微生物生化鉴定
微生物的生化鉴定
微
生 物
4.甲基红实验（M.R实验）
生
（3）结果观察记录
化
鉴
加入甲基红1~2滴，红色——M.R实验阳性，用 + 表示；不变色——M.R
定
实验阴性，用 - 表示。分别将试验（“+”表示阳性，“-”表示阴性）
技
术37℃恒温倒置培养24-48h。
— 1—
• 微生物生化鉴定常规实验
微
生 物
2.淀粉水解实验
生
（3）结果观察记录
化
鉴
将平板打开盖子，滴入少量Lugol’s碘液于平皿
定
中，轻轻旋转平板，使碘液均匀铺面整个平板，
技
术
判断结果。
有水解圈—淀粉水解实验阳性，用 + 表示；
无水解圈—淀粉水解实验阴性，用 - 表示。
食品微生物检验技术
目录页
微生物生化鉴定原理 微生物生化鉴定常规实验
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微生物生化鉴定原理
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• 微生物生化鉴定的原理
微
生
物 生
微生物代谢类型多样性具体表现在生化反应的多样性，
化
不同微生物分解生物大分子的能力，分解利用含碳化合物、
鉴
含氮化合物的途径和产生代谢产物也各不相同。
定
微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产
技 术
的小导管，包扎灭菌。
试管标记：培养基名称和接种细菌菌名。
（试管4支，分别标记大肠杆菌、枯草杆菌，金黄色葡萄球菌，第四支空白对照）
接种培养：挑取少量菌种于试管中，37℃培养24h。
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• 微生物生化鉴定常规实验
微
生 物
1.糖发酵实验
生
微生物生理生化鉴定
提问：志贺氏菌都能分解葡萄糖，产酸不产 气，大多不发酵乳糖，不产生H2S。应该产 生什么现象？
大肠杆菌，能分解葡萄糖产酸产气，
大多数能分解乳糖，不产生H2S。应该是什
么现象？
沙门氏菌，能分解葡萄糖，不发酵乳
糖，大多数产生H2S，多数产气。
沙门氏菌的TSI试验
吲哚试验：用来检测细菌对色氨酸的利用能力。
有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色 氨酸产生吲哚和丙酮酸，吲哚本身无色，不能 直接观察到，当加入对二甲基氨基苯甲醛试剂 时，可形成红色的玫瑰吲哚。
吲哚试验
大肠杆菌：+ 产气杆菌： –
阳性 阴性
甲基红试验：用来检测细菌发酵葡萄糖的产 酸能力。当细菌代谢糖大量产酸时，就会使 加入培养基中的甲基红指示剂由橘黄色 （pH6.3）变为红色（pH4.2），即甲基红 反应阳性。
1、淀粉的水解试验
菌种：枯草芽孢杆菌，大肠杆菌。 培养基：固体淀粉培养基。 溶液或试剂：卢戈氏碘液。 器材：无菌培养皿，接种环，试管架。
1、淀粉的水解试验
操作步骤：
（1）无菌操作制备淀粉固定培养基平板。
（2）将枯草芽孢杆菌、大肠杆菌分别在同一平 板不同的部分划线接种，在平板的反面分别写 上菌名。
使吲哚溶于乙醚中。静置片刻，待乙醚层浮于液面后 形成明显的乙醚层，再沿管壁加入吲哚试剂8-10滴。 如有吲哚存在，则乙醚层呈现玫瑰红色，为阳性反应。
H2S试验
尿素酶（Urease）试验：
有些细菌能产生尿素酶， 将尿素分解、产生2个分子 的氨，使培养基变为碱性， 酚红呈粉红色。
1、未接种
微生物生理生化鉴定
1、淀粉的水解试验
微生物对大分子的淀粉不能直接利用，必 须靠产生的胞外淀粉酶将其分解后才能吸 收利用。
微生物生化鉴定管
微生物生化鉴定管微生物生化鉴定管是一种常用的实验室工具，用于对微生物进行生化鉴定。
通过使用生化鉴定管，可以了解微生物的代谢特性和生化反应，进而对微生物进行分类和鉴定。
以下是微生物生化鉴定管所包含的试验及其简要介绍：1.糖发酵试验：糖发酵试验是鉴定细菌能否利用不同糖类的重要方法之一。
不同细菌对糖的分解能力不同，因此可以通过观察糖发酵管中是否出现气泡来鉴别细菌。
2.柠檬酸盐利用试验：某些细菌能够利用柠檬酸盐作为碳源，通过观察是否能够利用柠檬酸盐生长来鉴别细菌。
3.丙二酸盐利用试验：丙二酸盐是植物体内一种有机化合物，某些细菌能够利用它作为碳源。
通过观察丙二酸盐利用试验管中是否出现颜色变化来鉴别细菌。
4.淀粉水解试验：淀粉水解试验是鉴定细菌能否分解淀粉的试验。
通过观察淀粉水解管中是否出现透明圈来鉴别细菌。
5.甲基红试验：甲基红试验是鉴定细菌能否利用某些有机酸作为碳源的试验。
通过观察甲基红试验管中颜色的变化来鉴别细菌。
6.乙酰甲基甲醇试验：乙酰甲基甲醇试验是鉴定细菌能否将乙酰甲基甲醇氧化成乙酸的试验。
通过观察乙酰甲基甲醇试验管中颜色的变化来鉴别细菌。
7.伏-普试验：伏-普试验是鉴定细菌能否将葡萄糖氧化成葡萄糖酸和过氧化氢的试验。
通过观察伏-普试验管中颜色的变化来鉴别细菌。
8.七叶苷水解试验：七叶苷水解试验是鉴定细菌能否分解七叶苷的试验。
通过观察七叶苷水解管中是否出现颜色变化来鉴别细菌。
9.吲哚试验：吲哚试验是鉴定细菌能否产生吲哚的试验。
某些细菌能够产生吲哚，而其他细菌则不能。
通过观察吲哚试验管中颜色的变化来鉴别细菌。
10.明胶液化试验：明胶液化试验是鉴定细菌能否分解明胶的试验。
通过观察明胶液化管中是否出现透明圈来鉴别细菌。
这些生化鉴定试验可以帮助我们了解微生物的代谢特性和生化反应，进而对微生物进行分类和鉴定。
在实际应用中，需要根据具体情况选择合适的生化鉴定管进行实验，以确保结果的准确性和可靠性。
微生物常规生化鉴定技术
微生物常规鉴定技术一、形态结构和培养特性观察１、微生物的形态结构观察主要是通过染色，在显微镜下对其形状、大小、排列方式、细胞结构（包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等）及染色特性进行观察，直观地了解细菌在形态结构上特性，根据不同微生物在形态结构上的不同达到区别、鉴定微生物的目的。
２、细菌细胞在固体培养基表面形成的细胞群体叫菌落（colony）。
不同微生物在某种培养基中生长繁殖，所形成的菌落特征有很大差异，而同一种的细菌在一定条件下，培养特征却有一定稳定性。
，以此可以对不同微生物加以区别鉴定。
因此，微生物培养特性的观察也是微生物检验鉴别中的一项重要内容。
１）细菌的培养特征包括以下内容：在固体培养基上，观察菌落大小、形态、颜色（色素是水溶性还是脂溶性）、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征及迁移性等。
在液体培养中的表面生长情况（菌膜、环）混浊度及沉淀等。
半固体培养基穿刺接种观察运动、扩散情况。
２）霉菌酵母菌的培养特征：大多数酵母菌没有丝状体，在固体培养基上形成的菌落和细菌的很相似，只是比细菌菌落大且厚。
液体培养也和细菌相似，有均匀生长、沉淀或在液面形成菌膜。
霉菌有分支的丝状体，菌丝粗长，在条件适宜的培养基里，菌丝无限伸长沿培养基表面蔓延。
霉菌的基内菌丝、气生菌丝和孢子丝都常带有不同颜色，因而菌落边缘和中心，正面和背面颜色常常不同，如青霉菌：孢子青绿色，气生菌丝无色，基内菌丝褐色。
霉菌在固体培养表面形成絮状、绒毛状和蜘蛛网状菌落。
革兰氏染色:革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。
革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。
该染色法所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。
G—菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。
生化反应鉴定实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解生化反应在微生物鉴定中的重要性。
2. 掌握常见生化反应的原理和方法。
3. 通过实验，对给定的微生物进行鉴定。
二、实验原理生化反应是指微生物在生长过程中，通过酶的催化作用，将营养物质转化为自身所需的物质，同时产生一些代谢产物。
这些代谢产物可以用来鉴定微生物的种类。
常见的生化反应包括糖发酵试验、吲哚试验、甲基红试验等。
三、实验材料与仪器1. 材料：- 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌等。
- 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂等。
- 试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水等。
- 仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管等。
2. 仪器：- 酒精灯- 接种环- 超净工作台- 恒温培养箱- 高压灭菌锅- 试管- 移液枪- 滴管四、实验方法1. 菌种培养：将菌种接种于葡萄糖蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。
2. 糖发酵试验：- 将培养好的菌种接种于糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖），置于恒温培养箱中培养24小时。
- 观察培养基颜色变化，记录发酵结果。
3. 吲哚试验：- 将培养好的菌种接种于蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。
- 加入吲哚试剂，观察颜色变化，记录结果。
4. 甲基红试验：- 将培养好的菌种接种于蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。
- 加入甲基红试剂，观察颜色变化，记录结果。
五、实验结果与分析1. 糖发酵试验：- 大肠杆菌：发酵葡萄糖、乳糖，不发酵蔗糖。
- 金黄色葡萄球菌：不发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
- 枯草芽孢杆菌：不发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
- 变形杆菌：发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
2. 吲哚试验：- 大肠杆菌：吲哚试验阳性。
- 金黄色葡萄球菌：吲哚试验阴性。
- 枯草芽孢杆菌：吲哚试验阴性。
- 变形杆菌：吲哚试验阳性。
微生物分类鉴定方法
微生物分类鉴定方法微生物分类鉴定是微生物学领域的重要研究内容之一，它涉及到对微生物的形态、生理生化特性、遗传特征等方面进行综合鉴定和分类。
准确地鉴定和分类微生物对于了解其生态学、分子进化等方面的特征以及应用于医学、农业等领域具有重要意义。
本文将介绍几种常用的微生物分类鉴定方法。
1.形态学鉴定法：形态学鉴定法是最传统和常用的微生物分类鉴定方法。
通过观察微生物在显微镜下的形态特征，如细胞形态、细胞大小、结构特征、胞壁形态等来对微生物进行鉴定和分类。
例如，革兰氏染色可以用于区分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌；芽孢形态特征可以用于区分芽孢杆菌属和其他杆菌属等。
2.生理生化鉴定法：生理生化鉴定法是通过微生物对不同生理生化试验的反应特征来鉴定和分类微生物。
常用的试验包括碳源利用试验、氧需求性试验、双氧水试验、酸碱度试验等。
例如，氧需求性试验可以区分厌氧菌和好氧菌；双氧水试验可以区分产气乳杆菌和其他乳杆菌属。
3.免疫学鉴定法：免疫学鉴定法是通过检测微生物产生的抗原或对抗原的反应来对微生物进行鉴定和分类。
包括血清学鉴定、补体结合试验、酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫电泳等。
例如，通过检测微生物产生的特定抗原来诊断细菌感染。
4.分子生物学鉴定法：分子生物学鉴定法是近年来发展迅速的微生物分类鉴定方法。
通过检测微生物的核酸序列来鉴定和分类微生物。
常用的方法包括PCR、序列分析、比较基因组学等。
例如，16SrRNA基因序列分析可以用于鉴定和分类细菌。
此外，还有一些综合鉴定方法，如荧光原位杂交（FISH）、质谱分析、流式细胞术等。
这些方法在微生物分类鉴定中各具特色，能够提供更准确和细致的分类信息。
总之，微生物分类鉴定方法多种多样，各种方法常常结合使用，以提高鉴定的准确性。
随着基因测序技术的发展，分子生物学鉴定方法在微生物分类鉴定中的地位越来越重要并逐渐取代了传统的鉴定方法。
微生物鉴定原理
微生物鉴定原理
微生物鉴定是通过分析微生物的形态特征、生理生化特性、遗传特性和分子生物学特性等方面的信息来确定微生物的种属或亚种的过程。
其原理主要包括以下几个方面：
1. 形态特征鉴定：通过观察微生物在培养基上的形态特征来判断其属于哪一类微生物，比如形状、大小、颜色、聚集方式等。
比如，球菌、杆菌、弧菌等各具有特定的形态特征。
2. 生理生化特性鉴定：通过检测微生物在特定条件下的生理生化反应来鉴定其种属或亚种。
常用的生理生化特性鉴定方法有氧耗量测定、产气反应、口气反应、酸碱反应等。
3. 遗传特性鉴定：通过检测微生物的遗传物质（如DNA或RNA）序列来确定其种属或亚种。
常用的遗传特性鉴定方法
有16S rRNA基因测序、多重引物扩增反应（PCR）等。
4. 分子生物学特性鉴定：通过检测微生物的分子生物学特性来确定其种属或亚种。
常用的分子生物学特性鉴定方法有核酸杂交、基因克隆、Southern blot等。
以上是微生物鉴定的原理，通过综合使用以上各种方法，可以较为准确地确定微生物的种属或亚种，为进一步的研究和应用提供依据。
微生物生化鉴定3篇
微生物生化鉴定【微生物生化鉴定】微生物生化鉴定是一种鉴定微生物种类和特性的方法，它通过检测微生物代谢产物和酶的活性等生化特性来对微生物进行鉴定。
在微生物的研究、诊断和治疗等方面都有着广泛的应用。
下面我们将分别介绍鉴定细菌、真菌和病毒的微生物生化鉴定方法。
一、细菌的微生物生化鉴定1. 常规生化试验：包括氧化-发酵试验、铁锰试验、利用光对紫杆菌的鉴别、胶原酶酶切试验等。
2. 抗生素敏感试验：对于致病菌的抗生素敏感试验是非常重要的生化鉴定方法。
在临床上，通过检测微生物对各种抗生素的敏感性来确定选用哪种抗生素进行治疗。
3. 酸碱度试验：对于肠道菌等产生乳酸的菌株，可以通过酸碱度试验来鉴定其种类。
4. 糖代谢试验：细菌不同的糖代谢方式也是一种微生物生化鉴定方法。
二、真菌的微生物生化鉴定1. 吸附凝集实验：可用于白色念珠菌的鉴定。
2. 纸片扩散法：可用于真菌药物敏感性试验。
3. 不同培养基的试验：对于不同种类的真菌，它们对不同培养基有不同的适应性，可以通过这种方法来进行鉴定。
4. 营养需求试验：真菌的营养需求也不同，通过对真菌在培养基上的生长情况进行观察，可以对其种类进行初步鉴定。
三、病毒的微生物生化鉴定1. 免疫荧光试验：通过对病毒进行免疫染色等手段来进行鉴定。
2. 基于PCR技术的鉴定：包括标准PCR、荧光PCR和荧光定量PCR等方法。
3. 细胞培养法：将病毒在细胞培养基上培养，观察病毒在细胞上的生长和变化，以进行鉴定。
总之，微生物生化鉴定方法是一种基础的、重要的微生物鉴定方法，对于微生物的研究、诊断和治疗等方面都具有重要的意义。
不同类型的微生物鉴定方法不同，需要根据具体的情况进行选择和操作。
通过合理地运用微生物生化鉴定方法，可以更准确地鉴定不同类型的微生物，为其应用提供有力的支持。
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常用生化试验一．糖、醇发酵试验1.糖、醇发酵试验原理：各种细菌因含有发酵不同糖、醇的酶，所以分解糖、醇的能力个不相同。
有的能分解某些糖、醇类，有的则不能分解。
有的分解某些糖、醇类发酵产酸产气，有的仅产酸，而不产气。
根据这些特点，可鉴别细菌。
培养基：糖发酵试验应用的培养基种类很多，大致可分为液体，半固体，固体（高层、斜面）等几类。
可根据试验的要求和细菌的特性来选择。
2.乙酰甲基甲醇试验（V-P 试验）原理：某些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，并将丙酮酸脱羧，变为乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性环境下，被空气中的氧氧化成二乙酰，二乙酰与培养基内蛋白胨中精氨酸所含的胍基起作用，生成红色的化合物。
故在培养基中加入少量含胍基的化合物，如肌酸、肌酐可增加胍基含量。
试验中加入的a -萘酚为催化剂，可加速此反应，使反应颜色增加，提高反应的敏感性。
大肠埃希菌不能将丙酮酸脱羧，故V-P 试验呈阴性。
培养基：磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基3.甲基红试验（MR 试验）原理：许多细菌如大肠埃希菌等，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再次被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，这样使培养基的PH 降至4.5 以下。
这时加入甲基红指示剂呈红色。
若细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其他物质（如醇、酮、醛、气体和水等），则培养基的酸度仍在PH6.2 以上，故加入甲基红指示剂呈黄色，为阴性反应。
培养基：磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基MUG 葡萄糖醛酸苷酶试验原理：细菌的葡萄糖醛酸苷酶在碱性条件下，作用于4-甲基伞形酮-3 -D葡萄糖醛酸甘（4-Methylumbelliferyl- 3 -D-glucuronide简称MUG ）的3葡萄糖醛酸甘键，使其水解，释放的4-甲基伞形酮在366nm 紫外灯下产生蓝白色荧光。
培养基：MUG 培养基4.3-半乳糖苷酶试验原理：肠杆菌科细菌发酵乳糖，依靠半乳糖苷渗透酶和3-半乳糖苷酶两种不同的酶作用，能水解邻硝酸酚-3-D 半乳糖苷（O-nitrophenyl- 3-D-galactopyranoside,ONPG ），而释放出黄色的邻硝酸酚。
发酵乳糖的细菌具有上述两种酶，可迅速分解乳糖。
迟缓发酵乳糖的细菌只有3■半乳糖苷酶，而缺少半乳糖苷渗透酶或是其活性很弱，不能将乳糖很快运送到菌细胞内，通常需要延长培养时间数天，乳糖才被分解。
本实验主要鉴别肠道细菌，乳糖发酵及乳糖迟缓发酵菌为阳性反应，非乳糖发酵酶为阴性。
本试验可作为迟缓发酵乳糖的细菌的快速鉴定方法。
5•葡萄糖氧化-发酵（0/F）试验原理：细菌对糖的代谢分为氧化型和发酵型两种。
在有氧环境下氧化完全，生成二氧化碳和水。
在无氧环境下，进行不完全的分解（发酵），生成酸类、醇类和气体。
氧化型的细菌在无氧环境中，不能分解糖。
发酵型的细菌无论在有氧或是无氧的环境中均可分解糖。
葡萄糖氧化-发酵试验有助于假单胞菌、硝酸盐阴性杆菌、粪产碱杆菌的鉴别。
培养基：氧化发酵试验培养基6•石蕊牛乳试验原理：牛乳中含有大量的乳糖和酪蛋白，营养丰富，一般细菌均能在其生长，但各种细菌对这些物质的分解能力不同，可观察的反应也不同，在培养基中加入石蕊是作为酸碱指示剂和氧化还原指示剂，可观察到不同的反应结果。
产气荚膜梭菌对牛乳具有强烈的发酵反应，产酸、产气、凝固、胨化几乎同时发生。
所产生的气体，可将培养基表层的凡士林冲至管口，牛乳可全被胨化变清，这种暴风雨”样的发酵现象称为汹涌发酵”为该菌所特有。
乳链球菌可使牛乳培养基产酸、凝固，并可使石蕊还原。
培养基：石蕊牛乳培养基二.氨基酸和蛋白质代谢试验1.靛基质试验原理：某些细菌，如大肠埃希菌、变形杆菌等，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，形成靛基质（吲哚）。
靛基质无色，与试剂对二甲氨基苯甲醛作用后，形成红色化合物-玫瑰靛基质。
本试验常用于肠杆菌科种属鉴别，大肠埃希菌98%为阳性反应，肺炎克雷伯菌、沙门菌为阴性反应。
培养基: 胰蛋白胨水培养基2.硫化氢产生试验原理：检查肠杆菌科娥硫化氢试验，是利用细菌对于培养基中硫代硫酸钠或硫酸钠、亚硫酸钠的还原作用，生成硫化氢。
硫化氢是无色气体，遇硫酸亚铁或枸橼酸铁铵，产生不溶性黑色沉淀物硫化亚铁。
按此原理设计的硫化氢试验，适用于肠杆菌科细菌的鉴定。
沙门菌，弗劳地枸橼酸杆菌，缓慢爱德华菌，莱克勒菌属和变形杆菌属为阳性反应，其他细菌均为阴性反应。
在沙门菌属中，亦有硫化氢阴性的菌型，如甲型副伤寒、仙台、猪霍乱沙门菌等，伤寒沙门菌中亦有部分菌株为硫化氢阴性。
培养基：二糖铁琼脂或克氏双糖铁琼脂培养基。
3•尿素酶试验原理：某些细菌，如变形杆菌具有尿素酶，能分解培养基中的尿素而产生大量的氨，使培养基成碱性，培养基中的酚红指示剂呈红色。
本试验常用语鉴别变形杆菌属。
变形杆菌属能分解尿素呈阳性反应，其他肠道细菌的尿素酶试验多数为阴性反应。
培养基：尿素培养基4•明胶液化试验原理：明胶是一种胶原蛋白，不具有一般蛋白质加热凝固的特性，其水溶液在24摄氏度以下为凝胶状态。
明胶可被细菌的胶原酶分解为氨基酸，分解后的明胶，凝固力降低，低于20摄氏度不再凝固，呈液化状态。
本试验为细菌鉴定的常规实验法。
铜绿假单胞菌，荧光假单胞菌，腐败假单胞菌等为阳性反应，肠杆菌科细菌很少液化明胶。
培养基：明胶培养基。
5•氨基酸脱羧酶试验原理：细菌分解氨基酸使其脱羧，生成胺和二氧化碳，此为脱羧反应，需要细菌所产生的脱羧酶完成反应。
各种细菌产生的脱羧酶不同，对各种氨基酸底物所产生的胺亦不相同，但均可使培养基变碱，由培养基中的指示剂显示出来。
培养基: 氨基酸脱羧酶培养基6•精氨酸双水解酶试验原理：细菌分解精氨酸产碱不限于精氨酸脱羧酶。
精氨酸可通过精氨酸脱酰胺酶及瓜氨酸酶，经两次水解，先生成瓜氨酸和氨，后形成鸟氨酸、氨及二氧化碳。
鸟氨酸又在鸟氨酸脱羧酶的作用下生成腐胺及二氧化碳。
氨和腐氨均为碱性，由培养基中的指示剂显示出来。
培养基：含精氨酸的氨基酸脱羧酶培养基或用Thomley精氨酸培养基，后者常用于假单胞菌属鉴定。
7•苯丙氨酸脱氨酶试验原理：变形杆菌属可产生苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸脱去氨基，形成苯丙酮酸，加入三氯化铁试剂后产生绿色反应。
本试验主要用于肠杆菌科细菌鉴定，变形杆菌属均为强阳性反应，而肠杆菌科其他细菌则为阴性反应。
培养基: 苯丙氨酸琼脂培养基。
三•碳源和氨源利用试验1•枸橼酸盐利用试验原理：枸橼酸盐培养基是一综合性培养基，其中枸橼酸钠为碳的唯一来源，磷酸二氢铵为氮的唯一来源。
有的细菌如产气肠杆菌等，可以利用枸橼酸盐作为碳源，能在此培养基上生长，并且分解枸橼酸盐而最后产生碳酸盐，使培养基变为碱性。
这样培养基中的溴麝香草酚蓝指示剂由绿色变为蓝色，为枸橼酸盐利用实验的阳性反应。
若细菌不能利用枸橼酸盐作为碳源，则在此培养基上不能生长，培养基不变色，为枸橼酸盐利用实验的阴性反应。
本试验主要用于肠杆菌科细菌鉴定，大肠埃希菌、志贺菌属、爱德华均属和耶尔森菌属均为阴性，沙门菌属，克雷伯均属，枸橼酸杆菌和魔秀变形杆菌通常为阳性反应。
此外，铜绿假单胞菌、洋葱假单胞菌和嗜水气单胞菌亦为阳性。
培养基: 西蒙枸橼酸盐培养基2•丙二酸盐利用实验原理：当细菌利用丙二酸盐作为唯一碳源时，丙二酸钠可被分解成碳酸钠，使培养基变碱。
沙门菌亚属n川及肺炎克雷伯菌为阳性反应，枸橼酸杆菌属、肠杆菌属和哈夫尼亚菌属有不用生物型反应，其他各菌属为阴性反应。
培养基：丙二酸钠培养基。
3•其他有机酸盐利用试验原理：酒石酸受细菌酶的作用，可分解为乙酸，草酸等比较简单的有机酸。
枸橼酸经细菌酶的作用进入三羧酸循环被分解为琥珀酸、乳酸、乙酸等。
这些有机酸的生成，使培养基的PH值下降，这可由培养基中的指示剂变化显示出来。
同时未分解的酒石酸和枸橼酸可与加入的醋酸铅试剂形成铅盐沉淀，故可判断反应程度。
细菌的酒石酸分解酶对各种酒石酸光学异构体的分解具有特异性，故可用于细菌的鉴别，此外，粘液酸经分解后也可形成简单的有机酸，亦可由PH降低时指示剂颜色变化进行判断。
本试验用于肠杆菌科细菌鉴别。
沙门菌属大部分菌属的右旋酒石酸盐利用试验为阳性，志贺菌属为阴性，沙门菌属对左旋酒石酸盐有不同反应，其他菌属均为阴性，不分解粘液酸的只有志贺菌属。
培养基：有机酸盐培养基四•酶类试验1•氧化酶试验原理：某些细菌如奈瑟球菌和铜绿假单胞菌，具有氧化酶，能将盐酸二甲基对苯二胺四甲基对二胺试剂氧化成红色的醌类化合物。
2•细胞色素氧化酶试验原理：某些细菌如铜绿假单胞菌，具有细胞色素氧化酶，在有分子氧存在的情况下，将试剂盐酸二甲基对苯二胺氧化，并与a萘酚生成吲哚芬蓝，而出现蓝色。
次试验常与氧化酶同时进行。
3•触酶试验（过氧化氢酶试验）原理：细胞代谢产生的过氧化氢对细菌细胞有毒，而细胞内的过氧化氢酶能催化过氧化氢，使其分解为分子态氧和水，使其解毒。
在含有过氧化氢酶的细菌培养物上滴加过氧化氢溶液后，立即产生大量气泡，为阴性反应。
绝大多数细菌的琼脂培养物均产生过氧化氢酶，但链球菌属为阳性，故用于鉴别葡萄球菌、微球菌邙日性）与链球菌。
乳酸菌及梭菌为阴性。
4•硝酸盐还原试验原理：某些细菌如肠道杆菌，能还原培养基中的硝酸盐为亚硝酸盐，亚硝酸盐与试剂中的醋酸作用，生成亚硝酸，亚硝酸与试剂中的对氨基苯磺酸作用生成重氮苯磺酸，在与试剂中的a-萘酚结合成N - a-萘酚偶氮苯磺酸（红色）。
本实验在细菌鉴定中广泛使用，肠杆菌科均为阳性反应。
培养基：硝酸盐培养基5•硝酸盐还原产气试验原理：有些细菌可将硝酸盐还原成亚硝酸盐，并将亚硝酸盐分解成氮气，观察有无产气现象，即为亚硝酸盐还原产期试验。
本试验常用于鉴别铜绿假单胞菌和其他假单胞菌，前者为阳性反应。
培养基：硝酸盐胨水培养基6•血浆凝固酶试验原理：测定葡萄球菌的致病性，通常以能否产生血浆凝固酶为准，产生者为致病菌株，不产欢迎下载5生者为非致病菌株。
但也有少量致病菌株不产生血浆凝固酶。
葡萄球菌产生的血浆凝固酶有两种，一种是结合在细菌的细胞壁上，直接作用与血浆中的纤维蛋白，使细菌凝成块状，破片法实验的阳性结果是由此酶形成。
另一种是由菌体类产生释放到菌体外，称为游离血浆凝固酶，它能使血浆中的凝固酶原变为凝血酶类产物，试管法的阳性结果是由游离的血浆凝固酶形成。
7•耐热性脱氧核糖核酸酶试验原理：某些革兰阳性均为葡萄球菌、链球菌、梭菌等能产生细胞外的脱氧核糖核酸酶（DNase），是培养基中的脱氧核糖核酸长链水解，成为由几个单核苷酸组成的寡核苷酸，但仅有金黄色葡萄球菌所长生的DNase能耐受煮沸而不被破坏。
除凝固酶试验外，这种耐热的脱氧核酸酶可作为金黄色葡萄球菌重要的鉴定试验。
试验采用甲苯胺蓝DNA琼脂，其中甲苯胺蓝0是一种异染性染料，党羽DNA结合时呈蓝色；担当DNA被水解成寡核苷酸或单核苷酸时，甲苯胺蓝0与其结合所产生的吸光光谱是粉红色，借以判断DNase的存在。