真菌标本检验标准操作规程
真菌药敏标准操作规程
真菌药敏标准操作规程真菌药敏标准操作规程一、实验室准备1. 实验室应设有专门的真菌药敏实验室，确保实验操作的安全性和准确性。
实验室的温度应保持在20-25摄氏度，相对湿度不超过60％。
2. 实验室应配备必要的设备和试剂，包括培养箱、显微镜、培养基及药物试剂等。
3. 实验人员应穿戴个人防护用品，包括实验服、手套、口罩和护目镜等，确保工作区的清洁和无菌。
二、标本处理1. 收集患者真菌感染标本，包括病理组织、血液、尿液、呼吸道分泌物等。
标本应立即送到实验室进行处理。
2. 标本处理前，应进行外部消毒，消毒方法可以是用70％的乙醇擦拭外表面。
3. 标本应立即进行处理，避免存放时间过长，以防真菌生长导致结果不准确。
三、真菌培养1. 将标本分散在适量的无菌生理盐水中，进行稀释。
注入培养基琼脂平板和液体培养基中，分别进行固体培养和液体培养。
2. 样本应在常温下放置，避免光照，保持湿润，以利于真菌生长。
3. 观察培养过程中真菌的生长情况，包括菌落形态、颜色、透明度等。
四、药敏实验1. 在培养基上划线，将待测真菌分散在培养基中。
2. 向培养基中加入不同浓度的药物，利用层析法、扩散法等方法进行药物敏感性测试。
3. 观察药物对真菌的抑菌效果，包括抑菌区直径和抑菌程度。
4. 根据药物敏感性测试结果判断真菌的药物敏感性，分为敏感、中度敏感、抵抗。
五、数据分析和结果判断1. 测定抑菌区直径，记录数据。
2. 根据抑菌区直径和抑菌程度，将真菌分为敏感、中度敏感和抵抗。
3. 结合临床情况和药物用药指南，判断真菌感染的治疗方案。
六、结果报告和存储1. 将测试结果进行记录和整理，制作报告。
2. 将结果报告及时反馈给医生。
3. 将结果数据进行存储，备份和管理，以便后续研究和参考。
七、质量控制1. 每批药物敏感性测试都应包含阳性对照和阴性对照，以确保测试结果的准确性和可靠性。
2. 定期进行质量控制，检查培养基的质量和药物敏感性测试的准确性。
真菌检测的质量控制的流程
真菌检测的质量控制的流程一、引言真菌检测是一项重要的质量控制措施，用于确保产品的安全和合规性。
本文将详细介绍真菌检测的质量控制流程，包括样品收集、实验室分析和结果解读等方面。
二、样品收集1. 样品选择：根据产品类型和检测要求，选择代表性的样品进行检测。
2. 样品采集：采用无菌技术收集样品，避免外部污染。
3. 样品存储：将样品储存于适当的温度和湿度条件下，避免真菌生长和样品变质。
三、实验室分析1. 样品准备：将样品进行处理，如研磨、稀释等，以便于后续实验操作。
2. 真菌培养：将样品接种于含有适当培养基的培养皿中，培养一定时间，促使真菌生长。
3. 真菌分离：从培养物中分离出单个真菌菌株，避免混杂现象。
4. 真菌鉴定：通过形态学和生物化学方法，对分离出的真菌进行鉴定，确定其种属和属属。
5. 真菌计数：使用显微镜和计数室，对样品中的真菌进行计数，得出真菌数量。
四、结果解读1. 标准值设定：根据相关法规和标准，确定真菌数量的合理范围。
2. 结果比较：将实验结果与标准值进行比较，判断样品是否符合要求。
3. 结果报告：将实验结果整理成报告，包括样品信息、实验方法、结果数据和结论等内容。
4. 异常处理：如果样品超过标准值，需要进行异常处理，如重新采集样品、改进生产工艺等。
五、质量控制措施1. 内部质量控制：实验室应建立内部质量控制体系，包括使用标准菌株进行日常验证、定期校准仪器设备、培训人员等。
2. 外部质量控制：参加相关质量控制组织的外部质量评估，与其他实验室进行比对，确保结果的准确性和可靠性。
3. 仪器设备维护：定期维护和校准实验室使用的仪器设备，确保其正常运行和准确性。
六、结论真菌检测的质量控制流程包括样品收集、实验室分析和结果解读等环节。
通过严格执行质量控制措施，可以确保真菌检测结果的准确性和可靠性，保障产品的质量和安全。
实验室应建立完善的质量控制体系，并参与外部质量评估，不断提高真菌检测水平。
真菌检测操作规程
念珠菌属鉴定的操作规程（Standard Operating Procedure for Candida）1、介绍(Intorduction)：念珠菌是一种腐物寄生菌，广泛存在于自然界。
是人体正常菌群之一，平时主要生存于人体的口腔、上呼吸道、消化道、阴道及其他脏器中。
念珠菌的致病性是相对的。
在正常情况下，寄生在人体内的念球菌呈酵母细胞型，一般不致病。
在机体某些生理、病理因素影响下，内环境改变，机体抵抗力/免疫力降低时，念珠菌就会大量繁殖发展为菌丝型，侵犯组织，达到一定量时，人体就会发病，引起临床症状。
念珠菌属(Candida)在临床标本中有以下几个种：白色念珠菌（C.albicans）、热带念珠菌(C.tropicalis)、克柔氏假丝酵母菌(C.krusei)、光滑念珠菌(C.parapsilosis)、链形念珠菌(C.catenulata)、高里氏念珠菌（C.gulliermondii）、高加索乳念珠菌(C.kefyr) 、郎比念珠菌(mbica)、溶脂念珠菌(C.lipolytica)、葡萄牙念珠菌(C.lusitaniae)、皱褶念珠菌(C.rugosa)、涎沫念珠菌(C.zeylanoides)，原命名类星形念珠菌（C.stellatoidea）认为是白色念珠菌的生物变种。
临床上以白色念珠菌最常见。
2、程序（Procedure）:2.1、标本采集：根据临床所疾病的不同，可取分泌物、痰、粪、尿、血或脑脊液等标本检验。
2.2、标本接种和培养：血液及体液标本先在肉汤培养基中增菌后转种。
尿、痰、脓性分泌物等可直接接种在血琼脂平板和巧克力平板上。
2.3、鉴定过程：2.3.1取平板上的菌落直接涂片，革兰染色并镜检2.3.2镜下为革兰阳性卵圆型或圆型大孢子，可能见到芽现象2.3.3转种念珠菌显色培养基，及上ATB FUNGUS内药敏板条2.3.4培养48h后，见下图菌落色彩初筛念珠菌属绿色翠绿色（直径约2mm）蓝灰色铁蓝色（直径约1.5mm）粉红色(模糊有微毛菌落较大) （直径约4-5mm）紫色(直径约2mm)白色白色念珠菌热带念珠菌克柔氏假丝酵母菌光滑念珠菌其它念珠菌2.3.5为白色则上API 20 C AUX 作生化鉴定，则按作业指导书《梅里埃半自动细菌鉴定系统操作流程》把生化输入电脑，并按系统提示记录鉴定结果，需补充试验则补充试验。
真菌检测步骤
真菌检查步骤1.采集标本浅部真菌的标本有毛发、皮屑、甲屑、痂等，标本在分离前常先用75%的乙醇消毒。
深部真菌的标本可根据情况取痰、尿液、粪便、脓液、口腔或阴道分泌物、血液、脑脊液、各种穿刺液和活检组织，采集标本时应注意无菌操作。
2.检查方法真菌检查的方法主要有：（1）直接涂片：为最简单而重要的诊断方法。
取标本置玻片上，加一滴10%KOH溶液，盖上盖玻片，在酒精灯火焰上稍加热，待标本溶解，轻轻加压盖玻片使标本透明即可镜检。
可用于检查有无菌丝或孢子，但不能确定菌种。
（2）墨汁涂片：用于检查隐球菌及其他有荚膜的孢子。
医学教育|网搜集整理方法是取一小滴墨汁与标本（如脑脊液）混合，盖上盖玻片后直接镜检。
（3）涂片或组织切片染色：涂片染色可更好地显示真菌形态和结构。
革兰染色适用于白念珠菌、孢子丝菌等；瑞氏染色适用于组织胞浆菌；组织切片通常用PAS染色，多数真菌可被染成红色。
（4）培养检查：可提高真菌检出率，并能确定菌种。
标本接种于葡萄糖蛋白胨琼脂培养基上，置室温或37℃培养1～3周，必要时可行玻片小培养协助鉴定。
菌种鉴定常根据菌落的形态及显微镜下形态判断，对某些真菌，有时尚需配合其他鉴别培养基、生化反应、分子生物学方法确定。
四、真菌学检验的基本技术（一）直接镜检是最简单也是最有用的实验室诊断方法，常用的方法有：①氢氧化钾/复方氢氧化钾法：标本置于载玻片上，加一滴浮载液，盖上盖玻片，放置片刻或微加热，即在火焰上快速通过2～3次，不应使其沸腾，以免结晶，然后轻压盖玻片，驱逐气泡并将标本压薄，用棉拭或吸水纸吸去周围溢液，置于显微镜下检查。
检查时应遮去强光，先在低倍镜下检查有无菌丝和孢子，然后用高倍镜观察孢子和菌丝的形态、特征、位置、大小和排列等。
浮载液：A.10%~20%的KOH。
配方：氢氧化钾10～20g，蒸馏水加至100ml，待氢氧化钾完全溶解后揺匀存放在塑料瓶内，适用于皮屑、甲屑、毛发、痂皮、痰、粪便、组织、耵聍等的检查。
真菌检测的质量控制的流程
真菌检测的质量控制的流程一、引言真菌检测是一项重要的质量控制工作，用于确定环境、食品、药品等样品中是否存在真菌污染。
本文将详细介绍真菌检测的质量控制流程，包括样品准备、实验操作、质量控制和数据分析等环节。
二、样品准备1. 样品采集：根据检测对象的不同，选择合适的采样方法，如空气采样、表面刮取、液体培养基等。
2. 样品保存：采集后的样品应及时保存，并在适当的环境条件下避免污染和变质。
三、实验操作1. 样品处理：根据样品类型和检测要求，对样品进行预处理，如研磨、稀释、过滤等。
2. 培养基制备：根据检测需要，准备适当的培养基，包括选择合适的基质、添加适当的抗生素等。
3. 接种和培养：将样品接种到培养基上，并按照一定的条件进行培养，如温度、湿度、pH值等。
4. 检测方法：根据实验目的和要求，选择合适的检测方法，如显微镜观察、菌落计数、PCR等。
四、质量控制1. 阳性对照：在每次实验中，应设置阳性对照样品，以确保实验操作的准确性和可靠性。
2. 阴性对照：在每次实验中，应设置阴性对照样品，以检测实验过程中的污染情况。
3. 平行实验：为了验证实验的重复性和一致性，可以进行平行实验，对同一样品进行多次检测。
4. 质量控制记录：对实验过程中的关键环节进行记录，包括样品信息、操作步骤、实验结果等，以便后续分析和追溯。
五、数据分析1. 结果解读：根据实验结果，判断样品中是否存在真菌污染，并进行定性或者定量分析。
2. 异常处理：对于异常结果，应及时进行排查和处理，如重复检测、重新采样等。
3. 统计分析：根据一定的统计方法，对实验数据进行分析，如平均值、标准差、相关性等。
六、质量控制文件1. 检测方案：编制真菌检测的质量控制方案，包括样品准备、实验操作、质量控制和数据分析等内容。
2. 校准记录：记录校准仪器的日期、方法、结果等信息，确保仪器的准确性和可靠性。
3. 质量控制记录：记录每次实验的关键环节和结果，包括阳性对照、阴性对照、平行实验等。
真菌标本检验标准操作规程
真菌标本检验标准操作规程1.目的规范真菌标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。
2. 适用范围各类真菌检测的标本。
3. 标本采集及处理3.1 标本类型痰、尿、粪、脓液、脑脊液、血、拭子、皮屑、甲屑、气管穿刺抽取的痰液等。
3.2 标本采集与处理3.2.1 痰液、气管穿刺抽取的痰液。
3.2.2 尿液早晨中段尿10ml，离心取沉淀液1ml，作真菌涂片及培养。
3.2.3 口腔、咽喉、外耳道、阴道、和直肠粘膜的标本应迅速放入内装1-2ml无菌蒸馏水的试管送检。
常规KOH涂片及SDA培养。
3.2.4 粪便无菌盒送检，挑取黏液、脓血接种于含氯霉素培养基上。
3.2.5 脓液脓液标本应置无菌广口有盖玻璃瓶或小的无菌平皿中，立即送检。
3.2.6 脑脊液采集于无菌试管3-5ml，立刻送检。
离心后以无菌吸管吸取离心沉淀物1ml，作墨汁涂片镜检和培养（SDA）25°C及37°一周。
3.2.7 血液分别于左右两侧无菌抽血3-5ml，立即置于脑心浸出液肉汤。
3.2.8 体液支气管积液、关节腔积液、心包积液、腹水等10ml离心沉淀后取0.5ml沉淀液作直接镜检(注意颗粒)及培养。
3.2.9 组织标本置于无菌平皿中立即送检，置无菌研钵或组织匀浆器加2ml蒸馏水，研磨成浆或切成1-2mm3的小块作真菌直接镜检（KOH涂片）及培养。
3.2.10 皮屑皮损的边缘、疱壁、脓液、深层趾（指）间皮屑或活动边缘皮屑。
取材前75%酒精棉球消毒取材处，标本作真菌直接镜检（KOH涂片）及培养。
3.2.11 甲屑用细锉或牙签研磨钻取病甲与正常甲交界处并且贴近甲床部的甲屑，标本用酒精浸泡待干燥后以十点接种法分别种于含放线菌酮及不含放线菌酮的SDA平皿，25°C-28°C培养3周，并同时作KOH涂片。
3.2.12 毛发取病发15根、75%酒精消毒，3-5根作直接镜检，5-10根种于SDA斜面（加氯霉素），稍划破斜面掩埋。
涂片找真菌标准操作规程
涂片找真菌标准操作规程1检验目的：用革兰染色找酵母样菌，为临床感染的初步诊断和用药提供依据。
2适用范围：各种涂片标本（主要如白带等）3检验原理3.1真菌的染色结构如革兰阳性菌细胞壁。
3.2经过革兰染色后变成紫色，体形较细菌大容1检验目的：用革兰染色找酵母样菌，为临床感染的初步诊断和用药提供依据。
2适用范围：各种涂片标本（主要如白带等）3检验原理3.1真菌的染色结构如革兰阳性菌细胞壁。
3.2经过革兰染色后变成紫色，体形较细菌大容易辨认。
4试剂：4.1试剂厂家：珠海贝索生物科技公司4.2包装规格：250ml×44.3试剂盒组成4.3.1龙胆紫（龙胆紫、乙醇）4.3.2碘溶液（碘、碘化钾）4.3.3脱色液（丙酮、乙醇）4.3.4沙黄溶液（沙黄、乙醇）5仪器设备：奥林巴斯双目显微镜6操作程序6.1涂片：用无菌接种环取一环无菌生理盐水于玻片上，再用无菌接种环挑取所需菌落，在玻片的生理盐水上均匀涂抹，自然晾干。
6.2固定：6.3将龙胆紫液（Crystal Violet）滴加在已固定的涂片上，染10秒钟后，水洗并甩干。
6.4滴加碘溶液（Iodine Solution），10秒钟后水洗并甩干6.5再滴加脱色液（Decolorizer），脱色10－20秒（或摇动玻片至紫色不再脱落为止，根据涂片之厚薄之需要），水洗并甩干。
6.6加沙黄溶液(Safranin Solution)复染10秒之后水洗。
6.7以滤纸吸干或在空气中自然干后，油镜镜检。
7结果观察7.1有真菌孢子及菌丝出现报告：找到真菌。
7.2无真菌孢子及菌丝出现报告：未找到真菌。
8质量控制：大肠埃希菌呈G－杆菌；金黄色葡萄球菌呈G＋球菌。
9注意事项9.1涂片不能太厚，并且要均匀，否则菌体堆积或分散不匀，会影响染色结果。
9.2脱色要至无蓝色脱落为止。
9.3火焰固定时，应避免菌体过分受热而皱缩变形，影响结果的判断。
9.4每次染色时应用大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌作阴阳性质控对照。
微生物血培养真菌标本采集及处理标准操作规程
微生物血培养真菌标本采集及处理标准操
作规程
微生物血培养真菌标本采集及处理的标准操作规程如下：
1. 皮肤消毒程序：用消毒液从穿刺点向外画圈消毒，至消毒区域直径达5cm以上，待消毒液挥发干燥后（常需30s以上）穿刺采血。
2. 静脉穿刺和培养瓶接种程序：
用10ml注射器无菌穿刺取血后，排尽针头内空气，勿换针头（如果行第二次穿刺或用头皮针取血时，应换针头）。
采血后直接注入血培养瓶，先注5ml于厌氧培养瓶，并注意避免注入空气，后注其它培养瓶，轻轻混匀以防血液凝固或严格按厂商推荐的方法采血。
3. 采血部位：通常为肘静脉，疑为细菌性心内膜炎时以肘动脉或股动脉采血为宜，切忌在静滴抗菌药物的静脉处采血。
对于成人患者，每次发热时应该分别在两个部位采集血标本以帮助区分是病原菌还是污染菌。
不应从留置静脉或动脉导管取血，因为导管易被固有菌群污染。
4. 采血次数和血量：对于成年患者，应该同时分别在两个部位采集血标本，在两个不同部位分离到同样菌种才能
确定是病原菌。
疑为心内膜炎时，为提高阳性检出率，可酌情不同部位、不同时间，多次采血或动脉采血进行培养。
采血量过少会明显降低阳性率。
5. 血液标本采集后应立即送检，不能及时送检者应置室温暂存，勿放冰箱。
以上步骤完成后，即可将处理好的标本送往实验室进行进一步的检测和分析。
同时，需要注意在整个操作过程中要严格遵守无菌操作规范，以避免污染和误差的产生。
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真菌标本检验标准操作规程
1.目的
规范真菌标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。
2. 适用范围
各类真菌检测的标本。
3. 标本采集及处理
3.1 标本类型痰、尿、粪、脓液、脑脊液、血、拭子、皮屑、甲屑、气管穿刺抽取的痰液等。
3.2 标本采集与处理
3.2.1 痰液、气管穿刺抽取的痰液。
3.2.2 尿液早晨中段尿10ml，离心取沉淀液1ml，作真菌涂片及培养。
3.2.3 口腔、咽喉、外耳道、阴道、和直肠粘膜的标本应迅速放入内装1-2ml无菌蒸馏水的试管送检。
常规KOH 涂片及SDA培养。
3.2.4 粪便无菌盒送检，挑取黏液、脓血接种于含氯霉素培养基上。
3.2.5 脓液脓液标本应置无菌广口有盖玻璃瓶或小的无菌平皿中，立即送检。
3.2.6 脑脊液采集于无菌试管3-5ml，立刻送检。
离心后以无菌吸管吸取离心沉淀物1ml，作墨汁涂片镜检和培养
（SDA）25°C及37°一周。
3.2.7 血液分别于左右两侧无菌抽血3-5ml，立即置于脑心浸出液肉汤。
3.2.8 体液支气管积液、关节腔积液、心包积液、腹水等10ml离心沉淀后取0.5ml沉淀液作直接镜检(注意颗粒)及培养。
3.2.9 组织标本置于无菌平皿中立即送检，置无菌研钵或组织匀浆器加2ml蒸馏水，研磨成浆或切成1-2mm3的小块作真菌直接镜检（KOH涂片）及培养。
3.2.10 皮屑皮损的边缘、疱壁、脓液、深层趾（指）间皮屑或活动边缘皮屑。
取材前75%酒精棉球消毒取材处，标本作真菌直接镜检（KOH涂片）及培养。
3.2.11 甲屑用细锉或牙签研磨钻取病甲与正常甲交界处并且贴近甲床部的甲屑，标本用酒精浸泡待干燥后以十点接种法分别种于含放线菌酮及不含放线菌酮的SDA平皿，25°C-28°C培养3周，并同时作KOH涂片。
3.2.12 毛发取病发15根、75%酒精消毒，3-5根作直接镜检，5-10根种于SDA斜面（加氯霉素），稍划破斜面掩埋。
3.3 标本拒收标准及处理参见《标本拒收程序》
4.试剂、培养基及仪器
4.1 接种针、电热灼烧器、显微镜、恒温培养箱、冰箱、全排式生物安全柜等。
4.2 常用培养基及血培养瓶放置于2-8°C冰箱，并在有效期内使用。
4.3 沙氏葡萄糖琼脂（SDA），科玛嘉念珠菌显色培养基米粉吐温琼脂，察氏琼脂，马铃薯葡萄糖琼脂，七叶苷琼脂，咖啡酸琼脂，API20CAUX板条，10%KOH，正常人或羊血清。
5. 真菌鉴定的质控（略）
6. 检验步骤
接收标本后，立即对标本进行编号、登记。
6.1 涂片检查标本置于载玻片后加1滴10%KOH，覆上盖玻片，微加热后轻压盖玻片，驱逐气泡并压匀标本，再以滤纸条吸去周围溢液。
先在低倍镜下寻找(遮去强光源)，发现真菌的菌丝或孢子后经高倍证实，报告“真菌直接镜检阳性”。
6.2 培养
6.2.1 粪、痰标本可用无菌棉签或接种针挑取带血、黏液的病理部分，接种于含氯霉素的沙氏葡萄糖琼脂及科玛嘉念珠菌显色培养基，置于37°C培养48小时。
6.2.2 支气管保护性毛刷标本悬液、肺泡灌洗液、体液及尿等液体标本，可以无菌吸管吸取离心沉淀物约0.5ml，接种于上述培养基，37°C孵育48小时后如未见菌落生长，可报告“无真菌生长”。
6.2.3 脑脊液取离心沉淀物约0.5ml接种于2管沙氏葡萄糖琼脂斜面，分别置25°C及37°C孵育一周。
6.2.4 血分别左右两侧无菌抽血3～5ml，立即置于脑心浸出液肉汤。
6.2.5 皮屑、毛发接种于沙氏葡萄糖琼脂斜面，置25°C～38°C培养2周。
6.2.6 甲屑以十点接种法分别种于含放线菌酮及不含放线菌酮的沙氏平皿25°C～28°C
培养3周。
7.结果报告
所有的标本如分离出真菌，应尽可能鉴定至种，报告“ΧΧ菌生长”，尤其对于念珠菌中克柔念珠菌对氟康唑天然耐药，光滑念珠菌对唑类药物也逐渐表现出不敏感倾向。
8.注意事项
真菌血培养每天检查完毕后需摇动培养基，37°C振荡培养可加速真菌的生长，提高检出率；不作直接镜检，因其直接镜检阳性率低。
9.临床意义
真菌根据感染部位不同分为浅部真菌和深部真菌两大类，前者主要累及皮肤、毛发及甲板，后者感染皮下组织及内脏器官。
准确鉴定至种的水平可以为临床诊断及治疗提供重要依据，特别四部分种对抗真菌药物的敏感性存在差异。
制定真菌鉴定规范的操作程序是保证结果的准确性与可靠性的基础。
危急值报告
血培养阳性涂片确定真菌及脑脊液墨汁涂片发现新型隐球菌后，应及时向临床报告。
安全防护措施
12.1 操作人员在工作过程中要穿隔离衣、戴口罩和手套。
12.2 所有报告结果后的标本及污染物，必须经高压灭菌、焚烧或浸泡杀菌剂中。
12.3 若送检途中培养瓶不慎打破，应封锁现场，进行消毒处理。
11.4 标本运送应采用密封容器。
参考文献
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[6]王端礼主编,医学真菌学—实验室检验指南，北京：人民卫生出版社，2004
[7]Glenn S Bulmer，郑岳臣主编，汉英对照医学真菌学，上海：上海科学技术出版社，2005。