支气管肺泡灌洗及灌洗液的细胞计数分类技术规范
支气管肺泡灌洗技术及其临床应用
支气管肺泡灌洗技术及其临床应用支气管肺泡灌洗（bronchoalveolar lavage, BAL）是经纤维支气管镜获取下呼吸道主要是肺泡来源的细胞与生化成分，分析探讨肺脏疾病病理学过程的一种比较安全而实用的技术。
BAL 不同于以获取大气道来源的样本进行病原学和肿瘤细胞学检查而采用少量液体（10～30 ml）进行的支气管冲洗，也不同于治疗性灌洗，如采用少量液体进行的支气管冲洗，以移出支气管哮喘、支气管扩张等患者气道内的黏稠分泌物采用大量液体（10～30 L）进行的全肺灌洗技术，以治疗肺泡蛋白沉积症。
自从20世纪70年代开始应用BAL研究肺脏疾病局部的免疫反应和炎症机制以来，无论是BAL的操作技术，还是支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid, BALF）的检测手段、检测项目及其应用范围都有了长足的进步。
许多国家的医学团体包括我国还先后制定并发表了指南性意见，规范了BAL的技术操作及BALF实验室处理过程，使其结果更加标准可靠，从而进一步促进了BAL 的发展和应用，使其作为研究肺脏疾病的一种检查手段得到了广泛的认可。
最新发布的关于结节病和特发性肺纤维化（idiopathic pulmonary fibrosis, IPF）的诊断和治疗的国际性联合声明也将BAL推荐为常规诊断手段。
第一节支气管肺泡灌洗的应用指征因为相对无创，没有明显的并发症，病人容易耐受，所以BAL 目前已经成为肺活检的替代或补充手段，用于各种原因引起的弥漫性实质性肺疾病的临床诊断、疗效判断、预后的评价以及病理和发病机制的研究。
临床上，BAL 检查主要用于感染性原因、非感染性原因、免疫性原因和肿瘤性原因引起的弥漫性实质性肺疾病（diffuse parenchyma lung disease, DPLD）在 DPLD 的诊断过程中，BAL 结果对于提示或除外某些疾病，缩小鉴别诊断范围确实具有非常重要的意义。
支气管肺泡灌洗(BAL)的临床应用与实验室检查
支气管肺泡灌洗(BAL)的临床应用与实验室检查一．定义：支气管肺泡灌洗（bronchoalveolar lavage,BAL）是一种经纤维支气管镜获取肺泡的细胞与生化成份的广为实用而安全的方法。
注意: BAL的操作规范BAL灌洗液的处理规范BAL的非细胞成份指标尚不能作为有用的临床参考二．用途：●疾病诊断：特异性诊断；重要诊断工具。
●疗效与预后评价●治疗●研究➢对于某些特殊疾病，BAL可以做出特异性的诊断●机会性肺部感染：卡氏肺囊虫性肺炎，巨细胞病毒性肺炎，肺结核，肺真菌感染●尘肺，石棉肺，肺出血●铍肺（阳性淋巴细胞转换试验）●支气管肺泡细胞癌，恶性淋巴瘤等（肿瘤细胞）●肺泡蛋白沉着症（对氨基水扬酸－阳性小体）●组织细胞增多症 X (Histiocytosis X)➢对于一些间质性肺病，BAL是重要诊断手段结节病，外源性过敏性肺泡炎，闭塞性细支气管炎伴机化性肺炎（BOOP），特发性肺纤维化(IPF)，慢性嗜酸细胞肺炎等。
三．应用指征1.间质性渗出改变：结节病，外源性过敏性肺泡炎，药物性肺泡炎，特发性肺纤维化，胶原血管疾病，组织细胞增多症 X，尘肺，癌性淋巴管炎等。
2.肺泡渗出改变：肺炎，肺泡出血，肺泡蛋白沉着症，BOOP，嗜酸细胞肺炎等3.免疫缺陷病人并肺渗出病变：HIV感染，化疗或放疗，免疫抑制剂治疗，器官移植四．BAL副反应：发生率为0-2.3%，当同时进行经支气管镜肺活检(TBLB)，副反应为7%，尚无因 BAL死亡报道，因TBLB死亡0.2%，因开肺活检(OLB)死亡1.8%。
1.副反应发生形式与时间2.副反应的预防：副反应随着灌注量及灌注肺段的增加而增加，仔细操作，特别注意能使并发症减少到最小程度。
●全面了解病史，进行肺功能试验，血气分析，血小板计数，出凝血时间，心电图，胸部放射片●ECG，氧饱和度监测并予吸氧●BAL后24小时观察●限制灌洗量到最小需要量●适当的操作前用药，必要时使用ß-受体激动剂等●特殊病人严格掌握适应征3.BAL时副反应发生的危险因素●>50%的肺野渗出实变PaO2<60mmHg●SaO2<90%，支气管反应性PC20<2ug/ml乙酰甲胆碱●FEV1<60%预计值，或FEV1<1L Prothrombin time<50%●血小板计数低于20,000/ml 明显异常的ECG●对镇静剂敏感或不能耐受严重的伴发症PC20：FEV1降低20%所需的最低乙酰甲胆碱浓度五．ＢＡＬ操作绝大多数在局麻下使用纤维支气管镜进行。
支气管肺泡灌洗液细胞形态学检验
二、标本采集与接收
（二）标本接收
标本送达检验科后,由工作人员在Iis系统扫码登记接收,对标 识不明、采集量不足等不合格的标本,执行标本拒收程序。接 收标本后应及时检验,室温可保存4h,分析后的标本保存24h,不 建议将标本保存24h后再应用于检测分析。
对于部分不合格标本,可执行让步接收与让步检验,与临床进 行沟通,并在报告单中备注,说明标本状况对检验结果的影响。
制作涂片4~6张。
三、检验程序
（六）仪器法制片
采用细胞离心机( Cytospin)甩片,按仪器操作说明书规范操作。 应用此方法制片,细胞分布均匀,结构清晰,利于形态辨识,可提 高病变成分检出率。若标本有核细胞数显著增高时,使用生理 盐水适当稀释标本,将悬液有核细胞数稀释至(100~200)× 106/L为宜,有的标本稀释可达10~200倍。
四、报告
（五）涂片保存
发出报告后,对涂片进行分类归档,妥善保管,保存时限按各实 验室标准操作规程进行处置,一般保存3~5年。
四、报告
（六）生物参考区间
有核细胞数(90~260)× 106/L,肺泡巨噬细胞85%~96%,淋巴细 胞6%~15%,中性粒细胞≤3%,嗜酸粒细胞<1%,鳞状上皮细胞/ 纤毛柱状上皮细胞≤5%。
要>30%。 ➢ ②不可混入血液,红细胞应<10%,上皮细胞应<5%。 ➢ ③多部位灌洗时,注明灌洗部位;注明灌洗液或冲洗液;较多时
弃去第1管。 ➢ ④儿童BALF标本采集应严格按相应标准要求施行。
二、标本采集与接收
（一）标本采集
根据检测目的分装于不同的无菌试管或洁净试管中。用于病 原学分析的标本需用无菌容器收集。常规细胞学分析需选择 硅化的塑料容器或玻璃容器以减少细胞的黏附,采集标本量成 人应不少于l0ml,儿童应不少于3ml。如考虑为大气道疾病时, 建议第1管吸回收液单独处理;非大气道疾病时,可将所有标本 混合后送检。标本采集结束后,贴好标本信息标签,室温2h内 送检。
支气管肺泡灌洗术操作规范
支气管肺泡灌洗术操作规范一、概述支气管肺泡灌洗术（bronchoavleolar lavage）通过纤维支气管镜对支气管以下肺段或亚肺段水平，反复以无菌生理盐水灌洗、回收，对其进行一系列检测和分析，从而获得下呼吸道病变的性质特点和活动程度，有助于确立诊断。
二、适应症（一）肺部感染，特别是免疫受损、免疫缺陷肺部感染的病原学诊断（二）弥漫型和周围型肺部肿瘤的细胞学诊断（三）间质性肺疾病，如结节病、特发性肺间质纤维化、外源性变应性肺泡炎、肺泡蛋白沉着症、胶原血管伴肺纤维化等的诊断、治疗、疗效和预后估计。
（四）以纤维支气管镜对支气管以下肺段或亚肺段水平，反复以无菌生理盐水灌洗、回收的一项技术，对其回收液进行细胞学、生化学、酶学和免疫学等一系列检测和分析。
1.全肺灌洗：用于肺泡蛋白沉着症、矽肺、肺泡微石症、哮喘持续状态等的治疗。
2.肺段灌洗：主要用于弥漫性间质性肺纤维化、石棉肺和卡氏肺囊虫肺炎的诊断，对弥漫性肺泡癌的诊断，也有重要价值。
三、用物用品准备（一）纤维支气管镜，冷光源，低负压吸引器（≤1（三）3kPa），硅质灌洗液收集瓶，50ml注射器，高频通气机）。
（二）盐酸利多卡因20-40ml，盐酸肾上腺素1mg，0.9%NS 500mL一瓶，0.9%NS250mL一瓶。
常规备用盐酸胺碘酮，西地兰，呋塞米，肾上腺素，甲强龙等抢救药品，简易呼吸气囊，储雾罐，心电监护等物品。
（三）交代病情，签气管镜检查同意书。
四、方法和步骤（一）灌洗部位选择:对弥漫性间质性肺疾病选择右肺中叶（B1 或B5 ）或左肺舌段,局限性肺病变则在相应支气管肺段进行BAL。
（二）BAL 操作步骤:1.首先在要灌洗的肺段经活检孔通过一细硅胶管注2 %利多卡因1～2ml ，做灌洗肺段局部麻醉。
2.然后将纤支镜顶端紧密楔入段或亚段支气管开口处,再经活检孔通过硅胶管快速注入37 ℃灭菌生理盐水，每次25～50ml ,总量100～250ml ,一般不超过300ml 。
支气管肺泡灌洗术及注意事项
支气管肺泡灌洗术及注意事项灌洗后7大并发症，防治措施这样做！支气管肺泡灌洗术在间质性肺疾病辨别、GM试验中都起到很大的作用。
而支气管肺泡灌洗术如何正确操作，操作中有哪些注意事项？小界邀请云南省第一人民医院呼吸科孙丹雄医生带来《支气管肺泡灌洗术及注意事项》。
一、操作方法首先一起来看看操作方法：术前准备：•局部麻醉剂为2%利多卡因，尽量减少咳嗽，准备生理盐水、注射器、手套、石蜡油（必要时使用，减少支气管镜损伤）灌洗部位：•病变局限者选择病变段（特别是出现新的或进展性的浸润性病变的叶段）。
•对于肺外周病变，有条件的单位可考虑采用径向超声支气管镜技术进行更准确的定位。
•对于未确诊的间质性肺疾病患者，在接受BAL操作前需要通过HRCT来决定BAL的具体部位，一般推荐在呈观磨玻璃影、大量结节或细网格影的部位进行操作。
•弥漫性病变者选择右肺中叶或左上叶舌段图弥漫性病变者灌洗部位选择局部麻醉：•在灌洗的肺段经活检孔注入2％利多卡因1ml～2ml，行灌洗肺段局部麻醉。
静脉复合麻醉的患者如仍有强烈的气道反应，同样可以注入2％利多卡因1ml～2ml。
•麻醉要充分，咳嗽反射必须得到充分抑制，防止因剧烈咳嗽引起的支气管黏膜损伤出血，影响BALF的回吸收量和检测结果（血液会导致GM试验假阳性）。
图支气管镜方向注入生理盐水：•支气管镜顶端嵌顿在目标支气管段或亚段开口后（嵌顿要紧密，防止大气道分泌物混入或灌洗液外溢），经操作孔道快速注入37℃或室温灭菌生理盐水，总量60ml～120ml，分次注入（每次20ml～50ml）负压吸引：•注入生理盐水后，立即用合适的负压吸引获取BALF，总回收率≥30％为宜。
注意负压不宜过大，以吸引时支气管腔不塌陷为宜。
灌洗液收集：•用于病原学分析的标本需要无菌容器收集；送检量10ml～20ml （≥5ml）；•细胞学分析需选择硅化的塑料容器或玻璃容器以减少细胞的黏附；•如考虑为大气道疾病时，建议第一管回吸收液单独处理；•非大气道疾病时，可将所有标本混合后分送。
支气管镜肺泡灌洗液(BALF)采集技术规范
支气管镜-肺泡灌洗液(BALF)采集技术规范患者咽喉局部麻醉后，导入纤维支气管镜。
通过纤维支气管镜对病灶所在支气管以下肺段或亚肺段水平，用37。
C或室温无菌生理盐水多次灌洗，每次注入20~60πιl(常规进行4~5次)，直到总共灌洗100~300ml,并充分吸引回收，从回收液中取出IOml标本，放入无菌管中，旋紧盖子，即刻送达实验室的技术。
【适应证】1.对于疑似肺炎患者，若有机会进行气管镜检查，则可同时采集肺泡灌洗液进行培养。
2.不能进行深部咳痰的患者，也可考虑通过气管镜获取标本。
【禁忌证】不能耐受支气管镜检查者。
【目的】采集肺泡灌洗液进行检测，可减少口咽部菌群的污染，提高检测结果的准确性。
【制度与依据】1.本规范理论部分主要依据：中华预防医学会医院感染控制分会发表于2018年第28卷第20期中华医院感染学杂志的《临床微生物标本采集和送检指南》。
感染性疾病的正确诊治需要以正确的病原学检测作为指导，而正确的病原学检测其前提是采集和送检合格标本。
因此，必须规范微生物标本的采集和运送，避免因标本的不合格，产生错误的病原学检测结果而误导临床治疗。
2.本规范操作部分主要依据：中华人民共和国国家卫生健康委员会2018年12月11日发布，2019年6月1日实施的《临床微生物学检验标本的采集和转运》，是中华人民共和国卫生行业标准，WS/T640—2018o本标准是按照GB/TL1—2009给出的规则起草；起草单位：北京大学人民医院、中日友好医院、安徽省立医院、首都医科大学附属北京友谊医院、北京医院、北京市垂杨柳医院；主要起草人：王辉、刘颖梅、张正、马筱玲、苏建荣、胡云建、宁永忠、王晓娟。
【准备】1.用物准备：医嘱单、痰液标本化验单或标本条形码、负压吸引装置1套、痰液收集器1个、生理盐水500ml、50ml注射器1个，无菌纱布2块，无菌手套、手消液，检查用物的有效期，物品处于备用状态。
2.环境准备：病室安静整洁，光线充足，适宜操作，关闭门窗（或窗帘），请无关人员回避，保护患者隐私。
改良支气管肺泡灌洗液细胞分类计数制片及染色法
改良支气管肺泡灌洗液细胞分类计数制片及染色法徐佳;黄媛;吴卫;董玉香;崔京涛;崔巍【摘要】目的改良支气管肺泡灌洗液细胞分类制片及染色方法,并对其临床实用性进行验证.方法随机抽取50例门诊及住院患者肺泡灌洗液标本,分别用改良的自动化瑞氏吉姆萨染色法及传统手工HE染色法染色,由两名具有专业技术能力的检验人员分别进行显微镜下细胞分类计数,评估两种制片方法检测结果的可比性.结果两种方法对肺泡灌洗液中吞噬细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和嗜酸性粒细胞计数一致性较好,相关系数(r)均＞0.95.改良法染色的细胞形态完整,细胞核和细胞浆分辨清楚,可见颗粒、空泡等细微结构;而传统法染色后的细胞固缩明显,细胞体积变小,细胞核和细胞浆分辨清晰度下降,颗粒和空泡等细胞结构辨认不清.改良法比传统法省去了滤液离心富集细胞的过程(6 min),并且使用自动化瑞氏吉姆萨染色法(20 min)代替了手工HE染色法(30 min),每份标本至少节省了15～20 min的制片和染色时间.结论改良的自动化瑞氏吉姆萨染色法优于手工HE染色法,更适用于支气管肺泡灌洗液细胞分类计数,尤其是批量检测.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2014(032)002【总页数】4页(P98-101)【关键词】支气管肺泡灌洗液;细胞分类计数;瑞氏吉姆萨染色;HE染色【作者】徐佳;黄媛;吴卫;董玉香;崔京涛;崔巍【作者单位】北京协和医院检验科,北京100730;北京协和医院检验科,北京100730;北京协和医院检验科,北京100730;北京协和医院检验科,北京100730;北京协和医院检验科,北京100730;北京协和医院检验科,北京100730【正文语种】中文【中图分类】R446支气管肺泡灌洗(bronchoalveolar lavage，BAL)技术是一种通过纤维支气管镜对支气管以下肺段或亚肺段以无菌生理盐水反复灌洗、回收、获取样本，并进行检查与分析的技术[1]。
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“凡大医者，必当安神定志，无欲无求，先发大慈恻隐之心，誓愿普救含灵之苦”
-----孙思邈
以下为本文具体内容：
支气管肺泡灌洗液细胞分类
一概述支气管肺泡灌洗术（BAL）是应用纤维支气管镜进行支气管肺泡灌洗，采取肺泡表面衬液进行炎症与免疫细胞及可溶性物质检查的方法，是一项较新的肺部疾病检查方法。
一般需要行纤维支气管镜检查时采集支气管肺泡灌洗液（BALF）标本。
经过单层纱布过滤，再经过800r/min离心10min后，上清液用于化学和免疫学检查，沉淀物用于显微镜检查。
BALF细胞学检查包括细胞计数和细胞分类，计数除上皮细胞及红细胞以外的所有细胞，经每毫升回收液的细胞总数表示，细胞分类可用沉淀物制定涂片或用细胞离心器进行。
二临床意义支气管肺泡灌洗液检查主要用于肺部感染的病原学诊断、恶性肿瘤检查和对间质性肺疾病的诊断、疗效评价和预后评估等。
1.有核细胞计数和分类计数
中性粒细胞增多见于细菌感染；淋巴细胞增多见于病毒性感染等；嗜酸粒细胞增多见于支气管哮喘、嗜酸粒细胞增高性肺炎等。
2.淋巴细胞亚群分析
BALF中淋巴细胞增多，可用单克隆抗体进行淋巴细胞亚群分析。
例如CD3、CD4、CD8、HLA-DR等以有助于发病机制的研究。
3.癌细胞
检查出癌细胞有利于肺部肿瘤的诊断。
诊断呼吸道原发性或继发性恶性肿瘤有较好效果，也包括周围性肺癌、弥漫性肺恶性肿瘤（如支气管肺泡癌）、小细胞肺癌等。
但BALF 检查结果受癌类型和肿瘤大小的影响，以腺癌和肺泡癌阳性率最高。
三正常值参考范围吞噬细胞：95±2.9%；中性多核细胞：＜1.0%；淋巴细胞：0.7%～。