沙门氏菌检验标准操作规程
简述沙门氏菌的检验流程
简述沙门氏菌的检验流程
当然可以，让我用更简单的话说说怎么检查沙门氏菌吧：
唤醒细菌：首先，从食物或者其他样本里取一点点（比如一小块肉或者一些蔬菜），放到一种能让细菌“醒过来”和长大的特殊水里。
然后，让它们在适合的温度下美美地“睡”上一晚。
帮好菌壮大多起来：第二天，从第一步得到的溶液里取点液体，转移到两种特别设计的“营养餐”里，一种是让沙门氏菌特别喜欢的，另一种是考验它们的。
接着，再让它们各自在一个暖暖的地方长一长。
找不同：等细菌长得差不多了，挑一点出来涂在几种颜色不一样的“细菌专属培养皿”上，这些盘子能帮助我们看清楚哪些是沙门氏菌。
确认身份：在培养皿上，我们会看到各种小点点，这些是细菌长出来的。
挑几个可疑的小点，做些小实验，看看它们的行为像不像沙门氏菌，甚至用专门的“血液测试”来确认是不是真的沙门氏菌家族的。
高科技快速验证（如果需要）：有时候，为了更快更准，我们会用一种叫做PCR的技术，直接检查细菌的DNA，就像用指纹一样确定它们的身份。
整个过程就像是在众多的细菌中找出沙门氏菌这个“嫌疑犯”，确保我们的食物安全，或者帮助医生诊断疾病。
沙门氏菌检验
沙门氏菌检验一、培养基和试剂：1、缓冲蛋白胨水（BP）：按GB4789.28中4.12规定2、氯化镁孔雀绿（MM）增菌液：按GB4789.28中4.13规定3、四硫酸钠煌绿（TTB）增菌液：按GB4789.28中4.14、4.15规定4、亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液：GB4789.28中4.16规定5、亚硫酸铋琼脂（BS）：按GB4789.28中4. 19规定6、DHL琼脂：按GB4789.28中4. 20规定7、HE琼脂：按GB4789.28中4.21规定8、WS琼脂：按GB4789.28中4.23规定9、SS琼脂：按GB4789.28中4.22规定10、三糖铁琼脂：按GB4789.28中4.26、27规定11、蛋白胨水靛基质试剂：按GB4789.28中3.13规定12、尿素琼脂（Ph7.2）：按GB4789.28中3.15规定13、氰化钾（KCN）培养基：按GB4789.28中3.16规定14、氨基酸脱羧酶试验培养基：按GB4789.28中3.12规定15、糖发酵管：按GB4789.28中3.2规定16、ONPC培养基：按GB4789.28中3.3规定17、半固体脂：按GB4789.28中4.30规定18、丙二酸钠培养基：按GB4789.28中3.7规定19、沙门氏菌因子血清：按26种用于初步分型；57种用于进一步分型；163种用于详细分型。
二、沙门氏菌检验程序：三、操作步骤：（一）、前增菌和增菌冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品均应经过前增菌。
各称取检样25g，加在装有255ml缓冲蛋白胨水的500ml广口瓶内。
固体食品可先应用均质器以8000~100000r/min打碎1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用灭菌匙或玻棒研磨使乳化，于36±1℃培养4h（干蛋品培养18~24h）移取10ml，转种于100ml氯化镁孔雀绿增菌液或四硫酸钠煌绿增菌液内，于42℃培养18~24h。
同时，另取10ml，转种于100ml亚硒酸盐胱氨酸增菌液内，于36±1℃培养18~24h.。
食品沙门氏菌测试方法标准
食品沙门氏菌测试方法标准
食品沙门氏菌测试方法标准主要包括以下步骤：
1.样品采集：从待检测的食品中采集适量样品，确保样品的代表性。
2.样品处理：将采集的样品进行适当处理，如破碎、研磨等，以便后续的
检测操作。
3.增菌培养：将处理后的样品接种到选择性培养基中，进行增菌培养。
选
择性培养基可以抑制其他微生物的生长，促进沙门氏菌的增殖。
4.分离培养：将增菌培养后的样品划线接种到鉴别培养基上，进行分离培
养。
鉴别培养基可以进一步筛选出沙门氏菌，并对其进行鉴别。
5.生化鉴定：对分离培养得到的沙门氏菌进行生化鉴定，以确定其是否为
沙门氏菌。
常用的生化鉴定方法包括API 20E、三糖铁试验等。
6.血清学鉴定：对生化鉴定为沙门氏菌的菌株进行血清学鉴定，以确定其
具体血清型。
常用的血清学鉴定方法包括玻片凝集试验、试管凝集试验等。
7.药敏试验：对分离得到的沙门氏菌进行药敏试验，以确定其对不同药物
的敏感性，为临床治疗提供参考。
需要注意的是，食品沙门氏菌测试方法标准可能因不同国家和地区而有所差异。
因此，在实际操作中，应根据当地的标准和法规进行相应的调整和操作。
沙门氏菌实验标准操作程序
关键控制点
1、操作台的卫生；
2、操作时房间风扇的开关，超净台的风扇开微风。
3、操作过程中注意无菌操作，冲枪后连枪头带里面的液体一并打入垃圾桶，并用酒精棉球清洗移液器枪口，切勿将液体打回原试管或三角瓶中。
注意事项
无菌操作将样品转至500 mL锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于36℃±1℃培养8 h～18h。
如为冷冻产品,应在45℃以下不超过15 min,或2～5℃不超过18 h解冻。
5、增菌轻轻摇动培养过的样品混合物，取1 mL，转种于10 mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液SC内，于36℃±1℃培养18 h～24 h。同时，另取取1 mL，转种于10 mL TTB内，于42℃±1℃培养。
2、亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）：称取23g亚硒酸盐胱氨酸增菌液溶于1000mL蒸馏水中，加热煮沸灭菌，不要过度加热，定量分装备用，勿需高压灭菌。
3、四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）：称取93.5g四硫磺酸钠煌绿增菌液溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌20min,临用前按每100ML加入碘液一支和P-73 0.1%煌绿一支，混匀后分装。现配先用，不宜久留。
沙门氏菌实验标准操作程序
岗位名称
检验员
执行人员
检验员
技能要求
掌握实验技能
监控人员
检验员
监控频率
实验过程
检验方法
对照试验
作业条件
在无菌室内操作
作业步骤
1、超净工作台与无菌室紫外灯照射半小时，通风半小时后进入无菌室操作；
2、样品用75%酒精喷洒后放入传递窗，在无菌室操作台按顺序摆放后再用75%酒精均匀喷洒；
0040沙门氏菌生化试验检验操作规程
目的建立沙门氏菌生化检验操作规程，确保检验数据的准确性。
依据《中国药典》2000版一部附录XIIIC-（80-81页）。
范围本标准适用于沙门氏菌生化检验操作。
责任人QC负责人、化验员。
内容1使用仪器、玻璃器皿、培养基、染色剂及试剂。
1.1仪器：托盘天平1.2玻璃器皿：150ml锥开瓶、试管、载玻片1.3试液：1.3.1靛基质试液：取对二甲基苯甲醛5.0g，加入乙醇75ml，充分振摇，使完全溶解后，再取浓盐酸25ml徐徐滴入（边滴边振摇，以免骤热使溶液色泽变深）即得。
1.3.2 0.9%氯化钠溶液：取氯化钠0.9g，加入蒸馏水100ml，微热使溶解，121℃灭菌30分钟，放冷，备用。
1.4染色剂：1.4.1结晶紫染液：取结晶紫1.0g，加入95%乙醇20ml使溶解，加1%草酸铵水溶液80ml，混匀，静置48小时使用，置密闭棕色瓶中贮存。
1.4.2碘液：取碘化钾2.0g，加水3-5ml使溶解，加入碘片1.0g，使全部溶解后加水稀释至300ml，置密闭棕色瓶贮存。
1.4.3沙黄试液：取沙黄0.25g，加95%乙醇10ml，使完全溶解后，加水100ml。
1.5培养基：1.5.1营养肉汤增菌液：取营养肉汤试药22g，加蒸馏水1000ml微热使溶解，按每瓶100ml分装，121℃灭菌15分钟，备用。
1.5.2四硫磺酸盐增菌液：取四硫磺酸盐试药4.6g，加蒸馏水100ml微热使溶解，121℃灭菌30分钟，备用。
1.5.3胆盐硫化琼脂培养基：取胆盐硫化琼脂培养基试药48g，加蒸馏水1000ml加热溶化后，116℃灭菌30分钟，冷却至60℃灭菌，倾注平皿，备用。
1.5.4曙红亚甲蓝琼脂培养基：取营养琼脂培养基（取营养琼脂试药4g，加水100ml，116℃灭菌备用）加热溶化后，取100ml，冷至60℃按无菌操作加入灭菌的20%乳糖溶液5 ml，曙红钠指示液2ml和亚甲蓝指示液1.5ml，摇匀，倾注平皿。
1.5.5沙门、志贺菌属琼脂：取沙门、志贺菌属琼脂试药60g，加蒸馏水1000ml，放置20分钟，用石棉网微火煮沸使完全溶解，冷至50℃左右倾入无菌平皿中凝固后，备用。
沙门氏菌检测操作规程
沙门氏菌检测操作规程1 原理沙门氏菌的检测需要四个连续的阶段见下图：1.1 用非选择性液体培养基预增菌将试料接种到缓冲蛋白胨水（BPW），在36℃±1℃下培养16~20h。
（样品中可能存在少量的沙门氏菌却含大量的肠杆菌科的其他菌，所以选择性增菌是必须的；为了检测受伤的沙门氏菌，常须进行预增菌。
）1.2 在选择性液体培养基上增菌将1.1中的培养物接种到四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液和亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液中。
于TTB增菌液内42℃±1℃培养18h～24h；SC 增菌液内36℃±1℃培养18h～24h。
1.3 初步筛选将1.2的培养物接种到以下两个选择性培养基：亚硫酸铋（BS）琼脂、木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂，于36℃±1℃分别培养40h～48h（BS 琼脂平板）或18h～24h（XLD 琼脂平板），根据菌落特性，辨别可疑沙门氏菌菌落。
1.4再次筛选挑出1.3中的可疑沙门氏菌菌落，在沙门氏菌显色培养基中培养再次筛选，再用合适的生化和血清学试剂进行鉴定。
2 试剂与仪器2.1所用器具三角烧瓶、玻璃珠、具塞试管、培养皿、1000μL枪头、5mL枪头、称量勺、接种环、接种针2.2 仪器：分析天平、恒温培养箱、微型振荡器、超净工作台、高压灭菌锅2.3 所用试剂和培养基2.3.1缓冲蛋白胨水培养基（BPW）称取BPW培养基20.1g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，以90mL/瓶分装到各锥形瓶，并于121℃灭菌15 min，冷至常温。
2.3.2 四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液取TTB增菌液基础93.6g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装于锥形瓶中，每瓶100mL。
将锥形瓶放入灭菌锅中，121℃灭菌20min；冷至30℃，每100mL基础培养基中加入TTB配套试剂碘液和煌绿各一支（开启前用75%酒精棉消毒西林瓶表面），混合均匀。
2.3.3 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液取SC培养基23g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装锥形瓶，冷至常温备用。
沙门氏菌检验国标检验步骤及接种方式
沙门氏菌检验国标检验步骤及接种方式沙门氏菌是一种常见的细菌引起的食源性疾病，可能会导致严重的胃肠道感染。
为了保障食品安全，确保公众的健康，我们需要进行沙门氏菌的国标检验。
下面是一份生动、全面且有指导意义的文章，详细介绍了沙门氏菌检验的国标检验步骤和接种方式。
第一步：样品准备在进行沙门氏菌检验之前，我们首先需要准备样品。
常见的样品包括食品、水、动物排泄物等，可能携带沙门氏菌。
样品应该收集自具有代表性的地点，并采取无菌采样容器进行收集。
收集样品时要注意避免污染，并确保样品的数量足够进行检验。
第二步：样品处理样品处理的目的是将潜在的沙门氏菌分离出来，并进行后续的检测。
可以采用不同的方法进行样品处理，常见的方法包括富集培养和选择性培养。
富集培养是将样品放入富集培养基中，利用培养基中的营养物质以及特定条件促使沙门氏菌生长。
选择性培养则是利用培养基中的特殊抑制剂抑制其他细菌的生长，从而使沙门氏菌生长出来。
第三步：菌落鉴定在样品处理后，我们需要对培养基上的菌落进行鉴定，确认是否为沙门氏菌。
常见的鉴定方法包括形态学鉴定、生理生化鉴定和分子生物学鉴定。
形态学鉴定主要通过观察菌落的形状、颜色和大小等特征来判断细菌的种类。
生理生化鉴定则是通过检测菌落对特定物质的代谢情况来确定细菌的种类。
分子生物学鉴定是利用特定的DNA序列来识别沙门氏菌的基因，通常使用PCR技术进行检测。
第四步：抗菌药敏试验沙门氏菌的抗菌药敏性检测是为了确定对何种抗生素具有敏感性。
通过抗菌药敏试验，我们可以选择合适的药物来治疗感染。
可以使用各种常见的抗生素盘进行试验，然后观察沙门氏菌对不同抗生素的反应。
根据抗生素的抑菌效果，可确定沙门氏菌的耐药性情况。
第五步：结果分析与报告最后一步是对检验结果进行分析，并撰写检验报告。
检验结果要结合国家标准进行评估，确定样品是否合格。
如果样品中检测到沙门氏菌，还需要评估其数量以及对公众健康可能造成的风险。
在撰写报告时，需要详细记录样品的来源、处理方法、检验步骤和结果，以及相应的建议和措施。
沙门氏菌检验标准操作规程
沙门氏菌检验标准操作规程1目的purpose规范888物料、产品的沙门氏菌检验操作，确保检验结果的可靠性。
2范围scope适用于888物料、产品的沙门氏菌检验工作。
3责任responsibility微生物检验员严格执行本规程，品质部负责人监督执行。
4程序procedure4.1定义和原理沙门氏菌广为存有于动物的肠道和内脏，以及被粪便污染的水和土壤中，就是细菌性食物中毒的主要病因。
本方法利用沙门氏菌呈圆形辛酸酯酶阳性，而氧化酶和脂肪酶均呈圆形阴性的特性，对物料、产品展开沙门氏菌检验。
4.2材料和设备4.2.1紫外灯：波长366nm，功率不小于6w。
4.2.2放大镜：3至4倍。
4.2.3毛细滴管。
4.2.4lx-b35l压力蒸汽杀菌锅。
4.2.5无菌的培养皿。
4.2.6无菌的注射环路。
4.3培养基和试剂4.3.1scdlp液体培养基：按《化妆品卫生规范》（2021版）或使用商品培养基干粉配制。
4.3.2四硫磺酸钠煌蓝（ttb）减菌液：按gb4789.4—2021第三章a.5酿制或采用商品试剂。
4.3.3ss琼脂培养基（含1%蔗糖）：牛肉浸膏(或牛肉粉)5.0g，蛋白胨5.0g，乳糖10.0g，蔗糖10.0g，胆盐no.38.5g，柠檬酸钠8.5g，硫代硫酸钠1.0g，柠檬酸铁1.0g，煌绿1.0g，中性红0.025g，琼脂13.5g，蒸馏水1000ml。
4.3.4he琼脂培养基：按gb4789.4—2021第三章a.5或采用商品培养基干粉酿制。
4.3.5玉米油维多利亚蓝琼脂培养基：灭菌后的基础培养基冷却至50℃左右，边摇边加入玉米油乳化液。
倾注平皿，制成平板。
基础培养基及玉米油乳化液配方如下：a）基础培养基：蛋白胨5g，酵母浸粉3g，氯化钠5g，琼脂13g，水900ml，ph7.8-8.0。
将各成分重新加入水中，冷却熔化。
调节ph7.8-8.0，116℃15min高压杀菌。
b）玉米油乳化液：玉米油100ml，0.1%维多利亚蓝水溶液100ml，0.5%琼脂溶液80ml，吐温801ml。
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1目的P URPOSE
规范888物料、产品的沙门氏菌检验操作，确保检验结果的可靠性。
2范围SCOPE
适用于888物料、产品的沙门氏菌检验工作。
3责任RESPONSIBILITY
微生物检验员严格执行本规程，品质部负责人监督执行。
4程序PROCEDURE
定义和原理
沙门氏菌广泛存在于动物的肠道和内脏，以及被粪便污染的水和土壤中，是细菌性食物中毒的主要病因。
本方法利用沙门氏菌呈辛酸酯酶阳性，而氧化酶和脂肪酶均呈阴性的特性，对物料、产品进行沙门氏菌检验。
材料和设备
紫外灯：波长366nm，功率不小于6W。
放大镜：3至4倍。
毛细滴管。
LX-B35L压力蒸汽灭菌锅。
无菌的培养皿。
无菌的接种环。
培养基和试剂
SCDLP液体培养基：按《化妆品卫生规范》（2007版）或使用商品培养基干粉配制。
四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液：按—2010附录配制或使用商品试剂。
SS琼脂培养基（含1%蔗糖）：牛肉浸膏(或牛肉粉)，蛋白胨，乳糖，蔗糖，胆盐，柠檬酸钠，硫代硫酸钠，柠檬酸铁，煌绿，中性红，琼脂，蒸馏水1000mL。
HE琼脂培养基：按—2010附录或使用商品培养基干粉配制。
玉米油维多利亚蓝琼脂培养基：灭菌后的基础培养基冷却至50℃左右，边摇边加入玉米油乳化液。
倾注平皿，制成平板。
基础培养基及玉米油乳化液配方如下：
a）基础培养基：蛋白胨5g，酵母浸粉3g，氯化钠5g，琼脂13g，水900mL，。
将
各成分加入水中，加热溶解。
调节，116℃15min高压灭菌。
b）玉米油乳化液：玉米油100mL，%维多利亚蓝水溶液100mL，%琼脂溶液80mL，
吐温801mL。
玉米油加维多利亚蓝水溶液混合，边振动边在沸水中加热溶化。
然后，
放入分液漏斗中，弃去蓝色水部分，再将着色的脂肪用水洗1-2次。
将着色脂肪20mL
加入810mL琼脂溶液中，再加1mL吐温80，116℃15min高压灭菌。
冷却后用超声
波乳化。
MUCAP试剂：取MUCAP 100mg，加纤维溶解剂溶解，再加Triton X-100 ，贮存于4℃冰箱。
使用时用的L醋酸盐缓冲液稀释10倍。
氧化酶试纸：将甲液与乙液等量混合。
取定性滤纸，浸透混合液后，于70-80℃烘箱烘干，剪成大小适当的纸条，密封于塑料袋或瓶中，贮存于4℃冰箱备用。
甲液：1% α-萘酚乙醇液；乙液：1% 二甲基对苯二胺草酸盐水溶液。
检验步骤
增菌和前增菌
取样品按SOP-QM-B017制备1：10稀释的检液。
取10mL加到90mLSCDLP液体培养基
中，置培养箱36℃±1℃培养18h～24h。
移取10mL，转接种于100mL四硫酸钠煌绿
（TTB）增菌液内，42℃±1℃培养18h～24h。
分离培养
分别用接种环取增菌液1 环，划线接种于一个SS 琼脂平板（含1%蔗糖）和一个HE琼脂平板。
SS琼脂平板于36 ℃±1 ℃培养24～30h，HE平板于36 ℃±1 ℃
培养40～48h。
沙门氏菌菌落特征：
a）在SS 琼脂平板上：无色半透明，菌落中心带黑色的菌落；或者菌落为粉红
色，中心带黑色，但有时不明显。
b）在HE平板上：无色半透明，菌落中心带黑色或几乎全黑色；或者菌落呈粉
红色，中心带黑色。
试验
从培养的分离培养基或显色培养基上挑选疑似沙门氏菌的菌落，尽量选较大、分离较好的单个菌落，用中性笔做好标记并编号。
用毛细滴管吸取MUCAP试剂，加一滴于编号的菌落上(覆盖整个菌落)。
将一个平板的被检可疑菌落全部都滴加试剂后，将平板置于366nm紫外灯下检视10至15
分钟。
发蓝色荧光的为MUCAP试验阳性，将阳性菌落编号记录下来。
氧化酶试验
用接种环挑取MUCAP阳性菌落，涂于氧化酶试纸上，观察涂菌点是否变蓝色。
在10min内变蓝色为氧化酶试验阳性，不变色为阴性。
脂肪酶试验
将SS琼脂或HE琼脂上，MUCAP阳性且氧化酶试验阴性的菌落，用接种环挑取划
线接种至玉米油维多利亚蓝琼脂培养基平板于36 ℃±1 ℃培养40～48h。
观察长出的菌落，脂肪酶阳性菌菌落呈蓝色；阴性菌菌落则呈无色或粉红色。
（注：氧化酶试验和脂肪酶试验顺序可以交换，或同时进行。
）
记录和检验结果报告
在检验原始记录上详细记录观察结果。
菌落的MUCAP试验阳性，且氧化酶试验与脂肪酶试验均为阴性，判定为沙门氏菌，报告沙门氏菌阳性。
其它情况均报告阴性。
检验出阳性结果的培养基平板要保存至少1个月。