蛋白表达及纯化
蛋白质的表达纯化
完全紧贴。）正常安装则会形成一个密闭的容
器。
蛋白质的表达纯化
5.将底座的开关打开， 并向外拨动透明的架子， 使中间空隙增大，放入 电极架。
6.如图所示将电极架往下 压（约1~2mm），使底面 完全接触。
蛋白质的表达纯化
7.关上底座开关。
8.放入电泳槽内，加上加样 架加样。注意加样架与刚才 制胶所用的梳子齿数必须一 致。
• 3. 细胞裂解液3mL以10-15mL/h 流速上Ni2+-NTA柱，收集流 出液。
• 4.洗脱杂蛋白：用50mL洗涤缓冲液UWB以10-15mL/h流速洗柱， 分别取10ul洗涤开始与结束时的样品用于SDS-PAGE 分析。
• 5.洗脱目标蛋白：用10mL洗脱缓冲液洗柱，每管0.5－1 mL， 共收集6－10管，分别取1蛋0白u质l样的表品达纯用化于SDS-PAGE 分析。
蛋白质的表达纯化
实验步骤
• 一、氯霉素酰基转移酶重组蛋白的诱导 • 1. 接种含有重组氯霉素酰基转移酶蛋白的大肠杆菌
BL21菌株于5mL LB液体培养基中 （含100ug/mL 氨苄 青霉素），37℃震荡培养过夜。 • 2. 转接1mL过夜培养物于100mL（含100ug/mL 氨苄青霉 素）LB液体培养基中，37℃震荡培养至OD600 = 0.6 0.8。取10ul 样品用于SDS-PAGE 分析。 • 3. 加入IPTG至终浓度0.5 mmol/l, 37℃继续培养1-3h. • 4. 12，000rpm 离心10 min, 弃上清，菌体沉淀保存于20℃或-70℃冰箱中。
蛋白质的表达纯化
• 3．制浓缩胶：按所需的浓度配制4%的浓缩胶，配
方如下：
30%Arc- Tris-HCl H2O
Bis
蛋白表达纯化的实验原理
蛋白表达纯化的实验原理蛋白表达与纯化是生物学实验中常用的技术，可以用来研究和生产各种蛋白质。
本文将一步一步回答关于蛋白表达纯化实验的原理和步骤。
第一步：蛋白表达系统的选择蛋白表达系统是指用来制备和表达目标蛋白质的细胞或病毒载体。
常用的表达系统包括细菌、酵母、昆虫和哺乳动物细胞等。
选择表达系统时需要考虑目标蛋白的性质、需求量和表达效率等因素。
第二步：构建表达载体表达载体是将目标蛋白的基因序列插入到细胞或病毒载体中，以实现蛋白表达的工具。
通常采用的方法是将目标基因通过限制性内切酶切割，然后与适当的载体连接。
第三步：细胞转染或感染将构建好的表达载体转染到细胞中，使目标蛋白基因在细胞内进行表达。
对于真核细胞（如哺乳动物细胞）可以通过转染的方式传递质粒DNA，而对于原核细胞（如大肠杆菌）可以通过热激转化或电穿孔等方法进行具体的转染。
第四步：培养表达细胞转染或感染后，需要将细胞培养到合适的条件下，以促进目标蛋白表达。
培养条件包括适宜的培养基、温度、氧气供应和营养物等。
此外，可以考虑添加特定的诱导剂或抑制剂，以调控蛋白表达的级别。
对于细菌目标蛋白表达，通常将细胞培养在含有抗生素的培养基上以选择表达带有目标基因的细菌。
第五步：蛋白表达检测为了确定目标蛋白是否在细胞中表达，可以使用多种方法进行检测。
常用的方法包括Western blot、ELISA、原位杂交、荧光染色等。
同时，可以通过调整培养条件或表达载体的构建来提高蛋白表达的水平。
第六步：蛋白纯化蛋白纯化是从表达系统中提取和纯化目标蛋白的过程。
纯化步骤的选择取决于目标蛋白的性质和所需的纯度。
常见的纯化方法包括亲和纯化、凝胶过滤、离子交换、大小排除层析、亲水性层析等。
此外，还可以使用亲和标签（如His标签、GST标签等）来辅助蛋白质的纯化。
第七步：蛋白质的鉴定和定量通过蛋白纯化后，需要对目标蛋白进行鉴定和定量。
可以使用SDS-PAGE、Western blot、质谱分析等方法来确定蛋白质的分子量和纯度。
蛋白表达纯化流程
第一章蛋白表达纯化一、诱导表达分析1) 把测序正确的表达质粒转化到合适的表达宿主菌中并涂布在相应抗性的LB 平板上培养过夜;2) 分别挑两个单克隆于3ml含抗生素的LB培养基中培养过夜;3) 按1%接种过夜培养的菌液于4ml含抗生素LB培养基中37度培养2-3小时;4) 加入终浓度为0.1mM的IPTG诱导表达3个小时左右，取样做蛋白电泳分析目标蛋白的表达情况。
二、蛋白纯化2.1重组蛋白的提取2.1.1 提取缓冲液20 mM Tris-HCl (pH8.0) 或者其他推荐使用的缓冲体系。
如需溶解难溶蛋白或者包涵体还可加入8 M urea 或 6 M guanidine hydrochloride 。
Note: 处理(His)6融合蛋白时可以加入5–50 mM imidazole 以减少上柱时的非特异性吸附。
2.1.2 方法1)发酵液离心收集菌体(at 7 000–8 000 g for 10 minutes or 1 000–1 500 g for 30minutes at +4 °C)。
2)弃去上清液，加入适当的20 mM Tris-HCl (pH8.0)，重悬；3)离心收集菌体同上，弃去上清液，将装有菌体的离心管置于冰中。
4)每ml菌体加入50ul冰冷的提取缓冲液重悬菌体。
5)冰浴中超声裂解菌体(超声2秒，停止6秒)，之后取样进行SDS-PAGE电泳分析。
Note:超声破菌应尽量使用最短的时间，长时间的进行可能会破坏蛋白功能。
还应避免产生泡沫，因为这样会使蛋白变性和导致宿主蛋白与融合蛋白协同纯化。
6)离心使细胞碎片沉降(at 12 000 g for 10 minutes at +4 °C)。
7)小心将上清液移到干净的容器中，并取样进行SDS-PAGE电泳分析。
Note:含有8 M urea的样品可以直接电泳上样，但含有6 M guanidine hydrochloride的样品必须换成8 M urea才可上样。
重组蛋白质的表达纯化和结构鉴定
重组蛋白质的表达纯化和结构鉴定在生物医学领域中，重组蛋白质凭借其广泛的应用前景成为了研究热点。
然而，要想获得高纯度的重组蛋白质，并对其结构进行准确的鉴定，需要经历一系列复杂而细致的实验步骤。
本文将从表达、纯化和结构鉴定三个方面介绍重组蛋白质的研究过程。
一、表达重组蛋白质的表达是研究重组蛋白质最初的关键步骤之一。
通常采用大肠杆菌（Escherichia coli）作为表达宿主。
首先，需要将目标基因克隆至表达载体中，确保其与启动子、转录因子等相互配合，并携带一定的标签，如His 标签、GST 标签等。
接着，将修饰好的表达载体转化至大肠杆菌中，采用选择性培养基筛选出目标菌株。
最后，将筛选得到的菌株进行大规模培养，促使目标基因在细胞内表达。
二、纯化获得表达目标蛋白的菌株后，需要将蛋白从细胞中纯化出来。
首先，采用超声波或高压颠破细胞壁，释放出蛋白质。
接着，通过离心等手段将蛋白质与其他细胞组分分离。
此时，可以利用目标蛋白质特异性的亲和层析柱，如镍柱、葡聚糖柱等，吸附目标蛋白质，并通过逆向洗脱等方法，得到高纯度的目标蛋白质。
三、结构鉴定获得纯度较高的重组蛋白质后，需要对其结构进行进一步的鉴定。
常用的结构鉴定方法包括X射线晶体学、核磁共振（NMR）、电子显微镜等。
X射线晶体学是目前应用最广泛的方法，通过将蛋白质结晶并进行X射线衍射实验，得到蛋白质的高分辨率结构。
NMR则通过测量蛋白质中核自旋的相对位置和相互作用关系，获取蛋白质的三维结构信息。
电子显微镜是一种能够获得蛋白质高分辨率结构的技术，主要应用于研究大分子复合物和纤维形态的蛋白质。
除了上述常用技术外，近年来还涌现出一些新的结构鉴定方法，如质谱联用技术、光学显微镜成像、负染电镜等。
这些方法的出现，为蛋白质结构鉴定提供了更多的选择和便利。
由于篇幅所限，本文仅对重组蛋白质的表达、纯化和结构鉴定进行了简要介绍。
事实上，研究重组蛋白质的过程还包括目标基因的设计与合成、蛋白质的功能分析等环节。
蛋白质表达纯化概述
昆虫表达系统的优缺点
• 1，组蛋白具有完整的生物学功能，如蛋白的正确 折叠、二硫键的搭配
•
2，蛋白翻译后的加工修饰；
•
3，表达水平高，可达总蛋白量的50%；
•
4，可容纳大分子的插入片段；
•
5，能同时表达多个基因。主要缺点是外源蛋
白表达处于极晚期病毒启动子的调控之下，这时
由于病毒感染，细胞开始死亡。
2.3 采用什么培养基进行表达？LB,TB,SOB,SOC等等。 2.4 客户是否有Protocol、essay等参考文献 • 客户是否指定用某种纯化工艺：亲和层析、排阻层析、反向层析、疏水层析、离子交
换 2.5 表达前是否要做小量实验（预表达/预实验/小试）。是否要做表达条件的优化筛选？
如果有，需要做温度、IPTG浓度、诱导OD、抗生素浓度（不常用）、诱导时间中的哪 些优化筛选。 2.3 蛋白纯度要求、浓度要求（蛋白定量方法:分光光度法、旋光光度法等）、蛋白总量 要求。是否要去热源（又叫内毒素，常用于抗原抗体的制备以及药物的筛选。）是否 要去除RNA，是否要去除核酸，是否要去除DNA。 2.4 蛋白活性要求（如果用于抗体的制备可以不需要活性。） 2.6 蛋白WB检测：常用于真核细胞表达检测。
2.1是否需要蛋白标签 GST（常用，增加蛋白溶解性）、His（最常用，用于易表达纯化， 性质稳定的蛋白）、Strep（有I、II两种!!实验方法不同。）、Flag （Flag是一种抗体， 特异性高，表达量相对较低，常用于昆虫、哺乳动物细胞的表达）等
2.2 如果有标签，是在3‘端还是在5’端（或者是蛋白标签在N端还是C端）。需不需要 酶切位点（用于后续纯化中去除标签）。是否要进行基因突变，突变位点在哪里？
• 昆虫表达系统是一类应用广泛的真核表达系统，它具有同大多数高等 真核生物相似的翻译后修饰加工以及转移外源蛋白的能力。昆虫杆状 病毒表达系统是目前国内外十分推崇的真核表达系统。利用杆状病毒 结构基因中多角体蛋白的强启动子构建的表达载体，可使很多真核目 的基因得到有效甚至高水平的表达。它具有真核表达系统的翻译后加 工功能，如二硫键的形成、糖基化及磷酸化等，使重组蛋白在结构和 功能上更接近天然蛋白；其最高表达量可达昆虫细胞蛋白总量的50%； 可表达非常大的外源性基因(一200kD)；具有在同一个感染昆虫细胞 内同时表达多个外源基因的能力；对脊椎动物是安全的。由于病毒多 角体蛋白在病毒总蛋白中的含量非常高，至今已有很多外源基因在此 蛋白的强大启动子作用下获得高效表达。。常用的杆状病毒包括苜蓿 银纹夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)和家蚕型多角体病毒(BmNPV)，常 用的宿主细胞则来源于草地夜蛾Sf9细胞，用于表达外源基因的质粒 来源于PUC系列，其含有一个多克隆位点和多角体蛋白启动子。
目的蛋白表达与纯化protocol
目的蛋白表达与纯化protocol小量表达测试：1、挑一单克隆到3ml LB（含抗生素）中，370C，220rpm振荡培养10h~12h。
2、保种：700μl菌液+400μl 80%灭菌甘油，充分混匀后置于-800C保存。
3、扩大培养：以1:100接菌，即取50μl菌液到5ml LB（含抗生素）中，370C，220rpm振荡培养2h~3h至OD值达到0.6。
4、对照取样：取1ml菌液，12000rpm离心1min，弃尽上清，-200C保存。
对照5、另取1ml菌液于一新的试管中，加1/1000 IPTG（终浓度为1mM），370C，220rpm振荡培养3h后收菌：12000rpm离心1min，弃尽上清，-200C保存。
370C样品6、其余约3ml菌液于160C，220rpm继续振荡培养1h后，加0.5/1000 IPTG（终浓度为0.5mM），160C，220rpm振荡培养12~24h（通常18h）后收菌：12000rpm 离心1min，弃尽上清，-200C保存。
160C样品7、Bugbuster分别处理上述三个样品，取20μl总蛋白，其余离心后分离上清和沉淀，进行SDS-PAGE电泳鉴定，上样顺序为：对照370C样品160C样品总蛋白上清沉淀总蛋白上清沉淀总蛋白上清沉淀若目的蛋白在上清中有表达，则可以进行大量表达与纯化，具体操作如下。
大量表达：1、挑一单克隆到7.5ml LB（含抗生素）中，370C，220rpm振荡培养10h~12h。
注意：此步用50ml离心管摇菌！2、扩大培养：以1:100接菌，即取将上述7.5ml菌液全部接到750ml TB（含抗生素）中，370C，220rpm振荡培养4h~5h至OD值达到1.0。
3、对照取样：取1ml菌液，12000rpm离心1min，弃尽上清，-200C保存。
（对照）4、其余约菌液于160C，220rpm继续振荡培养1h后，加0.5/1000 IPTG（终浓度为0.5mM），160C，220rpm振荡培养12~24h（通常18h）后收菌：6000rpm、40C离心10min，弃尽上清，取一点沉淀做表达鉴定（160C样品），其余-200C 保存。
基于生物素化技术的蛋白表达和纯化策略研究
基于生物素化技术的蛋白表达和纯化策略研究随着生物技术的高速发展和生物学研究的深入，对于蛋白表达和纯化的需求也越来越大。
其中，生物素化技术作为一种快速、高效、灵敏的标记技术，正受到越来越多的关注和研究。
本文将重点介绍基于生物素化技术的蛋白表达和纯化策略。
第一部分：生物素化技术的基础原理生物素是一种水溶性维生素，广泛存在于细菌、真菌、植物和动物细胞中，是一种重要的共生信号分子。
生物素化技术即利用生物素和生物素结合蛋白(Biotin-binding protein, BBP)之间的高亲和力，并通过干扰生物素与其它蛋白质的结合来标记和纯化感兴趣的蛋白或酶。
生物素化技术还可以分为两种：一种是利用菌体表达S tagging的生物素化技术(Biotin tag)，另一种是利用体外生物素化技术(Biotinylation)。
前者是将生物素连接到蛋白N端或C端附近，后者则是在蛋白N端或C端附近引入一个生物素化底物，随后加入生物素化酶引入生物素，从而实现蛋白标记和纯化。
第二部分：基于生物素化技术的蛋白表达策略1. 菌体表达生物素标记蛋白(Biotin tag)菌体表达生物素标记蛋白(Biotin tag)是基于遗传工程的方法，将BBP结构域融合到目标蛋白的N、C端，在表达和纯化过程中即可利用高亲和力进行标记和纯化。
优点：操作简单、标记和纯化效率高、纯度高。
缺点：蛋白质结构和生物活性可能会受到BBP的融合影响。
2. 利用体外生物素化技术(Biotinylation)表达蛋白利用体外生物素化技术，首先在蛋白的表达载体中引入生物素化底物(Biotin acceptor peptide, BAP)，随后在表达过程中加入生物素化酶，即可引入生物素，实现蛋白的标记和纯化。
优点：BBP与蛋白质结合灵活，不影响蛋白结构和生物活性。
缺点：操作复杂，标记和纯化效率可能会受到底物和酶浓度的影响。
第三部分：基于生物素化技术的蛋白纯化策略基于生物素化技术的蛋白纯化策略包括干扰生物素与其它蛋白质的结合、利用高亲和力纯化带标记蛋白和对标记蛋白进行洗脱的操作步骤。
蛋白表达及纯化PPT课件
萃取法
液-液萃取法
利用两种不混溶的溶剂，将目标蛋白 质从一种溶剂中转移到另一种溶剂中 。
反胶团萃取法
利用反胶团形成的微环境，选择性分 离和纯化蛋白质。
色谱法
凝胶色谱法
利用凝胶介质对不同大小的蛋白质颗粒的分离作用，将目标蛋白质与其他杂质 分离开。
离子交换色谱法
利用离子交换剂对不同带电状态的蛋白质的吸附作用，将其与其他蛋白质分离 开。
亲和层析
利用基因工程改造的蛋白质分 子上的特定标签与固相载体上 的配体结合进行分离纯化。常 用的亲和层析包括His-tag亲 和层析、GST亲和层析等。
离子交换层析和凝胶过滤 层析
与抗体药物的纯化类似，离子 交换层析和凝胶过滤层析也可 用于重组蛋白药物的进一步纯 化和精制。
蛋白质相互作用研究中的纯化应用
02
蛋白纯化方法
沉淀法
盐析法
通过加入高浓度的盐溶 液，改变蛋白质的溶解
度使其沉淀下来。
有机溶剂沉淀法
利用有机溶剂降低蛋白 质溶解度的原理，使其
沉淀。
聚合物沉淀法
利用聚合物与蛋白质的 相互作用，使蛋白质沉
淀。
低温沉淀法
在低温条件下，通过改 变蛋白质的溶解度使其
沉淀。
离心法
差速离心法
通过逐渐增加离心力，将 不同大小的蛋白质颗粒分 离开。
扩展床吸附技术
将大颗粒的介质填充于柱中，使流动相能够通过吸附作用去 除杂质，提高纯化效果。
集成化与自动化技术
集成化分离系统
将多个分离步骤集成在一个系统中， 实现连续的分离纯化，提高生产效率。
自动化控制技术
通过自动化控制系统，实现分离纯化 的全流程监控和自动调节，减少人为 误差和操作时间。
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Protein expression
检测该重组质粒在BL21中是否能被诱导表达，并确定在不同IPTG浓度和时间蛋白诱导 效率的差异。 挑单克隆菌落于7ml含有相应抗生素LB培养液的50ml培养管中，37C振荡培养过夜
（8-16h）。 37C，1mM IPTG终浓度诱导蛋白。取700ul过夜摇菌加入7ml含有相应抗生素LB培
外源基因在原核寄主细胞中表达, 它的编码结构 必须是连续的, 不间断的, 处于寄主启动子有效 控制下。
启动子
可使外源基因高水平表达的最佳启动子必须具备以下几个条件 1 ) 强启动子，外源基因的蛋白质的表达量占细胞总蛋白的10% - 30%以上 2 ) 应能呈现出一种低限的基础转录水平 3 ) 应该是诱导型的, 能通过简单的方式,使用廉价的诱导物得以诱导。 常用的大肠杆菌表达载体启动子：
An introduction to liquid chromatography
Protein solution applied to a column
Column = solid porous matrix (stationary phase) + liquid (mobile phase)
β－半乳糖苷酶基因lacZ 荧光素酶基因 (luciferase )基因、 半乳糖激酶基因(galK ) 氯霉素抗性(乙酰转移酶)基因 (cat ) 四环素抗性基因 (tetr ) Tag-
保护碱基 内切酶1 目的基因 内切酶2 保护碱基
X gene
引物的设计：设计一对特异性 引物。上游、下游引物引入酶 切位点
c: 转录终止子还能增强mRNA分子的稳定性, 大大提高蛋白质产物水平。
d:在构建大肠杆菌表达载体时，通常是添加全部终止密码子 , 阻止核糖体跳跃 (skipping )现象。
e:大肠杆菌格外偏爱使用终止密码子UAA, 当其后连上一个U而形成四联核苷酸 的情况下 , 转译终止效率便会得到进一步加强
转译起始序列
Yeast
Mammalian Insect
Expression System Characteristics
Characteristics
doubling time cost of growth medium expression level protein folding
N-linked glycos.
Fractional precipitation of proteins
Precipitate contaminants
Add Precipitant, Centrifugation
Precipitate protein of interest
Discard pellet
Add Precipitant, Centrifugation, Discard supernatant, Resuspend protein
λ噬菌体的PL启动子 大肠杆菌乳糖操纵子lac启动子 色氨酸操纵子trp启动子 pBR322质粒的beta－内酰胺酶启动子
终止子
a: 如果在克隆基因编码区的3末端之后，接上一个有效的转录终止子，便能够 阻止转录通读过位于下游另一个启动子
b: 如果在启动子的上游部位放置一个有效的转录终止子 , 那么由该启动子驱 动的克隆基因的转录便会被限制在最低本底水平。
养液的50ml离心管中，于OD600＝0.4-0.6（1:100接种，37C培养时，细菌生长至 OD600＝0.4-0.6约需2h）时加入终浓度为1mM的IPTG。 诱导前在37C培养的菌液中取1ml未诱导的对照，按1ml菌液×OD600×100μl的比例 (如1ml OD600为0.4的菌加40ul buffer)加入2×上样缓冲液，混匀，-20℃保存或直接 上样。 根据蛋白分子量大小配置相应浓度的SDS-PAGE胶。（50KD蛋白10％或12％） 诱导3-4h后收集菌液，取1ml样品，测OD600，10000rpm，1min离心去上清后加入 相应体积的2×上样缓冲液，vortex。 将收集的菌液在水中煮5min，上样10μl ，120V电压走浓缩胶，加电压至150V进入 分离胶电泳，直到染料刚好走到胶底。 取下胶，考马斯亮蓝染色至少30min（染液若是新配的，染20min就够了），脱色液 脱色。若急需看到结果，可以将胶在500ml蒸馏水中煮沸两次即可看到条带。
IPTG induction
1. Even in the absence of IPTG, there is some expression of T7 RNA polymerase from the lacUV5 promoter.
2. The degree of toxicity will vary from protein to protein.
Protein isolation, concentration, and stabilization
Reversible precipitation with salt or
organic molecules
From: Protein Purification Handbook. Amersham Biosciences. 18-1132-29, Edition AC
大肠杆菌表达外源基因的劣势
缺乏对真核生物蛋白质的复性功能 缺乏对真核生物蛋白质的修饰加工系统 内源性蛋白酶降解空间构象不正确的异源蛋白 细胞周质内含有种类繁多的内毒素(endotoxin)
Vector
二 大肠杆菌表达载体的基本组成
一个良好的大肠杆菌表达载体： 复制起点(ori) 多克隆位点。 筛选标记（抗菌素抗性基因、Tag、筛选标记） 控制和调节转录与翻译的必不可少的原件
X基因
内切酶1 目的基因
+
内切酶2 保护碱基
R1
R2
Your destination vector
Your linearized vector
1：DNA marker; 2：重组质粒pET28-X双酶切; 3：空质粒pET28a双酶切
图图1.14.X3 基重但因组为发质同生粒义点pE突突T变2变8（-(XAS双GerU酶）→切A鉴G定C)，
pET system manual, Novagen, 11th Edition
X蛋白在大肠杆菌中表达条件优化
1：0mmol/L； 2：0.25mmol/L；3：0.5mmol/L； 4：0.75mmol/L；5：1.0mmol/L； 6：1.5mmol/L； 7：2.5mmol/L； 8：3.5mmol/L； 9：5.0mmol/L。
Protein preparation, extraction, clarification
Cell growth, protein overexpression
Cell lysis Removal of cell debris
From: Protein Purification Handbook. Amersham Biosciences. 18-1132-29, Edition AC
a: mRNA的5末端之独特的结构特征, 是决定mRNA转译起始效率的主 要因素。 b: 在构建外源基因的高效表达载体时 , 需认真选择有效的转录起 始序列。 c: 未鉴定出通用有效的转译起始序列的保守结构 (KOZAK SEQUENCE)
筛选标记: 其编码产物可被快速测定的功能单元。 追踪某些特定的DNA结构 (重组质粒 )是否已经导 入寄主细胞 同任何一种目的启动子连接 , 其表达活性可作为 检测启动子功能的依据。
O-linked glycos. phosphorylation acetylation acylation g-carboxylation project cost
E. coli
rapid (30 min) low
high refolding may be
required no
no no no no no low
Yeast
rapid (90 min) low
low – high refolding may be required high mannose
yes yes yes yes no low
Insect
slow (18-24 hrs) high
low – high proper folding
simple, no sialic acid yes yes yes yes no
图1.5 X蛋白表达条件：IPTG浓度优化
1：蛋白marker；2~9：分别用IPTG 诱导表达 0、1、 2、3、4、6、8、12 h。
图1.6 X蛋白表达条件：诱导时间优化
Protein Purification
Characterize function, activity, structure Use in assays Raise antibodies many other reasons ...
蛋白表达、纯化
抗体制备应用及ELISA间接法
卢士强 2010-11-18
Part 1: 蛋白表达、纯化
蛋白表达流程
1. 目的基因cDNA 2. 表达宿主 3. 载体 4. 设计引物 5. 连接转化 6. 诱导表达 7. 蛋白纯化 8. 鉴定保存
gene
Host
Cell-free
Bacterial
Adapted from: Protein Purification Handbook. Amersham Biosciences. 18-1132-29, Edition AC
Basic scheme of protein purification
From: Protein Purification Handbook. Amersham Biosciences. 18-1132-29, Edition AC