液相色谱柱的使用及保养
液相色谱柱维护保养及仪器冲洗
液相色谱柱维护保养及仪器冲洗注意：每个色谱柱使用之前都要阅读一下使用说明书;色谱柱维护保养是很重要的,关系到色谱柱的使用寿命和检测结果的准确性,所以任何人用过色谱柱之后,一定要对色谱柱进行保养,管理人员和使用者互相监督;总的原则是色谱柱要轻拿轻放,避免损坏填料；另外没有使用的情况下,一定要保证两端的堵头封好;对于具体的色谱柱,下面列出常用色谱柱维护保养的具体方法和注意事项,以便使用者参考;min缓慢升高到min不接检测器冲洗色谱柱30分钟后,将色谱柱与检测器连上,流速调为ml/min冲洗色谱柱60分钟,然后不断降低有机相的比例如80%、50%、10%甲醇或乙腈各冲洗至少30分钟;若色谱柱暂时不用,则将色谱柱保存在高比例有机相中如80%甲醇或乙腈,或者参考该色谱柱使用说明书中建议的溶剂中；色谱柱使用时应用与分析流动相相同比例的有机溶剂将缓冲盐溶液换成水冲洗色谱柱15分钟,然后再换成流动相进行样品分析;样品分析完后,色谱柱维护与保养方法：流动相中若含酸、碱、盐类物质,则要先用10%甲醇或乙腈冲洗,min的流速冲洗至少30min,再用80%甲醇或乙腈冲洗至少30min,柱子保存在80%甲醇或乙腈里具体问题具体分析,洗脱程序可以是梯度洗脱程序,注意如果最后色谱柱保存的是高有机相,第二天用之前一定要用高水相过渡一下,再换成流动相;如柱子长时间未用,则柱子保存在100%的甲醇或乙腈里;对于含有离子对试剂的流动相如庚烷磺酸钠和十二烷基磺酸钠等,柱子应采用梯度洗脱,一般用乙腈-水系统水：90-10；乙腈：10-90冲洗时间要稍长些,然后保存于90%乙腈;需要特别强调的是,目前所有的C18柱均不能用纯水进行长时间1小时以上冲洗,除非有专门耐水的专用柱,否则,用纯水长时间冲洗色谱柱,会导致色谱柱的固定相流失和相塌陷,损坏色谱柱;大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2~8,有的pH稳定范围会宽,具体pH稳定范围参照色谱柱说明书,当分析条件的pH值偏小或偏大时,可选择pH稳定范围宽的柱子进行分析,否则,会损坏色谱柱;在每次进行样品分析时,要保证流动相包括盐、缓冲盐、酸等与色谱系统及柱内的保存液要互溶,如不能互溶,则需要用一定比例的有机溶剂不低于10%或与分析流动相相当的有机溶剂对柱子进行过渡,否则,流动相中的盐会在系统与柱内析出,影响样品分析或损坏柱子;硅胶柱、正相手性色谱柱包括AS-H、AD-H、OD-H系列,5DMB、5TBB系列,OA 系列如OA-3100、OA-3300对于未启用的新的色谱柱,在保证系统是正相的情况下,可先用异丙醇小流速流速为~min冲洗色谱柱约15分钟,然后换上正相流动相平衡进行色谱分析;硅胶柱及正相手性柱不能过水相对于sepax系列的硅胶柱,可以过低比例的水相有机相不低于50%,接上色谱柱之前要保证液相色谱系统中的所有管路为正相流动相如是不含盐的反相溶液如水/乙腈；水/甲醇,先用异丙醇冲洗所有管路,然后用正相流动相冲洗所有管路,最后再接上色谱柱；若反相流动相中含有缓冲盐如缓冲盐/乙腈；缓冲盐/甲醇,先用纯水冲洗HPLC系统,然后用异丙醇冲洗所有管路,最后用正相流动相冲洗,再接上色谱柱;使用结束后,先用异丙醇冲洗色谱系统与色谱柱,再用色谱级的正己烷冲洗色谱柱,或者直接用正己烷－异丙醇90：10冲洗,并保存在正己烷－异丙醇90：10中;如长时间未用,则保存在正己烷中;需要特别强调的是,冲洗硅胶柱时,不能用纯水或含水的有机溶剂或缓冲盐体系冲洗色谱柱,只能用纯有机溶剂冲洗色谱柱对于sepax系列的硅胶柱可以用不低于50%有机相冲洗色谱柱,最后保存在纯的有机溶剂中;在进行样品分析前,一定要保证流动相与色谱系统及色谱柱柱内的保存液要互溶,如不互溶,则需要用异丙醇过度,否则,会影响色谱系统与损坏柱子;反相手性色谱柱如：CHIRALCEL OZ-3R：同C18柱阴离子柱和阳离子柱：目前常见的阴子柱有waters IC-Pak TM anion,阳离子柱有磺酸基阳离子柱与waters阳离子交换柱钙型;对于waters IC-Pak TM anion 和waters阳离子交换柱钙型,新柱子使用前用高纯水小流速min缓慢升高到min冲洗约30分钟,然后再换成流动相平衡色谱柱;在冲洗色谱柱之前,要保证整个色谱系统为纯水相;对于磺酸基阳离子柱含有硅胶基柱的,使用前用甲醇或乙腈小流速冲洗30分钟,然后高纯水替换系统冲洗,然后接上色谱柱;分析完样品后,对于waters IC-Pak TM anion和waters阳离子交换柱钙型用高纯水冲洗色谱柱,色谱柱最后保存在纯化水中;对于磺酸基阳离子柱,用50%的乙腈或甲醇冲洗色谱柱30分钟,最后保存在甲醇或乙腈中参照柱子说明书;冲洗所用流速根据柱子耐压情况进行调整;需要特别强调的是waters IC-Pak TM anion和waters阳离子交换柱钙型是不能过有机相纯有机溶剂或有机溶液,否则会损坏色谱柱;氨基柱、氰基柱、苯基柱及C8柱目前所使用的氨基柱、氰基柱、苯基柱及C8柱基本都是使用反相系统,其操作方法与维护保养与C18相同;对于新碰到的别的型号的色谱柱,如本规程没有说明时,要参照色谱柱说明书具体问题具体分析;液相仪器的冲洗1、冲洗色谱系统具体情况具体分析,可针对缓冲盐浓度较高的流动相一般做完试验冲洗完色谱柱后,换上两通,将各通道放于10%乙腈中冲洗至少30分钟若原色谱系统中流动相含盐,则用高纯水有时候用温水效果更好冲洗至少30分钟后再用10%乙腈冲洗;若仪器长时间不用,则将仪器保存于80%乙腈中; 2、清洗进样针、柱塞杆洗针液应选择能较好溶解样品的溶剂如该样品在70%甲醇中溶解,则洗针液应选择70%甲醇或更高比例的甲醇；清洗柱塞杆的溶剂为了清洗流动相中析出的盐,一般选择低比例的有机相,如10%甲醇或乙腈;3、仪器的钝化色谱泵溶剂过滤头、进出口阀及管路包括进样器和检测池若被污染,系统应做清洗和钝化处理;一般采用30%磷酸水溶液作为清洗剂,用6mol/L硝酸作为钝化剂,先清洗再钝化;清洗的目的是去除不锈钢管路及系统内的污垢;钝化的目的是使不锈钢管路的内表面形成光滑均匀的氧化膜;30%磷酸水溶液制备：取85%浓磷酸35ml与65ml水混匀;6mol/L硝酸的制备：取浓硝酸40ml与60ml水混匀;方法：将色谱柱取下,用两通连接进样器和检测器,将所有吸滤头放入高纯水中,以min流速过渡至少30分钟,待管路中有机溶剂洗脱干净；再换用30%磷酸清洗系统约45分钟,再换高纯水冲洗,直至出口水pH值约为6～7用pH试纸测试,清洗完成；然后换用6mol/L硝酸冲洗系统约45分钟,再换高纯水冲洗,直至出口水pH值约为6～7,钝化完成;用纯甲醇过渡,浸润泵头及管路,备用;。
液相色谱柱的维护与保养
液相色谱柱的维护与保养
液相色谱柱的维护与保养非常重要，可以延长柱的使用寿命并保证分离效果的稳定性。
以下是液相色谱柱的维护与保养的一些建议：
1. 保持柱的洁净：在使用结束后，及时用纯水和有机溶剂洗净色谱柱。
可以采用逆向流动的方法，即用纯水从柱底往上流动直到洗净。
避免使用酸碱溶液以及有机溶剂中的含有杂质的溶液来清洗，避免杂质残留。
2. 避免干燥：柱在储存或者不使用时要避免干燥。
可以用保湿的方式，例如在储存时使用密封塑料袋或保湿剂。
避免长时间暴露在空气中，避免干燥引起的柱损坏。
3. 正确使用柱：避免使用超过柱最大压力或流速的方法进行色谱分离，这会导致柱壁破裂或分离效果恶化。
遵守柱的使用说明和规格。
4. 定期检查：定期检查柱的使用情况，例如检查是否有柱壁表面损坏或吸附物的形成。
如果发现有问题，应及时更换色谱柱。
5. 柱的再生：某些类型的液相色谱柱可以通过柱的再生来延长使用寿命。
具体的再生方法可以参考柱的使用说明书或与供应商咨询。
6. 注意避免柱受到冲击：在搬运和使用过程中要轻拿轻放，避免柱受到冲击造成损坏。
总之，正确的维护与保养可以延长液相色谱柱的使用寿命并保证其分离效果的稳定性。
根据柱的材质和类型，还可以采取适当的措施进行再生以延长柱的使用寿命。
常用液相色谱柱使用与保养
常用液相色谱柱使用与保养液相色谱（Liquid Chromatography，简称LC）是一种分离和分析物质的方法，广泛应用于化学、生物化学、环境科学、食品科学等各个领域。
在液相色谱系统中，色谱柱是其中最为重要的组成部分之一，对色谱分离的效果和分析结果有着重要影响。
因此，正确的使用和保养色谱柱是保证色谱实验质量和延长色谱柱寿命的关键。
一、色谱柱的选择1.根据分析需要选择合适的色谱柱类型，如反相、离子交换、凝胶、手性等。
选用的色谱柱应能实现样品分离的目标。
2.考虑色谱柱尺寸，如柱径和柱长。
柱径越小，理论板高度越高，分离效果越好，但同时也容易增大柱后压力。
柱长则决定了分离时间，通常根据样品的复杂程度和实验要求进行选择。
3.考虑色谱柱填充物，如C18、C8、C4等反相填料。
填充物的理化性质不同，会对分离效果产生影响。
根据样品性质和分离目标选择填料。
二、使用色谱柱的注意事项1.在使用前检查色谱柱外观，确保柱壁完好无损，无裂缝或损坏。
同时检查柱头端口是否干净，无污物残留。
2.进行柱前的处理，如样品预处理和溶剂预处理，保证样品的稳定性和纯度，避免对色谱柱产生不利影响。
3.操作时避免剧烈振荡、震动或摇晃色谱柱，以免对柱填料产生机械损伤。
4.在柱温控制装置的帮助下，保持色谱柱运行温度的稳定，以确保分离结果的重复性和再现性。
三、色谱柱的保养1.使用前、使用后和中间暂停使用时需正确保管色谱柱。
使用前，色谱柱应存放在干燥、阴凉的地方，避免阳光直射。
使用后，将色谱柱用保护帽覆盖，防止灰尘、气体和湿气进入柱内。
中间暂停使用时，用适当的主流溶液保养柱床，避免干燥。
保养柱床时需将色谱柱倒放，使柱床保持湿润状态。
2.避免在色谱柱上溢液，以免引起柱床断裂或填料活化。
使用前，尽量将样品溶液过滤或超声处理，避免样品中存在大颗粒杂质。
3.保证洗涤液和贮存液的纯度和质量，避免因杂质和离子引起色谱柱填料的损坏。
对于需要多次使用的色谱柱，洗涤液需要选择与柱填料相容的溶剂进行洗脱。
液相色谱柱的使用和维护保养
液相色谱柱的使用和维护保养液相色谱柱是一种广泛使用的分离技术，可用于分离和测定复杂混合物中的组分。
由于液相色谱柱具有精确分离、操作简便、分离效率高等特点，因此，越来越多的实验室都开始使用该技术。
在使用液相色谱柱时，正确的维护保养非常关键。
本文将介绍液相色谱柱的使用方法和维护保养技巧，以便确保您的分离实验能够得到最佳的结果。
一、液相色谱柱的使用1. 准备工作使用液相色谱柱之前，必须先进行预备工作。
这包括：清洗和准备液相色谱柱以免携带有污染物。
准备需要分离和测定的样品。
准备适当的流动相。
流动相必须符合样品的性质。
液相色谱柱的流动相应该是无色的，纯净的水或相应的缓冲液，并具有必要的缓冲能力。
根据柱的尺寸来选择适当的样品注射量。
2. 柱的装配通常情况下，液相色谱的柱是由管状的柱壳、填充柱节、柱端固定件和柱段之间的密封件组成。
在对柱进行装配的时候，对组件应该加强检查以保证每一个元件的质量。
柱被放置在可控压力的色谱装置中，直到达到设定的温度，流动相通过柱床高度。
在样品通过柱床的过程中，要确保流动相的速度恰好足够将所有的组分都分开并在规定的时间内溶出。
3. 分析过程准备工作完成后，可以开始进行样品的分离实验。
在整个过程中，以下措施应予以注意：在样品从样品室进入色谱柱之前，流动相必须在柱中流动。
否则，在注入样品时，将有空气囤积在柱床中，会在透射检测器处产生噪音。
更换液相色谱柱的流动相时需要小心，因为对于一些化学品来说，即使是微量的杂质也会对结果产生影响。
如果发现柱床粘住或困住，不应使用力量来拉动柱子，而应该使用相反方向的流动相，以使样品回到某一个位置，并反向流动一会，这样可以避免样品损坏柱子床。
二、液相色谱柱的维护保养液相色谱分析的成功与否，除了预备工作和分析过程外，还与样品的制备、取样位置以及样品进入液相色谱柱中的流动相的条件等因素有关。
因此，经常做好液相色谱柱的保养工作，可以有效防止柱子损坏，延长其寿命并保证实验结果的准确。
液相色谱柱的使用和维护
前言液相色谱的分离原理是,在色谱柱流动相中样品的不同组分与固定相发生吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和等作用,由于作用力的大小、强弱不同,各种组分在固定相中滞留的时间也不同,因而先后从以固定相中流出而得到分离。
因此液相色谱分离的关键之一是色谱柱中的固定相。
柱效的好坏直接影响目标化合物的分析和检测。
但在液相色谱运行过程中,色谱柱极易发生问题,因此掌握正确使用和维护色谱柱的知识非常必要。
色谱柱使用过程中容易发生柱堵塞引起系统压力过高;柱效低引起峰拖尾、变宽;柱污染、损坏导致鬼峰等问题。
引起这些问题的内在原因有:(1) 硅羟基的死吸附。
色谱柱的基材硅胶粒子表面存在硅胶羟基。
任何物质在色谱柱中都存在双分配效应,即在流动相与固定相之间进行分配,又在流动相与硅羟基之间进行分配。
被分析物质被硅羟基吸附称为非特异性吸附,或称死吸附。
当硅羟基对被分析物质的吸附趋近于饱和状态时,色谱柱柱效下降,峰形出现拖尾、变宽。
(2)重金属。
色谱柱的基材硅胶粒子无论纯度多高，无论怎样处理,都会有不少于5x10- 6的重金属以金属氧化物的形式残存在硅胶粒子的表面,这些金属氧化物很容易与其它化合物形成螯合物,使其被氧化,产生不对称峰或拖尾峰。
例如儿茶素和大多数中药,因含有多酚结构,极易被金属氧化物氧化,影响其分离效果。
(3) 碳流失。
固定相经长期使用,会有部分碳链被流动相洗脱下来,随流动相一起流出色谱柱外, 造成碳流失。
(4)缓冲液中盐的析出。
在做色谱分析时,有时流动相中会含有缓冲盐溶液。
分析结束后,如果没有先用含一定配比的水相流动相冲洗,而直接用纯有机相冲洗,瞬间柱子中的微环境是高有机相、低水相。
这时流动相中的缓冲盐溶液极易析出盐,将柱子堵塞,使柱压升高,柱效下降。
(5)色谱柱变干。
如果对色谱柱保存不当,使色谱柱中的保存液全部挥发,柱子内部变干,造成色谱柱的损伤,影响分离效果。
2色谱柱的使用新柱使用前应先检查产品包装、外观是否完好。
液相色谱柱保护柱安全操作及保养规程
液相色谱柱保护柱安全操作及保养规程液相色谱柱保护柱是在液相色谱分析中不可或缺的部分，它不仅可以延长色谱柱使用寿命，还能保证结果的准确性和可靠性。
但是，在使用液相色谱柱保护柱的过程中也存在一些潜在的危险，因此我们需要了解液相色谱柱保护柱的安全操作以及保养规程。
安全操作1. 确认柱保护柱适用于分析物在选择柱保护柱之前应该首先确认柱保护柱是否适用于分析物，也需要明确分析物的性质以及流动相的性质。
如果分析物中含有弱酸、弱碱成分，应该选择正相柱保护柱；如果分析物中含有酸性、碱性成分，则应该选择反相柱保护柱。
2. 正确连接柱保护柱在连接柱保护柱的时候需要确认连接口是否密封，避免柱保护柱造成柱床或者柱头受到破坏。
3. 确认起点和终点在连通柱保护柱之前，必须确定身份的起点和终点，以此来避免将流动相直接注入保护柱内部。
4. 避免高压冲击在液相色谱分析中，高压是常见的现象。
当高压过大或者压力突然降低时，会对柱保护柱造成冲击，导致保护柱损坏。
因此，需要避免压差过大，分段进行柱洗和换柱。
5. 避免液相中的氧化剂一些溶解度较差的氧化剂（如过氧化氢、亚硝酸盐等）会与柱保护柱中的硅酸胶反应，导致保护柱损坏。
因此，在使用液相色谱柱保护柱的时候需要避免使用这些氧化剂。
6. 定期更换柱保护柱柱保护柱是一种消耗品，在使用过程中需要定期更换。
如果不及时更换，柱保护柱中的沉淀物和过期的填料会对柱床造成污染，降低分析结果的准确性和可靠性。
保养规程1. 消毒为了避免保护柱内部发生细菌或者霉菌污染，需要定期消毒保护柱。
常用的消毒方法包括用有机溶剂洗涤、用二氧化硫气体灌注或者用过氧化氢消毒液处理。
2. 清洗柱体柱保护柱内部可能会形成脱落的硅酸胶颗粒，如果不及时清洗会对分析结果产生影响。
因此，需要定期用高纯度溶剂清洗柱体。
避免使用大量有机溶剂或者酸碱溶液，以免损坏保护柱。
3. 定时更换柱保护柱柱保护柱属于消耗品，使用一定时间之后需要及时更换。
在更换柱保护柱之前，应该进行柱床洗涤，避免污染保护柱内部。
月旭液相色谱柱安全操作及保养规程
月旭液相色谱柱安全操作及保养规程月旭液相色谱柱是一种常见的实验室仪器，它广泛应用于药物分析、生命科学和环境保护等领域。
在使用月旭液相色谱柱时，正确的操作和保养至关重要，这不仅可以提高实验结果的准确性和可靠性，还可以延长液相色谱柱的使用寿命。
本文将介绍月旭液相色谱柱的安全操作和保养规程。
安全操作1. 压力限制液相色谱柱在操作时会产生高压，因此必须确保操作过程中压力始终处于安全范围内。
不同型号的液相色谱柱压力限制不同，应严格按照仪器使用说明书上的指示进行操作，不得超过压力限制值。
此外，当压力突然升高时，应立即停止操作并进行检查。
2. 操作前检查在操作前，应检查柱子和接头的密封性。
如果柱子和接头的密封不良，将导致流体泄漏和柱子的破裂，从而对操作人员和仪器造成伤害。
因此，应定期检查柱子和接头的密封性，并在发现问题时及时更换。
3. 操作时的防护措施在使用月旭液相色谱柱时，应遵守实验室的安全操作规程。
操作人员应正确穿戴实验室安全防护用品，如实验室大衣、护目镜、手套等。
4. 操作结束后的处理操作结束后，应按照实验室的废物处理规程处理废液和废料。
同时，应关闭色谱柱，并按照操作手册上的指示进行保养。
保养规程1. 柱子储存月旭液相色谱柱应在常温下储存，并保存在干燥通风的地方。
柱子不得存放在高温和高湿的环境中。
2. 定期检查和保养在使用液相色谱柱过程中，应定期进行检查和保养。
首先，检查并清洗柱子表面，以确保表面的洁净和光滑。
其次，检查紫外可见检测器和泵的运行情况，确认设备的正常运行。
如果发现设备不正常，则应立即停止使用并进行维护。
3. 液相色谱柱的清洗清洗液相色谱柱的方法主要包括用纯水冲洗、以及使用醇、甲醛等溶液进行反向冲洗。
清洗时应避免使用强酸或强碱。
清洗后，应将色谱柱空转数小时，以便将水分和其他残留物完全清除。
4. 更换液相色谱柱液相色谱柱随着使用时间的增加和寿命的结束，应定期更换。
在更换柱子时，应按照操作手册上的指示进行操作。
高效液相色谱仪色谱柱的维护与保养
高效液相色谱仪色谱柱的维护与保养一、高效液相色谱仪色谱柱的维护与保养1. 注意安全在进行高效液相色谱仪色谱柱的维护和保养时，应注意安全，不要将手放在柱子上或柱子的内部，以免受到电击。
同时，也要注意防止外界的杂质进入柱内，避免影响柱子的性能。
2. 清洁色谱柱首先，使用湿抹布将色谱柱表面清洁干净，然后使用笔刷和溶剂将柱子内壁清洁干净。
清洁完毕后，需要将柱子放置在洁净的空气中，以便完全自然晾干。
3. 保养色谱柱在保养色谱柱时，需要注意柱子的密封，定期检查柱子的密封情况，如果发现柱子有渗漏现象，及时采取措施进行修理。
另外，还需要定期检查柱子的耐压强度，以免因耐压强度不足而造成柱子的破裂。
4. 定期更换色谱柱定期更换色谱柱是高效液相色谱仪色谱柱的保养工作之一。
色谱柱的使用寿命一般为2-3年，随着使用时间的延长，色谱柱的性能会发生变化，从而影响测试结果的准确性。
因此，需要定期更换色谱柱，以保证测试结果的可靠性。
二、色谱柱的存储1. 色谱柱应存放在干燥、无污染的环境中，避免阳光直射，以免受到湿气和污染物的侵害。
2. 色谱柱应放置在室温下，避免高温环境，以免影响色谱柱的性能。
3. 色谱柱应存放在通风良好的环境中，避免过多的湿气，以免影响色谱柱的密封性能。
4. 色谱柱应存放在有足够空间的地方，以免柱子撞击，造成损坏。
5. 色谱柱应存放在牢固的架子上，以免柱子受到重力的影响，造成损坏。
6. 色谱柱应存放在有足够防护措施的地方，以免受到杂质的污染，影响柱子的性能。
三、总结高效液相色谱仪色谱柱的维护与保养是高效液相色谱仪色谱柱使用的必要措施，既要注意安全，又要注意清洁和保养，定期更换柱子，并且要认真维护存储环境，以确保高效液相色谱仪色谱柱的正常使用。
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C18, C18, C18, C18,
phenyl, CN, NH2, Silica C8, phenyl, CN, Silica C8, Silica C4 C18, C8
色谱柱的清洗
对所做的样品要有充分的了解
用对该样品洗脱能力最强的流动相清洗
硅胶柱的一般方法
先用甲醇洗去极性杂质
回收率低，不出峰
“不可逆”吸附 固定相过强或流动相过弱 非特异性吸附
色谱柱以外的因素（一）
“柱效”问题，不一定是色谱柱问题！
仪器问题：连接不好造成死体积
进样器
检测器
管路，连接口 保护柱 在线过滤器堵塞
流动相问题：色谱柱未平衡好 进样量太大
色谱柱与仪器的联接
影响实验结果好坏的最重要因素
是决定性的步骤
样品预处理常用的方法
高速离心 过滤、超滤 选择性沉淀 衍生反应 液-固萃取 其他
/ 液-液萃取
Sep-Pak样品处理小柱
样品预处理的过程
去除微粒
过滤
过滤膜/过滤装置
有机(0.5m)/无机(0.45m)
膜片可更换
流速∶1.0 ml/min 纸速∶20 cm/min (用记录仪时，接检测器10mV档) 检测器灵敏度∶0.5-1.0AUFS (用记录仪时) 检测器时间常数∶小于0.2
谱带展宽（ml） =1000×W（cm）/20 （记录仪） =1000×W（min） （工作站）
液相色谱实用技术（二）
样品衍生∶氨基酸分析
PT法 IA CG O方 NS C
R
-
N C H O CO ຫໍສະໝຸດ 2氨 基 酸异酯 硫 氢 酸 苯
S R N H O H C C H NC O
-
AccQ-Tag 衍生法
H O R H1 N N R 2 O
N
１氨 °基 及酸 ２ ° O N N 半 衰 期 ＜ 1 秒N O O H 0 2 半秒 衰 期 约 1 5
除HP外，不同公司产品，其接头不同。处
理不当时，会造成：
色谱峰展宽（死体积）使柱效下降、或渗漏
解决办法：
自制相应的转换接头 使用“通用”型接头（锥箍及螺母）
这种锥箍在不锈钢管上是活动的，因此可以换接
不同的色谱系统及色谱柱。从Phase Separations公司能得到一些PEEK工程塑料的接 头，可用在所有类型的色谱柱上的。
) 整体式（对Waters柱）- 使用方便，容易
各种不同填料配合Waters柱
Sentry Guard 的规格
产品描述
3.920mm柱长 适应任何色谱柱，不需工具即可安装及更换 可换柱芯式设计，提供各种填料:
BondaPak: Nova-Pak:
Resolve:
Delta-Pak: Symmetry:
Waters色谱柱的联接
Waters及Phase Separations锥箍及螺母相同， 但锥箍前露出不锈钢管长度不同，其长度被称为 ：“stop-depth” Waters除Spherisorb以外的各种品牌的色谱柱用 的是“Waters”标准，其stop-depth的长度为 0.130英寸 Spherisorb品牌的色谱柱及Phase Separations 公司其他品牌色谱柱用的是“Parker-style”标 准，其 stop-depth 为0.090英寸
有机溶剂
乙腈，甲醇
强酸
三氯乙酸，过氯酸
盐
50%
硫酸铵 10% TCA
样品衍生
提高检测的灵敏度
增加紫外基团以增强紫外检测的灵敏度 增加荧光基团使样品用高灵敏度荧光检测器
改变分离的选择性
改变组份的基团，如：
变离子型化合物为非离子型，用反相方法分离
典型的例子
氨基酸分析
样品的预处理
样品预处理的目的
除去微粒 减少干扰杂质 浓缩微量的组份 提高检测的灵敏度及选择性 改善分离的效果 有利于色谱柱及仪器的保护
样品的预处理重要性
占样品分析时间的比例
样品预处理所用时间远大于色谱分离的时间
占分析的消耗总成本最大
消耗大量的溶剂及其他化学品
实验的重复性及准确性最差的环节
避免色谱柱床的干枯
避免机械震动
防止细菌生长
注意存放的温度
色谱柱常见毛病
柱压过高
多少才算高?
不同色谱柱有差异
不同系统有差异
不同溶剂有差异
柱效低
重复性差
不出峰，回收率低
柱压过高
为什么柱压会过高
微粒堵塞
样品
流动相
密封垫
柱床膨胀 不可逆吸附 细菌生长
液相色谱实用技术
色谱柱的使用及保养
良好的色谱实验习惯
拿到一根新色谱柱时，先测柱效 保留在新色谱柱上测得的色谱图，并记录
条件 定期检测柱效 定期检测仪器的谱带展宽
色谱柱的使用及操作
流动相的转换
特别是GPC柱
流速(压力)的变化幅度
温度的变化幅度
专用色谱柱∶样品及溶剂的要求
新型的保护柱 — Sentry Guard
Sentry Guard 的特点
特点
高质量, 高效填料 - 不损失柱效 增加分析柱效 - 增加适应范围 20mm柱长 - 脏样品载荷能力大，能延长保 护柱寿命 手可拧紧接头，安装时不需要工具
通用柱套
- 适用于所有的HPLC柱(3.9及4.6内径
除去样品及流动相中的颗粒
给色谱柱提供化学的保护
防止分析柱被化学污染
装置
在线过滤器 自装填料保护柱 预装保护柱
在线过滤器
In-Line
Filter，部件号 WAT084560
防止颗粒在色谱柱头累积 优点：基本不影响柱效 在需要高柱效的分析时中常用（如：氨基酸 分析）
可更换的消耗品
流动相及样品的预处理
液相色谱对流动相的要求
除色谱柱对流动相对的要求外，还有∶
与检测器匹配 脱气 避免卤素离子（不锈钢系统） 溶剂的粘度 细菌的生长
流动相的脱气
流动相脱气的目的
使色谱泵的输液准确
输液均匀准确，并且脉动减小 保留时间及色谱峰面积的重现性提高 防止气泡引起的尖峰 基线稳定，信噪比增加 溶剂的紫外吸收本底降低 减少死体积 防止填料的氧化
Guard-Pak预装保护柱
Waters的部件号，WAT088141 有各种填料的预装柱供选择，使用方便。填料容
积较小，也引起柱效降低
可换芯式保护柱
新型的保护柱 — Sentry Guard
适应的用户类型
非常脏, 非常复杂的样品本底
生化样品,
溶液
环境样品
食品
不想作太多的固相萃取 不想降低柱效
衍基 生酸 后 的 氨
A生 Q 试 C 剂 衍
+
H O O N O
O N H H O 2 N N
N 琥 - 珀 羟亚 基胺 酰
+
C O 2 +
O
6 鄝 基胺 - 啉琥 氨N 珀 基羟亚 酰
浓缩样品
浓缩样品的方法
萃取/吹干 沉淀/再溶解 色谱法 液固抽提/Sep-Pak小柱
固相萃取（SPE）技术
更换滤芯，部件号 WAT005139 (5/pkgs) 更换垫圈，部件号 WAT084567 (10/pkgs)
保护柱
可避免化学污染。多数保护柱影响到整个
色谱柱的柱效，特别是在用微柱时 保护柱的种类
普通自装填料的保护柱
Waters的部件号，WAT084550，用户自装填料 影响柱效同装填技术有关，柱效降低较大
缓冲液的pH值不合适 缓冲液的缓冲能力不足
简单的判别方法
高的柱反压是否伴随着
保留时间变化? 峰形变坏? 分辨率变坏?
测量色谱系统的谱带展宽
典型的分析系统应远小于 100 微升 如大于此数应检查仪器系统
测量色谱系统的谱带展宽
卸下色谱柱，用UNION代替之 按测柱效方法，以1/10的样品浓度进样，大约2~5微升 用5 sigma方法测4.4%峰高处的峰宽：W 仪器参数∶
用干燥的二氯甲烷、正庚烷100~200ml依次活化
键合相柱(烷基)的一般方法
20倍柱体积的：甲醇-氯仿-甲醇-水依次冲洗
记 住 ∶ 每 种 色 谱 柱 可 能 有 特 定 的 方 法 一 定 要 先 看 其 使 用 说 明 ！
色谱柱的存放
存放前的处理
除去杂质、盐
合适的存放溶剂
不同的Stop-Depth长度
色谱柱以外的因素（二）
柱压过高问题，不一定是色谱柱问题！
系统反压问题
阻尼器堵塞
进样器堵塞
管路或连接口堵塞 在线过滤器不干净 保护柱
压力传感器不准确 流速是否错误?
色谱柱以外的因素（三）
实验的重复性差
梯度实验时平衡时间不足 温度波动 流动相组成改变 样品溶剂不同 样品稳定性不好 方法的开发不好
记 住 ∶ 拿 到 一 根 从 未 用 过 的 色 谱 柱 时 一 定 要 先 看 其 使 用 说 明 ！
色谱柱的保养（一）
样品方面
除去微粒及杂质 了解样品在流动相中的溶解度
如样品的溶剂不是流动相，一定要用流动相试溶
解度，防止其在流动相中析出
了解样品与色谱柱的基质/填料是否相互作 用
色谱柱的保养（二）
流动相方面
除去微粒 纯度的要求
超纯水，梯度实验时水中有机杂质含量要低
缓冲液的pH值，在填料的允许范围内 缓冲液（盐）的浓度