolabeled antigen or antibody: The antigen or antibody of interest is labeled with a radioactive isotope, such as 125I or 3H. This labeled antigen or antibody is called the tracer.2. Incubation of the tracer with the sample: The tracer is incubated with the sample containing the unknown amount of antigen or antibody. During this incubation, the tracer competes with the unlabeled antigen or antibody in the sample for binding to a limited number of binding sites on a solid-phase support, such as a microplate or beads.3. Separation of bound and free tracer: After the incubation, the bound and free tracer are separated. This can be done by centrifugation, filtration, or precipitation.4. Quantification of the bound tracer: The amount of bound tracer is measured using a scintillation counter or gamma counter. The amount of bound tracer is inversely proportional to the concentration of the antigen orantibody in the sample.Based on the amount of bound tracer, a standard curve can be constructed by plotting the known concentrations of antigen or antibody against the corresponding counts per minute (CPM). The concentration of the unknown antigen or antibody in the sample can then be determined byinterpolating its CPM value on the standard curve.RIA has a high degree of sensitivity and specificity, making it a valuable tool for quantifying antigens and antibodies in various biological samples. It has beenwidely used in research, clinical diagnostics, and drug development.中文回答：放射免疫分析法（RIA）是一种用于测量样品中特定抗原或抗体浓度的技术。
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剂量反应曲线
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放射免疫分析原理示意图
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三、放射免疫测定的优点
1）灵敏度高 大分子，ng/ml水平；小分子，pg/ml水 平。
2）特异性好 3）精确地定量 4）操作方法越来越简便 5）抗体的来源日益广泛，放射免疫可测定的微量物
质越来越多。
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第二节 放射免疫基本试剂
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一、标准品
标准品是放射免疫分析法定量的依据，由于以标准 品的量用来表示被测物质的量，标准抗原的基本要求： (1)标准抗原与待测抗原的免疫性必须一致，即它们与
以在测定中得到的相应放射性强度为纵坐标作图。 放射性强度可任选B或F，亦可用计算值B/(B＋F)、 B/F和B/B0 （零标准管结合） 。标本应作双份测定， 取其平均值，在制作的标准曲线图上查出相应的受 检抗原浓度。
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34
第四节 放射免疫的质控
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一、质量控制的目的
控制系统误差，减少偶然误差。 系统误差：1、试剂盒的质量；
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五、缓冲液
目前最常用的缓冲液有下列几种：①磷酸盐缓 冲液；②醋酸盐缓冲液；③Tris –HCl缓冲液；⑤硼 酸缓冲淮。其中以磷酸盐缓冲液应用最多。 ①保护蛋白 ②防腐剂 ③酶抑制剂 ④阻断剂 ⑤载体蛋白
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六、试剂盒要注意的问题
1）检查药盒的数量与药盒说明书是否一致（一般 药盒内装有标记抗原、抗体、标准品、分离剂）。
特别适用于微量蛋白质、激素和多肽的定量测定。
4
二、基本原理
1、标记抗原（Ag*） 、非标记抗原（Ag）和特异性抗体 （Ab）三者同时存在于一个反应体系，标记抗原和非标 记抗原对特异性抗体具有相同的结合力，两者相互竞争 结合特异性抗体。
Ag* + Ab = Ag* Ab +
Ag AgAb
5
=
2、作为试剂的标记抗原和抗体的量是固定的，非标 记抗原是变化的。标记抗原与非标记抗原与限量的抗 体发生竞争性结合。反应达到平衡时，标记抗原抗体 复合物形成的量就随着非标记抗原的量而改变。
三、脑-肠肽类
胃动素（MTL）——抑肽酶-EDTA 神经降压素（NT）——抑肽酶-EDTA 神经肽（NPY）——抑肽酶-EDTA 胃泌素——血清
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四、骨代谢类
骨钙素（BGP）——血清 降钙素（CT）——血清 甲旁素相关肽——抑肽酶-EDTA
五、甲状腺功能类
游离T3 游离T4 甲状腺球蛋白TG 总T3 总T4 都为血清
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二、测定方法
用放射免疫分析进行测定时分三个步骤，即抗原 抗体的竞争抑制反应、B和F的分离及放射性的测量。
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T：总放射性,只有标记抗原时的放射性。 B0：待测抗原剂量为零时的最大结合。 NSB：非特异结合，标记抗原结合在非抗血清的物质
上的部分。
非特异结合率： （NSB/T）× 100% 最大结合率：（ B0 / T）× 100%
NSB（非特异结合管）<5%；B0/T最大结合率为 50%时曲线最好，但最大结合率>25%曲线就能用，结 合率低于20%曲线就不能用。
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第五节 放射免疫的应用
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一、心血管功能类：
血栓素（TXB2）——消炎痛-EDTA抗凝
6-酮-前列腺素F1α——消炎痛-EDTA抗凝
内皮素ET——抑肽酶-EDTA
2）标准品，抗血清、标记抗原要在-20℃以下保存， 加样前要将标准品、抗血清、标记抗原充分混匀， 标记抗原最好当天溶解，当天使用。
3）分离剂不能冷冻保存应保存在4℃冰箱内。
4）缓冲液，每种药盒的缓冲液不相同，不能相互
使用。
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第三节 放射免疫测定
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一、样品的处理
血清、血浆（抗凝），尿液，组织匀浆 用蒸馏水或缓冲液作适当稀释。 血清或血浆抽入试管-20℃保存3个月， -70℃ 保存6个月。
(3)聚乙二醇（PEG）沉淀法：PEG沉淀剂的主要优 点是制备方便，沉淀完全。缺点是非特异性结合 率比用第二抗体为高，且温度高于30℃时沉淀物 容易复溶。
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2、特异性分离法 (1)双抗法(Ab2法) (2)固相分离法：将特性抗体(第一或第二抗体) 或抗原结合在固相物质。 (3)金黄色葡萄球菌A蛋白分离法。
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（一）抗原抗体反应 将受检标本、标记抗原和抗血清按顺序定量加
入小试管中，在一定的温度下进行竞争抑制反应。 37℃，2h或4℃过夜。
加样程序
由于抗原、标记抗原和抗体三者加样次序不同， 而出现两种加样程序，分述如下：
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1、平衡饱和加样程序 （1）基本原理：让标记Ag和非标Ag与Ab以相同的机 率反应，反应达到平衡后中止反应，分离结合和游离 的标记Ag。 （2）加样程序：一般先加标准物或被测样品，再加 抗血清，最后加标记物。这样的顺序是让标准物或被 测物与抗体有短暂的结合，提高抗原的竞争抑制能力。
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试剂 缓冲液 标准液
样品 抗血清 125I-IL-2
PR分离剂
IL-2 RIA加样程序（μL）--B5
-
200
100
-
-
-
-
100
-
-
-
-
-
-
100
100
100
100
100
100
摇匀 4℃
24h
-
500
500
500
样品
-
100 100 100
500
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2、顺序饱和加样程序 （1）基本原理：先将标准物或样品与抗血清混匀， 免疫反应12～24h，使抗原与抗体充分结合，然后再 加入标记抗原，与抗体反应6～24h，最后分离B与F， 这称为顺序饱和分析法。 （2）应用顺序饱和加样，第1次温育时间可以长， 而第2次温育时间要短，这样可以提高灵敏度。
标记125I的方法可分两大类，即直接标记法和间接 标记法。
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三、抗体（抗血清）
抗血清中含有对其相应抗原的特异性抗体。 目前常以抗原免疫年轻、健康的纯种小动物而诱 发产生多克隆抗体，选取特异性高、亲和力强及 滴度高的血清，为RIA所用。
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四、B与F分离剂
以2%加膜活性炭溶液为例，2%加膜活性炭 溶液的配制： 活性炭2g（杭州木材厂生产，森工牌732型） 右旋糖酐T200.2g 加0.1mol/L PBS 至100ml 电磁搅拌1h，然后置于普通冰箱待用。
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（三）放射性强度的测定
B、F分离后，即可进行放射性强度测定。测量 仪器有两类，液体闪烁计数仪（β射线，如3H、32P、 14C等）和晶体闪烁计数仪（ γ射线，如125、131I、 57Cr等）。
计数单位是探测器输出的电脉冲数，单位为cpm （计数/分），也可用cps（计数/秒）表示。
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（四）标准曲线的制备 用半对数纸，以标准抗原的不同浓度为横坐标，
降钙素基因相关肽——抑肽酶-EDTA
心钠素ANP——抑肽酶-EDTA
肾上腺髓质素ADM——抑肽酶-EDTA
醛固酮——肝素抗凝
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二、多肽因子类
肿瘤坏死因子TNF、IL-1β、 IL-2、 IL-4、 IL-8、 IL-10、 粒细胞-集落细胞刺激因子、胰岛素样生长因子-2、红细胞生 成素（EPO）
放射免疫分析
Radio immunoassay （RIA）
王海龙 2006.03
探讨的主要内容
基本概念 基本原理 放射免疫方法的建立 放射免疫分析的要求和影响因素 免疫放射的基本概念 放免分析的应用
2
第一节 放射免疫概述
3
一、概念
一种体外超微量分析法，它是将具有高灵 敏度的放射性核素（如125I）示踪技术与高度 特异性的免疫化学技术二者结合建立起来的分 析方法。用于定量测定受检标本中的抗原。
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试剂 缓冲液 标准液
样品 抗血清
125I-URO
PR分离 剂
尿钠素 RIA加样程序（μL）
T
NSB
B0
B1---B5
-
300
200
-
-
-
-
200
-
-
-
-
-
-
100
100
摇匀 4℃
48h
100
100
100
100
摇匀 4℃
24h
-
500
500
500
样品
-
200 100
100
500
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（二）B、F分离技术 在RIA反应中，标记抗原和特异性抗体的含量
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六、肿瘤检测类
甲胎蛋白（AFP） 癌胚抗原（CEA） 铁蛋白 β2微球蛋白
七、糖尿病类
胰岛素 胰岛素抗体 C-肽
胰高血糖素
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八、 吗啡、叶酸、维生素 性激素类
44
45
抗体的亲和力和特异性应相同。 (2) (3)标准抗原的量必须准确。 (4)标准抗原应有很好的稳定性。
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二、标记物
1、标记抗原应具备： ①比放射性高，以保证方法的灵敏度； ②免疫活性好； ③所用的核素的半衰期尽可能长，标记一次可较
长时间使用，这对来之不易的抗原尤其重要； ④标记简便、易防护。
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2、标记用的核素有放射γ射线和β射线两大类。 前者主要为131I、125I、57Cr和60Co；后者有14C、3H 和32P。放射性核素的选择首先考虑比活性。125I是 目前常用的RIA标记物。
非标记抗原量增加，相应地结合较多的抗体，从 而抑制标记抗原对抗体的结合，使标记抗原抗体复合 物相应减少，游离的标记抗原相应增加，亦即抗原抗 体复合物中的放射性强度与受检标本中抗原的浓度呈 反比。
6
3、将Ag* Ab与游离Ag*分开，分别测定其放射性强度， 就可算出结合态的Ag* （B）与游离态的Ag* （F）的 比值（B/F），或算出其结合率[B/(B＋F)]，这与标 本中的抗原量呈函数关系。用一系列不同剂量的标 准抗原进行反应，计算相应的B/F，可以绘制出一条 剂量反应曲线。 4、受检标本在同样条件下进行测定，计算B/F值， 即可在剂量反应曲线上查出标本中抗原的含量。