微生物生长量测定法
模块三微生物生长量的测定技术(精)
模块三 微生物生长量的测定技术
微生物生长测定技术
一、体积测量法 二、重量法 三、比浊法 四、薄膜过滤计数法 五、涂片染色法
一、 体积测量法
又称菌丝浓度法，是通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量
来反映微生物的生长状况。
方法是：取一定量的待测培养液离心后,测出上清液体积为v,则
三、比浊法
特点：快速、简便；但易受干扰。
原理：在一定范围内，菌悬液中的细胞浓度与混浊度成 正比，即与光密度成正比，菌数越多，光密度越大。因 此，借助于分光光度计，在一定波长下测定菌悬液的光 密度，就可反应出菌液的浓度。
四、薄膜过滤计数法
常用该法测定含菌量较少的空气和水中的微生
物数目。
将定量的样品通过薄膜（硝化纤维素薄膜、醋
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酸纤维薄膜）过滤，菌体被阻留在滤膜上，取下 滤膜进行培养，然后计算菌落数，可求出样品中 所含菌数。
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五、涂片染色法
应用：可同时计数不同微生出视野面积；取0.1mL菌
液涂于1cm2面积上，计数后代入公式：
每ml原菌液含菌数=视野中平均菌数×涂布面积/视野面积×100 ×稀释倍数
菌丝浓度为(10-v)/10。
菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一 个重要监测指标，这种方法比较粗放、简便、快速，但需要设 定一致的处理条件，且由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养 物，结果会有一定偏差。
二、称干重法—适合菌浓较高的样品
将一定量的菌液中的菌体通过离心或过滤分离出 来,然后烘干(干燥温度可采用105℃、100℃或80℃)、 称重。一般干重为湿重的10%—20%，而一个细菌细胞 一般重约10-12—10-13g。 举例：大肠杆菌一个细胞一般重约10–12~10–13g，液体 培养物中细胞浓度达到2×109个/mL时，100mL培养 物可得10~90 mg干重的细胞。
微生物生长测定方法的原理及优缺点
微生物生长测定是指通过一系列方法和技术来检测和测定微生物的生长情况，包括微生物数量、生长速率、生长条件等。
微生物生长测定方法在医药、食品、环境等领域都有着重要的应用，对于评估产品质量、卫生安全具有重要意义。
本文将从原理和优缺点两个方面对微生物生长测定方法进行分析和讨论。
一、微生物生长测定方法的原理微生物生长测定方法主要基于微生物在特定条件下的生长特性来进行测定。
常见的微生物生长测定方法包括培养计数法、营养物质利用法、生物发光法等，下面针对每种方法的原理进行详细介绍。
1.培养计数法培养计数法是通过将待测样品在适宜的营养培养基上培养一定时间后，根据所形成的微生物菌落数量来进行测定微生物数量的方法。
其原理是利用微生物在特定条件下的生长特性，以及对不同影响因素的适应能力。
通过控制培养基的成分和环境条件，可以使不同菌种在不同条件下得到生长，并最终形成可见的菌落。
根据菌落的数量和形态，可以初步判断出待测样品中微生物的种类和数量。
2.营养物质利用法营养物质利用法主要是利用微生物对不同的碳源、氮源、氢源、无机盐等物质的利用能力来进行测定微生物的数量和生长情况。
其原理是根据微生物对不同营养物质的需求和利用方式，采用不同的培养基和特定的条件，使不同微生物菌种在不同培养基上的生长情况有所差异，通过观察和测定微生物生长的情况来推断待测样品中微生物的数量和种类。
3.生物发光法生物发光法是一种利用微生物在特定条件下产生发光现象来进行测定微生物数量和生长情况的方法。
其原理是利用微生物在特定条件下产生的发光物质，例如荧光素、发光菌等，通过测定发光强度和时间来间接推断微生物的数量和生长情况。
二、微生物生长测定方法的优缺点微生物生长测定方法在实际应用中具有一定的优点和局限性，下面将针对不同的方法进行分析和讨论。
1.培养计数法的优缺点优点：(1) 可以直接观察和测定微生物的数量和生长情况，结果直观准确。
(2) 可以根据培养基的选择和条件的控制，选择性培养出目标微生物。
微生物生长的测定方法
微生物生长的测定方法作者：刘华来源：《神州·下旬刊》2013年第02期摘要：微生物生长情况可以通过测定单位时间里微生物数量或生物量（biomass）的变化来评价。
通过微生物生长的测定可以客观地评价培养条件、营养物质等对微生物生长的影响，或评价不同的抗菌物质对微生物产生抑制（或杀死）作用的效果，或客观地反映微生物生长的规律。
因此微生物生长的测量在理论上和实践上有着重要的意义。
关键词：微生物测定方法计数法生理指标法微生物生长的测定有计数、重量和生理指标等方法。
1、计数法此法通常用来测定样品中所含细菌、孢子、酵母菌等单细胞微生物的数量。
计数法又分为直接计数和间接计数两类。
⑴直接计数这类方法是利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。
此法的缺点不能区分死菌与活菌。
计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积l mm2和高0.1mm的计数室，在1mm2的面积里又被刻划成25个（或16个）中格，每个中格进—步划分成16个（或25个）小格，但计数室都是由400个小格组成。
将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计算4-5个中格的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按下面公式求出每毫升样品所含的细菌数。
每毫升原液所含细菌数=每小格平均细菌数×400×l000×稀释倍数⑵间接计数法此法又称活菌计数法，其原理是每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落。
将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.2ml 故人无菌平皿，再倒人适量的已熔化并冷至45℃左右的培养基，与菌液混匀，冷却、待凝固后，放人适宜温度的培养箱或温室培养，长出菌落后，计数，按下面公式计算出原菌液的含菌数：每毫升原菌液活菌数=同一稀释度三个以上重复平皿菌落平均数×稀释倍数×5此法可因操作不熟练造成污染，或因培养基温度过高损伤细胞等原因造成结果不稳定。
微生物的大小及数量的测定
微生物试验报告
内沿盖玻片的右上角滴入一小滴(不宜过多)， 使菌液沿两玻片间自行渗入计数室， 勿使产生气泡，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌液。 (3)先在低倍镜下找到计数室后，再转换高倍镜观察计数。 (4)计数时用 16 中格的计数板，要按对角线方位，取左上、左下、右上、右下的 4 个中格(即 100 小格)的酵母菌数。如果是 25 中格计数板。除数上述四格外， 还需数中央 1 中格的酵母菌数(即 80 小格)。由于菌体在计数室中处于不同的空 间位置，要在不同的焦距下才能看到，因而观察时必须不断调节微调螺旋，方能 数到全部菌体， 防止遗漏。 如菌体位于中格的双线上， 计数时则数上线不数下线， 数左线不数右线，以减少误差。 (5)凡酵母菌的芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品 重复分数 2-3 次(每次数值不应招差过大，否则应重新操作)，取其平均值，按下 述 公 式 计 算 出 每 毫 升 菌 液 所 含 酵 母 菌 细 胞 数 （ 25 中 格 ）。
关键词
目镜测微尺 物镜测微尺 血球计数板
前言
微生物细胞的大小， 是微生物重要的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之 一， 也让我们对微生物的实际大小有了一个感性的认识。微生物数量的测定在微 生物生长曲线中运用非常重要， 我们从微生物的数量上了解其生长状况，这也能 指导我们的生产工业。
一、 实验目的
1. 了解显微镜测定微生物大小与血球计数板测定微生物数量的原理。 2. 学习并掌握显微镜下测定微生物细胞大小的技术，包括目镜测微尺、镜台测 微尺的校正技术与测定细胞大小的技术。 3. 了解血球计数板的结构，学习并掌握血球计数板计数微生物数量的技术，包 括样品的点样、菌数计数的方法与计算。
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微生物（2） 镜台测微尺（图 2）
土壤微生物数量测定方法
土壤微生物数量测定方法土壤微生物是指生活在土壤中的微小生物，包括细菌、真菌、放线菌、古菌等。
土壤微生物在土壤的生物地球化学循环、有机质分解、养分转换和植物健康等过程中起着重要的作用。
因此，对土壤微生物数量的准确测定具有重要意义。
本文将介绍一些常用的土壤微生物数量测定方法。
1.瓶培法：将适量的土壤样品与适量的培养基混合，在37°C下培养约24小时，然后通过平板计数法或最凼稀释法进行测定。
2.膜过滤法：将土壤提取液通过特定孔径的膜过滤器滤过，然后将膜放置在培养基上进行细菌的生长，最后进行计数。
3.间接法：通过测定土壤样品的可培养细菌指标，如氧化还原酶、脱氢酶等的活性，从而推算出土壤中的细菌数量。
4.分子生物学方法：通过PCR扩增土壤DNA中的细菌基因，如16SrRNA基因，再通过测定PCR产物进行细菌数量的测定。
1.直接镜检法：直接在显微镜下观察土壤样品中的真菌，通过计数来估算真菌的数量。
2.平板计数法：将土壤样品均匀撒在培养基上，通过培养方法使真菌生长形成菌落，最后进行计数。
3.膜过滤法：与细菌数量测定相似，将土壤提取液通过膜过滤器滤过，然后将膜放置在适当的培养基上进行真菌的生长，最后进行计数。
4.分子生物学方法：通过PCR扩增土壤DNA中的真菌基因，如18SrRNA基因，再通过测定PCR产物进行真菌数量的测定。
1.直接镜检法：直接在显微镜下观察土壤样品中的放线菌，通过计数来估算放线菌的数量。
2.平板计数法：将土壤样品均匀撒在培养基上，通过培养方法使放线菌生长形成菌落，最后进行计数。
3.膜过滤法：与细菌和真菌数量测定类似，将土壤提取液通过膜过滤器滤过，然后将膜放置在适当的培养基上进行放线菌的生长，最后进行计数。
4.分子生物学方法：通过PCR扩增土壤DNA中的放线菌基因，如16SrRNA基因，再通过测定PCR产物进行放线菌数量的测定。
通过上述方法测定土壤中微生物的数量，可以了解土壤微生物对土壤生态系统功能的影响，并为土壤质量评价和科学合理利用提供依据。
土壤微生物生物量测定方法
土壤微生物生物量测定方法
土壤微生物生物量的测定方法有很多种，一般可以分为直接和间接测定方法。
直接测定方法包括：
1. 水解法：将土壤样品经过水解处理，然后通过高密度离心和显微镜观察计数获得微生物生物量。
2. 利用滴定法：通过向土壤中添加抑制剂或适宜的滴定液，测定细菌和真菌的数量以确定生物量。
3. 融解法：将土壤样品与溶解剂混合，在特定温度下溶解土壤中的微生物，然后通过测定溶液中的生物量来计算土壤中的微生物生物量。
间接测定方法包括：
1. 培养基测定法：将土壤样品接种到特定的培养基中，利用培养基中微生物生长所需的营养物质来测定微生物生物量。
2. 脂肪酸测定法：通过提取土壤样品中的脂肪酸，并利用气相色谱仪测定来确定微生物的生物量。
3. 磷脂酸测定法：通过提取土壤中的磷脂酸，并利用色谱或质谱仪测定磷脂酸来估计微生物生物量。
这些方法各有优缺点，选择适合的方法需要考虑实验条件、样品处理的方便程度
和测定结果的准确性。
微生物数量的测定方法
微生物数量的测定方法微生物数量的测定方法微生物是一类微小的生物体，包括细菌、真菌、病毒等。
它们广泛存在于自然界中的土壤、水体、空气中，也存在于人体内外。
了解微生物的数量对于环境监测、食品安全、医学诊断等领域具有重要意义。
本文将介绍几种常用的微生物数量测定方法。
1. 直接计数法直接计数法是最直接、最常用的微生物数量测定方法之一。
它通过显微镜观察和计数来确定微生物的数量。
首先，将待测样品制备成适当的悬浮液，然后在显微镜下观察，并使用计数器进行计数。
这种方法适用于细菌和酵母等较大的微生物。
但是，由于显微镜观察需要较高的技术水平和时间，所以无法快速测量大量样品。
2. 培养法培养法是一种常用的微生物数量测定方法，它通过培养微生物并计数生长的菌落来确定数量。
首先，将待测样品制备成适当的培养基，然后在恰当的温度和湿度条件下培养一段时间。
培养基中的微生物会形成可见的菌落，通过计数菌落的数量来确定微生物的数量。
这种方法适用于大部分微生物，但是它需要一定的培养时间，并且某些微生物可能无法在常规培养基上生长。
3. 膜过滤法膜过滤法是一种常用的微生物数量测定方法，它通过将待测样品过滤到膜上，并将膜培养在适当的培养基上来确定数量。
首先，将待测样品通过特定孔径的过滤器过滤，然后将过滤后的膜放置在培养基上培养。
培养基中的微生物会在膜上形成可见的菌落，通过计数菌落的数量来确定微生物的数量。
这种方法适用于水样、空气样等液态和气态样品。
4. 分子生物学方法分子生物学方法是一种新兴且快速发展的微生物数量测定方法。
它通过检测和分析微生物DNA或RNA来确定数量。
常用的分子生物学方法包括聚合酶链反应（PCR）、实时荧光定量PCR（qPCR）等。
这些方法可以快速、准确地测定微生物的数量，并且可以检测到少量微生物。
但是，分子生物学方法需要一定的实验设备和技术，并且对样品预处理要求较高。
总结起来，微生物数量的测定方法有直接计数法、培养法、膜过滤法和分子生物学方法等。
微生物的生长量的测定方法
实验误差分析
误差来源
01
分析实验过程中可能出现的误差来源，如样品采集、培养条件
控制、测定方法等。
误差控制
02
采取有效措施，如使用标准品、进行重复实验等，减小误差对
实验结果的影响。
误差评估
03
对实验误差进行评估，了解误差对实验结果的影响程度，提高
实验的准确性和可靠性。
THANKS
感谢观看
显微镜直接计数法
总结词
显微镜直接计数法是通过显微镜观察微生物细胞并计数来测定微生物生长量的 方法。
详细描述
该方法通过显微镜观察微生物细胞，利用血球计数板或细胞计数板进行计数， 根据计数结果计算微生物生长量。该方法适用于各种生长阶段的微生物生长量 测定，但操作较为繁琐，需要一定的技术要求。
流式细胞计数法
菌落计数法
总结词
菌落计数法是一种通过培养微生物并计数菌落数量来测定微生物生长量的方法。
详细描述
该方法通过将微生物接种在固体培养基上，经过一定时间的培养，微生物繁殖形成肉眼可见的菌落，然后通过计 数菌落的数量来推算原始接种的微生物数量。该方法适用于对数生长期的微生物生长量测定，具有操作简单、直 观的优点。
通过测量与微生物生长相关的生理指 标来间接评估微生物的生长量。
详细描述
生理指标法包括测量细胞密度、细胞 形态、细胞代谢产物等，这些指标的 变化与微生物的生长状态密切相关， 可以间接反映微生物的生长量。
比浊法
总结词
利用微生物悬液的光学性质来测量其浓度，从而评估微生物的生长量。
详细描述
比浊法是通过测量微生物悬液的光密度来计算微生物的浓度。在一定波长下，光 密度与微生物浓度呈线性关系，因此可以用来评估微生物的生长量。该方法操作 简便、快速，适用于大量样本的快速检测。
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微生物生长量测定法
1、体积测量法：又称测菌丝浓度法
通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。
方法是取一定量的待测培养液(如10毫升)放在有刻度的离心管中,设定一定的离心时间(如5分钟)和转速(如5000 rpm),离心后,倒出上清夜,测出上清夜体积为v,则菌丝浓度为(10-v)/10.菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。
这种方法比较粗放,简便,快速,但需要设定一致的处理条件,否则偏差很大,由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物,结果会有一定偏差。
2、称干重发法
可用离心或过滤法测定。
一般干重为湿重的10-20%.在离心法中,将一定体积待测培养液倒入离心管中,设定一定的离心时间和转速,进行离心,并用清水离心洗涤1-5次,进行干燥。
干燥可用烘箱在1050C或1000C下烘干,或采用红外线烘干,也可在800℃或400℃下真空干燥,干燥后称重。
如用过滤法,丝状真菌可用滤纸过滤,细菌可用醋酸纤维膜等滤膜过滤,过滤后用少量水洗涤,在400℃下进行真空干燥。
称干重发法较为烦琐,通常获取的微生物产品为菌体时,常采用这种方法,如活性干酵母，一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。
3、比浊法
微生物的生长引起培养物混浊度的增高，通过紫外分光光度计测定一定波长下的吸光值,判断微生物的生长状况。
对某一培养物内的菌体生长作定时跟踪时,可采用一种特制的有侧臂的三角烧瓶。
将侧臂插入光电比色计的比色座孔中,即可随时测定其生长情况,而不必取菌液。
该法主要用于发酵工业菌体生长监测。
4、菌丝长度测量法
对于丝状真菌和一些放线菌,可以在培养基上测定一定时间内菌丝生长的长度,或是利用一只一端开口并带有刻度的细玻璃管,到入合适的培养基,卧放,在开口的一端接种微生物,一段时间后记录其菌丝生长长度,借此衡量丝状微生物的生长。