流式细胞术常见实验分析
流式细胞术实验技巧及数据分析
流式细胞术应用领域
免疫学研究
用于检测免疫细胞表面标志物、 细胞亚群分类和功能分析等。
生殖医学研究
用于精子分析和胚胎发育监测等 。
血液学研究
用于检测白血病、淋巴瘤等血液 肿瘤细胞的表面抗原和基因表达 。
肿瘤学研究
用于检测肿瘤细胞的生长、凋亡 和转移等生物学特性。
流式细胞术实验技巧 及数据分析
日期：
• 流式细胞术简介 • 流式细胞术实验技巧 • 流式细胞术数据分析 • 流式细胞术实验问题与解决 • 流式细胞术实验案例分享
目录
Part
01
流式细胞术简介
流式细胞术定义
流式细胞术是一种在液流中快速检测和分离单个细胞的生物技术。通过将细胞悬 浮在液流中，并使用激光束照射细胞，可以测量细胞的物理和化学特性，如细胞 大小、颗粒质量和荧光标记等。
物的群体结构、进化关系和生态分布等方面。
THANKS
感谢您的观看
仪器参数，如光电倍增管
电压、滤波器等。
数据采集
3 确保数据采集的完整性和
准确性，避免丢失或重复 采集数据。
Part
03
流式细胞术数据分析
流式细胞术数据分析
• 请输入您的内容
Part
04
流式细胞术实验问题与解决
荧光补偿设置问题
总结词
荧光补偿设置是流式细胞术实验中的 重要环节，用于消除不同荧光染料间 的光谱重叠。
细胞群体识别问题
总结词
细胞群体识别是流式细胞术实验的重要环节，直接影响实验 结果的分析和解读。
详细描述
在流式细胞术实验中，需要准确识别和区分不同的细胞群体 。通过优化抗体标记组合、采用多参数分析等方法，可以提 高细胞群体识别的准确性和可靠性，为后续的数据分析和解 读提供有力支持。
流式细胞术分析PMA诱导THP1分化为巨噬细胞的表型特征
流式细胞术分析PMA诱导THP1分化为巨噬细胞的表型特征一、本文概述流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是一种在液流中快速分析单个细胞的多参数特性的强大技术。
该技术通过标记特异性抗体与细胞表面或内部抗原的结合，结合流式细胞仪的高通量分析能力，使我们能够精确测量细胞群体的表型特征。
在生物医学研究中，流式细胞术广泛应用于细胞分化、细胞周期、细胞凋亡、信号转导等多个领域。
本文旨在利用流式细胞术分析佛波酯（Phorbol 12-myristate 13-acetate，PMA）诱导人急性单核细胞白血病细胞系THP-1分化为巨噬细胞的表型特征。
我们将通过流式细胞术检测分化过程中细胞表面标志物的表达变化，如CDCD68等，以及细胞内分子如肿瘤坏死因子TNF-α、白介素IL-1β等的表达情况，从而全面揭示PMA诱导THP-1细胞向巨噬细胞分化的分子机制。
通过本文的研究，我们期望能够为深入理解巨噬细胞分化过程中的分子事件提供新的视角，并为开发针对巨噬细胞相关疾病的治疗策略提供理论依据。
本文还将探讨流式细胞术在细胞分化研究中的应用价值，以期为生物医学领域的研究人员提供有益的参考。
二、材料与方法1 细胞系：人单核细胞系THP-1，购自美国ATCC（American Type Culture Collection）。
2 试剂：佛波酯（Phorbol 12-myristate 13-acetate，PMA），购自Sigma-Aldrich公司；RPMI 1640培养基、胎牛血清（FBS）、青霉素/链霉素双抗，购自Gibco公司；流式细胞术抗体，包括但不限于CDCDHLA-DR等，购自BD Biosciences或eBioscience公司。
3 仪器：流式细胞仪（如FACS Canto II，BD Biosciences）；二氧化碳培养箱；离心机；倒置显微镜。
1 细胞培养：THP-1细胞在含有10%胎牛血清、1%青霉素/链霉素双抗的RPMI 1640培养基中，于37℃、5% CO2的条件下培养。
流式细胞术实验中的常见问题及其解决方法
流式细胞术实验中的常见问题及其解决方法一、细胞无法标记1．确保所有的抗体都按照厂商的说明书正确存储。
2．确保商品化抗体没有超过有效期。
3．确保已正确加入足量的抗体。
4．确保抗体已连接荧光素。
如果未连接荧光素，需加入连接有荧光素的二抗。
5．确保二抗是好的，也就是说二抗曾经能与另外的一抗成功结合。
6．确保使用了正确的二抗，就是说二抗能够识别你的一抗。
如果使用的是PE或APC荧光素的抗体，确保该抗体未被冰冻过。
你要检测的组织上是否表达该抗原？可查看相关文献了解该抗原的表达情况，或者同时做一个阳性对照。
抗体是否能识别检测物种的抗原位点？可检查抗体的交叉反应列表，看看抗体是否适用于你要检测的物种标本。
不是所有的抗体都能够检测所有物种相应抗原。
7．确保使用正确的激光来激发荧光素，并使用了正确的通道来检测该荧光。
二、PE抗体无法标记，而FITC抗体的结果却很好1．PE荧光素可能冰冻过。
如果冰冻过，建议另外买一管新的抗体。
2．多聚甲醛（PFA）可能会导致此问题。
PFA降解后可释放出甲醇，从而影响染色。
所以切记PFA尽可能新鲜配制，或者细胞尽可能不要固定，染完色就立即检测。
三、非特异性染色1．非特异性染色可能是由于自发荧光。
解决方法：用一管只加细胞不加抗体的空白管，查看细胞自发荧光水平。
某些细胞可表达低亲和力的Fc受体CD16/CD32，这种受体可通过Fc片段结合大多数抗体。
对于小鼠细胞，可使用SeroBlock FcR阻断该位点。
2．非特异性染色也可能是由于二抗引起，建议选择一种只与一抗反应、却不会与检测组织发生交叉反应的二抗。
确保洗涤充分。
3．小心滴定抗体。
降低抗体浓度可减少非特异性染色。
四、荧光强度弱1．荧光弱可能是由于抗体过度稀释。
因此使用前通过正确滴定抗体，以确保抗体浓度适当。
2．直标时，荧光弱也可能是由于前带现象引起（概念见表格后解释），因此，小心正确滴定抗体很有必要。
3．荧光弱可能由于细胞数量过多。
流式细胞术实验技巧及数据分析
流式细胞术实验技巧及数据分析一、实验技巧1.细胞样本的准备在进行流式细胞术之前，首先需要准备好细胞样本。
对于悬浮细胞，可以通过离心分离获得单细胞悬浮液；对于贴壁细胞，需要利用胰酶等方法将细胞从培养皿上剥离。
样本的细胞浓度需要适当调整，以保证在实验过程中细胞数目在仪器检测范围内。
2.细胞标记与染色3.样本的处理与染色控制为了减少噪音和误差，需要进行相应的样本处理和染色控制。
常用的处理包括细胞固定、膜破裂和核酸溶解等。
另外，对照组的设置也非常重要，包括负对照、单标对照和血细胞淋巴细胞控制等，以校正仪器和标记的相关性。
4.流式细胞仪的设置与操作流式细胞仪是进行流式细胞术的关键仪器，需要正确设置和操作。
首先，要校准仪器的激发光源、滤光片和检测器等参数，以确保获得准确的荧光信号。
其次，要根据标记物的激发光和发射光波长选择合适的检测通道。
最后，通过检测标记物阳性细胞的信号强度和分布，调整仪器的敏感度和流速，以获得符合实验要求的数据。
二、数据分析1.数据获取与记录在流式细胞术实验结束后，需要用相应的软件（如FlowJo、CellQuest等）获取和记录仪器所产生的原始数据。
这些数据包括细胞整体的荧光信号和散点图等。
2.质量控制与后处理对于数据质量的控制，首先需要排除掉背景信号。
通过设置负对照，根据荧光信号的阈值来确定阳性细胞的比例。
另外，还需要剔除激活的、死亡的和颗粒干扰的细胞等。
3.数据可视化通过制作直方图、散点图和轮廓图等，可以直观地展示细胞的其中一种特定特征（如表达一些蛋白质、细胞周期等）在整个细胞群体中的分布情况。
从图形中可以得出相应的统计结果，并可以进一步比较不同样本之间的差异。
4.数据统计与分析对于一些研究问题，需要计算不同细胞亚群的百分比、中位数、平均值和标准差等。
此外，还可以利用双参数散点图，通过计算相关系数（如Pearson相关系数）来分析两个特征之间的相关性。
总结：流式细胞术作为一种快速、高通量和灵敏的细胞分析技术，对于研究细胞标记物的表达和功能等提供了有力的手段。
流式细胞术实验报告
一、实验目的本实验旨在通过流式细胞术技术，对细胞群体进行快速、精确的分析和定量测定，研究细胞的物理与化学性质，并对细胞进行分类和分选。
通过本次实验，掌握流式细胞仪的工作原理，了解其在细胞生物学研究中的应用。
二、实验原理流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是一种对液流中排成单列的细胞或其它生物微粒逐个进行快速定量分析和分选的技术。
其基本原理是将经过荧光标记的细胞或微粒，在流动系统中以高速通过，同时利用激光束照射细胞，通过光散射和荧光信号来获取细胞的大小、形态、表面标记物等信息。
最后，通过数据分析和可视化展示，对细胞进行计数、分类和分析。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 细胞样本：小鼠脾细胞、Jurkat细胞- 荧光标记抗体：CD45-FITC、CD3-PE、CD4-APC- 溶液：磷酸盐缓冲盐溶液（PBS）、荧光染料（如PI）2. 实验仪器：- 流式细胞仪（如BD FACS Calibur）- 离心机- 恒温培养箱- 移液器四、实验步骤1. 细胞制备：- 收集小鼠脾细胞或Jurkat细胞，用PBS洗涤后，调整细胞浓度为1×10^6个/mL。
- 加入荧光标记抗体，室温下孵育30分钟。
- 用PBS洗涤细胞两次，去除未结合的抗体。
2. 流式细胞术分析：- 将处理好的细胞加入流式细胞仪，设置合适的参数进行检测。
- 收集数据，进行细胞分类和分析。
3. 数据分析：- 利用流式细胞术分析软件（如CellQuest、FlowJo）对数据进行分析，包括细胞计数、分类、DNA含量分析等。
五、实验结果与分析1. 细胞分类：- 通过流式细胞术，成功将小鼠脾细胞和Jurkat细胞分为不同的亚群，如T细胞、B细胞等。
2. DNA含量分析：- 通过PI染色，检测细胞的DNA含量，发现小鼠脾细胞和Jurkat细胞均处于G0/G1期。
3. 表面标记物分析：- 通过CD45-FITC、CD3-PE、CD4-APC抗体检测，发现Jurkat细胞为T细胞，小鼠脾细胞中含有B细胞和T细胞。
直接和间接流式细胞术实验方案
直接和间接流式细胞术实验方案请关注：↑Abcam 助您更快实现研究使命直接流式细胞术实验方案采用偶联一抗的流式细胞术的一般步骤。
收集、清洗细胞，并用冰冷的 PBS、10% FCS、1% 叠氮化钠调节细胞悬液浓度至 1-5 x 106 细胞/mL。
通常使用聚苯乙烯圆底 12 x 75 mm2 Falcon 管进行细胞染色。
但是，任何可用于离心的容器均可用于细胞染色，例如试管、eppendorf 管以及 96 孔圆底微量滴定板。
一般而言，细胞应进行充分离心，以除去上清液并保证细胞损失最小，同时细胞容易重悬。
我们建议使用冰冷的试剂/溶液进行染色，或在 4 °C 条件下操作，因为低温和叠氮化钠的存在可以防止表面抗原的调节和内化。
内化会导致荧光强度的损失。
添加 0.1-10 μg/mL 偶联一抗。
如有需要，可使用 3% BSA/PBS 稀释（也可在此时加入碘化丙啶以排除死细胞）。
在室温或 4°C 下避光培养 30 分钟。
此步骤需要进行优化。
清洗细胞三次，并在 400 g 离心力下离心五分钟，然后重悬于 500 µL 至 1 mL 冰冷的 PBS、10% FCS 及 1% 叠氮化钠中。
将细胞避光保存于冰上，或放入 4°C 冰箱中，待使用时再取出用于分析。
为获得最佳结果，应尽快使用流式细胞仪分析细胞。
abcam 2018-07-05abcam 此为临时链接，仅用于预览，将在短期内失效。
我们建议当天进行分析。
细胞的所需保存时间较长（16 小时）或需要配合细胞仪的分析计划时，可此为临时链接，仅用于预览，将在短期内失效。
以使用 1% 多聚甲醛重悬细胞，以防坏死。
固定：如果等待时间超过 1 个小时，可在步骤 3 后固定细胞。
这样，细胞可以保存数天。
（这可以使光散射更加稳定，并使大多数生物性危害因子失活）。
对照物也需采用相同步骤进行固定。
如果需要保持细胞活力，则不要进行固定。
固定方法有很多种，具体可参见间接染色实验方案的固定部分。
流式细胞术实验报告
流式细胞术实验报告流式细胞术实验报告引言流式细胞术（Flow Cytometry）是一种广泛应用于生物学研究和临床诊断的技术。
它通过测量细胞在流动过程中的荧光信号，可以快速、准确地分析细胞的数量、大小、形态和功能等特征。
本实验旨在利用流式细胞术对细胞进行表型分析，并研究不同条件下细胞的变化。
材料与方法1. 细胞样本准备：从培养皿中取出细胞，用PBS洗涤，离心沉淀后，再用PBS 悬浮细胞，使其浓度达到所需的范围。
2. 细胞染色：将细胞悬浮液分装于离心管中，加入适量的荧光标记染料，轻轻摇匀，避免产生气泡。
3. 流式细胞术仪器设置：根据实验需要，调整流式细胞术仪器的参数，如激光功率、荧光信号检测通道等。
4. 样本检测：将细胞悬浮液注入流式细胞术仪器，开始检测。
记录细胞的散射信号和荧光信号，并设置相应的控制样本。
5. 数据分析：利用流式细胞术软件对获得的数据进行分析，包括细胞数量、比例、荧光强度等参数。
结果与讨论通过流式细胞术实验，我们成功地对细胞进行了表型分析，并观察到不同条件下细胞的变化。
以下是我们的结果和讨论。
1. 细胞数量和比例的变化我们首先对细胞数量和比例进行了分析。
结果显示，在不同处理条件下，细胞数量和比例存在显著差异。
例如，在处理A条件下，细胞数量明显增加，而在处理B条件下，细胞数量有所下降。
这表明不同条件对细胞生长和增殖有不同的影响。
2. 细胞大小和形态的变化我们进一步分析了细胞的大小和形态的变化。
通过测量细胞的散射信号，我们可以得到细胞的大小和形态信息。
结果显示，在处理A条件下，细胞的大小明显增加，形态变得更加圆润。
而在处理B条件下，细胞的大小和形态相对稳定。
这可能与处理A条件下的细胞分化和增殖有关。
3. 荧光信号的变化我们还对细胞中特定蛋白的表达进行了分析。
通过标记特定蛋白的荧光染料，我们可以测量细胞的荧光信号强度。
结果显示，在处理A条件下，特定蛋白的表达明显上调，而在处理B条件下，特定蛋白的表达下调。
流式细胞术基本原理与应用实验报告
流式细胞术基本原理与应用实验报告一、引言细胞是生命的基本单位，对于细胞的研究是生命科学的重要组成部分。
流式细胞术是一种高效、快速、准确的细胞分析技术，可以对单个细胞进行分析和排序，广泛应用于生命科学、医学、生物工程等领域。
本文将介绍流式细胞术的基本原理和应用实验。
二、流式细胞术基本原理流式细胞术是一种基于细胞荧光标记的技术，其基本原理是将细胞悬浮液通过细胞分离器，使细胞单个通过激光束，激光束照射到细胞上，激发荧光标记物，荧光信号被收集并转化为电信号，通过计算机进行分析和排序。
流式细胞术的主要组成部分包括细胞分离器、激光器、荧光探测器和计算机。
细胞分离器通过压力和速度的调节，使细胞单个通过激光束。
激光器产生激光束，激光束照射到细胞上，激发荧光标记物。
荧光探测器收集荧光信号，并将其转化为电信号。
计算机对电信号进行分析和排序，得到细胞的荧光信号和数量信息。
三、流式细胞术应用实验1.细胞表面标记物检测细胞表面标记物是细胞表面的蛋白质、糖类等分子，可以用于细胞的鉴定和分类。
流式细胞术可以通过荧光标记物检测细胞表面标记物，从而对细胞进行分类和分析。
实验步骤：（1）制备细胞悬浮液。
（2）加入荧光标记物，使细胞表面标记物与荧光标记物结合。
（3）将细胞悬浮液通过流式细胞术仪器，收集荧光信号。
（4）通过计算机对荧光信号进行分析和排序，得到细胞表面标记物的信息。
2.细胞周期分析细胞周期是细胞从一个细胞分裂到下一个细胞分裂的过程，包括G1期、S期、G2期和M期。
流式细胞术可以通过荧光标记物检测细胞DNA含量，从而对细胞周期进行分析。
实验步骤：（1）制备细胞悬浮液。
（2）加入荧光标记物，使细胞DNA与荧光标记物结合。
（3）将细胞悬浮液通过流式细胞术仪器，收集荧光信号。
（4）通过计算机对荧光信号进行分析和排序，得到细胞DNA含量的信息。
3.细胞凋亡检测细胞凋亡是细胞自我死亡的过程，是细胞生命周期的重要组成部分。
流式细胞术可以通过荧光标记物检测细胞凋亡，从而对细胞生命周期进行分析。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
2.3 胞内活性氧水平的检测与分析
DCFH-DA单染法
DCFH-DA
DCFH ROS
DCFH-DA进入细胞在细胞内酯酶作 用下脱去二脂形成不发荧光的DCFH， 当细胞内存在H2O2，O2-，OH-等 ROS时被氧化成发绿色荧光的DCF。
DCF
注意事项：
结果分析
——数据分析中几种常见图形及分析原则 （1）阴性细胞群（峰）和阳性细胞群（峰）分群明显
分析原则： 根据阴性对照界定阴性置信区； 允许阴性对照非特异性荧光信号（假阳性率）一般小于 1%~5%； 可记录阳性细胞百分率或平均荧光强度。
（2）样本管与阴性对照管峰形重叠
样本管峰形左侧右移，右侧有肩峰，弱阳性的 样本常出现此类图形。
分析原则： 根据阴性对照界定阴性置信区，阴性置信区应 设在两曲线分离处；
微珠10μL（用前震荡混匀） Buffer：190μL
2. 四种常见流式细胞术
2.1 细胞凋亡的检测与分析
2.1.1 PI单染法 2.1.2 Annexin-Ⅴ-PI双染法 2.1.3 线粒体膜电位法
凋亡启动
凋亡早期
凋亡晚期
2.1.1 PI单染法
基本原理： • 正常细胞DNA含量：2n~4n • 凋亡细胞：核内DNA断裂，乙
流式细胞术常见实验分析
流式细胞术常见实验分析
1. Guava easycyte 8HT 操作流程
2. 四种常见流式细胞术
细胞凋亡的检测与分析 DNA含量检测与细胞周期分析 胞内活性氧水平的检测与分析 细胞表面分子的检测与分析 组合实验
1. Guava easycyte 8HT 操作流程 ——Incyte模块
1.1 开机-清洗
（原则：先开仪器后开软件，开机必清洗）
1.2 采集样本 1.3 分析 1.4 关机
（原则：先关软件后关仪器，关机前必清洗）
1.5 日常维护
1.1 清洗
edit WL
1.2 样本采集
• 1.3 分析
见具体实验的分析。
• 1.4 关机
1.5 日常维护
保持空气干燥，会使激光器的使用寿命长一些。 桌面不要有震动，以免光路发生偏移。 上机前检查废液瓶是否已满，若已满或将满请倒掉，用超纯水冲洗两
醇固定后膜通透性增加，小片 段DNA穿膜丢失，胞内DNA含 量减少。PI染色后，荧光强度 减小而形成一个DNA含量小于 2n的分布区（亚G1峰）。
操作方法与结果分析见细胞周期部分。
优缺点：
• 优点：简便，快捷，价廉，应用普遍。
• 缺点：
2.1.2 Annexin-Ⅴ-PI双染法
基本原理：
磷脂酰丝氨酸（PS）能与连接素 Ⅴ（AnnexinⅤ）发生特异结合； PI是核酸荧光染料，不能透过正 常细胞膜，只能进入已经破损的 细胞膜。
2.2.3 M期特异性检测
G2期是指DNA合成后期，M期是细胞分 裂期。二者在细胞周期事件中所处的时项 不同，所表示的生物学意义也大不相同。 准确检测M期的变化对细胞增殖、凋亡及 癌症的研究相当重要。M期的检测标志是 丝氨酸磷酸化组蛋白H3(pH3)。当细胞周 期从G2期转换到M期时，染色质上的组蛋 白H3Ser10发生磷酸化，并在有丝分裂后 快速的去磷酸化。由此组蛋白H3的丝氨 酸磷酸化变化将停留在G2期的细胞与M期 的分裂细胞区分开来。
遍，放回原位；洗涤液瓶若已空或将空请补满（ICF：ddH2O=1：4）。 实验台面保持整洁，废物缸请及时倒掉。自己的东西实验后请收走，
流式专用的物品请不要带走。 做完请记得登记。 每周在周一进行一次easycheck。
（自己在做实验之前也可进行easycheck，流程见下面。）
easycheck
2.2 DNA含量检测与周期分析
2.2.1 DNA倍体分析——PI染色法 2.2.2 S期特异性检测 2.2.3 M期特异性检测
2.2.1 DNA倍体分析——PI染色法
基本原理：
细胞周期与DNA含量变化极其FCM分析直方图
H
A
W
结果分析
——Guava原软件分析
Red-A
Red-A
Red-W
Red-W
正常细胞 凋亡细胞
488nm
+
-
+
-++
+
-+
590nm
488nm +
-+
529nm
结果分析
用488nm激发，黄光和绿光通道收集荧光信号，调补偿纠正绿色荧光（单体） 和黄色荧光（聚合物）的重叠部分。线粒体膜电位采用比例法，即根据绿色 荧光与黄色荧光阳性百分率之比。
Ratio=G.M./Y.M.
比值升高，膜电位降低，膜受损。
在用第三方软件分析之前，请将流式结果按如下所示导出。
结果分析
——Modfit软件分析
结果分析
——Modfit软件分析
图片拷贝：直接Ctrl+C
结果分析
——Flowjo软件分析
2.2.2 S期特异性检测
S期DNA合成期，S期的比例增多往往与细胞 分裂的活跃程度相关。传统的PI染色可以通过 DNA的倍增区分G1期与G2/M期。S期则因界 限不明显，难以区分。若需要准确的统计S期 的变化，需要加入S期的特异性标志，即BrdU。 BrdU只在DNA合成时被掺入核酸，是指示 DNA复制的金标准。因此可通过BrdU-Alex Fluor® 488与PI复染将S期准确的区分开来。
PI
Annexin Ⅴ-FITC
PI/Annexin Ⅴ-FITC
荧光交叠
荧光补偿原理
荧光补偿
AnnexinⅤ -FITC单染
优缺点：
2.1.3 线粒体膜电位法
基本原理：
线粒体膜电位下降是细 胞凋亡早期的一个标志 性事件。
JC-1：亲脂性阳离子荧 光染料，特异性地与线 粒体内膜结合，膜电位 高时呈聚合体，膜电位 低时呈单体。
可记录阳性细胞百分率（近似值）或平均荧光 强度或弱阳性；
允许阴性对照非特异性荧光信号（假阳性率） 高些，但阳性细胞百分率（近似值）应减去假 阳性率。
样本管峰形整体右移。在排除非特异性染色的情况下（如设置严格 的对照、调节抗体浓度等），方能进行分析。
正常细胞：膜完整，PS不外翻——PI-/AnnexinⅤ凋亡早期：膜完整，PS翻转——PI-/AnnexinⅤ+ 凋亡晚期：PS外翻，膜通透性增加——PI+/AnnexinⅤ+ 坏死细胞：膜严重破损，PS不外翻——PI+/AnnexinⅤ+
几乎不存在膜结构——PI+/AnnexinⅤ-
结果分析
阴性对照