流式细胞术原理及应用(新)描述
流式细胞术原理及应用
流式细胞术原理及应用
流式细胞术是通过一种名为流式细胞仪的仪器完成的，它能够以非常
高的精确度进行分析和检测。
流式细胞仪通过一根轴，从这个轴上有三根
弹性管，细胞进行注射，从而使细胞在管中行进，细胞同时也受到外界信
号的影响，这种信号可以来自磁场、电场或光场。
当细胞运行到仪器的另
一端时，它们会被照亮，通过一台摄像机可以拍摄到高清晰度的照片，然
后在计算机上进行分析处理。
流式细胞术广泛应用于早筛检、医学诊断、药物发现、药理学实验和
抗生素耐药性研究等方面，它能够更加精确、快速地进行细胞分析。
此外，流式细胞术也可以用于分析抗原抗体，免疫细胞介导的反应，以及细胞因
子如细胞因子和表面受体等的表达情况。
这种技术还可以用来监测血液中细胞水平的变化，如血小板、红细胞、白细胞等。
流式细胞术分析的工作原理及应用
流式细胞术分析的工作原理及应用1. 工作原理流式细胞术（Flow Cytometry）是一种广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物开发等领域的细胞分析技术。
它基于细胞在流式细胞仪中通过单个细胞传感器单元的原理，可以实时、快速地检测和分析细胞的各种特性。
1.1 流式细胞仪原理流式细胞仪是流式细胞术分析的核心工具。
它将细胞悬浮液注入到一个窄小的液流中，并通过雷射束（Laser Beam）对细胞进行激发。
当细胞经过激发光束时，会发射出特定波长的荧光信号。
流式细胞仪通过光学设备收集并分析这些信号，从而获得关于细胞的信息。
1.2 细胞荧光标记在流式细胞术分析中，细胞通常会被标记上特定的荧光染料，以便测量其特定特征。
这些标记可以是单一的，也可以是多重的，用于同时分析多个参数。
1.3 数据分析流式细胞仪在测量细胞荧光信号的同时，还会记录细胞的大小、形状和荧光强度等参数。
这些数据可以通过特定的软件进行分析和解释，以获得关于细胞数量、细胞类型和细胞功能等方面的信息。
2. 应用领域流式细胞术分析具有广泛的应用领域，在生物医学研究和临床诊断中发挥着重要作用。
2.1 免疫学研究流式细胞术在免疫学研究中广泛应用，可以用于分析免疫系统中不同类型的细胞数量和功能。
通过对白细胞表面标记物的检测，可以检测特定细胞亚群的存在，并研究其在疾病和免疫反应中的作用。
2.2 肿瘤学研究流式细胞术在肿瘤学研究中也扮演重要角色。
它可以用来研究肿瘤细胞的增殖、存活和死亡等关键特性，进而评估药物治疗对肿瘤细胞的影响。
此外，流式细胞术还可以检测循环肿瘤细胞，从而提供肿瘤早期诊断和治疗监测的手段。
2.3 微生物学研究流式细胞术被广泛应用于微生物学研究中，可以用于分析微生物的数量和生物学特性。
通过对细菌、真菌和病毒等微生物的荧光标记，可以确定它们的种类、数量和活性，从而研究其生长规律和致病机制。
2.4 干细胞研究流式细胞术在干细胞研究中也扮演重要角色。
简述流式细胞术的原理与应用
简述流式细胞术的原理与应用一、流式细胞术的原理介绍流式细胞术（Flow cytometry）是一种利用流式细胞术仪（Flow cytometer）对单个活细胞进行多参数分析的技术。
它基于细胞的光学性质和生物化学特性，通过探针标记、荧光染料和细胞表面抗原的相互作用，对细胞进行高速连续检测和分离。
流式细胞术的原理如下：1.细胞悬浮和样本处理：将细胞样品作为悬浮液，通过离心等方法将细胞分散在液体中，去除细胞的团块和碎片，保证单个细胞的流式检测。
2.细胞标记：采用流式细胞术特定的探针和染料对细胞进行标记，以便后续检测和分析。
常用的标记方法包括荧光染料标记、抗体标记和细胞分子探针标记。
3.细胞分离和传送：将标记的细胞悬浮液通过流式细胞术仪，以流速每秒数千个细胞的速度单个分子传送到探测点。
4.光散射与荧光探测：细胞经过流式细胞术仪后，以激光束照射细胞，通过散射光和荧光信号的检测，对细胞进行空间分布和化学信息的获得。
5.数据采集与分析：通过计算机系统采集和记录细胞经过流式细胞术仪后所产生的光散射和荧光信号，在分析软件中对数据进行处理和解读，获得有关细胞的信息。
二、流式细胞术的应用流式细胞术是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的技术，它在细胞学、免疫学、血液学、肿瘤学等领域有着重要的应用价值。
下面列举几个流式细胞术的应用示例：1.血液学研究：流式细胞术结合细胞表面标记和荧光染料标记，可以对血液中的不同细胞类型进行快速的鉴定和数量分析。
例如，通过流式细胞术可对血液中的淋巴细胞、单核细胞和粒细胞等进行分类和计数，从而判断患者的免疫状态和疾病进展。
2.癌症诊断与治疗：流式细胞术对肿瘤细胞的检测和分析有着重要的作用。
通过流式细胞术，可以检测和定量肿瘤细胞的表面抗原和细胞内信号分子，进一步了解肿瘤细胞的类型、分化程度和增殖状态，为癌症的诊断和治疗提供指导。
3.免疫学研究：流式细胞术能够对免疫系统中的各种细胞类型进行鉴定、计数和功能分析。
FCM(流式细胞术检测)原理及临床应用
流式细胞术(flow cytometry FCM)是利用流式细 胞仪对单个生物颗粒(红细胞、白细胞、各类组织细 胞、血小板、微生物等)以及人工合成微球的物理和 生物学特性进行多参数定量分析，并能对特定细胞 群体加以分选的分析技术。
FCM的工作原理
流式细胞仪组成：
1.液流系统 2.光学系统 3.数据处理系统
双标记或多标记分析：目前使用的流式细胞仪 能用一个激光束激发检测三色甚至四色荧光信 号。检测时需注意荧光补偿。
常用免疫荧光染料组合
荧光染料 FITC+PE
激发波长 （nm）
488
发射波长（nm） 525、575
颜色 绿色、橙色
FITC+PeCy5
488
525、675
绿色、红色
FITC+ECD
488
实体瘤以多倍体居多；
G0 期：DNA 合成静止期 G1 期：DNA 合成前期 S 期： DNA 合成期 G2 期：DNA 合成后期 M 期： 细胞分裂期
DNA 倍体 2N 2N
2N-4N 4N 4N
DNA非2倍体出现是鉴别良性与恶性肿瘤的特异性指 标:
良性肿瘤和正常组织良性增生不出现DNA非2倍体细 胞而恶性肿瘤常可出现异倍体细胞；
过去认为 FCM测定残存白血病细胞不可靠， 因为现用的 McAb不能鉴别正常血细胞与白血 病细胞。虽然至今尚未发现白血病细胞特异抗 原，但近来有人提出根据白血病细胞的以下特 征， FCM检测的敏感度可明显提高
白血病细胞的某些抗原表达量明显高于相应 的正常血细胞
如小儿ALL，其CDl0+细胞的荧光强度可 高达3-4个对数值，而其 CD45则为弱阳性或 阴性。
525、625
流式细胞术简介及应用进展课件
流式细胞术简介及应用进展
15
▪高速度：分析细胞数：1000个/s→60000个/s ▪高灵敏度：荧光分子数/细胞：3000→100个FITC； ▪高准确度：区分两个细胞：参数：相差5% →1%； ▪高精度：CV值：7% →< 1%; ▪多参数：荧光：1个 →12个参数； ▪高纯度：分选细胞：80-90% →99.9%; ▪其 它：荧光信号：线性检测→对数检测
电子程序化单细胞分选仪——Electronically programmable individual cell sorter, EPICS (Coulter公司）
流式细胞术简介及应用进展
5
BD FACSCalibur型 FCM （单L，3F）
流式细胞术简介及应用进展
6
Coulter EPICS XL/XL-MCL （单L，4F）
流式细胞术简介及应用进展
11
BD FACSAria
BD FACSCount
CD3\4\8 专为HIV监测设计的经济普及型流式细胞仪
流式细胞术简介及应用进展
12
BD FACSCanto 2L 6C
流式细胞术简介及应用进展
13
BD FACS Calibur 1L 4C
流式细胞术简介及应用进展
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三、流式细胞术应用的新进展
流式细胞术简介及应用进展
17
2、cytometric bead array (CBA)
微球流式芯片技术(CBA)是一种微球多参数检测分析技 术，它用一系列的微球组合来捕获并结合流式细胞术检 测溶液中被检测物质的量，其采用夹心法分析策略。用 已知的标准品和对照标准曲线就可得出被测样品的浓度。 这种检测方法，既不受样品量的限制，也可同时检测多 项指标参数；客观、省时、人为因素影响小。
流式细胞术基本原理与实用技术
流式细胞术基本原理与实用技术流式细胞术（Flow Cytometry）是一种常用的细胞分析技术，它基于光学、电子和计算机技术，能够对单个细胞进行快速、准确的多参数分析。
本文将介绍流式细胞术的基本原理和实用技术。
一、基本原理流式细胞术的基本原理是利用细胞在液体中悬浮的特性，在流动状态下通过一个细胞计数器，同时对细胞进行多参数的检测和分析。
其主要包括以下几个步骤：1. 细胞样品的制备：将待检测的细胞样品进行预处理，如离心、洗涤等，以获得单细胞悬浮液。
2. 细胞的进样：将细胞悬浮液通过微细管道进入流式细胞仪的流动系统中，形成单细胞的液体流。
3. 细胞的定位和聚焦：利用激光束对细胞进行定位和聚焦，使其逐个通过探测区域。
4. 细胞的激发和发射：通过激光束的照射，激发细胞中的荧光染料或标记物，使其发射特定波长的荧光信号。
5. 光信号的收集和处理：收集细胞发射的荧光信号，并经过光学系统进行分光、分束、分光和聚焦，最后通过光电倍增管或光电二极管转换为电信号。
6. 数据的获取和分析：将电信号转化为数字信号，并通过计算机系统进行数据采集、存储和分析，得到细胞的各项参数及相关统计学分析。
二、实用技术1. 细胞标记技术：为了能够准确地检测和分析细胞的特定性质，常常需要对细胞进行特异性的染色或标记。
常用的标记方法包括荧光染料、抗体标记和基因表达标记等。
2. 多参数分析技术：流式细胞术可以同时检测多个参数，如细胞大小、形态、表面标记物的表达、细胞周期等。
通过合理选择和配置荧光染料和滤光片组合，可以实现多重标记和多参数分析。
3. 数据分析软件：流式细胞术产生的数据量庞大，需要借助计算机软件进行数据的分析和解读。
常用的数据分析软件有FlowJo、CellQuest、ModFit等，它们可以对细胞的分布、比例、相关性等进行统计学分析和图形展示。
4. 高通量流式技术：随着科学研究的深入和技术的发展，高通量流式技术逐渐兴起。
它通过提高仪器的样品处理速度和自动化程度，实现对大量样品的快速检测和分析，广泛应用于生物医学研究和临床诊断。
流式细胞术的原理和应用
流式细胞术的原理和应用流式细胞术（Flow cytometry）是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的生物技术，它通过将单个细胞悬浮在溶液中，利用激光器照射并检测细胞表面或内部的荧光标记物，实现对细胞的定量和质量分析。
流式细胞术具有高通量、高准确性和高灵敏度的特点，被广泛应用于细胞表型分析、细胞分选、DNA含量测定、蛋白质定量、染色体分析、细胞凋亡测定等领域。
本文将对流式细胞术的原理和应用进行详细介绍。
一、流式细胞术的原理1. 细胞悬浮流式细胞术的第一步是将待检测的细胞悬浮在生理盐水或缓冲液中，以确保细胞处在单个状态，方便后续的激光检测。
2. 细胞标记细胞通常会被标记上与特定蛋白或分子结合的荧光标记物，通过特异性和高亲和力结合到细胞表面或内部的特定结构上。
这些标记物可以是荧光染料、荧光免疫球蛋白（Fluorescent-labeled antibodies）等。
3. 激光照射悬浮细胞通过流式细胞仪中的微流道单个流经，在通过激光照射后，激光与标记物产生光散射或荧光发射。
4. 光散射和荧光检测流式细胞仪通过多个检测器检测光散射和荧光发射强度，这些数据被传输到计算机中进行分析和图形呈现。
5. 数据分析通过计算机软件对检测到的数据进行图形处理和数据分析，包括各种细胞表型的区分、细胞计数、蛋白质表达水平、细胞周期分析等。
二、流式细胞术的应用1. 细胞表型分析流式细胞术可以用来分析细胞的表面标记物和内部标记物，比如CD标记、HLA标记、细胞凋亡标记等，帮助研究者深入了解细胞的功能和特性。
2. 细胞分选基于细胞表面标记物的差异，流式细胞术结合细胞分选仪可以实现对不同亚群细胞的快速纯化和分离，广泛应用于免疫学、干细胞研究等领域。
3. DNA含量测定通过DNA特异性荧光染料，流式细胞术可以对细胞的DNA含量进行测定，帮助研究细胞周期的变化、细胞增殖速率的测定等。
4. 蛋白质定量利用荧光标记的免疫球蛋白，流式细胞术可以对细胞中蛋白质的表达水平进行定量分析，比如研究细胞信号通路的活性等。
流式细胞术的原理及应用
流式细胞术的原理及应用前言流式细胞术（Flow Cytometry）是一项基于光学技术的分析和分类细胞及其组分的方法。
通过将细胞悬浮液通过流式细胞仪，实现细胞的快速高通量检测和分析。
流式细胞术在生命科学研究、临床诊断、药物研发等领域得到广泛应用。
本文将介绍流式细胞术的基本原理及其主要应用。
1. 原理1.1 细胞悬浮液的注射流式细胞术的第一步是将待检测的细胞悬浮液注入流式细胞仪。
悬浮液中的细胞会依次通过一个细胞注射口，形成细胞流。
1.2 通过激光激发荧光信号流式细胞仪利用激光束激发细胞或标记物的荧光信号。
细胞通常被染色或标记以便准确识别和分析细胞特定的特征。
1.3 接收荧光信号经过激发后，流式细胞仪会收集荧光信号，并通过各种光学和电子元件将其转化为电信号。
1.4 数据分析与可视化流式细胞仪将收集到的数据传输到计算机进行分析和可视化。
根据不同的荧光信号特性，可以得到细胞的表型、数量、活性等信息。
2. 应用流式细胞术在许多领域有着广泛的应用，在以下几个方面得到了突出的成果和应用：2.1 免疫学流式细胞术在免疫学研究中发挥着重要的作用。
通过流式细胞术，可以对免疫细胞进行表型和功能分析，了解免疫细胞的分布、表达特征、活性等信息，为研究免疫系统的机制提供了强有力的工具。
2.2 癌症研究流式细胞术在癌症研究中广泛应用。
通过流式细胞术，可以对癌细胞进行检测、鉴定和分析，了解癌细胞的异质性、增殖速率、转移能力等特征，为癌症的诊断和治疗提供重要信息。
2.3 微生物学研究流式细胞术在微生物学研究中起到关键作用。
通过流式细胞术，可以快速准确地对微生物进行定量分析和分型鉴定，如对细菌、真菌、病毒的检测和鉴别。
2.4 细胞工程与干细胞研究流式细胞术在细胞工程领域和干细胞研究中有着广泛的应用。
可以通过流式细胞术对干细胞进行分选、分析和富集，并对细胞工程的效果进行评估和监测。
2.5 遗传学研究流式细胞术在遗传学研究中也发挥着重要作用。
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分为三大类： 第一类－－台式机
光路调节系统固定，自动化程度高，操作简便，易学易掌握,适合 用于临床
第二类－－大型机
科研型，分辨率高，可分选用于培养，可选配多种激光器，更灵活
第三类－－新型流式细胞仪
装配有2～4根激光管，同时检测15个参数，高速分选达50000个/s
流式细胞仪的主要组成部分：
流式细胞术与PNH
利用流式细胞术检测阵发性睡眠性 血红蛋白尿（PNH），根据血细胞的细 胞膜所缺乏的糖化肌醇磷脂（GPI）所连 接的蛋白，如DAF（CD55）与MIRI （CD59），来确诊此病，比传统的血清 溶血试验具有更高的特异性与敏感性。
流式细胞术与血小板
血小板： 巨血小板 血小板无力症
• 细胞凋亡与坏死的区别 虽然凋亡与坏死的最终结果极为相似，但 它们的过程与表现却有很大差别。 坏死（necrosis）：坏死是细胞受到强烈理 化或生物因素作用引起细胞无序变化的死亡过 程。表现为细胞胀大，胞膜破裂，细胞内容物 外溢，核变化较慢，DNA 降解不充分，引起 局部严重的炎症反应。 凋亡是细胞对环境的生理性、病理性刺激 信号，环境条件的变化或缓和性损伤产生的应 答有序变化的死亡过程。其细胞及组织的变化 与坏死有明显的不同。
流式细胞术是20世纪70年代发展起
来的一种技术，有人将流式细胞仪比 喻成高级的荧光显微镜。 目前，该技术以广泛用于生物及医 学基础研究与临床检测，在分子生物学、 免疫学、遗传学、血液学、肿瘤学等领 域内发挥着重要作用。
流式细胞仪 控制 光源 标本 效率 电脑 激光 制备成的单细胞 （或颗粒）悬液 高 几百 ~ 几万个 细胞/秒
散点图适用于：多参数分析
流式应用常见范围
• • • • • • • 细胞大小 细胞的颗粒度 细胞表面分子：CD 系列 细胞浆内分子：胞内细胞因子 细胞核内分子：P53 细胞功能检测：细胞周期、凋亡 其他（膜电位、钙离子浓度、核酸等）
实验对照的设计
• 空白对照：ALL • 阴性对照：常用同型抗体对照
荧光显微镜 人脑 紫外光 放于固定的标本 台上 低 几十个细胞/分
结果
功能
精确、客观
可同时测多个参 数、能进行分选
有主观因素
一般只测一个参 数、不能分选
鞘液系统
流动室
光路系统
检测区
光学原理
laser
抗体标记的方法
Байду номын сангаас
抗体的选择
• 首选直接标记抗体 • 荧光分子 PE最强，适用于弱表达抗原
遗传 HEREDITAS(Beijing)27(3):461~465,2005 <流式细胞术分析和分拣植物染色体> 流式细胞术在富营养淡水湖泊微型浮游植物细胞中的应用 细胞生物学杂志 2004，4，26卷第2期
（五）流式细胞术在环保领域的应用
粉尘粒子
随着白细胞分化抗原意义的确 认以及单克隆抗体技术的发展， 随着人们创新意识的加强，结合 计算机技术和其他技术，流式细 胞仪的应用领域将不断开拓，成 为科研与临床不可或缺的重要工 具。
网织血小板
血栓性疾与血栓前状态： 由于活化血小板是血栓的 主要成分之一，也是引起血栓 形成的主要原因，所以血小板 活化程度的增高与疾病的发生 发展有关。
流式细胞术与网织红细胞
流式细胞术与肿瘤
DNA非整倍体的出现可能是恶变细 胞的重要标志， FCM在肿瘤学上的应用， 主要是利用DNA含量测定，进行癌前病 变及早期癌变的检出、化疗指导以及预 后评估等工作。 癌前病变的癌变率与病变的增生程 度一致，而增生程度与 DNA 含量的异常 改变又呈平行关系。
淋巴细胞亚群分析 机体免疫状态是衡量机体是否罹患 疾病的重要指标，目前多采用流式细胞 术来检测机体的免疫状态，其中最重要 的指标是检测T,B,NK淋巴细胞的水平。
常用细胞表型及意义 （cluster of differentiation,CD)
CD3 总T细胞 CD4 T辅助/诱导细胞亚群 CD8 T抑制/细胞毒细胞亚群 CD19 B细胞抗原 CD16+56 NK细胞 CD33 髓细胞前体 CD34 多能干细胞
FITC最便宜，适用于强表达抗原
• 间接标记 适用范围广, biotin-avidin不适合
弱抗原的检测
数据处理系统
流式细胞分析的信息
• • • • • • Forward scatter(FSC) Side scatter(SSC) FL1-FITC FL2-PE FL3-PerCP PL4-APC
流式细胞术与生殖医学
正常男性精液中均为单倍体细胞，而由于精子发 生障碍所致不育的男性精液中会出现大量2倍体和4倍 体细胞。
1、精子的有无 2、精子形成过程中那一步发生阻滞
（四）流式细胞术在植物研究领域的应用
流式细胞分析在人类基因组计划中发 挥了重要作用，流式细胞技术的应用也适 用于植物，目前这个技术应用范围包括流 式核型分析，分拣纯化染色体，定位基因， 构建等。流式细胞术与造血干细胞移植
流式细胞术与白血病免疫分型
流式细胞的免疫分型：
• 是白血病分型的重要指标，而白血病分 类是选择化疗方案和判断预后的重要依 据。 FAB标准(MICM)，形态学、免疫表型 染色体、分子生物学结合, • 适合于白血病的分型诊断，但不适合用 于确诊是不是白血病。 • Minimal residual diseases (MRD)
流式细胞术与移植
利用流式细胞仪可对器官移植和骨髓移 植后的患者进行监控。当患者CD3+、CD25+持 续增加提示已开始发生排异，CD4+/CD8+ T持 续下降，表明有感染发生，当其比值小于 0.2 时必需停用免疫抑制剂。
其它免疫性疾病分析
SLE患者的淋巴细胞变化可 以反应该病的活动情况和器官侵 犯程度，活动或非活动性伴有多 系统疾病，但无肾脏损害的患者 可出现CD4+ CD8+T比值升高， 伴 有严重肾脏损害的SLE患者可出 现低CD4+、高CD8+的现象。
微球流式芯片技术 CBA(Cytometric Bead Array)
采用夹心法分 析策略,以微珠 来捕获可溶性 分子。
（三）流式细胞术的临床应用
• • • • • • • 白血病免疫分型 HLA-B27: 强直性脊柱炎 淋巴细胞亚群 造血干细胞计数：造血干细胞移植 网织红细胞 PNH诊断（CD55、CD59） 血小板活化试验
流式细胞术的原理 及其应用
马洪星
FLOW CYTOMETRY 流式细胞术 FLOW CYTOMETOR 流式细胞仪
• Flow Cytometry
– Measuring properties of cells in flow
• Flow Sorting
– Sorting (separating) cells based on properties measured in flow – Also called Fluorescence-Activated Cell Sorting (FACS)
流式细胞的基本信息: “形态”
流式细胞的主要信息:Fluorescence
• • • •
FL1 FL2 FL3 FL4
最常用的标记方法是荧光素分子标 记的抗体与细胞抗原结合
常用术语
Gating
流式常见图形 (Histogram Plot)
直方图适用于：单参数分析
流式常见图形 (Dot Plot)
细胞凋亡的生物学意义
胚胎形成、肌体正常发育、衰老和 损伤细胞的清除以及肿瘤的发生、发展 和转归等都与细胞凋亡有关。
生物医学的研究热点
凋亡检测
每一步都有检测试剂盒
每一步都有检测试剂盒
流式细胞术检测细胞凋亡
1、半胱氨酸蛋白酶3检测法（早早期） 2、Annexin V-FITC/PI 法（早期） 3、Apo2.7检测法（早期） 4、TUNEL 法（晚期） 5、DNA含量分析法（晚晚期） 6、细胞凋亡相关基因的流式细胞术检测
为治疗方案和药理学研究提供依据：不同 类型的肿瘤对化疗药物的敏感性不同。可利 用 FCM 进行细胞周期分析，适当选择周期特 异性药物或非周期特异性药物。 MDR是由多药耐药基因编码的P糖蛋白 （P-gp）亲脂化合物，包括多种抗癌药物和荧 光染料的跨膜性排出泵。从人淋巴细胞排除 荧光染料与细胞内P-gp的含量直接相关。当淋 巴细胞出现MDR阳性细胞时，患者对化疗药 物开始出现耐药性，需要考虑其他治疗方式。
由于T淋巴细胞在人体的免系统中承 担着重要功能，因此当感染发生时，T淋 巴细胞各亚群的变化往往能很敏感地反应 感染的状态和程度。例如：CD4分子有 HIV识别部位，因CD4细胞是HIV病毒的 受体，AIDS患者CD4+T细胞明显减少， 该指标是诊断AIDS的重要指标。当病毒 感染发生时（如乙型肝炎、EB病毒和巨 细胞病毒包涵体病毒），CD8+T细胞增多， 对CD8T细胞测定有助于对感染的诊断、 治疗效果的动态观察。
亚二倍体峰（凋亡峰） --- PI staining 不能区分凋亡与死亡细胞
Annexin V Assay 建议用于悬浮细胞
Annexin V Assay 能够区分死亡与凋亡
细胞周期
G2 M
S
G1
G0 Quiescent cells
（二）定量流式细胞术 （quantitative flow cytomety) 通过检测标准微球的荧光强度获得 标准曲线，通过标准曲线求得待测细胞的 某种生物分子的精确数值，从而反映在某 种生理病理条件下出现的微细变化，对临 床疾病的研究、诊断及治疗等具有重要意 义。
外周血、骨髓、癌组织、癌旁组织、 石蜡切片、各种体液（尿、脑脊液、胸 腹水等）
单细胞生物、特殊处理的植物细胞、某些非 细胞粒子、可溶性分子
待测标本
处理成单event悬液