放射免疫分析
• b. 常用的分离方法
• 1. 双抗体法
– 特点： 分离完全，非特异结 合小，环境影响小， 效价高，但分离时间 长，成本高。
• 2. 沉淀法 聚乙二醇（w=6000）
– 特点： 快速，价廉，来源方便，受环境影响大
• 3. 双抗体PEG法
– 将双抗体和沉淀法两者结合进行分离。
– 本法具有两种方法的优点，并克服了双抗体分离时间 长和沉淀法非特异性结合高的缺点。
• b. 抗血清的制备：
• 1.大分子物质可直接免疫动物诱导抗体产生，但 是小分子物质为半抗原，必须与载体结合制成人 工抗原（半抗原-蛋白质），才能进行免疫。 • 2．选择合适的免疫动物：兔、鼠、羊。 • 3．应用佐剂：福氏完全佐剂与不完全佐剂（羊毛 脂、石蜡油 +卡介苗）。 • 4．选择合适的免疫方法：剂量、接种途径（腹股 沟、腋窝、脊柱两侧皮内多点）、间隔时间（加 强）与次数。
放免分析的优点
• 灵敏度高
• 特异性强
• 精确度高
• 用血量少
• 缺点：污染；放射性核素衰变及不 稳定
第三章 放射免疫分析
放射免疫分析法 免疫放射分析法 临床应用
免疫放射分析法 （immunoradiometric assay， IRMA）
• 1968年，Miles和Hales创立了免疫放射分析法 （IRMA）。 • IRMA与IRA不同，它是将放射性核素标记在抗体 上，而不是标记在抗原上。同时所用的标记抗体 与待测抗原比较是过量的。
• CA50——胰腺癌、肝癌、结、直肠癌、卵 巢癌、子宫癌、胃癌、肺癌、食道癌。 • CA19-9——对胰腺癌和胆囊癌诊断有较高 特异性，阳性率＞80%，绝对值升高明显。 • CA125——非粘液性卵巢癌诊断特异性强。 • CYFRA21-1——肺癌的诊断和疗效观察。
五 心血管疾病
• 内皮素（ET）
（二）特异性抗体
• a. 对特异性结合抗体的要求： • 1．亲和力 （affinity）高：指单个抗体分子与抗 原决定簇特异结合的能力，用 亲和常数Ka 值表 示，反映灵敏度，Ka应达109~1012mol/L。 • 2．特异性高：与待测抗原的结合力高，而与待 测抗原类似物的结合能力（交叉反应率）低。 • 3．滴度 （效价）高：指将血清稀释时能与抗原 发生反应的最高稀释度。它反映抗血清中有效抗 体的浓度。稀释倍数越高，滴度(titer)越高，表 示抗体的效价越高。 • 4．稳定性好：能长期保存，化学性质、效价稳 定。
Ag+Ab*
Ag-Ab*+Ab* B F
• 由上式可见， IRMA不存在竞争反应，是待测抗 原直接与标记抗体反应。待测抗原的量与抗原标记抗体复合物的量成正相关关系。
1.单位点IRMA
• 单位点（one-site）IRMA是利用过量的标记抗体（Ab*） 与待测抗原（Ag）进行免疫结合反应，形成抗原标记抗体 复合物，当反应达到平衡后，再用固相抗原免疫吸附剂 （SP-Ag）与剩余的标记抗体结合，并将其分离。
四 肿瘤
• 甲胎蛋白（AFP）
• 甲胎蛋白作为一种肿瘤特异性抗原，对早期诊断原 发性肝癌具有较高灵敏性和特异性。阳性率在 60%~85%。
• 癌胚抗原（CEA）
• 癌胚抗原首先是从结肠癌和胚胎组织中提取的一种 肿瘤相关抗原，癌胚抗原升高和消化道肿瘤密切相 关。胃癌患者阳性率可高达50%以上。
• 糖类抗原（carbohydrate antigen， CA）
放射免疫分析技术的临床应用
• • • • • • 一 甲状腺疾病 二 代谢类疾病 三 骨和矿物质代谢 四 肿瘤 五 心血管疾病 六 器官移植中的药物监控
一 甲状腺疾病
• • • • • • TSH 促甲状腺激素 STSH 高灵敏度甲状腺激素 FT3 血清游离三碘甲状腺原氨酸 FT4 游离甲状腺素 TgAb 抗甲状腺球蛋白抗体 TmAb抗甲状腺微粒体抗体
临床上确诊为甲状腺功能亢进的步骤
STSH,FT3,FT4
STSH↓,FT3↑,FT4↑
STSH↓,FT3↑,FT4正常
STSH↓,FT3↑,FT4正常
确诊甲亢
摄131Ⅰ率
摄131Ⅰ率
摄131Ⅰ率
摄131Ⅰ率↑ 摄131Ⅰ率↓ 摄131Ⅰ率↑ 摄131Ⅰ率↓
摄131Ⅰ率↑或正常
摄131Ⅰ率↓
T4甲亢 （伴有甲肿）
• 骨钙素（OC）
• 骨钙素由成骨细胞合成，在合成过程中不断有少量 骨钙素释放到循环系统中，骨钙素的水平直接反映 骨骼生成状况，其检测可以帮助评价骨骼更新程度， 高水平的骨钙素与骨代谢病相关。 • 整分子骨钙素放免药盒（intact OC IRMA kit）可 以用于软骨病、Paget骨病、甲状腺功能亢进、肾 性营养不良、绝经后骨质疏松症的检测。
STSH,FT4
STSH↑,FT4↓
原发性甲低
有甲状腺肿
无甲状腺肿
抗甲状腺抗体阳性
抗甲状腺抗体阴性
抗甲状腺抗体阳性
抗甲状腺抗体阴性
桥本甲状腺炎
①激素合成障碍 ②药物引起（碘、锂） ③碘缺乏症（地甲肿）
抗甲状腺抗体阳性
①131I治疗后 ②甲状腺手术后或甲腺外照射 ③无甲状腺肿克丁病
二 代谢类疾病
• 胰岛素原（proinsulin）
病人服T3，（多无甲 肿）
T4甲亢 （伴有甲肿）
病人服T3，（多无甲 肿，FT4有时↓）
①毒性弥漫性甲肿（Graves 病） ②多结节甲肿（结节性甲亢） ③大的单个结节 （自主性结节甲亢）
有甲肿时多为： ①亚甲炎伴甲亢 ②碘致甲亢 ③甲状腺内转移癌伴甲 亢
无甲肿时多为医源性甲 亢
临床上确诊为甲状腺功能减退的步骤
2.双位点IRMA
• 将抗体1结合于固相表面，加入标本后，待测抗原与固 相抗体形成抗原-抗体复合物，并留在固相表面。洗去 其他物质后，加入标记抗体2，在固相表面形成抗体抗原-标记抗体复合物，再洗去多余标记抗体，即可达 到分离目的。
竞争性分析与非竞争分析的比较
第三章 放射免疫分析
放射免疫分析法 免疫放射分析法 临床应用
第三章 放射免疫分析技术
体外放射分析技术
• 利用放射分析方法或其派生的相 关技术在体外进行体内物质种类 和含量的分析测定。
竞争性放射分析——放射免疫分析（RIA）
非竞争性放射分析——免疫放射分析（IRMA）
待测物质浓度与检测手段
临床化学分析
-12 10
pg/mL -9 10 -6 10 mg/mL -3 10 mg/mL -0 10 g/L
• 1,25二羟基维生素D及25羟基维生素D
• 体内维生素D经日光紫外线照射、且在C1和C25位 羟基化后，才能转变为有活性的维生素D代谢物。 • 测定血清中1,25二羟基维生素D及25羟基维生素D 的浓度可鉴别与维生素代谢有关的疾病。目前国内 用维生素D放免药盒用于维生素D缺乏症、骨营养 不良、肝炎和药物性维生素D紊乱、甲状旁腺功能 亢进或减退的测定。
• 正常生理条件下，胰岛素原分子释放很少，占 总分泌5%-10%，因此不考虑其对胰岛素测定 的影响。在病理情况下，如胰岛素瘤，血中胰 岛素原可达50%-70%。目前，市场上已有用 纯胰岛素原做为标准品的放免药盒，可用来直 接测定血清或血浆中的胰岛素原含量。
• 人真胰岛素(insulin specific)
• ET是一种内皮细胞来源的血管活性多肽，主要分
放射免疫分析法 （Radioimmunoassay，RIA）
• 1959年，Yalow和Berson创立了放射 免疫分析法（RIA），并因此于1977 年获得诺贝尔生物医学奖。 • 这种方法结合了放射性核素测量的 高灵敏性和免疫抗原-抗体反应的高 特异性两大特点，开创了生物活性 物质微量测定技术的先河。
女科学家 R.Yalow
基本原理
竞争结合：放射性标记的抗原（Ag*）和非 标记的抗原（Ag）在同一反应系统中与特异 性抗体（Ab）的竞争性结合。 Ag + Ab + Ag* Ag-Ab
Ag*-Ab
• 在上反应式中：
• Ag与Ag*的免疫活性相同，即 与Ab有相同的亲和力； • Ab的结合位点数＞Ag或Ag*， 但＜Ag+Ag*； • Ag*与Ab的量是恒定的，Ag是 待测量。
②B0为标准抗原浓度=0时的放射性值。
放免分析基本条件
• （一）标准抗原 • （二）特异性抗体 • （三）标记抗原 • （四）分离技术
（一）标准抗原
• a. 概念：是指已知真实含量，且不含对免疫反应 产生干扰杂志的抗原。 • b. 用途： • 免疫动物制备抗体——Ab • 放射性核素标记——Ag* • 绘制剂量反应曲线 • c. 要求： • 高纯度 • 高准确度 • 良好的稳定性
c.单克隆抗体的使用：
•
•
特异性高
亲和力低，不一定优于传统的多克隆抗
体
（三）标记抗原
• 对标记抗原的要求：
• 1．放射性比活度高：即单位物质的放射性强
度高，一般至少达到370GBq/mmol。
• 2．免疫活性：与标记前一致。
• 3．放射化学纯度高：应 > 95%。
• 4．稳定性好：标记的同位素不易脱落。
ng/mL
免疫分析
Therapeutic Drugs Thyroid Hormone Fertility Hormone
Allergy Cancer Markers Infectious Disease Vitamins Serum Proteins
第三章 放射免疫分析
放射免疫分析法 免疫放射分析法 临床应用
货架期短 以125I取代H，可能影响 免疫活性 标记方法简单，比活度高 γ射线测量效率高
对分离方法的要求：
• 1．使抗原-抗体复合物（B）与游离抗原（F）尽 可能分离完全； • 2．分离后便于放射性测量； • 3．分离效果不受外界干扰因素的影响； • 4． 操作简便、分离迅速、重复性好； • 5．与游离标记物的非特异性结合尽可能小； • 6. 试剂来源广泛、价格低廉。
放射免疫分析
剂量反应曲线
8
放射免疫分析原理示意图
9
三、放射免疫测定的优点
1）灵敏度高 大分子，ng/ml水平；小分子，pg/ml水 平。
2）特异性好 3）精确地定量 4）操作方法越来越简便 5）抗体的来源日益广泛，放射免疫可测定的微量物
质越来越多。
10
第二节 放射免疫基本试剂
11
一、标准品
标准品是放射免疫分析法定量的依据，由于以标准 品的量用来表示被测物质的量，标准抗原的基本要求： (1)标准抗原与待测抗原的免疫性必须一致，即它们与
以在测定中得到的相应放射性强度为纵坐标作图。 放射性强度可任选B或F，亦可用计算值B/(B＋F)、 B/F和B/B0 （零标准管结合） 。标本应作双份测定， 取其平均值，在制作的标准曲线图上查出相应的受 检抗原浓度。
33
34
第四节 放射免疫的质控
35
一、质量控制的目的
控制系统误差，减少偶然误差。 系统误差：1、试剂盒的质量；
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五、缓冲液
目前最常用的缓冲液有下列几种：①磷酸盐缓 冲液；②醋酸盐缓冲液；③Tris –HCl缓冲液；⑤硼 酸缓冲淮。其中以磷酸盐缓冲液应用最多。 ①保护蛋白 ②防腐剂 ③酶抑制剂 ④阻断剂 ⑤载体蛋白
17
六、试剂盒要注意的问题
1）检查药盒的数量与药盒说明书是否一致（一般 药盒内装有标记抗原、抗体、标准品、分离剂）。
特别适用于微量蛋白质、激素和多肽的定量测定。
4
二、基本原理
1、标记抗原（Ag*） 、非标记抗原（Ag）和特异性抗体 （Ab）三者同时存在于一个反应体系，标记抗原和非标 记抗原对特异性抗体具有相同的结合力，两者相互竞争 结合特异性抗体。
Ag* + Ab = Ag* Ab +
放射免疫分析
RIA基本试剂
2、标准抗原（标准品）
是已知含量并呈梯度浓度的系列 标准抗原，作标准曲线用。 要求： 保证与被测物具有相同的免疫活 性和相同介质。
RIA基本试剂
3、抗体
RIA使用：多克隆抗体 单克隆抗体
衡量抗体质量的指标是：
亲和力:抗体结合的强度
特异性:不受交叉反应物质影响的程度 滴度:抗体的效价——抗体实际应用时
125I的特性：
碘元素共有 29 种同位素，其中 23 种放 射性核素，125I最为常用，优点：
半衰期适中（60天），易于商品化和储存， 也利于废物处理； 只发射28keV χ线和35keV γ射线（无β）， 容易测量，辐射自分解少，标记物足够稳定； 化学性质活泼，标记容易，可得到多种标记 物而广泛应用。
待测Ag与*AgAb呈负相关函数关系
RIA操作过程
配制已知浓度系列标准抗原（Ag）---现
多由厂家提供已配置好的标准品
加待测抗原（Ag）和抗体（Ab）--温育 加标记抗原（*Ag）和抗体（Ab）--温育 分离复合物*AgAb（B）和游离*Ag（F） 用γ计数器测量放射性计数 根据标准曲线或计算机直接算出
化学发光免疫分析（CLIA）
荧光免疫分析（FIA） 时间分辨荧光免疫分析（TrFIA） 颗粒计数免疫分析（PACIA） ……
主 要 内 容
一 . 二 .
概述 放射免疫分析（RIA）
基本试剂 操作过程 质量控制 基本原理 分离技术
三．免疫放射分析（IRMA） 四. 非放射性标记免疫分析技术
的稀释倍数，滴度越高，所需的抗血清量越 少，血清的稀释倍数越高，抗血清中杂质干 扰也少。一般滴度高到1：1000以上，血清 中干扰物质影响就很小。
免疫放射分析基本原理
免疫放射分析基本原理
免疫放射分析（Radioimmunoassay，简称RIA）是一种常用的生物化学分析方法，通过使用放射性同位素标记的抗体来测量样品中特定物质的含量。
其基本原理如下：
1. 准备试样：需要测量的物质（抗原）存在于待测样品中。
样品可以是血清、尿液、分离得到的纯化物质等。
2. 标记抗体：选择能与待测物质结合的特异性抗体，并将该抗体与放射性同位素标记结合。
常用的同位素标记有^125I和
^3H。
放射性同位素标记的抗体是利用放射性同位素的射线释放特性来进行测量的关键。
3. 反应体系：将标记抗体和待测样品中的抗原加入到一个反应管中，使抗体与抗原发生特异性结合。
这一步骤通常需要一定的时间（通常为数小时）来达到最大的结合效率。
4. 分离无结合物质：通过加入剩余的非标记抗体或其他方法，分离无结合的标记抗体和未结合的物质（无结合物质）。
这一步骤可用于增加测量的灵敏度。
5. 分离被结合的标记抗体：将反应体系分离，常见的方法是利用沉淀或吸附等技术，将被结合的标记抗体与其他成分分离开来。
6. 测量放射活性：通过放射计或闪烁计数仪等设备，测量分离得到的被结合的标记抗体的放射活性。
放射活性与待测物质的
浓度呈正相关关系。
7. 构建标准曲线：使用已知浓度的标准物质重复上述步骤，测量其放射活性，并作为标准曲线的数据点。
通过与标准曲线的比较，可以确定待测样品中物质的浓度。
总之，免疫放射分析是一种利用放射性同位素标记的抗体来测量待测样品中特定物质含量的分析方法。
通过与已知浓度的标准物质进行比较，可以准确地测量待测物质的浓度。
放射免疫分析
放射免疫分析摘要：放射免疫技术（radio immunoassay ,RIA）类型主要包括经典的放射免疫分析(radioimmunoassay, RIA)和免疫放射分析或免疫放射度量分析( immunoradiometric assay，IRMA)。
由于受接触放射性物质，损害操作人员的身体，测定完成后放射性材料的处置等问题的存在,再加上80年代初出现的非同位素标记技术得到了极大的发展和广泛应用，放射免疫技术的应用有下降的趋势。
0引言：放射性核素依衰变方式分α、β、γ三种，用于放射性标记的有β和γ两类;分别用液体闪烁计数器及γ计数器测定。
目前常用的是γ型放射性核素，如125I、131I、51Cr和60Co，以125I最常用；β型放射性核素有3H、14C和32P，以3H最常用。
关键词：结构，原理，临床应用1检测的基本结构原理、结构及其探测原理核射线探测仪器由射线探测器和后续电子学单元两大部分组成。
核射线探测器是个能量转化器，其检测原理是当射线作用于闪烁体，闪烁体吸收了射线的能量而引起闪烁体中的原子或分子激发，当受激的原子或分子退激时，则发出光子进入光电倍增管光阴极，转换为光电子，光电子在光电倍增管电场作用下到达阳极，形成电脉冲。
转换模式是放射能→光能→电能→脉冲。
液体闪烁测量是在闪烁杯内进行的，放射性样品主要被溶剂和闪烁剂分子包围，射线能量先被溶剂分子吸收，受激溶剂分子退激时释放出能量激发闪烁剂，当激发态回到基态时释放出光子到达光阴极，光阴极产生光电子，在光电倍增管的电场作用下，在阳极获得大量电子，形成脉冲信号，输入后读分析电路形成数据信号，最后由计算机数据处理，求出待测抗原含量。
放射性活度测定方法放射免疫分析中经抗原抗体反应和B、F分离后通过检测放射性量来反映待测物的含量。
放射性量的检测需特殊的仪器，放射免疫分析仪实际上就是进行放射性量测定的仪器。
测量仪器有两类，即晶体闪烁计数仪（主要用于检测γ射线，如125I、131I、57Cr等）和液体闪烁计数仪（主要用于检测β射线，如3H、32P、14C等）。
《放射免疫分析》课件
放射免疫分析是一种广泛应用于医学与生物领域的实验技术，结合放射性同 位素和免疫反应，用于检测和定量测量生物样本中的特定分子。
简介
1 什么是“放射免疫分析”
放射免疫分析是一种使用放射性同位素标记的抗体或分子探针进行定量测量的实验技术。
2 有哪些应用场景
放射免疫分析广泛应用于临床诊断、生物学研究和药物开发等领域，特别是在肿瘤标志 物检测、激素水平测量和免疫检测方面。
3 放射免疫分析的过程
放射免疫分析包括样本 前处理、标记试剂制备、 样品配制、反应体系建 立和实验操作步骤等多 个步骤。
实验流程
1
样本前处理
对样本进行处理，使其符合放射免疫
标记试剂制备
2
分析的要求，例如去除干扰物质、浓 缩或稀释样品。
将放射性同位素与特定抗体或分子标
记在一起，以便在免疫反应中检测和
发展趋势
未来，放射免疫分析可能朝 着更高灵敏度、更低辐射和 更简化实验操作的方向发展， 也有望应用于新领域，如点of-care测试和分子影像学。
结论
结合实验结果，总结放 射免疫分析的特点和应 用，并对未来发展进行 展望。
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定量目标分子。
3
样品配制
将待测样品与标记试剂进行适当的混
合与反应，使目标分子与标记试剂发
反应体系建立
4
生特异性的结合。
为免疫反应提供适宜的环境，调整pH
值、温度和离子浓度等参数，以促进
免疫反应的进行。
5
实验操作步骤
按照合适的实验步骤和时间要求，进 行免疫反应、洗涤、分离等操作，以 获得准确的测量结果。
放射免疫分析
二、 (一)标讥抗原和抗体用量最佳化设计。 1、标记抗原用量选择。 2、抗血清的使用滴度选择及其方法。 (二) 1、 2、标准曲线工作范围 (三) (四)
15
(五) 1 、反应容积 缩小反应容积可相应减少 抗体和标记抗原的绝对用量，使非标记 抗原的竞争力相应增强，有利抗原、抗体结合反 应的平衡结合常数K与温度有关必须通过 实验来确定最佳工作条件。 (六)B与F (七)
7
(四)掌握标准曲线的斜率对测定的影响 标 准曲线的斜率对放射免疫分析方法的灵 敏度和精密度均有影响。
1、亲和常数K 2、 3、 ( 五 ) 掌握 Bo( 总结合 ) 、 T( 总管 ) 、 NSB 的概
8
第二节 放射免疫分析方法学 一、掌握建立放射免疫分析方法的必备条件 (一) (1)标准抗朱与待测抗原的免疫性必须一致， 即它们与抗体的亲和力和特异性应相同。 标准抗原与待测抗原所处的介质条件应基 本相同。 (2)抗原必须纯度度。 (3)标准抗原的量必须准确。 (4)标准抗原应有很好的稳定性。
13
2、 (1) 双抗法 (Ab2 法 ) ：应用抗 IgG 的第二抗体 来分离B和F的方法称为双抗体法。 双抗体法具有特异、高效、非特异性结合 低、重复性好等优点。在使用此法时，往 往加入适量的第一抗体同种动物血清作载 体。同时第二抗体必须是过量(但也不宜过 大)，且以不影响反应平衡为宜. (2) 固相分离法：将特性抗体 ( 第一或第二 抗体)或抗原结合在固相物质。 (3)金黄色葡萄球菌A蛋白分离法。
第四章
放射免疫分析
目的与要求： 掌握放射免疫分析的基本原理， 实验室配置及质量控制。 内容： 放射免疫分析 (RIA) 是由 Yalow 和Berson于 1960年创建的一种体 外放射分析技术。这是检验专业 学生必须掌握和重点。
放射免疫分析临床应用刘冬
放射免疫分析临床应用刘冬放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA）是一种以放射性示踪剂和免疫反应结合技术来测定生物标志物的一种方法。
该技术已广泛应用于临床医学中用于检测和测量患者体内的一些特定物质含量，如激素、抗体、肿瘤标志物等。
本文将重点介绍放射免疫分析在临床应用中的一些例子。
一、激素测定激素是机体内起调控作用的重要化学物质。
通过测定患者体内激素的水平，可以评估一些疾病的发生和发展，以及患者对治疗的反应。
常见的激素测定项目包括甲状腺激素、生长激素、性激素等。
放射免疫分析可以通过测定血液或尿液中激素的浓度，来帮助医生进行确诊和治疗方案的制定。
例如，对于甲状腺功能亢进患者，可以通过测定血液中的甲状腺素水平来确定是否需要进行手术或药物治疗。
二、肿瘤标志物测定肿瘤标志物是一种可以在肿瘤患者体内检测到的特殊物质。
通过测定血液中的肿瘤标志物的水平，可以帮助医生进行肿瘤的筛查、诊断和监测治疗效果。
放射免疫分析可以对常见的肿瘤标志物，如癌胚抗原（CEA）、前列腺特异性抗原（PSA）等进行快速、准确的检测。
例如，在临床上，对于可能患有肺癌的患者，测定血液中的CEA水平可以帮助医生进行早期诊断和有效治疗。
三、感染性疾病诊断感染性疾病的早期诊断对于患者的治疗和康复至关重要。
通过测定患者体液中的抗体水平，可以判断患者是否被特定的病原体感染。
放射免疫分析可以用来检测和诊断一些常见的感染性疾病，如乙肝、艾滋病等。
例如，对于可能患有乙型肝炎的患者，可以通过测定血液中的乙肝病毒表面抗原（HBsAg）和乙肝病毒表面抗体（HBsAb）来判断患者的感染状态和治疗效果。
综上所述，放射免疫分析技术在医学临床应用中发挥着重要的作用。
通过对患者体内特定物质含量的测定，可以帮助医生进行疾病的早期诊断、有效治疗和预后评估。
随着医学技术的不断发展，放射免疫分析技术在临床应用中的前景将会更加广阔。
放射免疫分析名词解释
放射免疫分析名词解释放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA）是一种用于检测和定量分析生物样品中特定抗原或抗体浓度的方法。
它是将放射性同位素标记于抗原或抗体上，在放射性同位素发出的放射线与样品中的抗原或抗体发生特异性结合后进行测定，从而得出相应物质的浓度。
放射免疫分析的基本原理是免疫反应，即抗原与抗体之间的特异性结合。
在RIA中，通常选择具有放射性的同位素标记物作为追踪试剂。
标记物可以是同位素标记的抗原或抗体，其中最常用的是放射性同位素碘-125（^125I）或碘-131（^131I）。
这些放射性同位素会发出特定能量的射线，可以通过辐射探测器测量。
RIA的步骤包括样品预处理、标记物制备、抗体反应和分离、洗涤、放射测定等。
首先，需要将待测物标记为放射性同位素，常见的方法是用碘-125标记。
然后，将标记物与样品中的抗原或抗体进行相互反应，形成抗原-抗体复合物。
接着，通过分离和洗涤步骤，去除未结合的放射性同位素。
最后，使用辐射探测器测量放射性同位素发出的射线，由此可以得到样品中特定抗原或抗体的浓度。
放射免疫分析的优势在于其高灵敏度和高特异性，可以检测到极低浓度的物质。
它广泛应用于医学、生物学、生物化学等领域，用于检测和量化各种生物分子，如荷尔蒙、抗体、蛋白质、癌标志物等。
RIA还可以用于研究免疫反应、疾病诊断、药物筛选和治疗监测等方面。
然而，放射免疫分析也存在一些问题。
首先，使用放射性同位素会造成辐射危害，对实验操作人员和环境有一定风险。
其次，放射性同位素的半衰期较短，需要定期更换，增加了实验的复杂性和成本。
此外，由于放射性同位素的使用受到严格的监管和限制，一些实验室可能无法获得所需的放射性同位素。
总体而言，放射免疫分析是一种广泛应用的生物分析技术，具有高灵敏度和高特异性。
随着科技的进步，更多无放射同位素的免疫分析方法被开发出来，如酶免疫分析、荧光免疫分析等，逐渐取代了放射免疫分析的应用。
放射免疫分析的原理
放射免疫分析的原理放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA）是一种利用放射性同位素标记抗原或抗体来检测物质浓度的技术。
该技术广泛应用于临床诊断、生物化学研究以及药物筛选等领域，具有高灵敏度和高特异性的特点。
放射免疫分析的原理是基于抗原与抗体之间的特异性结合。
抗原是一种能够诱导免疫系统产生抗体的物质，而抗体是一种能够特异性结合抗原的免疫蛋白。
在放射免疫分析中，通常选择特异性结合抗原的抗体，并利用放射性同位素标记抗原或抗体，以便测定样品中抗原或抗体的浓度。
放射免疫分析的步骤一般包括抗原标记、抗体固定、分离和计数等几个关键步骤。
首先，将抗原标记上放射性同位素，通常使用的同位素有碘-125（125I）、碘-131（131I）、氘-3（3H）等。
标记后的放射性抗原具有相对稳定的放射性，可用于测定抗原的浓度。
然后，将已标记的抗原与待测样品中的抗原进行特异性结合，并通过添加抗体来固定放射标记的抗原。
接着，利用分离技术（如沉淀法、凝胶层析法等）将游离的抗体或抗原分离出来。
最后，通过放射计数器测定标记抗原或抗体的放射性强度，从而计算出待测样品中抗原或抗体的浓度。
放射免疫分析的原理基于放射性同位素的高灵敏度和稳定性，使得其具有极高的检测灵敏度和特异性。
相对于传统的免疫分析方法，如酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）等，放射免疫分析能够在极低的抗原浓度下进行检测，且能够检测复杂样品中的微量物质。
因此，放射免疫分析广泛用于检测激素、生物分子、药物和疾病标志物等各种生物样品中的微量物质。
然而，放射免疫分析也存在一些局限性，主要是由于放射性同位素的使用带来的放射性污染和辐射风险。
为了克服这一局限性，人们提出了许多新的代替技术，如免疫荧光分析（immunofluorescence assay，IFA）、化学发光免疫分析（chemiluminescence immunoassay，CLIA）等。
放射免疫分析
加样： 1、Ag（系列标准品及待测样品）50ul/每管 2、Ag* 200ul/每管 3、Ab 100ul/每管 混匀，37℃ 45分钟，加分离剂离心，测定 结合部分放射性。
放射免疫分析的几种标准曲线图：
抗原抗体的结合反应遵循质量作用定律， 即：
当反应达到平衡时， k1[Ag][Ab]=k2[AgAb]。设KA为平衡结 合常数，也称亲和常数，则有：
Ag + Ab → AgAb + Ag* ↓ Ag*Ab
式中Ag *代表标记抗原，Ag代表非标 记抗原，Ab代表特异性抗体，Ag * Ab代 表标记抗原抗体复合物，AgAb代表非标 记抗原抗体复合物。
当反应体系中同时存在Ag、Ag *和Ab， 而Ag *的量一定、Ab的量限定（分子数少于抗 原）时，随着Ag的增加，Ag * Ab的量相应减 少，即与Ag（包括标准抗原或待测抗原）的 量呈负相关竞争性抑制。当反应达到平衡后， 将反应体系中的标记抗原抗体复合物与游离的 标记抗原分离，测定其放射性。以标准抗原的 浓度为横坐标，以标记抗原抗体复合物的结合 率（B/T、B/F、B/B0）为纵坐标，绘制剂量 效应曲线（calibration curve），也称标准曲 线。
3）亲和力和亲和常数测定：亲和力表 示特定的抗原、抗体之间的结合能力， 常用亲和常数KA来表示。KA越大，表 示抗原、抗体之间结合能力越强，B/F 值大，方法的灵敏度高。 随着单克隆抗体（monoclonal antibody，McAb）技术的发展，提高 了现代体外分析技术的特异性和亲和力。
（二）、放射性标记物 放射性标记物是体外放射分析的测 量依据，常用的标记核素有125I和3H。 对标记物的质量要求包括： （1）比活度（specific activity）：体外 放射分析法的定量范围一般在10-9-1012mol水平，标记物的用量应等于或小于 被测物的最小量，以得到较好的灵敏度。 高比活度的标记物是确保分析方法灵敏 度的前提。