基础培养基种类
基础培养基的制备
1.灭菌器内加入一定量的水，将包扎好的物品放入其中。 封盖。
2.接通电源，进行加热。 3. 排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大 气后关闭排气阀。
4.当压力达15bl/in2（即1.05kg/cm2）时，此时灭菌器 内的温度为1210C，维持15～20min。
• 不加氮源的无氮培养基： 分离固氮菌
• 不加含碳有机物的无碳培养基： 分离自养型微生物
• 加入青霉素等抗生素的培养基： 分离导入的目的基因的受体细胞
• 加入氨基嘌呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基： 分离杂交瘤细胞
五、培养基配制的一般程序
• 称量：按照配方正确称取各种原料放于烧杯中。
• 溶化：在烧杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。
应用微生物与免疫学
一、目的要求
• 了解配制培养基的基本程序，熟悉基础培养 基的配制原则和制备方法。
• 掌握肉汤培养基、普通琼脂培养基的制备及 用途。
二、实验原理
• 培养基为人工培养微生物而制备的、提供适合微生物生长、 繁殖或积累代谢产物的营养基质。
• 人工制造适宜的培养基并给予合适的温度、气体等培养条 件，即能使细菌等微生物在体外迅速生长繁殖。
按培养基 配方称量
加水加 热熔化
调节 pH值
过滤
分装 包装
灭菌
检查灭菌 彻底与否
六、实验内容
（一）材料： • 药品：牛肉膏、蛋白胨、琼脂、氯化钠等。
• 高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱。 • 其它： 1N NaOH、天平、牛角匙、电炉、pH试纸、烧杯、
量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、三角瓶、带棉塞的试管、培 养皿、吸管、各种包装纸、绳索、标签等。
5.灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打 开排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品。
细胞培养各种培养基简介
DMEM、RIPA1640、F12、L15等细胞培养基的基本知识培养细胞的完全培养基由基础培养基（如MEM）和添加剂（如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子）组成，培养基的配方一直在改进，其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等。
一、基础培养基绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。
最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。
而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另外常规含有无机盐和代谢添加剂（例如核苷酸）。
MEM/F12 这两种培养基各取1/2，形成神经生物学最通用的培养基。
Dulbecco`s改良培养基——DMEM，现应用于快速生长的细胞，同MEM 含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。
选择某种培养基，应仔细了解成分表，应知道大多数情形下培养基都有不足。
例如，有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸，而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域，但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言，则并非最佳选择，特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。
F12中含有硫酸亚铁，据报道也有神经毒效应。
在所有这些培养基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度，这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。
对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸（若培养基中这两种物质缺乏时）。
MEM与F12均要用5%的CO2来平衡，DMEM含更高浓度的NaCO3，要用10%的CO2来平衡，当然也可以在较低CO2浓度下使用。
这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的，但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。
原则上，HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。
实际操作中并非如此简单。
显然，溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。
细胞培养基种类与基本成分
(1)需要长期保存的血清必须储存于-20C-70C低温冰箱中。4C冰箱中保存 时间切勿超过1个月。由于血清结冰时体积会增加约10%，因此，血清在冻入 低温冰箱前，必须预留一定体积空间，否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。
(5)切勿将血清在37C放置太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中的有效成 分会破会而影响血清质量。
(6)血清中的沉淀物絮状物：主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维
蛋白造成，这些絮状物不会影响血清本身的质量。可用离心3000rpm,5分钟去
除，也可不用处理。
显微镜下 小黑点”经过热处理过的血清，沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀 物在显微镜下观察象 小黑点”常误认为血清受污染。一般情况下，此小黑点不 会影响细胞生长，但如果怀疑血清质量，则应立即停止使用，更换另一批号的血 清。
(2)一般厂商提供的血清为无菌，无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物，则 可将血清加入培养液内一起过滤，切勿直接过滤血清。
(3)瓶装血清解冻需采用逐步解冻法：-20C至-70C低温冰箱中的血清放入4C冰箱中溶解1天。然后移入室温，待全部溶解后再分装。在溶解过程中需不 断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。切
2、MEM细胞培 养基
又称低限量Eagle培养基 (Minimal Essential Medium) ，1959年在Eagle's基础 培养基(BME)上修改而来，删去赖氨酸、生物素，氨基酸浓度增加，适合多 种细胞单层生长，有可高压灭菌品种，是一种最基本、试用范围最广的培养基， 但因其营养成分所限，针对生产之特定细胞培养与表达时， 并不一定是使用效果 最佳或者最经济的培 养基。
基础培养基种类
基础培养基种类
基础培养基是生物实验室中保持细胞或微生物生长、生活活动所必
需的培养基质。
常见的基础培养基主要有以下几种类型：
1. LB培养基
LB（Luria Broth）培养基是一种用于细菌培养的营养丰富的液态培养基。
其成分包括蛋白胨、酵母粉和氯化钠等，能够提供细菌所需的碳源、氮源和矿物质等。
LB培养基适用于大多数细菌的培养，是细菌学
研究中最基础的培养基。
2. YPD培养基
YPD培养基是一种适用于酵母细胞的培养基。
其成分包括葡萄糖、酵
母粉和氯化钠等，能够提供酵母细胞所需的能量和营养物质。
YPD培
养基适用于酵母菌的培养、繁殖和转化。
3. DMEM培养基
DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）培养基是一种适用于哺乳
动物细胞的培养基。
其成分包括葡萄糖、氨基酸、维生素和矿物质等，能够提供细胞所需的营养和生长因子。
DMEM培养基适用于多种哺乳
动物细胞的培养、繁殖和传代。
4. M9培养基
M9培养基是一种用于细菌培养的最小培养基。
其成分包括氨基酸、糖
类和矿物质等，能够提供细菌所需的最基本营养。
M9培养基适用于对
细菌基本营养需求进行研究和筛选特定基因的细菌。
5. SD培养基
SD（Synthetic Defined）培养基是一种适用于酵母细胞的最小培养基。
其成分包括氨基酸、糖和矿物质等，能够提供酵母细胞所需的最基本营养。
SD培养基适用于研究酵母细胞的基本生理过程和筛选突变株。
DMEM等细胞培养基的基本知识
DMEM、RIPA1640、F12、L15等细胞培养基的基本知识培养细胞的完全培养基由基础培养基（如MEM）和添加剂（如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子）组成，培养基的配方一直在改进，其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等。
一、基础培养基绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。
最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。
而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另外常规含有无机盐和代谢添加剂（例如核苷酸）。
MEM/F12 这两种培养基各取1/2，形成神经生物学最通用的培养基。
Dulbecco`s 改良培养基——DMEM，现应用于快速生长的细胞，同MEM含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。
选择某种培养基，应仔细了解成分表，应知道大多数情形下培养基都有不足。
例如，有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸，而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域，但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言，则并非最佳选择，特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。
F12中含有硫酸亚铁，据报道也有神经毒效应。
在所有这些培养基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度，这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。
对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸（若培养基中这两种物质缺乏时）。
MEM与F12均要用5%的CO2来平衡，DMEM含更高浓度的NaCO3，要用10%的CO2来平衡，当然也可以在较低CO2浓度下使用。
这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的，但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。
原则上，HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。
实际操作中并非如此简单。
显然，溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。
研究报告实验二细菌培养与代谢产物检查
实验二细菌培养与代谢产物检查【目的】①学习并初步掌握基础培养基制备方法。
②了解细菌生长繁殖所需要营养以及常用培养基的种类和用途。
③了解细菌所具有的不同生化反应及代谢产物，以利细菌的鉴定和鉴别。
④规范地进行无菌操作。
一、基础培养基的制备(一)培养基的制作程序培养基制作的一般程序：准确称量培养基的各种成分→混合溶解→测定及矫正pH→分装、包装→灭菌→检定→保存备用。
(二)常用培养基的种类按培养基的作用分为：①基础培养基：含有细菌需要的最基本营养成分(蛋白胨1％，牛肉膏0.3％，氯化钠0.5％，用蒸馏水溶解)。
按其性状不同可分为：(1)肉汤培养基。
(2)普通琼脂培养基。
分斜面和平板培养基，内含2～3％的琼脂，呈固体状。
(3)半固体培养基，含0.2～0.5％的琼脂。
②营养培养基：供营养要求较高的细菌用，如血琼脂培养基(在普通琼脂培养基中加入5％～10％的脱纤维动物血)。
③选择培养基：如SS琼脂培养基，可选择性抑制非病原菌生长，有利于分离病原菌。
④鉴别培养基：如含铁双糖培养基，用以鉴定细菌。
⑤厌氧培养基：如庖肉培养基，用以培养厌氧菌。
(三)基础培养基的制备过程1、肉汤(肉浸液)培养基【材料】牛肉、蛋白胨、氯化钠、水(蒸馏水或自来水)、NaOH溶液(1N和N／10)、0.02％酚红指示剂、吸管等。
【方法】①取新鲜瘦牛肉，除去脂肪及筋膜，切成小块后用绞肉机绞碎，每500g碎肉加水1000ml，混合置4℃冰箱过夜(使营养物质即溶解性蛋白质充分渗出)。
②次日取出煮沸半小时左右，使肉渣蛋白质全部凝固；加热过程中不时地用玻璃棒搅拌，以免沉淀烧焦。
也可不放置冰箱过夜，直接煮沸1小时。
③用数层纱布过滤，弃去肉渣(肉渣中的液体应尽量挤净)，于滤液中加入1％蛋白胨及0.5％氯化钠，加热溶解，并补足失水至1000ml。
④冷却到50℃在右，以N／10 NaOH调至pH值7.6～7.8。
⑤待pH矫正后，再加热10min，使肉汤中部分蛋白质等因加碱及再度加热而凝固沉淀。
新教材高中生物第章发酵工程第节发酵工程的培养基教师用书苏教版选择性必修
第一节发酵工程的培养基课标内容要求核心素养对接举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物。
生命观念：掌握培养基的分类、成分与作用，能根据微生物的类型与特点选择正确的培养基。
科学思维：归纳概括培养基的主要类型、特点及应用。
科学探究：掌握培养基的配制方法，并能科学地选用和设计适合微生物生长需求的培养基。
一、培养基的类型和基础培养基1．培养基的类型(1)培养基的定义培养基主要是指为人工培养微生物等而制备的，适合微生物等生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质。
(2)培养基的类型、特点及应用划分依据培养基种类特点用途(实例)培养基的成分天然培养基(由动植物组织或微生物细胞以及它们的提取物或粗消化物配制而成)优点：取材便利、营养丰富、配制简便缺点：营养成分难以控制、实验结果的重复性较差适用于工业化生产合成培养基(由准确称量的高纯度化学试剂加蒸馏水配制而成)优点：化学成分及其含量明确、实验的可重复性好缺点：配制过程繁琐，成本较高多用于研究和育种物理性质固体培养基加一定量的凝固剂(如：琼脂)接种、保存和培养微生物半固体培养基加少量凝固剂液体培养基不加凝固剂菌种的扩大培养、工业生产用途基础培养基(一般含有水、碳源、氮源、无机盐等)提供大多数微生物对营养条件的基本需求牛肉膏蛋白胨培养基特殊培养基(以基础培养基为基础)提供特殊用途选择培养基、鉴别培养基、加富培养基2．基础培养基的成分(1)碳源：构成微生物体的重要成分，也是微生物生命活动的能量来源。
主要包括葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、淀粉和纤维素等。
(2)氮源：构成微生物细胞中蛋白质和核酸的主要元素。
可分为有机氮源(豆饼粉、牛肉膏、蛋白胨、酵母粉等)和无机氮源(硝酸盐、铵盐等)。
(3)无机盐：培养基的重要成分，是微生物生长繁殖和合成多种代谢产物所必需的营养物质。
微生物根据需要从培养基摄取磷酸盐等必要的无机盐。
二、特殊培养基1．特殊培养基的种类(1)选择培养基①用途：将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来。
常用基本培养基的特点
常用培养基的特点
（1）MS培养基：是1962年由Mnrashige和Skoog为培养 烟草细胞而设计的。特点是无机盐和离子浓度较高，为较 稳定的平衡溶液。其养分的数量和比例较合适，可以满足 植物的营养和生理需要。其硝酸盐（钾、铵）含量较其他 培养基为高，广泛地用于植物的器官、花药、细胞和原生 质体培养，效果良好。有些培养基的大量元素（如LS、 RM）是由它演变而来的。1/2MS、1/3MS、1/4MS是由 MS培养基的大量元素分别减少到原来的1/2、1/3和1/4而 构成的。MS1/2则是MS的所有基本成分都减半构成的。 （2）B5培养基：是1968年由Gamborg等为培养大豆根细 胞而设计的。其主要特点是含有较低的铵，因为铵可能对 不少培养物的生长有抑制作用。从实践得知，有些植物在 B5培养基上更适宜，如双子叶植物，特别是木本植物。
常用培养基的种类及 特点
李华荣 3120040
培养基的种类
根据培养基的组分，通常将培养基分为两个水平，一个是 基本培养基，包括大数量元素和微量元素、维生素和氨基 酸，还有糖和水等；而是完全培养基，即在基本培养基的 基础上，根据各种不同试验要求，添加各种植物生长调节 物质以及其他的复杂有机附加物，包括有些成分尚不完全 清楚的天然提取物。 迄今为止，基本培养基有几百种，但较常用的仅一二十种， 如MS、White、改良White、Nitsch、N6、SH、HE、ER、 NT、LS、RM、Miller、B5、DKW、WPM等。
（9）WPM培养基：由Lloyd和McCown于1980年开发的一种 低浓度的培养基，适合于多种木本植物的培养。 （10）BL培养基（1965）：其成分基本同MS培养基。唯去 掉甘氨酸、盐酸氨硫酸、盐酸吡哆素，增加天冬氨酸。 （11）ER培养基（1965）：与MS基本相似。但磷酸盐含量 比MS高1倍、微量元素却低得多。 （12）H培养基（1967）：大量元素无机盐约为MS的一半、 磷酸二氢钾及氯化钙稍低；微量元素含量较MS高但种类少， 维生素种类较多。 （13）SH培养基（1972）：硝酸钾含量较高，铵与磷酸是以 NH4H2PO4提供的。 （14）WS培养基（1966）：无机盐含量低，微量元素种类少。 适用于某些树种的生根培养。 （15）HE培养基（1953）：钾盐和硝酸盐是通过不同化合物 来提供。无机盐含量稍低。 （16）LS培养基（1965）：与MS培养基类似。大量、微量元 素以及铁盐痛MS，有机物中去掉甘氨酸、烟酸和盐酸吡哆素。
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基础培养基种类
基础培养基种类一般来说，基础培养基种类可以分为植物细胞培养基、动物细胞培养基和细菌培养基。
1. 植物细胞培养基：
植物细胞培养基是一种特定的表面活性剂组成的液体基底，包含植物细胞生长需要的各种维生素、氮源和糖类，其中最常用的是MS 培养基、Murashige & Skoog (MS)培养基和WPM培养基。
2. 动物细胞培养基：
动物细胞培养基是一种特定的多维活性剂组成的液体基底，其中包含动物细胞生长需要的各种氨基酸、维生素、氮源和糖类。
常用的动物细胞培养基有MEM、DMEM、RPMI等。
3. 细菌培养基：
细菌培养基是一种特定的多维活性剂组成的液体基底，其中包含细菌生长需要的各种氨基酸、维生素、矿质盐、氮源和糖类。
常用的细菌培养基有LB培养基和PBS培养基等。
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