液相色谱柱保存及再生
液相色谱柱再生
液相色谱柱再生色谱柱使用久了，会出现分离度降低，理论塔板数降低等柱效降低的现象，适当处理能使柱效恢复。
但不是所有柱子都能倒冲的，最好问问生产商。
不了解的话，还是按下面的方法处理一下试试。
常规处理: 硅胶、氧化铝、极性键合相色谱柱每一次用完后用低流速长时间的二氯甲烷或正己烷等溶剂冲洗;键合相硅胶色谱柱、离子交换色谱柱和凝胶色谱柱先用蒸馏水冲洗, 再用甲醇冲洗,然后用甲醇与蒸馏水以一定比例混合的溶液冲洗后过夜。
对于已使用一段时间后柱效下降的色谱柱可按以下方法进行再生。
再生处理包括活化(右→左)和净化(左→右)两种。
硅胶、氧化铝、极性键合相色谱柱按下列顺序冲洗: 三甲基戊烷或己烷←→三氯乙烷←→乙酸乙脂←→丙酮←→乙醇←→水。
键合相硅胶柱:蒸馏水←→甲醇(冲洗过程中可加入少量二甲基甲酰胺)。
离子交换树脂柱: 高浓度的NaCl溶液(1-2molL的NaCl溶液)可使大部分树脂再生,油脂等少数与树脂紧密结合的物质可用低浓度碱溶液(如0.1molL的NaOH溶液)冲洗, 酸性有机物吸附在固定相的用低pH缓冲液冲洗, 碱性有机物用高pH缓冲液冲洗, 然后再用蒸馏水←→甲醇←→二氯甲烷←→甲醇←→蒸馏水冲洗。
凝胶色谱柱: 由于凝胶色谱柱是根据被分离物质的分子量大小而分离物质,通常用稀的氢氧化钠或非离子型去垢剂(0.2%-1%NP-40或Lubrol)冲洗可除去大部分的结合物质,如果一些污染物仍然不能清除时,用24%或30%乙腈冲洗过夜可除去疏水蛋白,用30%-50%乙酸可除去亲水蛋白, 用蛋白水解酶处理可分解凝胶中剩余的痕量胃蛋白酶,然后再用蒸馏水←→甲醇←→蒸馏水冲洗。
已污染的色谱柱的处理: 因保留强的物质污染,流动相或样品中不溶物沉积于柱头,可用下列方法洗涤: 去除脂类可用四氢呋喃、乙腈或甲醇洗涤;去除蛋白质可用乙腈、丙醇和1%三氯乙酸进行梯度洗脱;一些高疏水性化合物可用乙腈或甲醇洗脱,同时反复注入100-200ml 的四氢呋喃。
液相色谱柱的维护与保养
液相色谱柱的维护与保养
液相色谱柱的维护与保养非常重要，可以延长柱的使用寿命并保证分离效果的稳定性。
以下是液相色谱柱的维护与保养的一些建议：
1. 保持柱的洁净：在使用结束后，及时用纯水和有机溶剂洗净色谱柱。
可以采用逆向流动的方法，即用纯水从柱底往上流动直到洗净。
避免使用酸碱溶液以及有机溶剂中的含有杂质的溶液来清洗，避免杂质残留。
2. 避免干燥：柱在储存或者不使用时要避免干燥。
可以用保湿的方式，例如在储存时使用密封塑料袋或保湿剂。
避免长时间暴露在空气中，避免干燥引起的柱损坏。
3. 正确使用柱：避免使用超过柱最大压力或流速的方法进行色谱分离，这会导致柱壁破裂或分离效果恶化。
遵守柱的使用说明和规格。
4. 定期检查：定期检查柱的使用情况，例如检查是否有柱壁表面损坏或吸附物的形成。
如果发现有问题，应及时更换色谱柱。
5. 柱的再生：某些类型的液相色谱柱可以通过柱的再生来延长使用寿命。
具体的再生方法可以参考柱的使用说明书或与供应商咨询。
6. 注意避免柱受到冲击：在搬运和使用过程中要轻拿轻放，避免柱受到冲击造成损坏。
总之，正确的维护与保养可以延长液相色谱柱的使用寿命并保证其分离效果的稳定性。
根据柱的材质和类型，还可以采取适当的措施进行再生以延长柱的使用寿命。
色谱柱再生方法简介
高效液相柱是消耗品，会随使用时间或进样的次数增加，出现色谱峰高降低，峰宽加大或出现肩峰，柱效下降。
需要定期进行彻底清洗和再生。
1、反相柱
分别用甲醇：水＝90：10、纯甲醇、二氯甲烷等溶剂着流动相，依次冲洗，每种流动相流经色谱柱不少于20倍的色谱柱体积。
然后再以相反的次序冲洗。
2、正相柱
分别用正己烷、异丙醇、二氯甲烷、甲醇等溶剂做流动相，顺次冲洗，每种流动相流经色谱柱不少于20倍的柱体积（异丙醇粘度大，可降低流速，避免压力过高）。
注意使用溶剂的次序不要颠倒，用甲醇冲洗完后，再以相反的次序冲洗至正己烷。
所有的流动相必须严格脱水。
3、离子交换柱
长时间在缓冲溶液中使用和进样，将导致色谱柱离子交换能力下降，。
用稀酸缓冲溶液冲洗可以使阳离子柱再生，反之，用稀碱缓冲溶液冲洗可以使阴离子柱再生。
用户还可以选择能溶解柱内污染物的溶剂为流动相做正方向和反方向冲洗。
但再生后的色谱柱柱效是不可能恢复到新柱的水平的。
如果柱子装反了，可以调回来，但可能会造成柱内担体塌陷。
在不得已的情况下尽量不要反装色谱柱。
液相色谱柱清洗活化再生
1.色谱柱的活化30个柱体积，然后用甲醇/乙腈：水（50:50）冲洗10个柱体积，然后再用流动相平衡30柱体积。
=9：1冲洗30倍柱体积，再流动相平衡30个柱体积。
100%甲醇或乙腈冲洗30个柱体积，然后转换到流动相平衡。
用于反相色谱时，先用异丙醇或乙醇冲洗色谱柱50-100个柱体积，然后用甲醇/乙腈：水（50:50）冲洗10个柱体积，然后再用流动相平衡30柱体积。
50倍柱体积50/50乙腈/水活化平衡，然后再用流动相平衡30柱体积。
2.色谱柱的清洗保存和再生清洗：如使用缓冲盐，先用高比例水相冲洗30个柱体积，然后再转换到80%有机相冲洗30个柱体积。
再生：用95%水，甲醇，异丙醇，甲醇，95%水分别冲洗30个柱体积，在第一次用95%水时，进样10次100 μL DMSO。
清洗：100%乙醇0.3ml/min 3h，再用正己烷：异丙醇=9：1冲洗30倍柱体积并保存。
再生：根据不同类型正相柱选择。
[常规正己烷/异丙醇的柱子，乙醇（0.1%三氟乙酸）0.3ml/min 3h，乙醇0.3ml/min 3h，乙醇（0.1%二乙胺）0.3ml/min 3h，乙醇0.3ml/min 3h，正己烷：异丙醇=9：1冲洗30倍柱体积]清洗：用100%水冲洗30个柱体积去除盐，然后用100%甲醇或乙腈冲洗30个柱体积后保存在50%甲醇或乙腈中。
再生：先用高浓度盐的缓冲液清洗（浓度可以是5-10倍，不超过1M），然后再用100%水洗，50%乙腈或甲醇保存。
清洗：反相使用时同反相C18色谱柱，如短期不用，可用95%甲醇或乙腈保存;长期不用时需用异丙醇置换，最后用正己烷保存。
再生: NH2柱用于反相条件时，NH2键会水解，先用含1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗30个柱体积，乙腈-水(50:50)冲洗30个柱体积，95%水/5%乙腈冲洗30个柱体积，异丙醇冲洗30个柱体积，95%乙腈/5%水冲洗30个柱体积并保存。
液相色谱柱的清洗和再生
用25℃的20:80的乙腈
水溶液以0.1ml/min的
流速反向冲冼4小时
用25℃的20:80的乙腈
水溶液以0.1ml/min的
流速反向冲冼4小时
钠离子型
用85℃的0.1mol/L 的
NaNO3溶液以0.1ml/min
的流速反向冲冼4—16小
时
用水冲冼至平衡。
正相再生
适合于主要使用正相流动相的多孔石墨化碳柱。
用50ml二氯甲烷以1ml/min流速冲洗。
用50ml甲醇以1ml/min流速冲洗。
用50ml水以1ml/min流速冲洗。
用50ml 0.1mol/L盐酸以1ml/min流速冲洗。
用50ml水以流速1ml/min冲洗。
用25℃的20:80的乙腈
水溶液以0.1ml/min的
流速反向冲冼4小时
用65℃的20:80的
ACN:0.01NH2SO4溶液
以0.1ml/min的流速反
向冲冼4小时
钙离子型
用25℃的0.1mol/L pH6.3
的Ca(NO3)2溶液以
0.1ml/min的流速反向冲
用95%甲醇水溶液冲洗重新平衡。
将色谱柱改为正向。
作者：英国的R.Plumb-Glaxo
强有机溶剂再生
适合于水相分析极性或离子类分析物。
用50ml丙酮以1ml/min流速冲洗。
用120ml二丁醚以1ml/min流速冲洗。
用50ml丙酮以1ml/min流速冲洗。
7 带金属抗衡离子的聚合物填料
基质是带金属抗衡离子的聚合物色谱柱，有三种再生方法，每种方法详细列于下表：
色谱柱的再生,操作,注意事项
色谱柱的再生色谱柱的再生，这大概是一种美好的愿望，但是对于我们这种经费少的单位，只能死马当活马医治，所以再生的手段是必不可少的。
再生要根据色谱柱的具体类型来选择再生方式，当然，前面也说过了，再生这个词用在这里是不太恰当的。
那么什么问题会导致我们要对色谱柱进行再生呢通常，样品中含有一些对分析者来说不感兴趣的东西。
盐、脂质、含脂物质、腐质酸、疏水蛋白质和其它一些生物物质是一些可能在使用时与HPLC柱发生相互作用的物质。
这些物质有比分析者的目标物或少或大的保留值。
那些保留值较小的物质如盐类一般来说在空体积时就被冲出色谱柱。
这些非目标产物的干扰能被检测器检测到而且能形成色谱峰，气泡，基线上移或者是负峰。
如果样品成分在柱子中有很强的保留而且流动相溶液成分不足以把这些物质洗脱下来，多次上样后，这些吸附在柱子表面的物质通常就会积累在柱头。
这些行为通常只有通过平行实验才能发现。
有着中等保留值的样品能被缓慢洗出而且表现为宽峰，基线扰动，或者基线漂移。
有时候这些被吸附的样品成分累积到一定程度足以使他们开始形成新的固定相。
分析物能与这些杂质作用形成一定的分离机理。
保留时间会波动，拖尾会出现。
如果足够的污染产生，柱子的反压能超过泵所能承受的最大压力，使柱子无法工作以及在堵塞处产生空体积。
这时，我们就要对色谱柱进行再生，有的时候是和清洗混到一起的。
再生反相色谱柱1、首先倒转柱子。
2、以大约最佳流速的40%的流速冲洗柱子大约45-60分钟，使用的溶剂的顺序要按照水—甲醇—异丙醇—二氯甲烷—异丙醇—甲醇—水进行。
3、柱子转回正常方向，使用分析所用洗脱液平衡。
注意：在使用另外的淋洗方法的时候，一定要先用水开始冲洗以去除缓冲液，保证其后的洗脱液可以混溶。
详细见梯度洗脱需要注意到问题我也会另辟文章详细写一下流动相的互溶问题。
再生硅胶柱1、首先倒转柱子。
2、以大约最佳流速的40%的流速冲洗柱子大约45-60分钟，使用的溶剂的顺序要按照异辛烷（或己烷）—乙酸乙酯—干燥的异辛烷（或己烷）进行。
液相色谱柱再生流程
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液相色谱柱的使用及再生
液相色谱柱的使用及再生一、液相色谱柱的使用方法1.准备工作：在使用液相色谱柱之前，需要先进行柱前洗涤。
首先，将色谱柱和相关装置安装到系统中，并连接好进样器。
然后，使用纯溶剂通过色谱柱，将柱内的固定相洗涤干净。
这可用于去除残留的杂质和吸附在固定相上的杂质。
2.样品进样：将待分析样品溶解在合适的溶剂中，通过自动进样器或手动进样器将样品进样到柱中。
在进样过程中，要保证样品与液相色谱柱内的固定相充分接触，以获取准确的分析结果。
3.溶剂梯度：对于复杂的样品混合物，通常需要使用溶剂梯度来实现目标物质的分离。
溶剂梯度可以通过改变溶剂的组成比例或流速来实现。
在液相色谱仪中，可以使用梯度装置来实现自动的溶剂梯度。
4.分析条件控制：在进行液相色谱分析时，需要根据目标物质的特性来选择合适的分析条件，如流速、温度、检测器类型等。
这些条件将直接影响分析结果的准确性和重复性。
5.数据分析和解释：分析结束后，可以通过数据处理软件对所得数据进行处理和解释。
常见的数据处理方法包括峰面积计算、质量浓度计算、波长选择等。
二、液相色谱柱的再生技术1.清洗：随着柱使用时间的增加，固定相表面可能会积累附着物质，影响分离效果。
这时可以使用一些溶剂来清洗柱。
选择的清洗溶剂应该与分析柱内的固定相相溶，但不会溶解固定相。
常用的清洗溶剂包括醇类、有机溶剂和酸碱溶液等。
清洗过程中要保持流速适中，以充分冲洗柱内的固定相。
2.修饰：一些情况下，固定相表面可能出现活性减弱的情况，导致分离能力下降。
这时可以使用修饰剂来修复柱的活性。
修饰剂通常是一种能与固定相反应的化学物质，可以局部刷新固定相表面，恢复柱的活性。
3.再生：当固定相活性无法恢复，或者由于固定相老化等原因，完全更换液相色谱柱是常见的再生方法。
再生过程包括柱前洗涤、柱后洗涤、柱填充等多个步骤，需要根据具体柱的特性和使用情况来进行。
总结：液相色谱柱的使用方法和再生技术对于液相色谱分析的准确性和重复性具有重要意义。
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一。
保养
1.反相色谱柱每天实验后的保养：
使用缓冲液或含盐的流动相，实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。
注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。
2.长期保存色谱柱：
如色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度最好是室温。
二。
再生
因为色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的增加，会出现色谱峰高降低，峰宽加大或出现肩峰的现象，一般来说可能是柱效下降。
（1）、反相柱的再生：依次采用20-30倍的色谱柱体积的甲醇：水=10：90（V/V），乙腈，异丙醇作为流动相冲洗色谱柱，完成后再以相反顺序冲洗色谱柱。
（2）、正相柱的再生：依次以20-30倍色谱柱的体积的正己烷、异丙醇、二氯甲烷、甲醇作为流动相冲洗色谱柱，然后再以相反的顺序冲洗色谱柱。
要注意上述溶剂必须严格脱水。