双光子和光谱扫描在激光共聚焦显微镜上的应用经验 PPT课件
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在2个不同Z坐标下做bleach， ex 458nm
ex 900nm 做z-stack，显示多层光 刻效果，信号随深度增加而衰减
叶表面蜡质层成像及厚度测定
菲（多环芳烃类）渗透 Ex 700nm Channel mode Z-stack
谢谢大家
非线性效应：碳纳米管
Ex 850
421
原理：某些材料在双光子
激发，会发射波长为激发
光一半的荧光
Ex 1000
利用不同波长的双光子激光照 射可能含碳纳米管的靶向药物， lambda扫描发现荧光信号呈现 严格的倍频关系
Ex 1040
4Fra Baidu bibliotek8 518
光刻和深度扫描
一种人工合成的透明有机晶体， 在一定强度的近紫外光下会发生 局部变性，从而具有双光子效应
GFP标记水稻根中自发荧光的清除
单光子激发，水稻根带有强烈的黄绿色
自发荧光
双光子激发，自发荧光为蓝色
ex 488nm，Lambda mode
ex 820nm , lambda mode
GFP标记水稻根中自发荧光的清除
• 双光子激发下GFP荧光与自发荧光 的波长分离，820nm激发时，仅采 集493-542nm区间的信号以保证特 异性
Ex 820nm, channel mode
土壤浸出液中外源GFP标记细菌浓度分析
目的：了解土壤中的不同细菌间的竞争关系 方法：等比掺入外源GFP标记菌体，设置多种 环境条件 问题：土壤标本背景嘈杂，往往带有各种带荧 光的杂质颗粒 解决： 1 固定样品体积 2 lambda成像检测GFP特异荧光 3 最大化pinhole
双光子和光谱扫描在激光共聚焦显微 镜上的应用经验
浙江大学生命科学学院 仪器与技术服务平台
机型：Zeiss LSM710 nlo
690-1080nm可调谐飞秒激光器
32通道阵列PMT
激光共聚焦显微镜的非常规应用
• 利用双光子分辨目标荧光和自发荧光 • 利用光谱扫描鉴定微弱荧光信号的真假 • 转基因材料快速筛选 • 嘈杂背景下的细胞计数 • 非线性效应 • 光刻和深度扫描 • 模拟近红外光源
ex 900nm 做z-stack，显示多层光 刻效果，信号随深度增加而衰减
叶表面蜡质层成像及厚度测定
菲（多环芳烃类）渗透 Ex 700nm Channel mode Z-stack
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Ex 850
421
原理：某些材料在双光子
激发，会发射波长为激发
光一半的荧光
Ex 1000
利用不同波长的双光子激光照 射可能含碳纳米管的靶向药物， lambda扫描发现荧光信号呈现 严格的倍频关系
Ex 1040
4Fra Baidu bibliotek8 518
光刻和深度扫描
一种人工合成的透明有机晶体， 在一定强度的近紫外光下会发生 局部变性，从而具有双光子效应
GFP标记水稻根中自发荧光的清除
单光子激发，水稻根带有强烈的黄绿色
自发荧光
双光子激发，自发荧光为蓝色
ex 488nm，Lambda mode
ex 820nm , lambda mode
GFP标记水稻根中自发荧光的清除
• 双光子激发下GFP荧光与自发荧光 的波长分离，820nm激发时，仅采 集493-542nm区间的信号以保证特 异性
Ex 820nm, channel mode
土壤浸出液中外源GFP标记细菌浓度分析
目的：了解土壤中的不同细菌间的竞争关系 方法：等比掺入外源GFP标记菌体，设置多种 环境条件 问题：土壤标本背景嘈杂，往往带有各种带荧 光的杂质颗粒 解决： 1 固定样品体积 2 lambda成像检测GFP特异荧光 3 最大化pinhole
双光子和光谱扫描在激光共聚焦显微 镜上的应用经验
浙江大学生命科学学院 仪器与技术服务平台
机型：Zeiss LSM710 nlo
690-1080nm可调谐飞秒激光器
32通道阵列PMT
激光共聚焦显微镜的非常规应用
• 利用双光子分辨目标荧光和自发荧光 • 利用光谱扫描鉴定微弱荧光信号的真假 • 转基因材料快速筛选 • 嘈杂背景下的细胞计数 • 非线性效应 • 光刻和深度扫描 • 模拟近红外光源