第二章 分子克隆工具酶

合集下载

基因工程复习资料

基因工程复习资料

第二章分子克隆工具酶基因工程工具酶⏹限制性内切酶——主要用于DNA分子的特异切割⏹DNA甲基化酶——用于DNA分子的甲基化⏹核酸酶——用于DNA和RNA的非特异性切割⏹核酸聚合酶——用于DNA和RNA的合成⏹核酸连接酶——用于DNA和RNA的连接⏹核酸末端修饰酶——用于DNA和RNA的末端修饰⏹其它酶类——用于生物细胞的破壁,转化,核酸纯化,检测等。

第一节限制性核酸内切酶(restriction enzyme)一、限制性内切酶的发现历史核酸酶:催化核酸酯键的水解核酸外切酶:作用于核酸链的末端(3′或5 ′),逐个水解核苷酸。

核酸内切酶:从核酸分子内部切断3′,5′磷酸二酯键。

限制性核酸内切酶:在细菌细胞内存在的一类能识别并水解外源双链DNA的核酸内切酶。

1、细菌的限制——修饰现象细菌的限制——修饰作用发现细菌的限制(restriction)现象:寄主控制的专一性phageλKR-M 系统的作用:R-M 系统是细菌安内御外的积极措施。

保护自身的DNA不受制;破坏外源DNA使之迅速降解细菌R-M 系统的限制酶可以降解DNA,为避免自身DNA 的降解,细菌可以修饰(甲基化酶)自身DNA,未被修饰的外来DNA 则会被降解。

个别噬菌体在被降解之前已经发生了修饰,则可免予被降解。

限制性内切酶本是微生物细胞中用于专门水解外源DNA的一类酶,其功能是避免外源DNA的干扰或噬菌体的感染,是细胞中的一种防御机制。

由于R/M现象的发现使得核酸内切酶成为基因工程重要的工具酶。

2、限制性核酸内切酶的发现限制性核酸内切酶(restriction endonuelease)是一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列,并使每条链的一个磷酸二酯键断开的内脱氧核糖核酸酶(endo-deoxyribonuclease)。

它是可以将外来的DNA切断,即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力,但对自己的DNA却无损害作用,这样可以保护细胞原有的遗传信息。

第二章:分子克隆的工具酶

第二章:分子克隆的工具酶

加几个和加哪几个的问题
/techinfo/re/restrdigpcrii.htm
比如设计引物5'端导入酶切位点的时候, 一般导入3–4 个;导入的碱基, 最好是A/G/C/T比较平均,并能部分平衡 整个引物的GC%和Tm;G/C为主,可以使引物5'形成所谓GC Clamp(有的软件,认为这样好). 别的就没什么了.
1. 现象
* 1975 EcoRI切割 phage (Lambda)中的5个 位点,并不是随机的,靠近右端的位点, 比分子中间的位点切割快10倍。
* 有4个 SacII位点 三个在中央 一个在右臂(Right-terminus)
at 40,386 中央三个快50倍
NEB检测了许多限制酶,有许多酶 的差异在10倍的范围上,但有许多 酶有较大的差异, 如
三、限制酶产生的末端种类 1.粘性末端
1)3’-端突起, 2)5’-端突起,个数为2或4个核苷酸
2. 平末端
SmaI 5’-CCCGGG-3’ 3’-GGGCCC-5’
5’-CCC 3’-GGG
GGG-3’ CCC-5’
在对称轴上同时切割DNA的两条链
HaeIII
GG↓CC
EcoRV GAT↓ATC
双酶切 PCR产物
AccI HindIII
EcoRI
CCGGTCGACCGG
2hr 20hr 00
CAAGCTTG CCAAGCTTGG CCCAAGCTTGGG
00 00 10% 75%
GGAATTCC
>90 >90
PstI
GCTGCAGC TGCACTGCAGTGCA
AACTGCAG(N) 14 CTGCAG(N) 20

7(2011)第7讲 分子克隆工具酶9.13

7(2011)第7讲 分子克隆工具酶9.13


其他分子克隆工具酶
(一)DNA聚合酶(DNA polymerase)
1、大肠杆菌DNA聚合酶I及其大片段(Klenow片段) (1)大肠杆菌DNA聚合酶I 特性:具有3种酶活性
聚合酶功能 3’
5’ 5’ 外切功能
3’外切功能
a.5’3’DNA聚合酶活性 底物:单链DNA模板及带3’羟基的DNA引物
MboⅠ▼ GATC
• 【同尾酶】
(isocaudarner):不同来 源的限制性核酸内切酶 识别与切割的核苷酸靶 序列各不相同,但都产
生相同的粘性末端,这
类酶称为同尾酶。 BamHI(GGATCC))和 BglⅡ(AGATCT)。
当一种限制性内切酶在一个特异性的碱 基序列处切断DNA时,就可在切口处留 下几个未配对的核苷酸片段,即5’突出。 这些片断可以通过重叠的5‘末端形成的氢 键相连,或者通过分子内反应环化。因 此称这些片断具有粘性,叫做粘性末端
2.大肠杆菌DNA聚合酶I大片段(Klenow fragment) (1)Klenow酶的基本性质:
• 【Klenow酶】大肠杆菌DNA聚合酶I经枯草杆菌蛋
白酶处理,获得N端三分之二的大肽段,即Klenow酶。
• Klenow酶仍拥有5`→3`的DNA聚合酶活性和3`→5` 的核酸外切酶活性,但失去了5`→ 3`的核酸外切酶 活性。
3.限制性核酸内切酶的分类 • 据限制性核酸内切酶的识别切割特性、催化条件及 是否具有修饰酶活性,可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ辅助因子 识别序列
Ⅰ型
多功能 异源三聚体 ATP Mg2+ SAM 距识别序列1kb处
Ⅱ型
单功能 同源三聚体 Mg2+ 4-6bp回文序列
Ⅲ型
双功能 异源二聚体 ATP Mg2+ 距识别序列下游 24-26bp处 随机性切割

第二章 分子克隆工具酶3.8

第二章 分子克隆工具酶3.8

1962年W. Arber提出,菌体中含有2种以上功能 不同的酶:
1. 核酸内切酶:能识别切断外来DNA分子的某 些部位,使其使去活性,限制外来只菌体的繁 殖——限制性核酸内切酶;菌体的防御系统。
2. 修饰酶:也能识别限制性内切酶所识别的 序列,并把某些 C 或 A 甲基化,使其不被 RE 降 解——菌体保护自身DNA系统。
(2)同尾酶(isocaudarmer):不同来源的酶其 识别和切割序列有一定的相关性,作用后能产
生相同的黏性末端,例如BamH I(GGATCC)。同
尾酶产生的DNA片段能通过黏性末端之间的互
补作用而彼此连接起来,但重组后形成的序列
再也不能被原来的任何一种同尾酶所识别。
同尾酶
Sau3A I GATC CTAG BamH I GGATCC CCTAGG
4.切割后产生平头或黏性末端。
5.Ⅱ型RE酶只需Mg2+, 不需ATP。
Ⅱ型酶切割双链DNA可产生两种不同的切口


1. 平头末端 (blunt end) 即在识别序列的对 称轴上进行切割,例如Hae Ⅲ识别序列为5’GGCC-3’,其切点在G与C之间; 2.黏性末端(cohesive end) 即在识别序列的 两个对称点切开DNA双链,产生末端带有单链 尾巴的切口。黏性末端又可分为两种:从DNA 分子5’端切割产生5’端突出的黏性末端称为 5’黏性末端.如EcoRI;从3’端切割产生3’ 端突出的黏性末端称为3’黏性末端,如Pst I。
第三节
DNA 聚 合 酶
DNA聚合酶
(DNA polymerase)
在细胞内的DNA复制过程中起着重要的作用。 它们通常被分为DNA聚合酶I、Ⅱ、Ⅲ三类。 DNA聚合酶I是基因工程中最常用的工具酶。 基因工程中常用的DNA聚合酶有: 大肠杆菌聚合酶I(全酶);

基因工程复习总结

基因工程复习总结
思考题
第二章分子克隆工具酶
1简述基因工程研究用的工具酶的类型和作用特点。
2.说明限制性内切核酸酶命名原则(举例)。
3.限制内切核酸酶的星活性是指什么?
在极端非标准条件下,限制酶能切割与识别序列相似的序列,这个改变的特殊性称星星活性。星星活性是限制性内切酶的一般性质,任何一种限制酶在极端非标准条件下都能切割非典型位点。
第三章分子克隆载体
1.基因工程载体应具备哪些特点?
能在宿主细胞中独立复制;
有一定的选择标记,易于识别和筛选;
有合适的限制酶位点,可插入一段较大的外源,而不影响其本身的复制;
最好有较高的拷贝数,便于载体制备。
2.作为一个最基本的载体,它必须具备哪些功能元件?
能独立复制的单链或双链;
选择标记基因;
合适的限制酶位点。
引物有哪些基本要求?
在多数试验中人们习惯使用的引物浓度为各1μM,即1μl,在100μl反应体系中相当于6x1013个分子。如果5%用于扩增1的片段,可得到3.3μg的产物,足以用于常规分析。
引物设计要考虑的几个问题
①长度:至少16,通常为18-30,更短的引物一般会降低扩增的特异性,但会提高扩增的有效性。
c.包装蛋白制备过程较复杂,每批包装蛋白的包装效率不稳定。而且,购买包装蛋白的费用较高。
第五章表达载体
····1.以大肠杆菌为例,表达载体比克隆载体多了哪些功能元件,各有什么生物学功能?
2.简述利用T7噬菌体启动子的系列表达载体的工作原理。
····3.何为穿梭载体,在遗传结构上有何特点?
···4.将人的某个基因在大肠杆菌中表达应注意哪些问题?
4.黏粒载体具有哪些优缺点?怎样克服其缺点?
黏粒的优点
(1)同时具有λ噬菌体和质粒载体的特性

第二章 分子克隆工具酶(共73张PPT)

第二章 分子克隆工具酶(共73张PPT)

噬菌体T4DNA连接酶
噬菌体T4DNA连接酶分子也是一条多肽链,分子量为 60KD,其活性很容易被0.2mol/L的KCl和精胺所抑制。 此酶的催化过程需要ATP辅助。T4DNA连接酶可连接 DNA-DNA,DNA-RNA,RNA-RNA和双链DNA粘性 末端或平头末端。另外,NH4C1可以提高在大肠杆菌 DNA连接酶的的催化速率,而对T4DNA连接酶那么无 效。无论是T4DNA连接酶,还是大肠杆菌DNA连接酶 都不能催化两条游离的DNA链相连接。
2) 反响系统因素
缓冲液〔无菌、无污染〕 buffer 〔pH=8.0〕 :
50mmol/L Tris-HCl 10mmol/L MgCl2
1mmol/L DTT或巯基乙醇 100μg BSA/ml
〔DDT:二硫苏糖醇 BSA: 牛血清蛋白)
NaCL〔0, 500, 1000mM〕
金属离子如:Ⅱ型酶需Mg2+,假设以Mn2+代 替Mg2+〔如HindⅢ,ECORI〕那么特异性改
④ 其它有些限制酶识别的序列有交叉,如在 pUC 系列质 粒的多克隆位点中有一个 SalⅠ 位点〔识别切割位点为 G↓TCGAC〕,该位点也可被 AccⅠ〔识别切割位点为 GT↓MKAC〕和 HincⅡ〔识别切割位点为 GTY↓RAC〕切割。
(3) 同尾酶
有些限制酶识别序列不同,但是产生相同的粘性末端,这些 酶称为同尾酶〔isocaudamer)
2.2 种类及作用机理
T4 DNA连接酶(ATP提供能量〕和大肠 杆菌DNA连接酶〔NAD+提供能量〕两 种。
大肠杆菌的DNA连接酶
大肠杆菌的DNA连接酶是一条分子量为75KD的多肽链。 对胰蛋白酶敏感,可被其水解。水解后形成的小片段仍 具有部份活性,可以催化酶与NAD(而不是ATP)反响形 成酶-AMP中间物,但不能继续将AMP转移到DNA上促 进磷酸二酯键的形成。

第二章 (用)分子克隆工具酶

第二章 (用)分子克隆工具酶

W=A or T S=C or G
6:EcoRI HindIII
G AATTC A AGCTT
>6 Not I
GC GGCCGC 8
BbvCI CC TCAGC
7
PpuMI RG GWCCY 7
2.结构 ① 回文对称(旋转镜像对称) DNA两条链的对称位置。
切割位点在
EcoRI
GAATTC CTTAAG
化酶

分子不在一起
4-6bp, 大多数 5-7bp 非对称 为回文对称结 构
在识别位点中 在识别位点下 或靠近识别位 游 24-26bp 点
分开的反应 同时竞争
限制作用是否 Yes
No
Yes
需用 ATP
类型II(type II)占93%
识别回文序列(palindromic sequence),
在回文序列内部或附近切割,产生带3’-OH和
•全部辅音按字母读,如pstⅠ
限制性酶和修饰酶的数量
早前上是限制性酶加R,是修饰酶加M,且菌株 号和序号小写 1968年 下半年 615R 98M 1998年 10000细菌 古细菌
3000种酶 200多特异性 到2006年2月为止,共发现3773种限制酶,810种 甲基化酶
到2011年?(查)
三、限制性核酸内切酶的类型
5’-P基团的DNA产物 需Mg2+,相应的修饰酶只
需SAM。
• EcoRI
GAATTC CTTAAG
识别序列(recongnition sequence)主 要为4-6bp,或更长且呈二重对称的特殊序 列。
但有少数酶识别更长的序列或简并序 列(degenerate sequence),切割位置因酶 而异,有些是隔开的。

基因工程学习资料

基因工程学习资料

Dra III
Ear I
同裂酶(isoschizomer)
• 指来源不同但具有相同识别序列的一类限制酶,但其切割位点可能不同。 • 可分为如下几种情况: 1 ) 同 序 同 切 酶 , 如 BamH I 和 BstY I 具 有 相 同 的 识 别 切 割 位 点 G↓GATCC; 2)同序异切酶,如Kpn I(GGTAC↓C)和Acc65 I(G↓GTACC); 3 ) 识别简并序列的限制酶包含了另一种限制酶识别序列,如 EcoR I ( G↓AATTC )和 Apo I ( R↓AATTY )、 Sal I ( G↓TCGAC )和 Acc I (GT↓MKAC)、Hinc II(GTY↓RAC)。
H.O.Smith and D.Nathans(1973)年提议的命名系统 • 用属名第一个字母和种名的头两个字母组成的3个字母的略 语表示寄主菌的物种名。 如:Escherichia coli 用Eco表示。 • 用一个写在右下方的标注字母代表菌株或型,如:EcoR。 • 以罗马字母表示同一菌株中不同的限制和修饰体系。如: EcoRI 和EcoRV (EcoR I, EcoR V)。 • 例:Hind III 表示为从流感嗜血菌Rd 菌株(Haemophilus influenzae Rd)中分离到的第三种限制性内切酶。
2.1.9.3 酶量
• 根据酶的活性和DNA底物的量、反应时间而定。 限制性核酸内切酶活性单位定义: 在最适反应条件下,60分钟内完全切割1μg λDNA所需的酶量为1个酶活性单位(unit 或U) • 容积活性: U/ μl • 与DNA分子上识别位点的密度、位点偏爱有关: 密度大用酶量多;密度小用酶量少。 • 常用酶量:酶和底物比例为2~10U/ μgDNA
识别序列的结构
  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

② 同序异切酶 KpnⅠ 和 Acc65Ⅰ 识别的序列是 相同的,但它们的切割位点不同,分别为 GGTAC↓C 和 G↓GTACC 。 ③“同功多位”许多识别简并序列的限制酶包含 了另一种限制酶的功能。如 EcoRⅠ 识别和切割位点 为 G↓AATTC , ApoⅠ 识别和切割位点为 R↓AATTY ,后者可识别前者的序列。 ④ 其它有些限制酶识别的序列有交叉,如在 pUC 系列质粒的多克隆位点中有一个 SalⅠ 位点(识别 切割位点为 G↓TCGAC),该位点也可被 AccⅠ(识 别切割位点为 GT↓MKAC)和 HincⅡ(识别切割位点 为 GTY↓RAC)切割。
1.4 限制性核酸内切酶活性及其影响因素
1.1 引言--核酸酶和限制性核酸内切酶的定义
核酸酶(Nuclease): 通过切割相邻两个核苷酸残基之间磷酸二酯键,导致 核酸分子多核苷酸链水解断裂的蛋白酶。 1)按作用对象可分为: Deoxyribonuclease (DNAase) & Ribonuclease (RNAase) 2)按水解断裂核酸分子不同方式可分为: Endonuclease & Exonuclease
PstⅠ切割后产生3ˊ粘性末端:
有一些酶沿对称轴切断DNA,产生平 端或钝端(Blunt end), 如SmaⅠ:
Recognition Sequences and Cutting sites of selected Restriction Endonucleases
Enzyme Recognition sequence BamH I G↓GATCC Enzyme Recognition seuqence Pst I CTGCA ↓G
J:\生物视频\细胞生物学视频\连接酶\连接酶.swf
OH
P
5` 3`
3` 5`
DNA ligase
5` 3` 3` 5`
DNA ligase 连接缺刻(nick)
DNA连接酶
连接的部位:磷酸二酯键(梯子的扶手), 不是氢键(梯子的踏板)。
2.2 种类及作用机理
T4 DNA连接酶(ATP提供能量)和 大肠杆菌DNA连接酶(NAD+提供能量) 两种。
大肠杆菌的DNA连接酶
大肠杆菌的DNA连接酶是一条分子量为75KD的多 肽链。对胰蛋白酶敏感,可被其水解。水解后形成 的小片段仍具有部份活性,可以催化酶与NAD(而不 是ATP)反应形成酶-AMP中间物,但不能继续将AMP 转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。
大肠杆菌的DNA连接酶
DNA连接酶在大肠杆菌细胞中约有300个分子, 和DNA聚合酶Ⅰ的分子数相近,这也是比较合理的 现象。因为DNA连接酶的主要功能就是在DNA聚合酶 Ⅰ催化聚合,填满双链DNA上的单链间隙后,封闭DNA 双链上的缺口。这在DNA复制、修复和重组中起着 重要的作用,连接酶有缺陷的突变株不能进行 DNA 复制、修复和重组。
Bgl II EcoR I
Hind II Hind III Kpn I Not I
A ↓GATCT G ↓AATTC
GTPy ↓PuAC A ↓AGCTT GGTAC ↓C GC ↓GGCCGC
Sal I Sau3A I
Sfi I Sma I Xba I Xho I
G ↓TCGAC ↓GATC
GGCCNNNN ↓NGGCC CCC ↓GGG T ↓CTAGA C ↓TCGAG
1μg DNA /1U HPaⅠ 50μl
37℃
1h
限制性核酸内切酶的反应条件
2) 反应系统因素
缓冲液(无菌、无污染) buffer (pH=8.0) :
50mmol/L Tris-HCl 10mmol/L MgCl2 1mmol/L DTT或巯基乙醇 100μg BSA/ml (DDT:二硫苏糖醇 BSA:牛血清蛋白) NaCL(0, 500, 1000mM)
双酶切
A有公用Buffer的。(直接用公用Buffer 切)
B两种酶反应温度不同的。(先切其中 一个然后高温失活,再用另外一个酶切) C无公用Buffer的:先用低盐Buffer切几 个小时,再补加盐分到高盐加入另外一 个酶继续切
限制性核酸内切酶的反应条件
3.星活性
在极端非标准条件下,限制酶能切割与识别序列相似的序列, 这个改变的特殊性称星星活性,如EcoRⅠ星活性用EcoRⅠ*表
在指明pH与37℃,在0.05mL反应混合
物中,1小时消化1μg的λDNA的酶量为1
单位。
(3)限制性核酸内切酶的反应条件
1)底物 DNA
DNA纯度:
RNA 与 E 结合影响有效酶浓度; DNA浓度: [DNA]过大,抑制酶活,影响酶分子扩散 如:4μg DNA /1U HPaⅠ 50μl 37℃ 15h
多核苷酸5`-OH磷酸化,制末端标记探针
末端转移酶
S1核酸酶 DNA酶Ⅰ RNA酶A 逆转录酶 磷酸酶
使3`-末端加同聚物尾
降解单链DNA或RNA 在双链DNA上产生随机切口 降解RNA 补平反应,合成cDNA或制探针 切除核酸末端磷酸基
1 限制性内切酶
1.1 引言--核酸酶和限制性核酸内切酶的定义 1.2 限制性核酸内切酶的命名 1.3 限制性核酸内切酶的分类
酶 限制性核酸内切酶 DNA连接酶 大肠杆菌DNA聚合 酶Ⅰ 或Klenow酶
SUMMARY 主要用途 识别DNA特定序列,切割DNA分子 连接两个DNA分子或片段 1 制作DNA探针;2 合成cDNA第二链; 3 填补双链DNA 3`凹端;4 DNA测序。
Taq DNA 聚合酶
多核苷酸激酶
聚合酶链式反应及功能 2.2 种类及作用机理 2.3 使用时的注意事项
2.1 定义及功能
DNA连接酶(DNA ligase):可使一段DNA的 3` 羟基末端和5`磷酸末端形成3`,5`- 磷酸二酯 键,把两个DNA片段连在一起,封闭DNA双链上形 成的切口的酶。 DNA连接酶是1967年在三个实验室同时发现 的。 J:\生物视频\细胞生物学视频\连接酶\DNA连接酶.
功能:限制、修饰
特点:需Mg2+、ATP和S-腺苷蛋氨酸为辅 助因子;识别位点和切割位点不一致, 没有固定切割位点(随机性);
应用:不常用。
功能:限制、修饰
1.3.2 Ⅲ型限制性内切 酶
特点:需Mg2+、ATP和S-腺苷蛋氨酸为辅助因 子;特异切割,切割位点在识别位点 外,距识别位点3`端24-26bp处。 应用:数量很少,分子克隆中无实际作用。
示。
影响因素:甘油浓度高(>5%),酶过量(>100U/ml), 离子强度低(<25mM), pH 值过高(>8.0), 45%聚乙二 醇(PEG),有机溶剂,8%二甲基亚枫,二价阳离子, 12%乙醇。
DNA末段的长度对限制酶切割 的影响
需要在识别序列两端存在一定长 度的非识别序列增加切割效率
位点偏爱(Site preference)
限制性内切核酸酶(restriction endonuclease):
指一类能识别双链DNA分子中特定核苷酸序
列,并在识别序列内或附近特异切割双链DNA 的核酸内切酶。
限制酶天然存在于细菌体内,与相伴存在的 甲基化酶共同构成细菌的限制-修饰系统 (Restriction-Modification System)。
1.2限制性核酸内切酶的命名
Escherichia
Coli
Ry13
EcoR I
属名 种名 株系 编号 若种名头2个字母相同则其中一个可用种名的第一
和第三个字母。
1.3 限制性核酸内切酶的分类
1.3.1 Ⅰ 型限制性内切酶 1.3.2 Ⅱ 型限制性内切酶 1.3.3 Ⅲ 型限制性内切酶
1.3.1 Ⅰ型限制性内切酶
酶量不超过总体积的 1/10
3L 0.1- 1g 2u
3 L 30 L
思考题
用限制酶BglⅡ消化2ug λDNA ,该 DNA浓度为 125ug/mL,BglⅡ为 4 units/uL.并提供了限制酶BglⅡ的10倍的 缓冲盐体系。请设计一最佳方案来完成 该实验
限制性内切酶的选择
原则:选常见的、活性高的酶, 如果双酶切最好选有公用 Buffer的酶 推荐酶:Promega公司, Takara公司,Tyoyobo公司
分布:主要在微生物中。 作用特点:特异性,即识别特定核苷酸序列,切割特定切点。 结果:产生黏性未端(碱基互补配对)。 举例:大肠杆菌的一种限制酶EcoRI能识别GAATTC序列, 并在G和A之间切开
(1) 基本特性
识别长度为4-8个核苷酸的特异序列;最常见的 为6个碱基. 许多识别序列具回文结构,如Hind Ⅲ 的识别序 列: 5` AAGCTT 3` 3` TTCGAA 5 切割产生的末端有粘端 (cohesive/sticky end) 如BamH I (G↓GATCC) 和平端 (blunt end) 如 Sma I (CCC ↓GGG)
(a)分子间连接
(1) · · · · · G 5´ AATTC· G· · · · · · CTTAA 5´ (2) · · · · · G 5´AATTC· G· · · · · · CTTAA 5´
(1) (2) · · · · ·G AATTC· · · · · · G 5´AATTC· G· · · · · · CTTAA G· · · · · · CTTAA
第二章 分子克隆工具酶
分子克隆工具酶
基因工程的操作,是在分子水平上的操作,是依赖一些 酶(如限制性核酸内切酶,连接酶,DNA聚合酶等)作为工具对
基因进行人工切割,拼接和扩增等操作。所以把这些酶称之
为“工具酶”。
工具酶是对野生菌株(或真核生物如酵母)进行改造、优
化、而产生的生物工程产品。
工具酶
相关文档
最新文档