磷脂脂肪酸微生物鉴定系统 ppt课件
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脂类-生物化学 PPT
鞘磷脂
• 鞘磷脂由鞘氨醇、脂肪酸和磷酰胆碱（少数是磷酰乙醇 胺）组成。
• 鞘氨醇 至今已经发现60多种，哺乳动物的鞘氨醇主要 是18碳不饱和的4－烯鞘氨醇（4－sphinganine），称 为D－鞘氨醇（D－sphingosine），其次是二氢鞘氨醇 （dihydrosphingosine）和4－羟二氢鞘氨醇（又叫植 物鞘氨醇phytosphingosine）。
• 必需脂肪酸：维持生长所需的，体内又不能合成的 脂肪酸。如油酸；亚麻酸；EPA（二十碳五烯酸）； DHA(二十二碳六烯酸)
五、脂肪酸的主要化学反应
• （1）机体代谢中，在脂肪酸酶催化下，活化硫酰化， 形成脂酰CoA。
• （2）不饱和脂肪酸的双键极易为强氧化剂，如H2O2 、超氧化物阴离子自由基（O2·-)或羟自由基（·OH）所 氧化。
胆固醇的 结构
脂蛋白
• 脂蛋白是由脂质和蛋白质以非共价键结合而成的 复合物，其中的蛋白部分称载脂蛋白。
• 脂蛋白广泛存在于血浆中，因此也称血浆脂蛋白 。细胞膜中与脂质融合的蛋白质也可看成是脂蛋 白，并称为细胞脂蛋白。
• 血浆脂蛋白依据密度增加为序可分为乳糜微粒、 极低密度脂蛋白、中间密度脂蛋白、低密度脂蛋 白和高密度脂蛋白五类，五类脂蛋白中有的还存 在亚类。
• Ⅰ类极性脂质：具有界面可溶性，但是不具有容积可 溶性，能渗入膜，但是自身不能成膜。如三酰甘油脂
• Ⅱ类极性脂质：它是成膜分子，如磷脂类、单酰基甘 油等
• Ⅲ类极性脂质：可溶性脂质，如去污剂
三 脂质的生物学作用
1、储存脂质，作为能源物质和碳源 2、结构脂质，构成生物膜、 3、活性脂质，具有特殊的生理作用 4、作为溶剂
• 立体结构：环与环稠合构型顺式，两个基角处在环面的同 侧；环与环稠合构型反式，两个基角处在环面的异侧。
磷脂脂肪酸(PLFAs)谱图分析技术
微生物生态学的研究方法——磷脂脂肪酸分析（PLFA）【内容摘要】定量描述微生物群落是微生物生态学的难题之一。
应用传统的微生物培养方法和显微技术, 需要在选择性培养基上培养微生物, 即首先从环境样品中分离出纯菌株, 再对该菌株进行一系列的生理生化分析。
文章综述了磷脂脂肪酸谱图分析法在微生物生态研究中的应用，包括估算微生物生物量、确定群落结构、指示特定微生物，指示生理和营养状况等，并指出此种方法存在的问题及改进方法。
【关键词】磷酸脂肪酸微生物生态学应用及发展一、引言：环境中微生物的种类和数量是及其丰富的[1]，微生物能把有机质作为营养源转化为组成物质和能量，它们在环境治理过程中扮演着极其重要的作用。
分离和鉴定处理系统中的优势菌，了解特定环境下微生物群落的种群分布、遗传多样性及其动态变化规律和认识微生物群落的稳定性及功能菌的作用，是环境微生物学研究的重要内容。
传统的微生物鉴定和群分析方法建立在微生物纯种培养分离基础上，但自然环境中有 99%以上的微生物还不能通过人工培养，在微生物的分析和研究工作中具有很大的局限性。
二、正文：1．磷脂脂肪酸(PLFAs)谱图分析技术概述1.1 PLFA 概念、分类和命名磷脂是含有磷酸基团的脂质，目前已发现了1000多种磷脂类物质。
磷脂作为微生物细胞膜主要成分，是甘油分子的第3位羟基被磷酸或其他羟基所酯化形成的。
其结构特点是：具有由磷酸相连的取代基团（含氨碱或醇类）构成的亲水头（hydrophilic head）和由脂肪酸链构成的疏水尾（hydrophobictail）。
PLFAs(磷脂脂肪酸，phosphohpids fattyacids)谱图分析方法的原理是基于磷脂——几乎是所有生物细胞膜的重要组成部分，细胞中磷脂的含量在自然条件下(正常的生理条件下)恒定[ 2 ]，其长链脂肪酸的形式——磷脂脂肪酸PLFAs 可作为微生物群落的标记物。
此外，磷脂不能作为细胞的贮存物质，在细胞死亡后将很快降解(厌氧条件下约需2d，而好氧条件下约需12—16d)m，可代表微生物群落中“存活”的那部分群体阁。
脂肪酸的生物合成及磷脂和胆固醇代谢ppt课件
脂酸的合成：
启动、装载（丙二酸单酰基的转移）、 缩合、还原、脱水、还原
.
22
软脂酸的合成步骤（ E. coli ）：
（1）启动（priming） —— 乙酰CoA与ACP作用： E1：乙酰CoA:ACP转酰酶（AT）
乙酰CoA + ACP-SH 乙酰- S- ACP + CoASH 乙酰- S- ACP + E2-SH ACP -SH +乙酰- S- E2
C 3 C HO＋ S HC 3 C -＋ o A O A T 生 物 P 素 、 M 2+ n HO C 2 C O HO C ＋ A S＋ D C P i P o
丙 二 酰 C o A
.
11
乙酰CoA羧化酶 (acetyl- CoA carboxylase)： 以生物素为辅基，是脂肪酸合成的限速酶。
（2）装载（loading）——丙二酸单酰基转移反应： E2：丙二酸单酰CoA:ACP转酰酶（MT）
丙二酸单酰CoA + ACP-SH E2 丙二酸单酰-S-ACP + CoASH
.
23
（2）装载（loading）
（1）启动（priming） . 乙酰CoA:ACP转酰酶
脂肪酸合酶
24
- 酮酰-ACP合酶 （KS）
酰CoA和碳酸氢盐) 3 脂肪酸合酶 4 由脂肪酸合酶催化的各步反应——软脂酸的
合成 5 软脂酸合成与分解的区别 6 脂肪酸碳链的延长及去饱和
.
7
一 脂肪酸的生物合成
胞浆中饱和脂酸的生物合成---丙二酸单酰CoA途径 棕榈酸中碳原子的来源：
乙酰CoA 丙二酸单酰CoA CH3CH2(CH2CH2)6CH2COOH 起始物（引物）
启动、装载（丙二酸单酰基的转移）、 缩合、还原、脱水、还原
.
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软脂酸的合成步骤（ E. coli ）：
（1）启动（priming） —— 乙酰CoA与ACP作用： E1：乙酰CoA:ACP转酰酶（AT）
乙酰CoA + ACP-SH 乙酰- S- ACP + CoASH 乙酰- S- ACP + E2-SH ACP -SH +乙酰- S- E2
C 3 C HO＋ S HC 3 C -＋ o A O A T 生 物 P 素 、 M 2+ n HO C 2 C O HO C ＋ A S＋ D C P i P o
丙 二 酰 C o A
.
11
乙酰CoA羧化酶 (acetyl- CoA carboxylase)： 以生物素为辅基，是脂肪酸合成的限速酶。
（2）装载（loading）——丙二酸单酰基转移反应： E2：丙二酸单酰CoA:ACP转酰酶（MT）
丙二酸单酰CoA + ACP-SH E2 丙二酸单酰-S-ACP + CoASH
.
23
（2）装载（loading）
（1）启动（priming） . 乙酰CoA:ACP转酰酶
脂肪酸合酶
24
- 酮酰-ACP合酶 （KS）
酰CoA和碳酸氢盐) 3 脂肪酸合酶 4 由脂肪酸合酶催化的各步反应——软脂酸的
合成 5 软脂酸合成与分解的区别 6 脂肪酸碳链的延长及去饱和
.
7
一 脂肪酸的生物合成
胞浆中饱和脂酸的生物合成---丙二酸单酰CoA途径 棕榈酸中碳原子的来源：
乙酰CoA 丙二酸单酰CoA CH3CH2(CH2CH2)6CH2COOH 起始物（引物）
微生物学 脂类代谢 ppt课件
NADH + H+ ③再脱氢 NAD+
PPT课件
27
PPT课件
28
4. 脂酸氧化是体内能量重要来源 —— 以16碳软脂酸的氧化为例
活化：消耗2个高能磷酸键 β-氧化：
每轮循环
四个重复步骤：脱氢、水化、再脱氢、硫解 产物：1分子乙酰CoA
1分子少两个碳原子的脂酰CoA 1分子NADH+H+ 1分子FADH2
• 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ • 教师的教鞭
• “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我 笨，没有学问无颜见爹娘 ……”
• “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
2. 脂类物质的基本组成（脂酸与醇结合成脂） ①脂酸与甘油结合：甘油三脂、甘油磷脂
甘油三酯
(triacylglycerols,TAG) （triglyceride, TG ）
二酯和三磷酸肌醇)； 3.转变成重要活性物质，胆固醇可
转变成类固醇激素、维生素等； 4.促进脂溶性维生素的吸收。
PPT课件
11
细胞膜中的脂类
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12
第二节
甘油三酯的代谢
Metabolism of Triglyceride
PPT课件
13
• 2.1 甘油三酯的分解代谢
本
• 甘油的氧化
节 主
• 脂酸的β氧化
CH3-(CH2)n - CH2 - CH2 -COOH
动物β-氧化在线粒体基质中进行
植物β-氧化在过氧化物酶体和乙醛酸循环体进行
PPT课件
19
➢脂肪酸氧化反应过程
第一阶段：脂肪酸的活化 第二阶段：脂酰CoA进入线粒体 第三阶段：脂酰CoA 的β-氧化 第四阶段：乙酰CoA的彻底氧化
脂代谢检验ppt(共51张PPT)
功能
转运外源 性TG
转运内源性 TG
转运内源 性TG、
CE
转运内源 性CE
逆向转运 CE
Lp(a) 是一类独立的由肝脏合成的脂蛋白
血 浆 脂 蛋 白 代 谢 紊乱
高脂血症: TC 或/和 TG
高脂蛋白血症 : CM、VLDL、LDL、HDL
脂质异常血症
临床表型
是否继发其他
Fredrickson
基因分型法
一、血清（浆）静置试验
清澈 测定TC 空 （TG正常）
TC正常:血脂正常 TC升高：Ⅱa
（VLDL正常）
腹
下层清澈：Ⅰ型
血
上层有“奶油”层
清
4℃过夜
（CM升高）
下层混浊：Ⅴ型 （VLDL↑）
混浊
（TG升高）
均匀混浊测定TC TC升高：Ⅱb型、Ⅲ型
（VLDL升高）
TC正常：Ⅳ型
二、血清（浆）总胆固醇测定
280-800 KD
肝脏
LDL、HDL
6
抑制纤溶酶原活性
脂蛋白受体
识别Apo糖E，蛋清白除血液循
环调中节CM细残胞粒和外β脂-V蛋LDL
白的残水粒平
LDL受体
残粒受体 清道夫受体
运送
及
巨噬细清胞除表面,介导修 饰LDL从血液循环中清除
LDL受体：识别ApoB100（ApoE ）对维持细胞和全身胆固醇平衡起
Ⅱb型高脂蛋白血症 Ⅲ型高脂蛋白血症
Ⅳ型高脂蛋白血症 Ⅴ型高脂蛋白血症
Ⅰ型高脂蛋白血症
家族性高乳糜微粒血症 脂蛋白酶缺乏症
基因突变 LPL CM
① 4℃静置过夜，
表面奶油状，下层澄清
② 血清TG↑↑， 血清TC正常或轻度↑
脂肪酸磷脂糖脂等油脂的伴随物PPT课件
老年
60以上
量
脂肪（克/日） 35-40 40-50 45-60 60-70 70-85 60-50
<50
食物来源
植物油：花生油、 菜籽油、豆油、葵 花籽油、亚麻油。 动物的肉、内脏， 各类坚果如核桃仁、 杏仁、花生仁、癸 花籽仁等，各种豆 类如黄豆、红小豆、 黑豆等，部分粮食 如玉米、高梁、大 米、 红小豆、小 米等 .
核桃
66.6
花生仁 柠檬
39.2 0.9
青菜
0.2
苹果
0.2
牛乳
3 以上
香蕉
0.8
全脂炼乳 8 以上
全脂乳粉 25～30
上述含量是指用乙醚提取的脂类总量
第2页/共29页
脂肪的日推荐量和主要来源
日
组别 婴幼儿 儿童 小学生 中学生 青壮年 中老年
推荐
年龄(岁) 3岁以下
3-6 6-12 12-18 18-45 45-60
第3页/共29页
脂类物质的测定意义
脂肪是食品中重要的营养成分之一。脂肪可 为人体提供必需脂肪酸；脂肪是一种富含热能 营养素，是人体热能的主要来源，每克脂肪在 体内可提供 37.62 kj (9 kcal) 热能，比碳水化 合物和 蛋白质高一倍以上；是食物中能量最高的营养 素。但是摄入过量对人体健康不利！
第15页/共29页
☆ 抽提
将滤纸筒或滤纸包放入索氏抽提器内，连 接已干燥至恒重的脂肪接受瓶，由冷凝管上端加 入无水乙醚或石油醚（30-60℃沸程） ，加量为 接受瓶的2／3体积，于水浴上(夏天65℃，冬天 80℃左右)加热使乙醚或石油醚不断的回流提取， 一般视含油量高低提取6-12h，至抽提完全为止 （用滤纸试）。
GB/T 22220-2008 食品中胆固醇的测定 高效液相色谱法 方法提要：样品经无水乙醇-氢氧化钾溶液皂化，石油醚和无 水乙醚混合溶液提取，甲醇溶解定量后，采用高效液相色谱 仪测定，外标法定量。
第六章 脂类的测定 食品分析教学课件 ppt
加热的条件下将试样成分水解，使 结合或包藏在组织内的脂肪游离出 来，再用有机溶剂提取，经回收溶 剂并干燥后，称量提取物质量即为 试样中所含脂类。
仪器 ① 恒温水浴50~800C。 ② 100m不含过氧化物）。 石油醚（30~600C沸腾）。 盐酸。
此法使用于各类食品总脂肪的测定，特别对于易吸潮， 结块，难以干燥的食品，但此法不宜用高糖类食品， 因糖类食品遇强酸易炭化而影响测定效果。
脂类中的磷脂，在水解条件下将几乎完全分解为脂肪 酸及碱，测定值将偏低。故对于含较多磷脂的蛋及其 制品，鱼类及其制品，不适宜用此法。
原理 酸分解法的原理是利用强酸在
② 回 收溶剂
③ 石油醚萃取、定量
用移液管加入25ml石油醚，然后加入15g无 水硫酸钠，立即加塞混摇1 min ，将醚层移入 具 塞 离 心 沉 淀 管 进 行 离 心 分 离 （ 3000r/min ） 5min。用10mL移液管加入迅速吸取离心管中 澄清的石油醚10mL，于已称量至恒量的干燥 称量瓶内，蒸发去除石油醚，于100~1050C烘 箱中烘至恒量（约30 min ）。
含糖巧克力：碱性乙醚 乳及乳制品：罗紫-哥特里法 酸水解：对包括结合态脂类在内的全部脂类进
行定量。
6.2.1 索氏提取法
原理
将经前处理而分散且干燥的样品用无水乙醚 或石油醚等溶剂回流提取，使样品中的脂肪进入 溶剂中，回收溶剂后所得到的残留物。
一般食品用有机溶剂浸提，挥干有机溶剂后 得到的重量主要是游离脂肪，此外，还含有磷脂、 色素、树脂、蜡状物、挥发油、糖脂等物质，所 以用索氏提取法测得的脂肪，也称粗脂肪。
② 挥干溶剂后残留物中若有黑色焦油状杂质，是分解 物与水一同混入所致，会使测定值增大造成误差， 可用等量的乙醚及石油醚溶解后，过滤，再次进行 挥干溶剂的操作
仪器 ① 恒温水浴50~800C。 ② 100m不含过氧化物）。 石油醚（30~600C沸腾）。 盐酸。
此法使用于各类食品总脂肪的测定，特别对于易吸潮， 结块，难以干燥的食品，但此法不宜用高糖类食品， 因糖类食品遇强酸易炭化而影响测定效果。
脂类中的磷脂，在水解条件下将几乎完全分解为脂肪 酸及碱，测定值将偏低。故对于含较多磷脂的蛋及其 制品，鱼类及其制品，不适宜用此法。
原理 酸分解法的原理是利用强酸在
② 回 收溶剂
③ 石油醚萃取、定量
用移液管加入25ml石油醚，然后加入15g无 水硫酸钠，立即加塞混摇1 min ，将醚层移入 具 塞 离 心 沉 淀 管 进 行 离 心 分 离 （ 3000r/min ） 5min。用10mL移液管加入迅速吸取离心管中 澄清的石油醚10mL，于已称量至恒量的干燥 称量瓶内，蒸发去除石油醚，于100~1050C烘 箱中烘至恒量（约30 min ）。
含糖巧克力：碱性乙醚 乳及乳制品：罗紫-哥特里法 酸水解：对包括结合态脂类在内的全部脂类进
行定量。
6.2.1 索氏提取法
原理
将经前处理而分散且干燥的样品用无水乙醚 或石油醚等溶剂回流提取，使样品中的脂肪进入 溶剂中，回收溶剂后所得到的残留物。
一般食品用有机溶剂浸提，挥干有机溶剂后 得到的重量主要是游离脂肪，此外，还含有磷脂、 色素、树脂、蜡状物、挥发油、糖脂等物质，所 以用索氏提取法测得的脂肪，也称粗脂肪。
② 挥干溶剂后残留物中若有黑色焦油状杂质，是分解 物与水一同混入所致，会使测定值增大造成误差， 可用等量的乙醚及石油醚溶解后，过滤，再次进行 挥干溶剂的操作
磷脂脂肪酸(PLFA)微生物鉴定系统课件
2. Sherlock利用样品的前处理过程和气相色谱分析(Gas Chromatography)去产生定性及定量脂肪酸再现性成份 描述.
3. 从未知的微生物中萃取出脂肪酸而后自动化的被定量 且利用Sherlock的软件来鉴定检测出脂肪酸的成份.
6
脂肪酸鉴定与传统微生物鉴定比较的优势：
操作过程
消耗品 人为判断
利用Dendrogram和2-D Plot分析菌种之间的亲源性关系 。
2. 厌氧菌库（Anaerobe Library）
3. 酵母库（Yeast Libarary）
4. 脱氧核糖核酸库 (DNA Libraries) 来源于任意测序仪的细菌的16S rRNA基因或真菌/酵母菌的28S rRNA的测序 结果可以直接拷贝到Sherlock DNA 软件，它利用系统发生树对序列进行识别 分析和鉴定。
该软件可以操控Agilent公司的6850、7890型气相色谱，通 过对气相色谱获得的短链脂肪酸的种类和含量的图谱进行 比对，从而快速准确地对微生物种类进行鉴定。
3
生物标记物 Biomarker
• 不饱和脂肪酸
• 蛋白质
• 核酸
• 类脂
• 磷脂
• 多糖 • etc.
生物标记物在不同细菌中的分布 谱不同鉴定细菌
厌氧菌 酵母菌
800 species 300 species
BHIBLA plate-grown PYG broth-grown
Sabouraud Dextrose Agar, 28 C for 24 hrs.
Bioterrorism
6 major bacterial agents of bioterrorism
12
Sherlock® microbe methods and libraries
3. 从未知的微生物中萃取出脂肪酸而后自动化的被定量 且利用Sherlock的软件来鉴定检测出脂肪酸的成份.
6
脂肪酸鉴定与传统微生物鉴定比较的优势：
操作过程
消耗品 人为判断
利用Dendrogram和2-D Plot分析菌种之间的亲源性关系 。
2. 厌氧菌库（Anaerobe Library）
3. 酵母库（Yeast Libarary）
4. 脱氧核糖核酸库 (DNA Libraries) 来源于任意测序仪的细菌的16S rRNA基因或真菌/酵母菌的28S rRNA的测序 结果可以直接拷贝到Sherlock DNA 软件，它利用系统发生树对序列进行识别 分析和鉴定。
该软件可以操控Agilent公司的6850、7890型气相色谱，通 过对气相色谱获得的短链脂肪酸的种类和含量的图谱进行 比对，从而快速准确地对微生物种类进行鉴定。
3
生物标记物 Biomarker
• 不饱和脂肪酸
• 蛋白质
• 核酸
• 类脂
• 磷脂
• 多糖 • etc.
生物标记物在不同细菌中的分布 谱不同鉴定细菌
厌氧菌 酵母菌
800 species 300 species
BHIBLA plate-grown PYG broth-grown
Sabouraud Dextrose Agar, 28 C for 24 hrs.
Bioterrorism
6 major bacterial agents of bioterrorism
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MIDI
pattern recognition software
GC 硬件选择
6890 目前6890升级为7890。
6850
微生物菌种库
噬氧菌 厌氧菌 酵母
大于1500种菌种，其中450种来自临床 大于800种菌种 300种，放线菌库亦包含其内。
迄今为止微生物鉴定系统中最大的菌库 并细分为超过100,000个株型，一步直接鉴定到株型，这是传统方法做不到的
2. Sherlock利用样品的前处理过程和气相色谱分析 (Gas Chromatography)去产生定性及定量脂肪酸再 现性成份描述.
3. 从未知的微生物中萃取出脂肪酸而后自动化的被定量 且利用Sherlock的软件来鉴定检测出脂肪酸的成份.
脂肪酸鉴定与传统微生物鉴定比较的优势：
操作过程
消耗品 人为判断
...over DNA-Based Identification
Bioterrorism list:
• Bacillus anthracis (Anthrax) • Brucella melitensis (Brucellosis) • Burkholderia mallei (Glanders) • Burkholderia pseudomallei (Melioidosis) • Francisella tularensis (Tularemia) • Yersinia pestis (Plague) • 15 challenge organisms
Sherlock® microbe methods and libraries
MIS 软件选择
汽化管和标准品
GC谱图
Report
Result Summaries
Instrument Throughput
short preparation autosampler
Single Tower: 45 samples Dual Tower: 90 samples $ 1. 0 per sample (inc. reagents, gases, calibration
经典案例：
1.2001年11月在美国成功鉴定炭疽（Bacillus anthracis
）病例
2.2004年获得AOAC Official Methods of AnalysisSM（美
国分析化学家组织官方分析法）
3.美国联邦调查局（FBI）和美国国家环保署(EPA)用
standards, glassware, and culture media)
目录
产品原理及介绍 配置介绍 产品优势 应用领域
...over Biochemical Tests
• 脂肪酸成分在细菌中结构、含量十分稳定 • 样品需求量少 • 脂肪酸分析基于种的数据库，定性判断准确。 • 实验周期短，获取结果快。 • 成本低，0.80 USD/样本 • 库容量大 • the strain level versus the species level
全自动微生物鉴定系统 Sherlock® Microbial Identification Systems
2010.4
目录
产品原理介绍 配置介绍 产品优势 应用领域
Sherlock® Microbial Identification System 全自动微生物鉴定系统
——细胞脂肪酸图谱鉴定
目标
产品优势
最大的 菌库
独创21 种细菌 武器数 据库
检测成 本低
操作简 便
微量样 品
速度快、 精度高
➢ 采取了其它方法进行验证
➢ DNA-based identification
➢ 菌株溯源
➢ 2-D Plot clustering ➢ Dendrogram clustering
目录
产品原理及介绍 配置介绍 产品优势 应用领域
MIS系统应用领域
灭菌控制 (Sterility Control) 饮用水及废水 (Drinking/Waste Water) 环境学 (Environmental) 植物及土壤 (Plant and Soil) 生态学（bionomics） 医学/临床 (Medical/Clinical) 工厂 (Industrial) 食物 (Food) 兽医学 (Veterinary)
该软件可以操控Agilent公司的6850、7890型气相色谱，通 过对气相色谱获得的短链脂肪酸的种类和含量的图谱进行 比对，从而快速准确地对微生物种类进行鉴定。
生物标记物 Biomarker
• 不饱和脂肪酸
• 蛋白质
• 核酸
• 类脂
• 磷脂
• 多糖 • etc.
生物标记物在不同细菌中的分布 谱不同鉴定细菌
Sherlock ® MIS为美国MIDI公司依据自20世纪60年代以来对微 生物细胞脂肪酸的研究经验，开发的一套根据微生物中特定短链 脂肪酸（C9-C20）的种类和含量进行鉴定和分析的软件。
权威
分获美国CDC、国土安全局和F生物鉴定系统产品 ➢ 唯一采用氢气做载气的脂肪酸分析系统
用量大,价格贵,不易保存
鉴定过程无需人为判断
容易误判
操作流程
细菌培养
皂化、甲基化
萃取
气相分析
鉴定报告
目录
产品原理及介绍 配置介绍 产品优势 应用领域
MIS系统构成
Agilent Technologies
gas chromatographs(GC)
MIDI
microbial databases
生物标记物—脂肪酸
➢ 细菌细胞内有300多种脂肪酸成分
➢ 细菌脂肪酸成分相对稳定
➢ Plasmid loss or gain, mutations have no effect on fatty acid composition
➢ 细菌脂肪酸易于提取，定性和定量
操作方法
1. MIS主要用来分析及鉴定在人工培养基中纯化培养的 微生物.
脂肪酸鉴定方法
传统方法
将菌分为嗜氧，厌氧及酵母在 对应培养条件下培养一定时间 （24-48h），通过2小时的脂肪 酸抽提工作后，进行气相色谱， 全自动分析，得到结果。操作 简单。
普通试剂，易保存
需先将菌分为革兰氏阳性及 阴性，并判断球、杆菌，在分 型培养后，需多耗一天时间进 行培养来得到菌的碳源利用率。 操作复杂
pattern recognition software
GC 硬件选择
6890 目前6890升级为7890。
6850
微生物菌种库
噬氧菌 厌氧菌 酵母
大于1500种菌种，其中450种来自临床 大于800种菌种 300种，放线菌库亦包含其内。
迄今为止微生物鉴定系统中最大的菌库 并细分为超过100,000个株型，一步直接鉴定到株型，这是传统方法做不到的
2. Sherlock利用样品的前处理过程和气相色谱分析 (Gas Chromatography)去产生定性及定量脂肪酸再 现性成份描述.
3. 从未知的微生物中萃取出脂肪酸而后自动化的被定量 且利用Sherlock的软件来鉴定检测出脂肪酸的成份.
脂肪酸鉴定与传统微生物鉴定比较的优势：
操作过程
消耗品 人为判断
...over DNA-Based Identification
Bioterrorism list:
• Bacillus anthracis (Anthrax) • Brucella melitensis (Brucellosis) • Burkholderia mallei (Glanders) • Burkholderia pseudomallei (Melioidosis) • Francisella tularensis (Tularemia) • Yersinia pestis (Plague) • 15 challenge organisms
Sherlock® microbe methods and libraries
MIS 软件选择
汽化管和标准品
GC谱图
Report
Result Summaries
Instrument Throughput
short preparation autosampler
Single Tower: 45 samples Dual Tower: 90 samples $ 1. 0 per sample (inc. reagents, gases, calibration
经典案例：
1.2001年11月在美国成功鉴定炭疽（Bacillus anthracis
）病例
2.2004年获得AOAC Official Methods of AnalysisSM（美
国分析化学家组织官方分析法）
3.美国联邦调查局（FBI）和美国国家环保署(EPA)用
standards, glassware, and culture media)
目录
产品原理及介绍 配置介绍 产品优势 应用领域
...over Biochemical Tests
• 脂肪酸成分在细菌中结构、含量十分稳定 • 样品需求量少 • 脂肪酸分析基于种的数据库，定性判断准确。 • 实验周期短，获取结果快。 • 成本低，0.80 USD/样本 • 库容量大 • the strain level versus the species level
全自动微生物鉴定系统 Sherlock® Microbial Identification Systems
2010.4
目录
产品原理介绍 配置介绍 产品优势 应用领域
Sherlock® Microbial Identification System 全自动微生物鉴定系统
——细胞脂肪酸图谱鉴定
目标
产品优势
最大的 菌库
独创21 种细菌 武器数 据库
检测成 本低
操作简 便
微量样 品
速度快、 精度高
➢ 采取了其它方法进行验证
➢ DNA-based identification
➢ 菌株溯源
➢ 2-D Plot clustering ➢ Dendrogram clustering
目录
产品原理及介绍 配置介绍 产品优势 应用领域
MIS系统应用领域
灭菌控制 (Sterility Control) 饮用水及废水 (Drinking/Waste Water) 环境学 (Environmental) 植物及土壤 (Plant and Soil) 生态学（bionomics） 医学/临床 (Medical/Clinical) 工厂 (Industrial) 食物 (Food) 兽医学 (Veterinary)
该软件可以操控Agilent公司的6850、7890型气相色谱，通 过对气相色谱获得的短链脂肪酸的种类和含量的图谱进行 比对，从而快速准确地对微生物种类进行鉴定。
生物标记物 Biomarker
• 不饱和脂肪酸
• 蛋白质
• 核酸
• 类脂
• 磷脂
• 多糖 • etc.
生物标记物在不同细菌中的分布 谱不同鉴定细菌
Sherlock ® MIS为美国MIDI公司依据自20世纪60年代以来对微 生物细胞脂肪酸的研究经验，开发的一套根据微生物中特定短链 脂肪酸（C9-C20）的种类和含量进行鉴定和分析的软件。
权威
分获美国CDC、国土安全局和F生物鉴定系统产品 ➢ 唯一采用氢气做载气的脂肪酸分析系统
用量大,价格贵,不易保存
鉴定过程无需人为判断
容易误判
操作流程
细菌培养
皂化、甲基化
萃取
气相分析
鉴定报告
目录
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MIS系统构成
Agilent Technologies
gas chromatographs(GC)
MIDI
microbial databases
生物标记物—脂肪酸
➢ 细菌细胞内有300多种脂肪酸成分
➢ 细菌脂肪酸成分相对稳定
➢ Plasmid loss or gain, mutations have no effect on fatty acid composition
➢ 细菌脂肪酸易于提取，定性和定量
操作方法
1. MIS主要用来分析及鉴定在人工培养基中纯化培养的 微生物.
脂肪酸鉴定方法
传统方法
将菌分为嗜氧，厌氧及酵母在 对应培养条件下培养一定时间 （24-48h），通过2小时的脂肪 酸抽提工作后，进行气相色谱， 全自动分析，得到结果。操作 简单。
普通试剂，易保存
需先将菌分为革兰氏阳性及 阴性，并判断球、杆菌，在分 型培养后，需多耗一天时间进 行培养来得到菌的碳源利用率。 操作复杂