牛乳中细菌数的检查
实验一 牛乳中细菌的检查
实验一牛乳中细菌的检查一、目的要求1．了解牛乳的细菌学检查方法——显微镜直接计数法和标准平板计数法。
2．学习牛乳的巴斯德消毒法。
二、基本原理从健康母牛体内刚挤出的牛乳，含有少量的正常起始微生物。
生牛乳是一种流体,富含糖类,蛋白质,脂肪,无机盐和维生素等营养物质,其中的细菌会很快繁殖,因此,采用不同细菌学检查方法对牛乳中细菌进行卫生检查,比较得出最佳检测方法,确定不同来源的生牛乳的等级、巴氏消毒牛乳的卫生标准。
但将牛乳装入未消毒的器具和在分装、运输过程中，会被很多其他微生物甚至致病菌污染，而且牛乳含有丰富的营养物质（碳水化合物、蛋白质、脂肪、无机盐和维生素等），在其中的微生物，会很快生长繁殖，因此，一份牛乳样品的细菌含量可反映母牛的健康状况和牛乳生产与保藏的条件。
显微镜直接计数法适用于含有大量细菌的牛乳，生牛乳可用此法检查。
标准平板计数法是广泛用于牛乳微生物计数的常规方法，此法比较敏感，牛乳中含少量细菌时，能得出比较正确的结果。
三、器材及试剂生牛乳10ml，灭菌水，肉膏蛋白胨琼脂；灭菌培养皿，1ml与10ml灭菌吸管，灭菌试管，微量吸液器与吸嘴各一个，载玻片，美蓝染液，烧杯，显微镜，水浴锅，试管架，吸水纸等。
四、操作步骤1．显微镜直接计数（1）在白纸上画出1cm2的方块，然后载玻片放在纸上。
（2）用10μl的微量吸液器吸取混匀了的生牛乳样品，放在载玻片 1cm2区域的中央。
（3）用接种针将牛乳涂匀，并涂满1cm2的范围。
（4）使涂片于空气中慢慢干燥。
将铁丝试管架放在沸水浴中，然后置已干燥的涂片于试管架上，用蒸汽热固定5分钟，待干。
（5）浸于美蓝染液烧杯内染色2分钟。
（6）取出载玻片，用吸水纸吸去多余的染料，晾干。
（7）再用水缓缓冲洗，晾干。
（8）油镜下观察细菌数，共数30—50个视野。
（9）计算细菌的数目2．巴斯德法消毒牛乳(1)将水浴锅的温度调节到63℃。
(2)将生牛乳样品用力摇匀，使微生物能均匀分布。
乳制品实验
正常牛乳应为白色或稍带黄色，有特殊的乳香味，无异味，组织状态均匀一致，无凝块和沉淀。
评定方法如下：1、色泽和组织状态检查：将少许乳倒入烧杯中，观察颜色。
静置30min后将乳小心倒掉，观察有无沉淀和絮状物。
用手指沾乳汁，检验有无粘稠感。
2、气味的检验：将少许乳倒入试管中加热后，嗅其气味。
3、滋味的检验：品尝加热后乳的滋味。
根据各项感官鉴定，判断乳样是正常乳或异常乳。
新鲜乳中的酪蛋白胶粒由于其表面带有相同的电荷（负电荷）和具有水合作用，故以稳定的胶粒悬浮状态分散于乳中。
要想使其从乳中沉淀出来需要两个条件：一是除去胶粒所带的电荷，二是破坏胶粒周围的结合水层。
当乳的新鲜度下降，酸度增高，酪蛋白所带的电荷就要发生变化，pH达4.6时（即酪蛋白的等电点），酪蛋白胶粒变为电中性，失去排斥力量，于是极易聚合成大胶粒而沉淀出来。
此外，加入强亲水物质如酒精、丙酮等，能夺取酪蛋白胶粒表面的结合水层，也使胶粒易被沉淀出来。
酒精试验就是借助于不同酸度的乳加入酒精后，根据酪蛋白凝结的情况判断乳的新鲜程度。
在酒精试验时，乳的酸度越高，酒精浓度越大，乳的凝絮现象越易发生。
1、仪器与试剂仪器：20毫升试管2支，2毫升刻度吸管2支试剂：68°中性酒精溶液2、操作方法取乳样2ml于洁净试管中，加入等量的68°酒精溶液，迅速轻轻摇动使充分混合，观察有无白色絮片生成。
如无絮片出现，表明乳是新鲜的，酸度不高于20°T，成为酒精阴性乳；出现絮片的乳，为酸度较高的不新鲜乳，成为酒精阳性乳。
根据产生絮片的特征，可大致判断乳的酸度。
表1 68°酒精试验凝结特征牛乳酸度凝结特征18—20 不出现絮片21—22 很细小的絮片23—24 细小的絮片25—26 中型絮片27—28 大型絮片29—30 很大的絮片表2 不同酒精浓度试验结果酒精浓度界限酸度（不产生絮片的酸度）68° 20°T以下70° 19°T以下72° 18°T以下3、酒精试验注意事项（1）非脂乳固体较高的水牛乳、牦牛乳和羊乳，酒精试验呈阳性反应，但热稳定性不一定差，乳不一定不新鲜。
生鲜乳标准-86
中华人民共和国国家标准生鲜牛乳收购标准 GB/T 6914—86本标准适用于收购的生鲜牛乳的检验和评级。
1 定义1.1 收购的生鲜牛乳:收购的生鲜牛乳系指从正常饲养的、无传染病和乳房炎的健康母牛乳房内挤出的常乳。
2 收购的生鲜牛乳的质量要求2.1 理化指标理化指标只有合格指标,不再分级,见表1。
表 1：项目│指标脂肪, ％≥│ 3.10蛋白质, ％≥│ 2.95密度(20℃/4℃) ≥│ 1.0280酸度(以乳酸表示),％≤│ 0.162杂质度,ppm ≤│ 4汞, ppm ≤│ 0.01六六六、滴滴涕，ppm ≤│ 0.12.2 感官指标正常牛乳应为乳白色或微带黄色,不得含有肉眼可见的异物,不得有红色、绿色或其他异色。
不能有苦、咸、涩的滋味和饲料、青贮、霉等其他异常气味。
2.3 细菌指标收购牛乳细菌指标计有下列两个,每个均可采用。
采用平皿细菌总数计算法，按表2每毫升内细菌总数分级指标进行评级;采用美蓝还原褪色法按表8美蓝褪色时间分级指标进行评级。
两者只许采用一个，不能重复。
表 2分级 ,级│平皿细菌总数分级指标,万个/mlⅠ│≤50Ⅱ│≤100Ⅲ│≤200Ⅳ│≤400表 3分级 ,级│美蓝褪色时间分级指标Ⅰ│≥4hⅡ│≥2.5hⅢ│≥1.5hⅣ│≥40min3 检验方法3.1 乳的取样法3.1.1 适用范围:本法记述从大型容器或小型容器中,取得具有代表性样品的生乳及消毒乳取样的方法。
3.1.2 规定:样品的采取必须由公认的、具有一定技术的代理人进行。
该代理人必须无传染性疾病。
样品应附有负责取样者签名的报告书，该报告书应详细记载取样的场所、奶别、货主、日期、时间、取样者和到场者的姓名及职称，必要时还应包括包装形式、大气温度、湿度、取样器具的灭菌方法、样品防腐剂添加与否及有关的特殊情况。
3.1.3 各样品必须贴上标签并密封之,必要时还要写明样品的重量。
样品采取后必须在24h内,迅速送往试验室进行检验。
牛乳中嗜冷菌的危害 牛乳中嗜冷菌的检测方法 - 养牛技术
牛乳中嗜冷菌的危害牛乳中嗜冷菌的检测方法-养牛技术嗜冷菌在-15—20℃之间最宜生长，其在保存过程中产生的大量胞外耐高温的脂肪酶和蛋白酶会分解脂肪和蛋白质，所以在高温杀菌后仍有残留，从而造成牛奶腐败变质。
为避免鲜牛乳发生变质,一般从收集到加工过程中都采取冷藏,但此时往往会导致乳中嗜冷菌占具主导地位,而其产生的耐热性酶类是主要造成鲜牛乳以及乳制品质量变差的一个主要原因.检测牛乳中细菌总数一般在37℃温度下进行48h培养,但该条件下嗜冷菌不会生长,从而往往被忽视,应加强检测。
下面就具体来了解一下：牛乳中嗜冷菌的危害牛乳中嗜冷菌的检测方法。
1、来源鲜牛乳中的嗜冷菌具有比较广泛的来源，且可分成较多类型的菌株，其中数量较多的是微球菌、假单胞菌以及产碱杆菌。
微球菌分布比较广泛，主要存在于动物体表、空气、水源以及、设备上；假单胞菌属主要在海水、淡水、土壤以及多种植物体内存在；产碱杆菌主要在饲料、水源以及粪便中存在。
在污染嗜冷菌的途径中，主要是通过接触个人，如药浴杯污染、挤奶工双手不卫生、水清洗乳头污染、贮存及运输设备不干净或没有严格消毒等，都容易导致嗜冷菌含量过高。
2、危害鲜牛乳中主要为兼性嗜冷菌，产碱杆菌属、假单胞菌属、克雷伯氏杆菌属、黄杆菌属以及无色杆属等，是目前经常能够分离到的嗜冷菌。
通过对以上菌株进行特性分析，发现其都会影响鲜牛乳的保存。
例如，假单胞菌具有很强分解蛋白质和脂肪的能力，能够导致脂肪发生分解，从而容易形成脂肪哈败味，还能够使其中的蛋白质发生分解产生蛋白胨；产碱杆菌，自身无法使牛乳中的糖类发生分解而产酸，但能够生成棕黄色、灰黄色的色素，还能够导致牛乳中含有的有机盐发生分解而生成碳酸盐，从而导致牛乳呈碱性，能够造成乳制品发生黏性变质。
也就是说，嗜冷菌能够使牛乳中的成分被破坏，这主要是由于嗜冷菌能够分泌耐热蛋白酶、脂肪酶而导致蛋白质、脂肪发生分解。
另外，在有氧低温条件下，嗜冷菌能够引起生色反应，如黄色、奶油色、绿色、红色、金色、黑色或者棕褐色等。
经典：01-实验一-牛乳中细菌的检查
3、标准平板计数法
将牛乳样品充分摇匀，系列稀释至10-2、10-3和10 -4 。 用1ml无菌吸管从三个梯度分别取1ml注入空白平板
内 各平板倾注约15ml已经融化并冷却至45 ℃左右的牛
肉膏蛋白胨培琼脂，立即放到桌上摇匀 凝固后，倒置于37 ℃培养箱内，培养24h。
12
3、标准平板计数法
3. 仪器或其他用具
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四、操作步骤
1. 美兰还原酶试验法
2. 标记2个无菌试管1、2 3. 分别向2个试管中加入5ml的牛乳样品（1号亚
奥特-变质，2号亚奥特-新） 4. 分别向试管中各加入1ml美兰，盖紧管塞
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1、美兰还原酶试验法
轻轻倒转试管约4次，置于37℃水浴中，并记 录培养时间
测试管在水浴中稳定5min中后，取出，轻轻 倒转一次后再放回水浴中
等”； 在6~8h之间被还原者，为“好质量”。
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标准平板计数法：
广泛应用的常规方法。 此方法较为敏感，牛乳中含有少量细菌时，
能得出比较正确的结果。我国消毒牛乳的卫 生标准是细菌总数<30 000个/ml。
7
三、器材
1. 牛乳样品和培养基
2.
亚奥特巴氏消毒牛奶样品
2. 溶液或试剂
3.
美兰溶液（1：250 000），无菌水等
实验一 牛乳中细菌的检查
一、目的要求 二、基本原理 三、器材 四、操作步骤 五、实验报告
1
一、目的要求
1、了解牛乳的细菌学检查方法 2、学习牛乳的巴斯德消毒法
2
二、基本原理
从健康母牛体内刚挤出的牛奶，含有少 量的正常起始微生物。
在分装与运输过程中，会被污染。 牛奶营养丰富，其中的微生物会快速繁
牛奶的成分检测
牛奶检验2009-09-11摘要：牛奶和乳制品是大自然赐予人类最理想的、最接近于人奶的完善天然食品。
牛奶中至少有100多种化学成分，其中水、蛋白质、脂肪、碳水化合物、矿物质、维生素都是人类赖以生存的营养素。
因此，牛奶有“白色血液”、“人类保姆”、“完全食品”等美称。
乳和乳制品已成为人们非常喜爱的日常食品之一。
根据FAO统计，世界年人均乳品消费量达到46公斤，而在一些发达国家，人均乳品消费量更是达到了130公斤，而乳品工业的产值更是占食品工业的产值的10％以上。
由于乳制品是人们日常饮食结构的重要组成部分，它的安全性直接影响到人们的身体健康，所以世界各国都对乳制品的质量控制制定了相当详细的法规体系。
众所周知要生产出优质的牛奶，就要有好的奶源，也就是说牛奶的质量主要取决于原料的好坏。
生产牛奶那么多的环节能不能确保牛奶的安全卫生呢？解决这一问题就要提高从奶源抓起。
本文主要介绍了原料奶的常规检验方法，包括感观的检验，理化指标的测定，微生物的检测等以保证我们喝到真正有营养健康的牛奶。
关键字：原料奶感观理化微生物前言：新鲜而优质的原料乳是制造优良乳制品的先决条件。
因此，在原奶收购时必须及时地进行原奶的质量检验。
根据感官检查理化性质及微生物的检查以区分质量好坏，判断出等级，以便按质论价和分别加工。
1收奶程序及指标控制1.1收奶程序新鲜牛奶在奶站经过初步的检验合格后被允许进入牛奶加工企业加工，在进入乳品加工企业以后牛奶要经过很多过程才能进行生产。
其具体程序如下：奶车入厂︱采样编号︱取样︱检验－感官不合格︱︱合格不合格－拒收︱︱过磅复检︱︱收奶—合格由收奶程序可见在原奶收入过程中质量检验有很大的作用。
原奶的好坏直接影响乳制品的质量，通过对原奶的检验可以了解其质量是否符合生产要求，使生产者心中有数，并为工厂制定生产计划、进行经济核算提供基本数据。
1.2 原奶指标1.2.1感官指标色泽收购鲜乳色泽应是乳白色或稍带微黄色。
牛乳中细菌的生长变化
牛乳中细菌的生长变化作者：张佳柠来源：《科技与生活》2012年第05期摘要生牛乳的pH为中性，在牛奶放置过程中，温度，湿度，牛奶中的营养物质的多少等会导致其中细菌生长发生变化，因此牛乳中的pH也发生着变化。
本次实验研究在牛奶放置过程中的细菌生长变化以及酸奶的制作过程，故实验中将牛奶拆袋后室温下放置，并且设置时放置时间不同以作为对照。
实验中采用美蓝还原酶试验法测定细菌生长变化的生理值，并以此结果比较同一品牌不同包装的牛乳中细菌的生长变化情况。
关键词牛奶；细菌生长变化；利乐枕；塑料带包装中图分类号 TS252 文献标识码 A 文章编号 1673-9671-(2012)031-0194-01牛乳是一种营养丰富的物质，当牛乳中存在微生物时，微生物的迅速繁殖引起牛乳的变质。
目前牛乳的消毒方法通常有两种：巴氏消毒法和超高温瞬时杀菌法（UHT）。
目前市场上的包装有袋和盒两种，称为利乐包装和塑料袋装。
贮藏条件涉及常温和低温；保存时间为3天-4天。
牛乳的细菌学检查方法有三种——显微镜直接计数法、美蓝还原酶实验法、标准平板活菌计数法，本实验采用美蓝还原酶实验法来对牛乳中的细菌数做检验，现介绍这种方法：美蓝还原酶试验法：该法中用的美蓝是一种氧化还原作用指示剂，通过加入其中的美蓝颜色变化的速度，可以鉴定该牛乳的质量，其标准规定为：牛乳等级（腿色时间为指标）：一级：6 h-8 h，质量好；二级：2 h-6 h，中等；三级：30 min-2 h，质量差；四级：30 min，质量很差。
1 实验方法1.1 实验试剂伊利普通枕状利乐包装奶两袋、伊利普通塑料袋装奶两袋、三元特级鲜牛奶三袋、美蓝染液。
1.2 实验方法计划离实验分别还有96 h（四天），72 h（三天），48 h（两天）时，24 h（一天）打开牛乳包装，倒出40 mL牛奶于标记为1的纸杯中，封口。
1.3 实验流程制备培养基→生理盐水的分装→灭菌→美蓝还原酶试验法。
2 结果牛奶放置过程中伴随着pH的变化结果如表1所示。
乳中抗生素的残留的测定
乳中抗生素的残留的测定中图分类号：S816.73文献标识码：A 文章编号：近20年来，兽药（包括药物添加剂）在畜牧业中的应用日益广泛，其在降低家畜发病率与死亡率、促生长、提高饲料利用率和改善产品品质方面的作用是十分显著的，已成为现代畜牧业不可或缺的物质基础。
牛乳与人们的生活息息相关，因此牛乳中的抗生素残留问题一直是各国政府和食品安全机构关心的重点，中国近年来对牛乳中的抗生素残留问题也逐渐予以关注。
1.1 牛乳中抗生素残留的原因青霉素、阿莫西林、氨苄西林等抗生素在奶牛养殖业中常用于治疗奶牛乳房炎和子宫内膜炎，由于其廉价和广谱的抗菌性而被大量且频繁地超剂量使用，因此导致了牛乳中高浓度抗生素残留。
牛乳中抗生素残留的原因主要是：非治疗目的用药、治疗目的用药和非法人为掺杂非治疗目用药的主要指在牛饲料中添加含有一定比例的抗生素的饲料添加剂，在饲料中添加抗生素的主要作用是：杀灭或抑制畜体内(特别是消化道内)的有害微生物，调节畜体胃肠道微生态平衡，从而改善动物健康，促进动物生长，达到预防奶牛疾病和使其生产力提高的目的。
这也是造成牛乳中抗生素残留的一个非常重要的一个原因如果在治疗后停止用奶时间不够，可能导致牛乳中抗生素残留超标美国食品和药品管理局（FDA）调查表明，用药不当是导致牛乳中抗生素残留的主要原因。
1.2 牛乳中抗生素残留的危害对于食品中药物残留是否引起严重后果仍有争议，特别是对药物残留的长期影响还不清楚，但是对于牛乳中抗生素残留引起的以下几点危害目前还是可以肯定的。
1.2.1 对人类健康的危害如果含有致敏抗生素的牛乳被敏感人群饮用，可引起食用者过敏反应，表现的症状轻则是皮疹、发热、关节疼痛，严重时可发生过敏性休克甚至危及生命。
曾报道，英国一对青霉素高度敏感的病人，使用约10IU/mL的青霉素的商品牛乳后，发生了变态反应。
链霉素可引起肾损害和听觉神经受损，四环素引起肝损害，其与骨骼、牙齿中的钙质结合，产生骨及牙齿感染，还可影响儿童的生长发育。
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牛乳中细菌数的检查摘要：【目的】采用两种方法检测牛乳中细菌数目，鉴定牛乳卫生等级。
【方法】采用美蓝还原酶试验法和标准平板计数法检测不同种类牛乳中细菌数目，确定质量等级。
通过对照试验鉴定巴斯德消毒法是否符合卫生标准。
【结果】美蓝还原酶试验法可以快捷简便地对牛乳质量等级进行定性检测；标准平板法可以对牛乳中细菌数量进行定量检测，结果准确。
【结论】通过标准平板法平行测定，可确定样品牛乳等级为中等和差。
通过对照试验，确定巴斯德消毒法可靠性强。
关键词：牛乳；美蓝还原酶；标准平板计数；细菌数；检查The Inspection of the Number of Bacteria in MilkYongqing Xue, Wenjing Sun, Xiangchen Fan, Na Li, Junyi Li, Hongzhou Zhao,Tongyang Chen, Chunyan Hu(College of Life Sciences, Shandong Agricutual University, Tai’an, 271000, China)Abstract:[Objective]Using two methods to detecting the quality of cow’s milk and the number of bacteria in milk and to dentifying the hygienic level of milk. [Methods] Using the methylene blue reductase method and the standard plate counting method to carry on the detection of the number of bacteria in different milk, therefore to determine the quality of milk. Through controlled trails to determine whether Pasteurization of milk meets the quality standards. [Results] Methylene blue reductase test method can be easy and quick for the qualitative detection of milk quality levels; while standard plate counting method can quantify the number of bacteria in milk and the results of the test are commonly accurate. [Conclusion] Measured by the standard plating count method, the milk samples being determined are at a middle and some even low level. By the controlled trials to determine that Pasteurization is reliable.Key words:the cow’s milk; the methylene blue reductase method; the standard plate counting method; the numble of bacteria; inspection1 引言牛乳富含蛋白质，长期饮用有助于增强体质。
同时，牛乳也是许多疾病传播的一种重要的非生命载体，富含微生物生长繁殖的丰富营养[1]。
从健康母牛体内刚取出的牛奶含有少量正常的起始微生物，在牛乳的采取、加工、分装与运输过程中，可能由于操作不规范而使牛乳污染杂菌。
由于牛乳营养丰富，其中污染的杂菌会快速繁殖，饮用后对身体有极大危害。
牛乳的细菌学检查一般有显微镜直接计数法、美蓝还原酶试验、检测大肠菌群和标准平板计数法[2]，本次试验通过后两种方法分别定性、定量检测牛乳样品的细菌数含量，同时通过对照试验，确定在牛乳消毒中被广泛应用的巴斯德消毒法的卫生标准是否达标。
2 材料与方法2.1 试验时间与地点2011年11月7日-8日，9号楼522试验室。
2.2 试验材料材料：亚奥特鲜牛奶；亚奥特纯牛奶；牛肉膏蛋白胨培养基；试剂：美蓝溶液（1:250 000）；无菌水；蒸馏水等；仪器和用具：试管，试管架，三角瓶，5mL移液枪及枪头，1mL移液枪及枪头，培养平板，高温蒸汽灭菌锅，恒温水浴锅，微波炉，显微镜，载玻片，标记笔等。
2.3 试验方法2.3.1 牛肉膏蛋白胨培养基和无菌水的制备与灭菌制备牛肉膏蛋白胨培养基400mL，分装在两个三角瓶中；取9支试管，每支试管加9mL 蒸馏水。
将牛肉膏蛋白胨培养基与装有蒸馏水的试管及21个平板一起灭菌，121℃维持20min。
牛肉膏蛋白胨培养基的配方（每1000mL）为：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl5g，琼脂4.4g，水1000mL，pH=7.0~7.2。
2.3.2 美蓝还原酶试验法测定牛乳质量（1）取三支无菌试管，标记为1号、2号和3号，1号试管加入10mL亚奥特鲜牛奶，2号、3号试管分别加入10mL亚奥特纯牛奶，1号、2号试管分别加入1mL美蓝溶液，分别加棉塞塞紧。
（2）轻轻摇动试管，置于37℃水浴锅中温浴，记录开始时间；（3）试管在水浴锅中稳定5min后取出，轻轻摇动后再放回水浴锅；（4）每隔30min取出试管观察美蓝与牛乳混合液颜色变化，直至3-6h，记录试管中牛乳4/5变白时的时间。
2.3.3 巴氏消毒法消毒牛乳（1）将亚奥特鲜牛奶摇匀，使其中的微生物充分混匀；（2）取一支无菌试管，标记A，加亚奥特鲜牛奶5mL；（3）将A试管置于80℃水浴锅中，使水面超过试管内牛乳液面，保持15min，不断摇动试管使加热均匀；（4）加热至15min时立即取出试管，用流水冲洗试管外壁，使牛乳迅速冷却；2.3.4 标准平板计数法检测牛乳中细菌数（1）将亚奥特鲜牛奶摇匀，使其中的微生物充分混匀；（2）取一支无菌试管，标记B，加亚奥特鲜牛奶5mL；（3）摇匀A、B试管中牛乳，从A试管中吸取1mL牛乳用无菌水稀释，稀释度依次为10-2，10-3，10-4；从B试管中吸取1mL牛乳用无菌水稀释，稀释度依次为10-3，10-4，10-5。
（4）取21个无菌平板并标明稀释度、溶液名称（消毒前牛乳、消毒后牛乳和无菌水），其中分别取不同梯度的牛乳各1mL依次注入相应标记的平板，每个梯度做三个平行；取无菌水1mL注入平板，做三个平行；（5）取出灭菌后的牛肉膏蛋白胨培养基，用微波炉熔化为液体，冷却到45℃左右后摇匀，向21个平板中各加15mL，静置。
（6）待平板中培养基凝固后倒置，置于37℃培养箱中培养24h；（7）选择菌落数为30-300左右的平板计数，计算每毫升牛乳中细菌数。
3 结果与分析3.1 试验结果3.1.1美蓝还原酶试验法结果见表1。
表1 美蓝还原酶试验法结果Table1 the results of methylene blue reductase test注：表格中“——”表示无数据。
3.1.2 标准平板计数法结果见表2。
表2 标准平板计数法结果Table2 the results of the standard plate counting method注：表格中“——”表示未获得数据。
3.2 分析3.2.1美蓝还原试验法1号试管还原时间为95min，所以牛乳质量为“差”；2号试管还原时间为185min，故牛乳质量为“中等”。
3号试管未加美蓝溶液，作为观察颜色变化的对照。
3.2.2标准平板计数法1mL巴氏消毒法消毒之后的牛乳中根据三个梯度测得的细菌数为9833个/mL。
说明生鲜牛乳必须经过巴斯德消毒后才可饮用。
未经消毒的牛乳未长菌落，具体原因见讨论部分。
4 讨论美蓝还原酶试验法和标准平板技术法是牛乳中细菌数检测中较为准确、直观的方法。
其中，美蓝还原酶试验法可以定性检测牛乳质量。
其原理是，美蓝作为一种氧化还原指示剂，可在厌氧条件下被还原为无色，如果牛乳中有细菌，其中的活的好氧和兼性厌氧菌通过呼吸作用消耗氧气，造成牛乳中溶氧下降，形成厌氧环境，氧化-还原点位降低，使美蓝还原为无色美蓝[3~4]。
牛乳中细菌数越多，呼吸作用越旺盛，消耗氧气越多，厌氧环境越严格，还原时间越短，因此可依据还原时间的长短判断牛乳的质量等级。
目前通过美蓝还原法检测牛乳质量的一般标准是：还原时间在30min之内的，质量为“很差”，为四级奶；还原时间为30min-2h的，质量为“差”，为三级奶；还原时间为2-6h的，质量为“中等”为二级奶；还原时间为6-8h的，质量为“好”为一级奶[5]标准平板菌落计数法是测定细菌数的经典方法，可以定量检测牛乳中细菌数量，从而直接判断牛乳质量。
该方法依据的原理是单个细菌在合适的培养条件下可长成菌落，通过系列稀释使细菌浓度降低，并可以充分分散为单个细菌，经合适培养后，每个细菌都长成肉眼可见的菌落。
待菌落长成后，通过统计菌落数并计算每毫升牛乳中的细菌数，从而判断牛乳的质量。
我国消毒牛乳的卫生标准是，用标准平板计数法检查，规定细菌总数小于30000个/mL[6]。
巴斯德消毒法是牛乳进行消毒普遍采用的方法，在牛乳分装之前消毒生奶，确保细菌相对较少，能消灭牛奶中的病原菌和有害微生物，但不破坏牛奶的营养成分，并保持其物理性质，多用于食品消毒，保持食品风味。
巴斯德消毒法是一种温和的加热工艺，在实际应用中加热消毒的范围较广，一般在63~90℃之间视消毒时间而定，主要方法有：63℃保持30min，或者是80℃保持15min，90℃保持5min。
本次试验即验证了该消毒方法的消毒效果，通过在80℃下保持15min然后用标准平板计数法检查细菌数，验证了巴斯德消毒法的可靠性，也说明生鲜牛乳必须经过巴斯德消毒法才符合卫生标准的要求，才能分装、饮用。
在本次试验中仍出现了一些问题，主要表现在以下方面：第一，在美蓝还原酶试验中，未验证美蓝溶液是否变质失效。
美蓝溶液变质后可能会影响还原时间的长短，甚至无法测得实验数据。
第二，在美蓝还原酶试验中，检查美蓝是否变色的时间间隔设定为30min，使得试验结果可能存在较大误差。
但缩短时间后，就意味着需要频繁取出试管，对温水浴效果有影响。
根据本次试验的结果，在尽量缩小误差且不影响温水浴效果的前提下，建议将时间间隔缩短为15min。
由于时间原因，本次试验并未验证15min的时间间隔是否确实符合试验要求。