细胞培养基种类与基本成分
细胞培养基成分
细胞培养基成分一、基础成分细胞培养基的基础成分包括无机盐、氨基酸、糖类和维生素。
无机盐是细胞生长所必需的，它们提供了细胞代谢所需的离子和微量元素。
常见的无机盐有氯化钠、磷酸盐、硫酸盐等。
氨基酸是蛋白质的构成单元，细胞需要氨基酸才能合成新的蛋白质。
糖类是细胞的能量来源，常用的糖类有葡萄糖、果糖等。
维生素是细胞生长所需的有机物质，它们参与了细胞的代谢和生长过程。
二、生长因子生长因子是细胞培养基中的重要组成部分，它们能够刺激细胞增殖和分化。
常见的生长因子有表皮生长因子（EGF）、基础生长因子（bFGF）、血小板源性生长因子（PDGF）等。
这些生长因子能够与细胞表面的受体结合，通过激活细胞内的信号通路，促进细胞的生长和发育。
三、血清血清是细胞培养基中的一种复杂液体，它包含了多种生长因子、激素、维生素等。
血清可以提供细胞所需的多种营养物质，促进细胞的生长和增殖。
然而，血清中的成分非常复杂，含有大量的未知因素，因此在某些研究中需要使用无血清培养基来避免血清的干扰。
四、胶原蛋白和基质胶原蛋白和基质是细胞培养基中的一种重要成分，它们能够提供细胞附着的支持和结构。
胶原蛋白是一种结构蛋白，能够形成纤维状的网络，提供细胞附着的基础。
基质则是一种细胞外基质，它包含了多种细胞黏附蛋白和分泌物，能够模拟细胞所在的体内环境，促进细胞的生长和分化。
五、抗生素和抗菌剂在细胞培养过程中，为了防止细胞感染和污染，常常向培养基中添加抗生素和抗菌剂。
抗生素能够抑制细胞培养中的细菌和真菌的生长，保证培养基的无菌状态。
常用的抗生素有青霉素、链霉素等。
抗菌剂则能够抑制细胞培养中的细菌的生长，常用的抗菌剂有氨苄西林、庆大霉素等。
细胞培养基的成分非常复杂，它们共同作用，为细胞的生长和发育提供了必要的条件。
在细胞培养实验中，选择合适的培养基成分对于细胞的研究非常重要。
不同类型的细胞可能需要不同的培养基成分，因此研究人员需要根据实际需要进行调整和优化。
细胞培养基成分
细胞培养基成分细胞培养基是一种为细胞生长和繁殖提供必要营养和环境的液体或凝胶。
它具有多种成分，包括无机盐、有机物、生长因子等。
下面将以细胞培养基的成分为标题，分别介绍每个成分的作用和意义。
一、无机盐无机盐是细胞培养基中的重要成分，它们提供细胞所需的微量元素和离子平衡。
无机盐包括氯化物、磷酸盐、硫酸盐等。
其中，氯化物提供细胞内外的离子平衡，磷酸盐参与能量代谢和核酸合成，硫酸盐在蛋白质合成中起重要作用。
二、有机物有机物是细胞培养基中的另一个重要成分，它们提供碳源、能量和细胞所需的有机分子。
有机物包括葡萄糖、氨基酸、核酸等。
葡萄糖是细胞的主要能量来源，氨基酸是蛋白质合成的基本单元，核酸是DNA和RNA的组成成分。
三、生长因子生长因子是细胞培养基中的一类特殊成分，它们能够促进细胞的生长和分裂。
生长因子包括细胞因子、激素和血清等。
细胞因子是一类蛋白质，能够通过与细胞表面受体结合来调节细胞的生长和分化。
激素是一类分泌于内分泌腺的生物活性物质，它们能够通过血液循环传递到靶细胞，并调节细胞的生理功能。
血清是从血液中提取的一种复杂的液体，其中含有多种生长因子和细胞因子，能够促进细胞的生长和分化。
四、缓冲剂缓冲剂是细胞培养基中的一类重要成分，它们能够维持培养基的pH 值稳定。
常用的缓冲剂有Hepes、Tris等。
缓冲剂能够吸收或释放氢离子，从而稳定培养基的酸碱度，为细胞提供一个适宜的生长环境。
五、抗生素和抗真菌药物抗生素和抗真菌药物是细胞培养基中的一类添加剂，它们能够抑制细菌和真菌的生长。
常见的抗生素有青霉素、链霉素等，常见的抗真菌药物有氨基甲酸盐、克霉唑等。
在细胞培养过程中，添加适量的抗生素和抗真菌药物可以避免细菌和真菌的污染，保证细胞的纯度和健康状态。
细胞培养基中的这些成分共同作用，为细胞的生长和繁殖提供了必要的条件。
无机盐提供了细胞所需的微量元素和离子平衡，有机物提供了碳源、能量和有机分子，生长因子促进了细胞的生长和分裂，缓冲剂稳定了培养基的酸碱度，抗生素和抗真菌药物防止了细菌和真菌的污染。
动物细胞的培养条件和培养基
• 2、合成培养基：优点是成分明确，组分稳定，可 大量生产供应。动物细胞培养中常用的有BME、 MEM、DMEM、HAM F12、RPMI 1640以及 ISOCOV、199和McCoy等。
• 缺点：无法替代一些未知成分。 • 解决途径合成培养基中添加小牛血清，彼此互补
的胎牛血清。
• 血清的作用机制可能为：（1）提供有利于细胞生 长增殖所需要的各种生长因子和激素；（2）提供 有利于细胞贴壁所需要的贴附因子和伸展因子； （3）提供可识别金属、激素、维生素和脂类的结 合蛋白；（4）提供细胞生长所必须的脂肪酸和微 量元素。
• 3、无血清培养基
• 无血清培养基的优点如下：①提高了细胞培养的可 重复性，避免，避免了由于血清批之间差异的影响； ②减少了由血清带来的病毒、真菌和支原体等微生 物污染的危险；③供应充足、稳定；
动物细胞的培养条件和培养基
• 为了使细胞培养在体外培养成功，需要一些 基本条件：
（1）绝对无菌操作； （2）足够的营养供应，排除有害物质包括极其
微量的离子掺入； （3）适量氧气供应；
（4）随时清除细胞代谢中产生的有害产物； （5）有良好的适于生存外界环境，包括pH、渗透
压和离子浓度等； （6）及时分种，保持合适的细胞密度。
6、空气
二、动物细胞培养基的 种类和组成
• 细胞种系不同对培养基的要求亦有差异，主要 有三类：天然培养基、合成培养基和无血清培 养基。 1、天然培养基：在细胞培养的早期阶段使用的 培养基，主要为来自天然的材料如血浆凝块、 血清、淋巴液、胚胎浸液以及羊水、腹水等。
• 优点：营养价值高 • 缺点：成分复杂、来源有限、成本较高
细胞培养各种培养基简介
DMEM、RIPA1640、F12、L15等细胞培养基的基本知识培养细胞的完全培养基由基础培养基（如MEM）和添加剂（如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子）组成，培养基的配方一直在改进，其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等。
一、基础培养基绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。
最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。
而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另外常规含有无机盐和代谢添加剂（例如核苷酸）。
MEM/F12 这两种培养基各取1/2，形成神经生物学最通用的培养基。
Dulbecco`s改良培养基——DMEM，现应用于快速生长的细胞，同MEM 含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。
选择某种培养基，应仔细了解成分表，应知道大多数情形下培养基都有不足。
例如，有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸，而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域，但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言，则并非最佳选择，特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。
F12中含有硫酸亚铁，据报道也有神经毒效应。
在所有这些培养基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度，这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。
对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸（若培养基中这两种物质缺乏时）。
MEM与F12均要用5%的CO2来平衡，DMEM含更高浓度的NaCO3，要用10%的CO2来平衡，当然也可以在较低CO2浓度下使用。
这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的，但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。
原则上，HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。
实际操作中并非如此简单。
显然，溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。
DMEM等细胞培养基的基本知识
DMEM、RIPA1640、F12、L15等细胞培养基的基本知识培养细胞的完全培养基由基础培养基（如MEM）和添加剂（如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子）组成，培养基的配方一直在改进，其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等。
一、基础培养基绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。
最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。
而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另外常规含有无机盐和代谢添加剂（例如核苷酸）。
MEM/F12 这两种培养基各取1/2，形成神经生物学最通用的培养基。
Dulbecco`s 改良培养基——DMEM，现应用于快速生长的细胞，同MEM含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。
选择某种培养基，应仔细了解成分表，应知道大多数情形下培养基都有不足。
例如，有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸，而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域，但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言，则并非最佳选择，特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。
F12中含有硫酸亚铁，据报道也有神经毒效应。
在所有这些培养基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度，这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。
对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸（若培养基中这两种物质缺乏时）。
MEM与F12均要用5%的CO2来平衡，DMEM含更高浓度的NaCO3，要用10%的CO2来平衡，当然也可以在较低CO2浓度下使用。
这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的，但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。
原则上，HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。
实际操作中并非如此简单。
显然，溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。
细胞培养基种类及用途
细胞培养基种类及用途1. DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）：DMEM 是最常用的无血清培养基之一，是以鹰的鸟胚为基础改进而来的，含有大量氨基酸、糖类、维生素和一些重要的生长因子。
适用于大多数哺乳动物细胞的培养，具有优良的细胞增殖和生长效果。
2.RPMI1640：RPMI1640是一种由罗斯韦尔公立医院制备的细胞培养基，主要用于淋巴细胞、淋巴瘤和骨髓细胞的培养。
它具有高浓度的氨基酸和维生素，适合长期的培养以及体外细胞繁殖实验。
3. MEM（Minimum Essential Medium）：MEM 是一种最简单的细胞培养基，含有大量的必需氨基酸、维生素和果糖。
它广泛用于原代细胞和肿瘤细胞的培养，具有适应性强、成本低的优势。
4. FBS（Fetal Bovine Serum）：FBS 不是一种细胞培养基，而是培养基中添加的血清。
FBS 富含细胞生长因子、激素和营养物质，可提供所需的细胞补体和血浆蛋白。
它被广泛用于细胞培养中，可以促进细胞的增殖和生长。
5. StemPro MSC SFM：StemPro MSC SFM 是一种专门设计用于人类间充质干细胞（MSC）培养的无血清培养基。
它富含生长因子和维生素，可以维持 MSC 的干性状态，有利于其增殖和多向分化。
6. Neurobasal medium：Neurobasal 是一种特殊的神经元细胞培养基，用于神经元细胞的培养。
它含有许多神经营养因子和激素，能够促进神经细胞的生长和分化。
7.DMEM/F12：DMEM/F12是一种混合型细胞培养基，是DMEM和HAMF12培养基的混合产物。
它具有增强细胞的生存能力和增殖速度的优势，适用于许多类型的肿瘤细胞和原代细胞的培养。
细胞培养基的选择要根据具体实验目的和细胞类型来确定。
不同种类的细胞培养基在细胞生长、增殖和分化方面有不同的影响，因此合理的选择细胞培养基可以提高实验效果和数据可靠性。
微生物培养基及其成分介绍
微生物培养基及其成分介绍培养基通常指人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养物质。
广义上说，凡是支持微生物生长和繁殖的介质或材料均可以作为微生物的培养基。
培养基的种类繁多，因考虑的角度不同，可将培养基分成以下一些类型：天然培养基：利用生物组织、器官及其抽取物或制品配成；根据对培养基成分了解的程度合成培养基：使用成分完全了解的化学药品配制而成；半合成培养基：由部分天然材料和部分已知的纯化学药品组成液体培养基：各营养成分按一定比例配制而成的水溶液或液体状态的培养基；根据培养基物理状态固体培养基：液体培养基中加入一定量的凝固剂配制而成的固体状态的培养基；半固体培养基：琼脂加入量为0.2%-0.5%而配制的固体状态的培养基；种子培养基：适合微生物菌体生长的培养基；培养基根据培养的目的发酵培养基：用于生产预定发酵产物的培养基；繁殖培养基：主要用于菌种保藏，大部分情况下就是斜面培养基；保藏培养基：主要用于菌种保藏，大部分情况下就是斜面培养基；基本培养基：能满足某菌种的野生型菌株最低营养要求的合成培养基；加富培养基：在普通培养基中加入血、血清、动（植）物组织液或其他营养物质（或生长因子）；选择培养基：根据某种或某类微生物的特殊营养要求，或对某些物理、化学条件的抗性而设计的培养基；根据培养基的特殊用途鉴别培养基：在培养基中添加某种或某些化学试剂后，某种微生物生长过程中产生的特殊代谢产物会与加入的这些化学物反应，并出现明显的特征性变化，从而使其与其他微生物区别开来；测定生理生化特性的培养基：鉴定微生物时，为了观察微生物的培养特征或测定生理生化反应而采用的培养基；税则品目3821项下制成的微生物培养基包括能为细菌、真菌、病原菌、病毒及其他微生物提供营养及繁殖条件的各类制剂，通常是用肉汁、鲜血或血清、蛋、土豆、藻酸盐、琼脂、胨、明胶等配制而得的，但不包括未制成培养基的产品。
现介绍几种常见的配制培养基用的物质及其归类。
培养基配方及配置
培养基配方及配置培养基是一种提供养分和条件给细胞、组织或微生物生长和繁殖的人工环境。
不同种类的细胞或微生物，需要不同的培养基来满足其生长和繁殖的需求。
下面将介绍细胞和微生物培养基的配方及配置方法。
1.培养基配方：不同细胞或微生物的培养基配方各有不同，下面是常用的细胞培养基的配方示例：-DMEM培养基配方：Dulbecco’s Modified Eagle Medium（DMEM）是一种广泛应用于动物细胞培养的基础培养基。
其主要成分包括：- 无铁媒介物（Iron Medium）：DMEM中通常包含高浓度的铁盐，例如铁氯化物。
- 糖类（Glucose）：DMEM中通常包含葡萄糖，用于提供能量供细胞代谢。
- 氨基酸（Amino acids）：DMEM中包含多种氨基酸，用于蛋白质的合成。
- 维生素（Vitamins）：DMEM中通常添加B族维生素和其他必需维生素。
- 盐类（Salts）：DMEM中含有多种无机盐，例如氯化钠、磷酸盐等。
- 缓冲液（Buffer）：DMEM中的缓冲液用于维持培养基的pH值。
- 补充物（Supplements）：DMEM中可添加血清、激素和生长因子等提供细胞生长所需的物质。
-LB培养基配方：大肠杆菌（Escherichia coli）的最常用培养基是Luria-Bertani （LB）培养基。
其主要成分包括：- 蛋白质源（Protein source）：LB培养基中通常添加琼脂和酵母提取物作为蛋白质源。
- 碳源（Carbon source）：LB培养基中添加葡萄糖等碳源供菌落生长所需。
- 盐类（Salts）：LB培养基中含有多种无机盐，例如氯化钠、磷酸盐等。
- 缓冲液（Buffer）：LB培养基的缓冲液用于维持培养基的pH值。
- 抗生素（Antibiotics）：LB培养基中添加抗生素，用于选择性培养目标菌株。
- 补充物（Supplements）：在LB培养基中还可以添加亲水胶体、氧化还原剂等。
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(1)需要长期保存的血清必须储存于-20C-70C低温冰箱中。4C冰箱中保存 时间切勿超过1个月。由于血清结冰时体积会增加约10%，因此，血清在冻入 低温冰箱前，必须预留一定体积空间，否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。
(5)切勿将血清在37C放置太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中的有效成 分会破会而影响血清质量。
(6)血清中的沉淀物絮状物：主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维
蛋白造成，这些絮状物不会影响血清本身的质量。可用离心3000rpm,5分钟去
除，也可不用处理。
显微镜下 小黑点”经过热处理过的血清，沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀 物在显微镜下观察象 小黑点”常误认为血清受污染。一般情况下，此小黑点不 会影响细胞生长，但如果怀疑血清质量，则应立即停止使用，更换另一批号的血 清。
(2)一般厂商提供的血清为无菌，无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物，则 可将血清加入培养液内一起过滤，切勿直接过滤血清。
(3)瓶装血清解冻需采用逐步解冻法：-20C至-70C低温冰箱中的血清放入4C冰箱中溶解1天。然后移入室温，待全部溶解后再分装。在溶解过程中需不 断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。切
2、MEM细胞培 养基
又称低限量Eagle培养基 (Minimal Essential Medium) ，1959年在Eagle's基础 培养基(BME)上修改而来，删去赖氨酸、生物素，氨基酸浓度增加，适合多 种细胞单层生长，有可高压灭菌品种，是一种最基本、试用范围最广的培养基， 但因其营养成分所限，针对生产之特定细胞培养与表达时， 并不一定是使用效果 最佳或者最经济的培 养基。
&HamF10细胞培 养基
1963年Ham设计，含微量元素，可在血清含量低时用，适用于克隆化培养。F10适用于仓鼠、人二倍体细胞，特适于羊水细胞培养。
7、DMEM/F12细胞培 养基
Ham's F12是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的，现在也广泛应用于克 隆形成率的分析及原代培养。F12还可以与DMEM等体积混合使用，得到一种 高浓度与成分多样化相结合的产物，这种培养基已应用于许多原代培养及更难养 的细胞系的培养。由于营养成分丰富，且可以使用较少血清，故也常作为无血清 培养基的基础培养基。
10、L15细胞培 养基
L-15培养液适用于快速增殖瘤细胞的培养，用于在C02缺乏的情况下培养肿瘤 细胞株。此培养液采用磷酸盐缓冲体系， 氨基酸组成进一步改良，并由半乳糖替 代了葡萄糖。
培养基成分
细胞培养基的种类很多，按其来源分为合成培养基和天然培养基 (目前使用的培 养基绝大部分是合成培养基)，按其物质状态分为干粉培养基和液体培养基两类。 干粉培养基需由实验者自己配制并灭菌，液体培养基由专业商家提供，用户可直
极易氧化。分子量为78.13，纯的2-Me是一种无色有刺激味的液体，比重为1.110-1.120(Do20),常用终浓度为5X10-5M。常配制成0.1M的储存液，用时每 升培养液加0.5ml。
液体培养基保存：
液体培养基应于4C冰箱避光保存，实验前放入37E预热。未加血清液体培养基 有效期为12个月。液体培养基中的L-谷氨酰胺会随着储存时间的延长而慢慢分 解。如果细胞生长不良，可以再添加适量L-谷氨酰胺。
5、RPMI-1640细胞培 养基
Moore等人于1967年在Roswell Park Memorial Institute研制，针对淋巴细胞培养 设计，含BSS+21种氨基酸+维生素11种等。现也用于悬浮细胞培养，如哺乳 动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培养，其它像
K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。
2-Me)。2-Me对细胞生长有很重要的作用。有人认为它相当于胎牛血清，有直 接刺激细胞增殖作用。2-Me的活性部分是硫氢基，其中一个重要作用是使血清 中含硫的化合物还原成谷胱甘肽，能诱导细胞的增殖，为非特异性的激活作用。 同时避免过氧化物对培养细胞的损害。另一个重要作用是促进分裂原的反应和DNA合成，增加植物凝集素(PHA)对淋巴细胞的转化作用，已广泛应用于杂交 瘤技术，另外，也开始用于一些难以培养的细胞。2-Me是一种小分子还原剂，
勿直接将血清从-20C进入37E解冻，这样因温度改变太大，容易造成蛋白质凝 集而出现沉淀。
(4)热灭活是指56°C,30分钟加热已完全解冻的血清。加热过程中須規則搖晃 均勻。此热处理的目的是使血清中的补体成分(compleme nt)灭活。除非必须， 一般不建议作此热处理，因为热处理会造成血清沉淀物显著增多， 而且还会影响 血清的质量。补体参与反应有：细胞毒作用，平滑肌细胞收缩，肥大细胞和血小 板释放组胺,增强吞噬作用，促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化。
至于选择何种培养基并没有一定的标准，有几点建议可供参考：
(1)建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞首选的培养基。]
(2)其它实验室惯用的培养基不妨一试，许多培养基可以适合多种细胞。
⑶根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如小鼠细胞株多选RPMI1640
⑷用多种培养基培养目的细胞，观察其生长状态，可以用生长曲线、集落形成 率等指标判断，根据实验结果选择最佳培养基，这是最客观的方法，但比较繁琐
接使用，非常方便。
1、合成培养基的主要成分有：氨基酸、碳水化合物、无机盐、维生素及其它辅 助物质：
氨基酸
氨基酸是组成蛋白质的基本单位。 不同种类的细胞对氨基酸的要求各异， 但有几 种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养液提供，这几种氨基酸称为必需氨基 酸。其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时， 细胞生长不良而死亡。因此，各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。但是，由于 谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20C冰箱中保存，在使用前加入培养液内。 已含谷氨酰胺的培养液在4C冰箱中储存2周以上时，还应重新加入原来量的谷 氨酰胺。
作为pH指示剂，酸性培养液呈橙黄色，碱性培养液呈深红色。
维生素
在细胞培养中，尽管血清是维生素重要来源，但是许多培养基中添加了各种维
生素以适合更多的细胞系其它一些成分。如在杂交瘤技术中常用的
DMEM培养液，使用时还需要补加丙酮酸钠和2-巯基乙醇(2-Mercaptoethanol,
缓冲系统
大多数细胞所需pH在7.2- 7.4。但是，细胞培养最适pH值随培养的细胞种类 不同而不同。成纤维细胞喜欢较高pH (7.4-7.7),而传代转化细胞系则需要偏酸pH (7.0- 7.4)。
由于多数培养液靠碳酸氢钠(NaHCO3)与CO2体系进行缓冲，因此，气相中 的CO2浓度应与培养液中碳酸氢钠浓度相平衡。如果气相或培养箱空气中CO2浓度设定在5%，培养液中NaHCO3的加入量为1.97g/L;如果CO2浓度维持 在10%，培养液中NaHCO3的加入量为3.95g/L。
细胞培养基种类与基本成分
是应用最广泛的培养基。其他 如M199、IMDM、L15培养基等也用于某些 细胞的培养。其具体的特征及应用如下：
1、BME细胞培 养基
基础Eagle培养基 (Basal Medium Eagle)，1955年Eagle设计，BSS+12种氨 基酸+谷氨酰胺+8种维生素。简单、便于添加，适于各种传代细胞系和特殊研 究用，在此基础上改良的细胞培养基品种有MEM、DMEM、IMDM等。
4、IMDM细胞培 养基
Guilber和Iscove将Dulbecco' Medium改良为Iscove's Medium,用于培养红细胞
和巨噬细胞前体。此种培养液含有硒、额外的氨基酸和维生素、丙酮酸钠和
HEPESo并用硝酸钾取代了硝酸铁。IMDM还能够促进小鼠B淋巴细胞，LPS刺激的B细胞，骨髓造血细胞，T细胞和淋巴瘤细胞的生长。IMDM为营养非 常丰富的培养液，因此可以用于高密度细胞的快速增殖培养。
细胞培养瓶盖不应拧得太紧，以保证气体交换。HEPES是一种非离子缓冲液，
在pH 7.2-7.4范围内具有较好的缓冲能力，但是非常昂贵，在高浓度时对一些 细胞可能有毒。HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠(0.34g/L)共用，以抵消因 额外加入HEPES引起的渗透压增加。在这种培养条件下，细胞培养瓶的盖子应 拧紧，以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中。大多数培养液中含有酚红
碳水化合物
碳水化合物是细胞生长主要能量来源， 其中有的是合成蛋白质和核酸的成分。 主 要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等。
无机盐
培养液中无机盐的主要功能是帮助细胞维持渗透压平衡。此外，通过提供钠，钾
和钙离子，帮助细胞调节细胞膜功能。培养液的渗透压是一个非常重要的因素，
细胞通常可耐受260mOsm/kg〜320mOsm/kg。标准培养液的渗透压在此范围内 波动。特别注意：向培养液中加入其它物质有可能会明显改变培养液的渗透压， 特别是溶于强酸或强碱中的物质。向培养液中添加HEPES时需按以下方法调节 钠离子浓度。
这就是大家常说的低糖和高糖了。
低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞 培养。高糖更适合高密度悬浮细胞培养， 也适用于附着性较差，但又不希望它脱 离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细 胞的培养。例如CHO细胞表达生产乙肝疫苗、CHO细胞表达EPO。
3、DMEM细胞培 养基
DMEM是由Dulbecco改良的Eagle培养基, 起初是为小鼠成纤维细胞设计的。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍，维生素浓度是MEM的4倍，采用双倍 的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。最初的配方中葡萄糖含量为1000mg/L,后来为了某些细胞的生长需要，将葡萄糖含量又调整为4500mg/L,