安乃近微生物限度检查方法的验证
版药典微生物限度检查方法验证方案
版药典微生物限度检查方法验证方案验证微生物限度检查方法的方案一、实验目的：验证药典中的微生物限度检查方法的准确性、可靠性和可行性。
二、实验材料：1.药典中规定的微生物限度检查方法；2.待验证的药品样品；3.适用的培养基和培养条件；4.培养基的质量控制菌种。
三、实验步骤：1.制备适用的培养基：按照药典中规定的方法和成分制备适用的培养基，并进行批次记录。
2.准备质量控制菌种：3.制备菌液悬液：从购买的质量控制菌种中，挑取一株菌种进行连续传代培养至活性最佳的生长阶段。
然后制备菌液悬液，以备后续试验使用。
4.扩大悬液应用范围：从第3步得到的菌液悬液中，取适量接种于适用培养基上，培养出代表性的细菌菌液悬液。
然后，通过菌液的光学检测、显微镜检查和菌落计数，确定菌液的细菌浓度。
5.验证方法的准确性：将待验证的药品样品加入培养基，根据药典中的方法将培养基分成不少于3组。
每组培养基中分别加入一定量的菌液悬液，并在药典规定的温度和时间下培养。
同时，设置对照组，只加入菌液悬液和培养基。
6.菌落计数：取适量的培养基样品，分别进行菌落计数，并根据培养基的数量、培养基总菌落数、对照组的菌落数等数据，计算菌落形成单位。
7.验证方法的可靠性：将待验证的药品样品按照药典中的方法进行连续验证，至少重复3次。
然后，对比不同验证结果的一致性和稳定性，评估方法的可靠性。
8.验证方法的可行性：根据实际的样品情况和验证结果，评估方法在操作上和技术上的可行性。
如，是否存在样品的特殊要求，检测方法是否能满足检测要求等。
四、数据处理与分析：根据实验结果的菌落计数和验证的次数，进行数据处理和统计分析。
评估验证结果的一致性、可靠性和可行性。
五、结论：根据实验结果和数据分析，得出关于药典中微生物限度检查方法的准确性、可靠性和可行性的结论。
如果验证结果与药典一致，说明方法可靠并可以使用。
如果验证结果与药典不一致，需要进一步分析原因和进行修正或优化。
2020微生物限度检查方法验证方案
2020微生物限度检查方法验证方案
2020微生物限度检查方法验证方案的具体步骤如下：
1. 确定验证样品：选择与待验证方法相似的样品，确保样品中含有合适的微生物，并且样品中不含任何可能影响验证结果的其他因素。
2. 准备验证样品：收集足够数量的样品，并且确保样品没有受到外界污染。
然后将样品分为若干等份，每份使用不同的验证方法进行检测。
3. 进行验证测试：按照待验证方法和验证方法的流程进行操作，进行微生物限度检查。
确保每一步操作准确无误，并且严格控制所有可能的干扰因素。
4. 检测结果分析：根据检测结果，对比待验证方法和验证方法的结果，评估两种方法的准确性、可靠性和适用性。
5. 数据统计和处理：对验证结果进行统计分析，包括计算平均值、标准差等。
如果有需要，可以使用统计学方法进行数据处理。
6. 结果评估：根据统计分析的结果，评估待验证方法和验证方法之间的差异。
如果验证方法的结果与待验证方法一致并且符合要求，则认为验证成功。
7. 编写验证报告：根据验证结果，编写验证报告。
报告应包含验证方法的详细
描述、样品信息、检测结果和分析、结论等内容。
以上是2020微生物限度检查方法验证方案的一般步骤，具体步骤可能会因实验目的、样品特性和验证要求等而有所不同。
在进行验证前，应仔细阅读国家相关规定和标准文件，确保验证过程符合法规要求。
同时，为了确保验证结果的准确性和可靠性，建议在验证过程中进行合适的实验室质量控制，例如采用质控菌株、系统重复性分析等。
微生物检查方法验证方案
微生物限度检查方法验证方案目录1、概述2、验证目的3、验证条件4、验证步骤5．验证试验小结1.概述微生物限度为产品质量的一个重要指标，其检查方法的选择对检验结果真实性有很大的影响，为此必须对其检查方法进行验证。
2.验证目的通过对微生物限度检查方法的验证，确认在正常条件下本检验方法处于控制状态，且能够稳定地对公司产品进行有效的微生物的检查和控制。
确认相应标准操作规程的适用性。
3.验证条件3.1验证小组成员与分工3.2 参加本方案实施操作的人员须事先进行《微生物限度检查标准操作程序》的培训，能熟练掌握检查方法和原理，熟悉本方案的内容。
3.3验证所用的各类物料均应符合相应的规定或标准。
相应的设备须验证的应事先进行验证并符合要求。
4.验证步骤4．1验证依据参照2010年版《中国药典》微生物限度检查计数方法的验证4．2与验证有关的文件《微生物限度检查标准操作程序》文件编号：SOP-ZL-010《净化工作台标准操作程序》文件编号：SOP-ZL-0324．3验证用材料4．3．1试验样品药品包装用复合膜产品4．3．2实验菌株1．金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]2．大肠埃希菌[CMCC（B）44102]3．枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]4．白色念株菌[CMCC（F）98001]5．黑曲霉[CMCC（F）98003]以上菌株购自省药品检验所。
4．4细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证4．4．1验证方法4．4．1．1菌液制备接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌新鲜培养物至营养肉汤中，培养18～24小时；接种白色念株菌至改良培养基中，培养24～48小时，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50～100CFU的菌悬液。
接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，培养5～7天，加入3～5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后，吸出孢子悬液（用管口带有薄的无菌纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数为50～100CFU的孢子悬液，备用。
合格评定—微生物检测方法验证与确认指南
合格评定—微生物检测方法验证与确认指南导言：食品安全一直备受人们关注。
微生物污染是引起食品安全问题的主要因素之一。
因此，对于食品生产企业来说，建立合格的微生物检测方法验证和确认体系是非常重要的。
本文将介绍关于微生物检测方法验证与确认的指南，帮助企业更好地管理微生物检测工作，确保食品质量安全。
1. 检测方法验证微生物检测方法验证是确定检测方法是否合适的过程。
它可以帮助企业确定检测方法的适用范围和检测结果的可靠性。
以下是微生物检测方法验证的步骤：1.1 确定检测方法的适用范围首先，应该确定检测方法的适用范围。
企业应该根据检测目的和检测物种的特性，选择适合的检测方法。
例如，对于生产饮料的企业，需要检测的微生物种类可能是酵母菌和乳酸菌等。
1.2 确定检测方法的检测限度和准确性接下来，需要确定检测方法的检测限度和准确性。
检测限度是指检测方法能够检测到的最小微生物数。
准确性是指检测方法检测结果的可靠性。
通常，企业应该使用标准微生物菌种来检测，以确保检测方法的准确性。
1.3 确定检测方法的可重复性和稳定性最后，需要确定检测方法的可重复性和稳定性。
可重复性是指在相同条件下，重复检测得到的结果的一致性。
稳定性是指检测方法在不同时间和条件下，检测结果的一致性。
企业应该进行多次测试，以评估检测方法的可重复性和稳定性。
2. 检测方法确认检测方法确认是确认检测方法可行性的过程。
它可以帮助企业确定检测方法是可靠的，并且可以得到准确的检测结果。
以下是微生物检测方法确认的步骤：2.1 确定检测方法的适用性首先，需要确定检测方法的适用性。
与检测方法验证类似，企业应该根据检测目的和检测物种的特性，选择适合的检测方法。
2.2 确定检测方法的准确性接下来，需要确定检测方法的准确性。
企业应该使用标准微生物菌种来检测，以确保检测方法的准确性。
2.3 对检测方法进行比对最后，应该对检测方法进行比对。
企业可以使用不同的检测方法，或者将检测结果与其他实验室的结果进行比对，以确定检测方法的可靠性。
最新微生物限度检查方法验证方案
微生物限度检查方法验证方案六、验证内容1.供试液的制备1.1.取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，充分振摇使混匀，作为1:10的供试液。
1.2.取1:10供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，充分振摇使混匀，作为1:100的供试液。
1.3.取1:100供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，充分振摇使混匀，作为1:1000的供试液。
备注：供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不超过45℃。
供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。
2.菌液制备2.1.接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，30〜35℃培养18～24小时；分别取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，依次稀释至、、、制成每1ml含菌数为小于100cfu的菌悬液。
2.2.接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中，20〜25℃培养2～3 天；取此培养物用0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，依次稀释至，制成每1ml含菌数为小于100cfu的菌悬液。
2.3.将黑曲霉菌斜面的新鲜培养物接种至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，20〜25℃培养5〜7天，使大量的孢子成熟。
加入3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，将孢子洗脱。
然后，采用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液依次稀释至，制成每 1ml 含孢子数小于100cfu 的孢子悬液。
2.4.上述菌悬液制备后若在室温下放置，应在2小时之内使用；若保存在2~8℃，可在24小时内使用。
黑曲霉孢子悬液可保存在2~8℃，在验证过的贮存有效期内使用。
药品微生物限度检查方法验证步骤及示教
药品微生物限度检查方法验证一般步骤1.样品及确定验证项目样品要求：不含菌或少量菌验证项目：根据药品用药途径、处方、制法确定。
细菌、霉菌及酵母菌计数验证（一般必作）；控制菌检查如为中药制剂必须查标准，根据用药途径、处方、制法确定控制菌检查项目。
特殊的如滴眼剂、用于烧伤、严重创伤等应根据制剂通则项下要求及微生物限度标准来确定。
2. 确定供试液制备方法3. 方法选择预试验（1）目的：确定样品对试验菌有无抑菌活性及计数验证各试验菌的回收试验方法。
（2）查资料，根据样品的功能、主治及所含成分等确定方法选择预试验方案。
（3）根据预试验结果确定各试验菌计数验证方法控制菌验证方法4. 验证试验：选择3个批号样品进行3次独立实验，证明方法的有效性；5. 据验证结果优化试验条件，建立微生物限度检查方法SOP。
6. 写出验证资料。
示教内容11.5.上午：菌液制备方法：一. 新鲜浓菌液制备（要求学员练习操作的内容）新鲜浓菌液接种：细菌大肠埃希菌[CMCC（B）44102]金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]生孢梭菌[CMCC（B）64941]（厌氧梭菌）铜绿假单胞菌[CMCC（B）10104]培养基：营养肉汤3-5ml、硫乙醇酸盐流体培养基3-5ml接种及培养：1.分别取各试验菌半个--1个菌落分别接种营养肉汤（充分研匀、摇匀），36±1℃培养16-18小时。
2.生孢梭菌新鲜培养物取0.1ml接种硫乙醇酸盐流体培养基（临用前排氧）36±1℃培养18-24小时。
霉菌及酵母菌白色念珠菌[CMCC（F）98001]、黑曲霉[CMCC（F）98003]培养基：改良马丁培养基3-5ml；改良马丁琼脂培养基斜面1.取白色念珠菌的菌落接种改良马丁培养基23-28℃培养24小时（可用36±1℃培养18-24）。
2.黑曲霉孢子悬液的制备：沾取黑曲霉孢子接种改良马丁琼脂培养（红字为示教内容基，培养5-7天待培养物黑色孢子生长（全部变黑，已制备好斜面培养物示教）加入5-10ml0.9%氯化钠溶液，小心振挡洗脱表面的黑色孢子1-2次，吸出洗脱液（注意不要触到菌丝体）即为孢子悬液。
安乃近片检验方法确认方案
安乃近片检验方法确认文件编号：×××药厂安乃近片检验方法确认方案起草人_____________ 部门____________ 日期___________ 审核人_____________ 部门____________ 日期___________ 审核人_____________ 部门____________ 日期___________ 批准人_____________ 日期__________ _目录一、确认方案1.概述2.确认的原则和目的3.确认的项目和范围4.组织及职责4.1确认方案和报告的起草、审核、批准4.2确认方案的培训4.3组织实施过程中的变更和偏差4.4实施组织人员5.样品和标准品信息6.分析仪器7. 实施检验人员信息8. 确认方法8.1鉴别检验方法确认8.2有关物质检查确认8.3含量测定确认9.结论报告二、确认报告三、确认证书1、概述安乃近片收载于《中国药典》2010年版第一增补本，本公司生产的规格为0.5g/片，其检测主要内容为：【性状】本品为白色或几乎白色片【鉴别】（1）取本品的细粉适量（相当于安乃近20mg），加稀盐酸1ml溶解后，加次氯酸钠试液2滴，产生瞬即消失的蓝色，加热煮沸后变成黄色。
（2）取本品细粉适量约（相当于安乃近0.1g），置试管中，加水1.5ml和稀盐酸1.5ml 溶解后，试管口覆盖一张用碘酸钾0.1g溶于淀粉指示液10ml润湿的滤纸，缓缓加热滤纸变蓝色，取下滤纸继续加热，用玻璃棒蘸取1滴变色酸硫酸溶液（1→100），置试管口，10分钟内，玻璃棒上的试剂显蓝紫色。
【检查】（1）有关物质取本品细粉适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中含安乃近5mg的溶液作为供试品溶液（临用新制）；另精密称取4-甲氨基安替比林对照品5mg，置100ml 量瓶中，精密加入供试品溶液1ml，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
另取安乃近和4-N-去甲基安乃近对照品适量，加甲醇溶解并稀释成每1ml中各含25ug的混合溶液作为系统适用性试验溶液。
微生物限度检查方法验证方案
微生物限度检查方法验证方案微生物限度检查方法验证方案1.目的：为确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查，包括细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查，特制定本验证方案，通过比较试验菌的恢复生长结果，来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性，以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可忽略不计，所采用的方法适用于该品种的微生物限度检查。
验证过程应严格按照本方案规定的容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写验证方案修改申请并报验证领导小组批准2.围：本验证方案适用于微生物限度检查方法的验证。
3.规性引用文件：根据《中国药典》2010年版二部附录ⅪJ 微生物限度检查法的要求，由于某些供试品具有抗菌活性，在建立微生物检查方法或产品的组分发生改变或原检查法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。
4.验证实施：4.4.1 试验前的准备:4.4.1.1 试验用具的准备：将试验需用的试管、刻度吸管、薄膜过滤器、滤膜（孔径0.22um、直径50mm）、平皿、空三角瓶、称量纸等，用牛皮纸包扎好后，放于湿热灭菌器中，在121℃，灭菌30 min，在3天使用。
4.4.1.2试验用培养基的制备：取适用性检查合格的营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基（BL）、改良马丁琼脂培养基、4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基（MUG）等脱水培养基，按照相应的配制说明，用纯化水配制、分装后，在2小时，放于湿热灭菌器中，在121℃，灭菌15 min，在3周使用。
4.4.1.3试验用稀释剂/缓冲液、冲洗液的制备：取在有效期的试剂，按照相应的配制方法，配制pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液、0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液等，用纯化水配制，加热使溶，过滤，分装，在121℃，灭菌15 min，在3周使用。
4.4.2 试验菌的制备和稀释：4.4.2.1细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证用菌液：4.4.2.1.1取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物少许接种至10ml营养肉汤中，在30～35℃培养18～24小时；取白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基中，在23～28℃培养24～48小时；取黑曲霉的新鲜培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养5～7天。
微生物限度检查方法验证方案
微生物限度检查法验证方案文件编号：起草人：起草日期：_________ 审核人：审核日期：_________ 批准人：批准日期：_________********有限公司****有限公司文件编号：FA-YZ-微生物限度检查法验证方案1．概述药典微生物限度检查法中要求在建立药品的微生物限度检查法时，应进行方法的验证，以证明所采用的方法适合于微生物限度检查。
所以对******微生物限度检查进行方法的验证。
2．目的为了保证检验质量，对所用的检验方法必须经过验证，才能确保检验结果的准确可靠。
3．适用范围本方案适用于****微生物方法学的确认与验证。
4．验证人员职责4.1．验证小组:组长：质量管理部经理成员：QC主管、微生物操作人员4.2．职责及分工：QC主管组织起草该验证方案，并组织实施该方案；微生物操作人员具体实施该方案；质量管理部经理协助和监控该方案的实施。
4.3．验证方案批准后，应进行培训。
由验证小组指定人员负责对小组成员及和验证有关的人员进行培训。
5．验证依据中国药典2015年版通则“1105”、“1106”6.****生物限度检验方法验证风险分析6.1 结果分析：通过以上采取的措施，风险均控制在可接受范围内。
7. 人员培训确认表8.验证方法6.1验证用样品： ****** 规格： 批号：****** 规格： 批号： ****** 规格： 批号：6.2． 验证用培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基 生产厂家： 批号： 配制批号： 沙氏葡萄糖琼脂培养基 生产厂家：批号： 配制批号： 营养琼脂培养基 生产厂家： 批号： 配制批号： 胰酪大豆胨液体培养基 生产厂家： 批号： 配制批号： 沙氏葡萄糖琼脂培养基 生产厂家： 批号 ： 配制批号：麦康凯液体培养基生产厂家：批号：配制批号：麦康凯琼脂培养基生产厂家：批号：配制批号：6.3验证用菌种:金黄色葡萄球菌（CMCC(B)26 003）、大肠埃希菌（CMCC(B)44 102）、枯草芽孢菌（CMCC(B)63 501）、白色念珠菌（CMCC(F)98 001）、黑曲霉菌（CMCC(F)98 003）6.4菌液制备：6.4.4取经30℃~35℃培养18～24小时的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌与枯草芽孢杆菌营养肉汤液体培养物1ml加入9ml 0.9%氯化钠溶液中，10倍稀释至10－5～10－7为不大于100cfu/ml 备用。
安乃近注射液细菌内毒素检验方法的建立
安乃近注射液细菌内毒素检验方法的建立【摘要】本实验对安乃近注射液的细菌内毒素检查方法进行研究，建立快速准确的细菌内毒素检查法。
按《中国药典》2010版附录XIE细菌内毒素检查方法进行。
利用不同厂末生产的鲎试荆进行干扰试验，全面考察安乃近注射液对细茼内毒素控查的干扰作用，以确定最佳试验条件。
安乃近注射液可以采用稀释方法排除干扰。
本细茵内毒素检查结果安全、可靠。
【关键词】安乃近注射液；细菌内毒素；研究安乃近化学名为[（1，5-二甲基-2-苯基-3-2，3-二氢-1H-吡唑-4-基）甲氨基]甲烷磺酸钠盐—水合物[1-5]。
安乃近主要用于退热，一般不作首选用药，仅在急性高热、病情急重，又无其他有效解热药可用的情况下用于紧急退热，亦用于治疗急性关节炎、头痛、风湿性痛、牙痛及肌肉痛等[6-10]。
安乃近可用于急性风湿性关节炎，但因本品有可能引起严重的不良反应，很少在风湿性疾病中应用。
本实验对安乃近注射液的细菌内毒素检查方法进行研究，建立快速准确的细菌内毒素检查法。
1.材料与方法1.1材料（1）DHG-9030B电热恒温水槽（上海秣马恒温设备厂），DHG-9240A电热干燥箱（上海和呈仪器制造有限公司）；JFC-001百级净化工作台（广州嘉凡净化科技有限公司）。
（2）试剂。
鲎试剂（厦门市鲎试剂实验厂有限公司）；鲎试剂2（科德角国际生物医学科技（北京）有限公司）鲎试剂3（厦门市鲎试剂实验厂有限公司）；鲎试验用水（杭州拓目科技有限公司）；细菌内毒素工作标准品（中国药品生物制品检定所）；pH调节剂（杭州拓目科技有限公司）。
1.2方法（1）试验准备所有容器、用具都必须经过处理，去除外源性内毒素，玻璃用具的灭菌处理为180℃2小时或250℃30分钟以上，塑料用具须确证不干扰实验结果。
（2）鲎试剂灵敏度复核按《中国药典》2010版二部附录ⅪE细菌内毒素检查法规定，进行鲎试剂的标示灵敏度复核。
杭州拓目科技有限公司、科德角国际生物医学科技（北京）有限公司、深圳市三利化学品有限公司三个厂家的鲎试剂均符合规定。
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安乃近片微生物限度检查方法验证报告
1 目的
确认安乃近片的抑菌活性及测定方法的可靠性。
2 内容
细菌、霉菌及酵母菌数的测定和控制菌的检查。
3 方法
按中国药典2010版微生物限度检查方法验证的要求进行方法验证。
4 菌种
4.1 细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证所用菌种：大肠埃希菌〔CMCC(F)44 102〕（10-7）、金黄色葡萄球菌〔CMCC(B)26 003〕（10-6）、枯草芽孢杆菌〔CMCC(B)63 501〕（10-5）、白色念珠菌〔CMCC(F)98 001〕（10-5）、黑曲霉菌〔CMCC(F)98 003〕（10-4）。
4.2 控制菌检查方法的验证所用菌种：大肠埃希菌〔CMCC(F)44 102〕。
5 培养基、稀释剂
营养肉汤培养基、改良马丁培养基、改良马丁琼脂斜面培养基、营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液、胆盐乳糖培养基、MUG培养基、乳糖胆盐发酵培养基。
6 方法验证
6.1 验证要求
细菌、霉菌及酵母菌数测定，至少进行3次独立的平行试验，每次平行试验回收率均应在70%以上:若试验组的菌回收率（试验组的平均菌落数-供试品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均菌落数的百分率）均不低于70%，照该供试液制备方法和计数法测定供试品的细菌、霉菌及酵母菌数。
控制菌检查方法的验证要求试验组检出试验菌—大肠埃希菌。
6.2 验证过程
6.2.1 细菌、霉菌及酵母菌数测定方法的验证
6.2.1.1 菌液制备
a、取经30—35℃培养18—24小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、培养物1ml，分别加9ml无菌0.9%氯化钠溶液10倍稀释为10-7、10-6、10-5约50—100cfu /ml，做活菌计数备用。
b、取经23—28℃培养24—48小时的白色念珠菌液体培养物1ml加9ml无菌0.9%氯化钠溶液10倍稀释为10-5约50—100cfu/ml，做活菌计数备用。
c、取经23—28℃培养5—7天的黑曲霉斜面培养物，加3—5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的0.9%无菌氯化钠溶液洗下霉菌孢子，然后吸取出孢子悬液（用无菌纱布过滤菌丝）至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的0.9%无菌氯化钠溶液 10倍稀释为10-4约50—100 cfu /ml，做活菌计数备用。
6.2.1.2 供试液制备
称取安乃近片10g，加pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液100ml。
培养基稀释法：采用加0.2 ml /皿供试液。
6.2.1.3 回收率测定
a、菌液组
①取10大-7肠埃希菌稀释液各1ml,注入两个平皿中；取10-6金黄色葡萄球菌稀释液各1ml,注入两个平皿中；取10-5枯草芽孢杆菌稀释液各1ml,注入两个平皿中，倾注营养琼脂培养基各约15ml-20ml，置30℃—35℃培养3天，测定其菌数。
②取10-5白色念珠菌稀释液各1ml,注入两个平皿中；取10-4黑曲霉稀释液各1ml,注入两个平皿中，倾注玫瑰红钠琼脂培养基各约15ml-20ml，置23℃—28℃培养5天，测定其菌数。
b、供试品对照组
①取供试液各1ml,按0.2ml/皿分别注入平皿中，倾注营养琼脂培养基各约15ml-20ml，置30℃—35℃培养3天，测定其菌数。
②取供试液各1ml，按0.2ml/皿分别注入平皿中，倾注玫瑰红钠琼脂培养基各约15ml-20ml，置23℃—28℃培养5天，测定其菌数。
c、试验组
①取供试液各1ml，按0.2ml/皿和10-7大肠埃希菌稀释液各1ml，分别注入平皿中；取供试液各1ml，按0.2ml/皿和10-6金黄色葡萄球菌稀释液各1ml，分别注入平皿中；取供试液各1ml按0.2ml/皿和10-5枯草芽孢杆菌稀释液各1ml，分别注入平皿中；倾注营养琼脂培养基各约15ml-20ml，置30℃—35℃培养3天，测定其菌数。
②取供试液各1ml，按0.2ml/皿和10-5白色念珠菌稀释液各1ml,分别注入平皿中；取供试液各1ml，按0.2ml/皿和10-4黑曲霉稀释液各1ml,分别注入平皿中，倾注玫瑰红
钠琼脂培养基各约15ml-20ml，置23℃—28℃培养5天，测定其菌数。
d、阴性对照试验
①取pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液各1ml,注入两个平皿中，倾注营养琼脂培养基各约15ml-20ml，置30℃—35℃培养3天，测定其菌数。
②取pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液各1ml，注入两个平皿中，倾注玫瑰红钠琼脂培
养基各约15ml-20ml，置23℃—28℃培养5天，测定其菌数。
6.2.2 控制菌检查方法的验证
6.2.2.1 大肠埃希菌
a、试验组
取供试液10ml及 10—100cfu大肠埃希菌1ml加入胆盐乳糖培养基中，置35℃培养24小时后，取培养物0.2ml至含5mlMUG培养基的试管内培养，于5小时24小时在366nm紫外光下观察，应能检出大肠埃希菌。
b、供试品对照组
取供试液10ml加入胆盐乳糖培养基中，置35℃培养24小时后，取培养物0.2ml 至含5mlMUG培养基的试管内培养，于5小时24小时在366nm紫外光下观察，不能检出大肠埃希菌。
c、阴性对照试验
取pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液10ml加入胆盐乳糖培养基中，置35℃培养24小时后，取培养物0.2ml至含5mlMUG培养基的试管内培养，于5小时24小时在366nm紫外光下观察，不能检出大肠埃希菌。
6.3 验证结果
细菌、霉菌及酵母菌数测定方法的验证结果
控制菌检查方法的验证结果
6.4 滤膜过滤法：
取1：10供试品液1ml，加入含有50ml稀释液的薄膜过滤器中，用0.45um薄膜过滤后，用PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗3次，每次100ml，在最后一次冲洗液中加入50～100cfu试验菌充分过滤，取出滤膜贴入预先准备好的营养琼脂培养基平皿中，平行制备2皿。
置规定的温度下倒置培养24小时。
结果如下：
7 结论
通过对安乃近片微生物方法检验方法验证，证明可用滤膜法测定细菌数，培养基稀释法测定霉菌及酵母菌数、常规法进行控制菌检查。