菌落总数的测定
国标菌落总数检测方法
国标菌落总数检测方法引言：菌落总数是指在一定的培养条件下，菌落形成的数量。
菌落总数检测是食品微生物检验中的一个重要指标，用于评估食品中微生物的污染程度和卫生质量。
本文将介绍国标菌落总数检测方法的步骤和原理。
一、国标菌落总数检测方法的步骤国标菌落总数检测方法主要包括样品制备、平板计数和结果计算三个步骤。
1. 样品制备需要准备好待测样品。
样品通常是食品、水或其他物质，可以是液体或固体。
将样品称取一定的量，然后按照一定的比例与适量的生理盐水进行稀释，以降低样品中菌落的数量，使其适合于后续的菌落计数。
2. 平板计数将制备好的样品溶液均匀地倒入已经凝固的琼脂平板中，然后用无菌铲子或无菌玻璃棒将溶液均匀涂抹在琼脂平板表面。
待琼脂凝固后，将平板倒置放置在恒温培养箱中，以利于菌落的生长。
根据不同的样品特点和需求，可以选择适当的培养温度和时间。
3. 结果计算在菌落生长适宜的条件下，菌落会在琼脂平板上形成。
在菌落形成后，使用计数器或目视观察，对菌落进行计数。
计数时需要遵循一定的规则，如避免重复计数、避免边缘菌落等。
最后，根据计数结果和样品的稀释倍数，计算出菌落总数。
二、国标菌落总数检测方法的原理国标菌落总数检测方法基于微生物在适宜的培养条件下形成可见的菌落的特性进行。
其原理主要包括稀释平板法和菌落计数法。
1. 稀释平板法稀释平板法是菌落总数检测的一种常用方法。
通过将样品与一定量的生理盐水进行稀释，使菌落的数量适于计数。
然后将稀释好的样品均匀涂抹在琼脂平板上，使菌落在琼脂上生长形成可见的菌落。
根据样品的稀释倍数和计数得到的菌落数量，计算出菌落总数。
2. 菌落计数法菌落计数法是国标菌落总数检测方法的关键步骤。
在菌落生长适宜的条件下，菌落会在琼脂平板上形成。
然后使用计数器或目视观察，对菌落进行计数。
计数时需要遵循一定的规则，如避免重复计数、避免边缘菌落等。
最后，根据计数结果和样品的稀释倍数，计算出菌落总数。
三、国标菌落总数检测方法的应用国标菌落总数检测方法广泛应用于食品、饮用水、药品、化妆品等领域。
菌落总数测定
食品安全菌落总数测定菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。
菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。
菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
菌落总数检验工作中会遇到各种实验平板的菌落计数工作，如倾注法平板，螺旋接种平板，3M菌落总数测试纸片，滤膜法平板等。
因此要高效准确的进行各类平板的菌落计数并保存所有实验数据和图片，必须要求采用的自动计数仪器支持各类平板的自动分析。
迅数菌落分析仪器采用了菌落放大图象拍摄，高分辨率的1000万像素CCD数字成像技术和Colonfast 菌落智能识别技术。
在菌落自动计数方面，仪器可以快速完成包含细菌、霉菌、酵母菌等样品的各类倾注法平板、涂布法平板、滤膜法平板、空气沉降法平板、螺旋接种平板、3M纸片的菌落自动计数和浓度计算，这个功能可以促进我们食品卫生检验中“菌落总数”测定项目的自动化；自动计数菌落的速度高于500个菌落/秒，最小可以分辨的菌落直径可达 0.01mm；可构建专用计数模板以适应复杂实验室环境，计数误差控制在10%以内。
“迅数”是采用最多的菌落仪品牌。
食品行业适用标准：GBT 4789.2-2008 食品卫生微生物学检验菌落总数测定需要进行菌落计数的行业有：疾病控制，卫生检验中心检验检疫局质量技术监督局大学：食品科学与工程微生物发酵免疫医学检验公共卫生科学院，研究机构环境监测部门自来水公司制药企业：生物制药，化学制药，抗生素企业化妆品企业食品企业：饮料、饮用水、乳品、保健食品、糕点糖果、膨化食品、食品添加剂、粮食及其制品、酒类、调味品、微生态、保健食品消毒剂、消毒器械：消毒剂；消毒器械；生物指示剂；化学指示剂；灭菌包装物一次性使用医疗用品：输注类；导管类；诊断、治疗器具类；透析器具类；麻醉器具类；手术巾、敷料类；护理器材类卫生用品：卫生巾；尿布；皮肤、粘膜卫生用品；隐形眼睛护理用品；其他的一次性卫生用品●大肠菌群计数传统的大肠菌群最可能数(MPN)法必须经过：初发酵实验，复发酵证实试验。
菌落总数 标准
菌落总数标准一、菌落总数定义菌落总数是指食品经过处理，在一定条件下培养后，所得每克（每毫升）检样中所生长出来的细菌菌落总数。
它是一种反映食品卫生状况的重要指标，用以判定食品被污染的程度。
二、菌落总数测定方法1. 按照国家标准方法，将样品进行稀释，取一定量稀释液接种到培养基上，置于恒温箱中培养。
2. 观察每个培养基上的菌落数量，并记录。
3. 根据稀释倍数和培养基上的菌落数量，计算出每克（每毫升）样品中的菌落总数。
三、菌落总数卫生标准根据国家卫生部门的规定，食品中的菌落总数应符合以下标准：1. 饮料、饮用水：≤100cfu/ml。
2. 植物性食品、罐头食品：≤1000cfu/g。
3. 肉制品、乳制品：≤50000cfu/g。
4. 调味品、粮谷类食品：≤1000cfu/g。
5. 冷饮食品：≤2000cfu/g。
四、菌落总数食品卫生要求1. 食品生产过程中，应采取有效措施控制菌落总数的污染，确保食品的安全卫生。
2. 生产过程中使用的原料、水源、容器等应符合卫生要求，避免污染。
3. 食品加工设备、器具、管道等应定期清洁消毒，保持良好的卫生状况。
4. 成品储存应避免污染，严格控制温度、湿度等条件，确保菌落总数不超标。
五、菌落总数环境卫生要求1. 生产场所应保持清洁卫生，定期进行清洁消毒，保持良好的卫生状况。
2. 生产场所的通风、照明等设施应符合卫生要求，防止细菌滋生。
3. 生产过程中产生的废弃物、污水等应及时处理，防止污染环境。
六、菌落总数检验规则1. 按照国家规定的标准方法进行检验，确保数据的准确性。
2. 检验时应选取具有代表性的样品，确保样品的代表性。
3. 对于不合格的样品，应进行复检，以确认数据的可靠性。
4. 对于批量生产的食品，应按比例抽样检验，确保整批产品的质量。
七、菌落总数标识、储存、运输要求1. 标识：产品标签上应注明菌落总数指标，以提示消费者注意食品的卫生质量。
2. 储存：食品应储存在清洁卫生的环境中，避免污染。
菌落总数的定量测定原理
菌落总数的定量测定原理您好,细菌的定量测定主要通过计算细菌在培养基上的菌落数目来实现。
以下是菌落总数定量测定的原理和步骤:一、原理菌落总数的测定是通过将含有细菌的样品在固体培养基上进行培养,统计形成的菌落数目来估算原始样本中活菌的含量。
因为每一个菌落理论上是由一个细菌细胞繁殖形成的,所以菌落数目可以反映样品中活菌的数目。
菌落总数法是对环境、食品等样品中的微生物进行定量检测的常用方法。
二、操作步骤(1)称取一定量样品(污水、食品等),配置适当的稀释度,一般做3-5个稀释度。
(2)吸取适量不同稀释度的样品(通常0.1ml、0.5ml等),涂布均匀到预先准备好的固体培养基平板上,每种稀释度设置2-3个平行。
(3)将涂有样品的培养基倒置置于培养箱,在最适合样品中细菌生长的温度下培养一定时间,通常1-3天。
(4)培养结束后,将培养基取出,统计每个稀释度平板上形成的菌落数。
选择菌落数目在30-300个之间的平板计数,以获得较准确的结果。
(5)根据稀释度计算出原样品中菌落形成单位的数量,即CFU/ml或CFU/g,即为菌落总数。
计算公式:菌落总数(CFU/ml或CFU/g) = 平板计数的菌落数÷稀释度÷接种量(ml)三、注意事项(1)样品要充分混匀,进行适当稀释,以获得单独分散的菌落。
(2)平板要平整,接种要均匀,避免菌落聚集。
(3)培养条件要适宜样品中的细菌生长。
(4)计数时,避免重复计数同一菌落。
(5)同一样品应设置多个稀释度的平行,选取菌落数在30-300之间的结果最准确。
(6)运算时注意计数的稀释倍数。
综上所述,菌落总数定量测定通过统计单位样品量中形成的菌落数量,从而推算出原始样品中的菌量,是一种简便可靠的微生物定量检测方法,在环境监测和食品微生物检验中应用广泛。
但操作过程需遵循标准方法,并注意各种影响因素,方能获得准确可靠的结果。
菌落总数的测定标准
菌落总数的测定标准一、采样方案1.1 采样对象：本标准适用于各类食品、药品、化妆品等产品。
1.2 采样量：根据产品类型及实际需要，一般采样量为10-50g（mL）。
1.3 采样方法：用无菌采样器随机取样，然后将样品混匀，制成1:10的稀释液。
二、培养基2.1 选择培养基：使用国家规定的标准培养基，如营养琼脂、孟加拉红培养基等。
2.2 培养基配制：按照培养基说明书进行配制，加入适量添加剂以满足实验要求。
三、培养温度3.1 培养温度：菌落总数培养温度为36℃±1℃。
3.2 恒温培养：培养过程中需保持恒温，不得超过±2℃。
四、培养时间4.1 培养时间：菌落总数培养时间为48小时±2小时。
4.2 时间记录：记录每个平皿的培养时间，以获得准确的菌落计数。
五、结果报告5.1 计数方法：使用菌落计数器对各稀释度平皿进行计数，并记录每个稀释度的平均菌落数。
5.2 结果报告：根据平均菌落数计算出每克（mL）样品中的菌落总数，并按照规定格式填写结果报告。
六、精度要求6.1 重复精度：同一稀释度同一平皿的菌落数偏差不得超过10%。
6.2 仪器精度：菌落计数器的精度应符合国家相关标准要求。
七、空白对照7.1 空白培养基：取适量空白培养基放入恒温培养箱中，观察其是否受到污染。
7.2 空白样品：取适量空白样品（如无菌水）进行实验，观察其是否受到污染。
八、重复试验8.1 重复次数：同一批次样品至少进行两次独立实验，以验证实验结果的可靠性。
8.2 异常情况处理：如出现异常数据或不符合要求的数据，应重新进行实验或采用备用样品进行实验。
台面和手部菌落总数测定方法
台面和手部菌落总数测定方法材料准备：1.台面和手部样本：可以使用棉签和一定量的无菌蒸馏水采集台面和手部样本。
2.无菌琼脂平板：用于培养菌落的基础培养基，可根据需要选择不同的基础培养基。
3.微量移液器或培养基倒置法:用于分装和传递样品。
操作步骤：1.检测台面菌落总数:1.1取一个无菌琼脂平板，打开盖子。
1.2使用一个无菌棉签，在台面上均匀刮擦，将样本涂抹在琼脂平板上。
1.3等待几分钟，使液体被琼脂平板吸收。
1.4将琼脂平板盖上，倒置放入孵化箱中，在适当的温度下培养24-48小时。
1.5检查孵化后的平板上是否有菌落，如果有，则用计数板或显微镜进行计数。
2.检测手部菌落总数：2.1检测手部菌落总数可以通过直接刮擦法或浸泡法进行。
以下是直接刮擦法的步骤：2.2取一个无菌琼脂平板，打开盖子。
2.3将一个无菌棉签浸泡在无菌蒸馏水中。
2.4站立，用棉签在手部表面均匀刮擦。
2.5将湿润的棉签均匀涂抹在琼脂平板上。
2.6将琼脂平板盖上，倒置放入孵化箱中，在适当的温度下培养24-48小时。
2.7检查孵化后的平板上是否有菌落，如果有，则用计数板或显微镜进行计数。
结果计算：菌落总数可以通过两种方法进行计数：直接计数和间接计数，根据实验需求进行选择。
直接计数方法：使用计数板或显微镜直接计数视野中的菌落。
这种方法适用于稀疏的菌落。
间接计数方法：根据菌落的数量，使用相应的公式进行计算。
例如，如果每个平板上的菌落数量过多，无法进行直接计数，可以选择随机取若干区域，计算平均数，并使用公式计算总菌落。
总结：以上是台面和手部菌落总数测定的常用方法。
通过这种测定方法，我们可以评估清洁度和卫生程度的高低，为改善环境卫生提供依据，并确保个人和公共健康。
在实际操作中，需要注意遵循无菌操作和一定的实验室安全措施，以确保准确性和可靠性。
菌落总数原理
菌落总数原理菌落总数是指在一定条件下，某一物质中菌落的总数。
菌落总数是微生物学中常用的一个指标，可以反映出样品中微生物的数量和种类。
而菌落总数的测定原理，是通过将待检样品进行适当稀释后，分别接种在含有适宜营养物质的琼脂平板上，培养一定时间后，观察并计数形成的菌落，从而推算出原始样品中微生物的数量。
菌落总数的测定原理主要包括以下几个步骤：首先，对待检样品进行适当稀释。
由于原始样品中微生物的数量可能非常庞大，直接接种在琼脂平板上会导致菌落过多，难以准确计数。
因此，需要对待检样品进行适当的稀释，以便在琼脂平板上形成可数的菌落。
其次，将稀释后的样品分别接种在琼脂平板上。
接种时需要注意均匀涂布，避免菌落过于密集，影响计数的准确性。
然后，将接种好的琼脂平板置于恒温培养箱中进行培养。
培养的时间和温度需要根据待检样品中微生物的特性而定，一般为24-48小时，有些微生物可能需要更长的时间。
最后，观察并计数形成的菌落。
在培养结束后，需要对琼脂平板上的菌落进行观察和计数。
这一步需要仔细操作，以确保计数的准确性。
通过以上步骤，我们就可以得到待检样品中微生物的数量。
菌落总数的测定原理相对简单，但需要严格按照操作规程进行，以确保结果的准确性和可比性。
菌落总数的测定原理在食品、药品、环境卫生等领域有着广泛的应用。
在食品行业中，菌落总数可以反映食品的卫生状况和微生物污染情况，对于保障食品安全具有重要意义。
在药品生产中，菌落总数的测定也是质量控制的重要环节，可以确保药品的纯度和安全性。
在环境卫生监测中，菌落总数可以反映出环境中微生物的污染程度，为环境卫生管理提供重要依据。
总之，菌落总数的测定原理是微生物学中的重要内容，它通过一系列的操作步骤，可以准确反映出待检样品中微生物的数量，具有广泛的应用前景。
在实际操作中，我们需要严格按照操作规程进行，以确保结果的准确性和可比性，从而更好地为食品安全、药品质量和环境卫生提供保障。
菌落总数测定
如果平板上菌落太多，不能计数时，不能 用多不可计作报告。应在最高稀释度平板 上任意选取2个1cm2的面积，计算菌落数， 除2求出每cm2面积内平均菌落数，乘以 63.6(皿底面积cm2数)。
关于均质器使用效果和对检测结果的影响， 有不同的报道： 不同食品样品采用不同的均质方法，测试 结果不同 。 不同的均质方式对金黄色葡萄球菌和大肠 杆菌的检测的影响也不同。
菌落总数的检验程序图
检样 10倍系列稀释 选择2~3个适宜样品匀液，各取1mL分别加入无菌培养平皿内
每皿内加入适量培养基 (PCA)
对照试验：
检样的稀释液中往往带有食品颗粒，在这 种情况下，为避免与细菌菌落混淆，可作 一检样对照，不经培养，置4℃环境放置， 在计数时用于对照。
或可选用TTC营养琼脂作培养基。
菌落计数：
如果高稀释度平板上的菌落数比低稀释度 平板上的菌落数高，则说明检验过程中可 能出现差错或样品中含抑菌物质，这样的 结果不 可用于结果报告。
菌落总数测定
菌落的概念：
菌落（colony）是指细菌在固体培养基上经 培养后生长繁殖而形成的能被肉眼所识别的 生长物集落，它是由数以万计的相同细菌集 聚而成的。
菌落总数的定义：
样品经过处理，在一定条件下培养后(如培 养基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质 等)，所得1mL(g)检样中所含菌落的总数。 所得结果包括一群在方法规定的条件下生长 的嗜中温的需氧和兼性厌氧菌。
缺点：
某些有红色颗粒的，需要注意；粘稠的液 体样品，不易分散开；表面活性比较大， 易流出；泡沫比较丰富的样品等
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实验九菌落总数的测定
一、目的要求
学习掌握菌落总数测定的基本原理和方法，了解食品上微生物的分布和繁殖动态。
二、实验说明
菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1ml检样中所含细菌菌落的总数。
菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
每种细菌都有它一定的生理特性，培养时应用不同的营养条件及其他生理条件（如温度、培养时间、pH、需氧性质等）去满足其要求才能将各种细菌都培养出来。
但在实际工作中，一般都只用一种常用的方法去作。
细菌菌落总数的测定，所得结果，只包括一君能在营养琼脂上发育的嗜中温性需氧菌的菌落总数。
三、实验材料
（1）培养箱 36±1℃
（2）恒温水浴 46±1℃
（3）天平。
（4）可调式电炉。
（5）吸管 1.0ml、10.0ml,标有0.1ml单位刻度。
（6）广口瓶 500ml，有盖。
（7）玻璃珠直径5mm。
（8）平皿皿底直径9.0cm。
（9）试管 18×200mm。
（10）酒精灯。
（11）试管架。
（12）研钵。
（13）灭菌刀和剪刀。
（14）灭菌镊子。
（15）酒精棉球。
（16）玻璃蜡笔。
（17）营养琼脂培养基。
（18）灭菌生理盐水、分装于试管中，每管9.0ml。
（19）食品检样。
四、检验程序（图9-1）
五、方法步骤
（一）检验稀释和培养
1、以无菌操作，将检样25g（或25ml）剪碎放于含有225ml灭菌生理盐水的广口瓶内（瓶内置有适量玻璃珠）或灭菌研钵内，经充分振摇或研磨用成1：10的均匀稀释液。
2、用1.0ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1.0ml，沿管壁徐徐注入含有9.0ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内液面），振摇试管混合均匀，作成1：100的稀释液。
3、另取1.0ml灭菌吸管，按上述操作作10倍稀释，如此每递增
稀释一次，即换1支1.0ml吸管。
4、根据食品卫生要求或对标本污染程度的估计，选择2-3个适宜稀释度，分别作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释液的吸管移1.0ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。
5、稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃营养琼脂（可放于46×1℃水浴保温）注入平皿约15ml，并移动平皿使混合均匀。
同时将营养琼脂培养基倾入加有1.0ml灭菌生理盐水的平皿内作空白对照。
6、待稀释液入平皿后，翻转平板，置36×1℃温箱内培养24±2h（肉、水产品、乳和蛋品为48±2h）取出，计算平板内菌落数，乘以稀释倍数，即得每克（或ml）样品所含菌落总数。
（二）计算方法
1、平板菌落数的选择
选取菌落数在30-300之间的平板作为菌落总数测定标准。
一个稀释度使用两个平板应采用两上平板的平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落可计算半个平板后乘以代表全皿菌落数。
2、稀释度的选择
（1）应选择平均菌落数在30-300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之（表9-1例1）。
（2）若有两个稀释度，其生长的菌落数在30-300之间，则视二者之比如何来决定。
若其比值小于2，应报告其平均数，若大于2，则报告其中较小的数字（表9-1例2及3）。
（3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最
高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（表9-1例4）。
（4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30则应以稀释度最低的平均菌落数乘以黧度倍数报告之（表9-1例5）。
（5）若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1（1）乘以最低稀释倍数报告之（表9-1例6）。
（6）若所有黧度的平均菌落数无法不在30-300之间，其中一部分大于300，而另一部分则小于30，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（表9-1例7）。
3、菌落数的报告
菌落数在100以内时，按其实有数报告，小于100时采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法来计算，为了缩短数字后面的零数也可用10的指数来表示（表9-1“报告方式”栏）。
六、实验作业
1、食品中检出的菌落数是否代表该食品上污染的所有细菌数？为什么？
2、为什么菌落总数测定用的营养琼脂培养基在使用前要保持在46±1℃的温度？
3、为使平板菌落计数准确需要掌握哪几个关键？并说明理由。