实验四 种子生活力测定
实验四 种子生活力测定
实验四种子生活力测定一、实验目的和要求了解测定种子生活力的基本原理，并学会其操作程序。
种子生活力：种子潜在的发芽能力。
二、测定原理四唑：2,3,5－三苯基氯(溴)化四唑（C19H15N4Cl(Br)）的简称为，为白色粉末，水溶液无色。
染色原理：种胚活细胞中的脱氢酶产生氢，与浸入种胚内的四唑发生作用，产生红色稳定而不扩散的三苯基甲（TPF）。
判断标准：凡种胚染成红色者表示有生活力，不染色的种子为无生活力的种子；不染色的部位为坏死的部位，根据坏死组织出现的部位及其分布可以判断种子的生活力。
三、材料及器具材料：刺槐器具及药品：烧杯、解剖刀、解剖针、镊子、培养皿、量筒、滤纸、手持放大镜、玻璃棒、取样匙、1%四唑等四、方法及步骤1. 测定样品的提取从净度测定后的纯净种子中随机提取50粒种子（四分法）。
3次重复。
同时准备部分种子作为后备。
2. 种子预处理（浸种，同发芽测定）3. 溶液配制溶液A：9.078g KH2PO4溶于1000mL水；溶液B：11.876g Na2HPO4·2H2O溶于1000mL水；缓冲液配制：溶液A：溶液B以2:3比例混合;1%的四唑溶液配制：称取四唑1g溶于100mL的缓冲溶液，现配现用。
4. 取种胚、染色处理剥除外种皮和内种皮，取出种胚后放入盛有清水的玻璃皿；记录空粒、腐烂粒及病虫害感染种粒。
如取胚时由于人为因素而破坏种胚，可从后备种子中补取；种胚剥取结束后一起放入四唑溶液，使溶液淹没种仁，上浮者要压沉。
置黑暗处，保持30～35℃染色2～3h。
5. 结果鉴定经过染色的种子分组放在潮湿的滤纸上，借助于手持放大镜或实体显微镜逐粒观察。
有生活力：种胚和胚乳完全着色；无生活力：种胚和胚乳完全不着色；根据种胚或胚乳上未着色的斑块的位置和大小判断种子有无生活力（种胚不染色的最大面积不超过1/4子叶末端）。
6. 种子生活力计算生活力的百分率根据3个重复组计算，不带小数，重复组间最大容许误差与发芽测定的规定相同，最后以3组生活力百分率的平均值为该种子批的生活力。
种子生活力测定
3、炒种法
数出一定数目的种子，放在锅里或铁板上炒， 能爆响的种子多为有生活力的种子，爆响频率 越快、声音越响，种子生活力就越强；虽然能 爆响，但声音弱而无力的，则是无生活力的种 子。
4、剥胚法
先将种子放在清水中浸泡10～24小时，然后剥去 种皮，放入铺有吸水纸的玻璃器皿中，将玻璃器 皿置于温度为20～25℃的湿箱中6～10小时，凡 是胚不腐烂，且各部分增长伸开，饱满而有光泽 的为有生活力的种子。
种子生活力测定
通过以下四种方法可鉴定果树种子生活力：
1、形态鉴定法
凡砧木种子大小均匀，籽粒饱满，千粒重较重， 种皮有光泽，无霉变气味，无病虫危害，剥去种 皮后，胚和子叶呈乳白色、不透明，压之有弹性、 不出油的种子为有生活力的种子；反之，则为失 去生活力或生活力极弱的种子。
2、染色法
将砧木种子浸入水中10～24小时，使种皮软化， 然后细心剥去种皮（桃、杏、李、核桃等有坚硬 木质外壳的种子，只需轻轻砸碎外壳，不需用水 浸泡），放入染色剂(5％红墨水，或0.1％靛蓝胭 脂红，或0.1％曙红溶液）中，染色1～2小时，再 将种子取出，用清水冲洗干净。观察染色后的种 子，凡胚和子叶完全染色者，为无生活力的种子； 胚或子叶部分染色者，为生活力弱的种子；胚和 子叶没有染色者，为有生活力的种子。
实验四 种子生活力测定
实验四种子生活力测定一、目的要求应用化学药剂处理和生物化学法快速测定体眠种子生活力并比较不同方法的效果。
二、材料用具（一）材料：水稻和玉米种子（二）药品：2．3—5一氯化三苯基四氮唑和红墨水等。
三、方法步骤（一）四唑盐类法：1．在洁净的水稻种子中，随机数取试样2份，各100粒剥去谷壳，浸入30℃的水中6－8小时。
2．用2．3．5－氯化三苯基四氮唑配制成的溶液，装在棕色玻璃瓶里，保存在黑暗中。
3．将已剥去壳的软化的米粒沿种胚纵切，取其一半浸于已配好的药液中，放于暗处（最好用棕色发芽皿盛放），经24小时可观察结果，如果提高温度可以缩短处理时间（40℃1小时）。
4．观察结果：凡种胚的主要构造染成深红色者为有生活力的种子，凡种胚的主要构造染成浅红色或不染色者为无生活力的种子。
5．具体种子具体做法：取水稻种子样品200粒，去壳，放纸间或水中30℃预湿12h，沿种子侧面胚纵切，放入0.1%四唑溶液35℃染色1-2h，凡是胚的主要构造染成正常鲜红色，或胚根尖端2/3不染色而其他部分正常染色的种子为有生活力种子。
（二）红墨水染色法：1．从洁净玉米种子随机数取试样二，各100粒，于30℃温水中浸2-3小时。
2．配制红墨水溶液，用红墨水加水配成1：60的溶液。
3．取出软化过的种子，沿胚切成对半，取其半粒种子。
4．浸入红墨水溶液，15分钟后取出，用清水冲洗。
5．观察结果：凡种胚的主要构造不染色或染色浅者为有生活力的种子，凡种胚染色者为无生活力的种子。
四、结果表示与报告计算各个重复中有生活力的种子数，重复间最大容许差距不得超过附表（生活力测定重复间的最大容许差距）的规定，平均百分率计算到最近似的整数。
种子生活力快速测定
种子生活力快速测定实验人员：候勇 2012年度国培班果蔬花卉专业试验目的：种子生活力是指种子的发芽潜力，即发芽力，是判断种子质量的重要指标；要了解种子生活力的大小，最可靠的方法是测定种子的发芽率。
种子的发芽率是指在适宜条件下种子发芽的百分数，它是鉴定种子质量的主要依据，在确定播种量以及种子生理研究中具有重要意义。
本实验的目的就是快速测定种子生活力的方法。
实验仪器及材料：1、仪器：电热恒温培养箱、培养皿、烧杯、镊子、单面刀2、试剂：3%TTC溶液、0.1%BTB溶液、1%BTB琼脂凝胶、红墨水5%3、材料：玉米、小麦吸胀种子方法一：红墨水染色法实验原理：红墨水染色法是根据活种子细胞的原生质膜具有选择性吸收物质的透性，而死种子的胚细胞原生质膜则丧失此性质，于是染料进入死细胞而染色。
操作步骤：1、浸种：取不同种子一部分用沸水煮5-10min，作为死种子；一部分用凉水浸泡一昼夜，吸涨备用。
2、染色：取已吸涨种子100粒，玉米种子可在中间阔面将胚纵切为两半将其中一半放入培养皿中，用5%红墨水染色。
3、结果观察：经过5-8min，倒出红墨水，多次用清水清洗后观察胚的颜色，凡是胚部不着色的为生活良好的种子，有略带红色的说明生活力较弱，都染红的说明无生活力。
结果：活种子%=胚不着色的种子数/供试种子*100 50%=5/10*100方法二：BTB变色法实验原理：活种子进行呼吸作用呼吸空气中的O2，放出CO2。
CO2溶于水成为H2CO3，H2CO3解离为H+和HCO3-，使得种子周围环境的酸度增加。
BTB法通过测定酸度的变化来判断种子活性。
BTB 变色范围为PH6.0—7.6,酸性呈黄色，碱性呈蓝色，中间经过绿色（变色点为PH7.1）。
色泽差异显著，易于观察。
操作步骤：1%BTB染色将吸胀的小麦种子分别整齐地埋于1%BTB琼脂凝胶两个培养皿中，胚向下，间距约1cm。
培养皿置于30C培养箱中培养0.5h，在光亮处下观察，种子附近呈现深黄色晕圈的是活种子，用沸水中杀死的种子分别进行对照。
实验四 生活力测定
实验四生活力测定一、目的种子生活力测定的目的是：1. 快速估测种子样品的生活力，特别是休眠种子样品的生活力；2. 某些样品在发芽测定结束时剩有较多的休眠种子未能萌发，此时可以逐粒测定这些种子的生活力，也可以再取一份样品测定样品的生活力。
二、定义种子生活力是用染色法测得的种子潜在的发芽能力。
三、应用范围本测定适用于附录B表B2给出方法的树种四、原理1. 四唑测定原理应用2，3，5-三苯基氯化（或溴化）四唑（2，3，5-triphenyl tetrazolium chloride of bromide）的无色溶液作为指示剂，以显示活细胞中所发生的还原过程。
这种指示剂被种子吸收，在种子组织内与活细胞的还原过程起反应，从脱氢酶接受氢。
在活细胞中，2，3，5-三苯基氯化四唑经氢化作用，生成一种红色而稳定的不扩散物质，即三苯基甲肤（triphenyl formazan）。
这样就能识别种子中红色的有生命部分和不染色的死亡部分。
除完全染色的有生活力种子和完全不染色的无生活力种子外，还会出现一些部分染色的种子。
在这些部分染色种子的不同部位看到其中存在着或大或小的坏死组织，它们在胚和（或）胚乳（配子体）组织中所处的部位和大小（不一定是颜色的深浅），决定着这些种子是有生活力还是无生活力。
不过同组织的健全程度相关的颜色差异仍然被认为具有决定性意义，主要是因为在某种程度上，它们有助于识别出健全、衰弱或死亡组织并确定其位置。
2. 靛蓝测定原理靛蓝（indigo carmine）为蓝色粉末，分子式为C16H8N2O2（SO3）2Na2。
靛蓝能透过死细胞组织使其染上颜色。
因此，染上颜色的种子是无生活力的。
根据胚染色的部位和比例大小来判断种子有无生活力。
五、试剂1. 使用氯化（或溴化）四唑的水溶液，浓度随树种而略有不同，见表B2中的规定。
如果所使用蒸馏水的pH值不在6.5~7.5范围之内，可将四唑溶于缓冲溶液。
缓冲溶液的配制方法如下：溶液a--在1 000ml水中溶解9.078g磷酸二氢钾(KH2PO4);溶液b--在1 000ml水中溶解11.876g磷酸氢二钠（Na2 H2PO4o2H2O），或9.472g磷酸氢二钠（Na2 H2PO4）。
实验四 种子生活力
③靛红染色
3.方法与步骤
④观察鉴定 将染色后的种子经清水冲洗后立即进行染 色情况的观察鉴定。凡胚部不染色或染成 浅蓝色、胚根尖端或少部分子叶染色的， 为有生活力的种子，凡胚部全部染成蓝色 的，或胚根、胚轴、胚芽、子叶等大部分 染成蓝色的，为无活力种子。 ⑤结果计算与处理 结果计算及容许差距与四唑染色法相同。
（二）靛红染色法
1.原理
有生命力的细胞膜是一个半透性膜，因此对内渗 透的物质有选择透性，而无生命力的细胞膜不是半透 性膜，因此无选择透性。靛红能透过死细胞组织使其 染上颜色。因此，染上颜色的种子是无生活力的。根 据胚染色部位和比例大小来判断种子有无生活力。
2.试剂与设备
①材料：玉米、大豆种子 ②设备：烧杯（100ml）、滤纸、刀片、镊子、培养皿
种子生 活力 测定方法
生物化学法
四唑测定法、溴麝香酚蓝法、甲烯蓝法、 中性红法、二硝基苯法
靛红染色法、红墨水染色法、软X射线造影法Fra bibliotek组织化学法
荧光分析法
离体胚测定法
一、实验目的
通过本试验，学习和掌握四唑染色法和靛红染色 法测定种子生活力的原理和方法，比较种子样品生活 力的高低。
二、实验内容
（一）四唑染色法 （二）靛红染色法
①数取试样 从净度分析后并经充分混合的玉米和 小麦种子中，随机数取100粒种子，2 次重复。 将选取的玉米和小麦种子水浸预湿 室温下浸泡24h,使其充分吸胀。 将吸胀后的玉米种子沿胚中线纵向切 开，取半粒，小麦纵切胚和3/4胚乳， 处理后的种子应保持湿润，直到每个重复 都完成为止。
②种子的预湿 ③种子的处理
实验二
种子生活力的测定
实验目的 实验内容与原理 材料及器具 方法与步骤 作业
种子活性测定实验报告
种子活性测定实验报告1. 引言种子活性是指种子在适宜的环境下发芽并形成新的植株的能力。
测定种子活性有助于评估种子的品质和提高农作物的产量。
本实验旨在通过测定种子的发芽率和活力指数来评估不同处理下的种子活性。
2. 材料与方法2.1 材料- 待测种子样本：A品种、B品种、C品种- 无菌培养基- 无菌培养皿- 实验室摄像机和计算机- 光照设备- 定量滴管和移液管2.2 方法1. 种子表面消毒：将待测种子分别放入无菌培养皿中，用70%酒精浸泡5分钟，然后用无菌水冲洗3次，以达到表面消毒的目的。
2. 播种：在每个无菌培养皿上均匀撒上100颗已消毒过的种子，使其分散排列。
3. 添加培养基：在每个培养皿中加入适量的无菌培养基，使其浸没种子。
4. 培养条件：将培养皿放置在恒温恒湿的培养箱中，保持温度在25左右，相对湿度为80%。
5. 光照条件：在培养皿上方设置适当的光照设备，以提供足够的光照，模拟自然环境。
6. 数据记录：每天记录各品种种子的发芽情况，包括发芽数、芽长等指标。
7. 活力指数计算：将发芽率和芽长指标综合计算得到种子活力指数。
3. 结果与讨论经过实验观察和数据统计，我们得到了以下结果：品种处理1 处理2 处理3 平均发芽率平均芽长- -A 90% 80% 95% 88.3% 3.6cmB 75% 90% 85% 83.3% 4.2cmC 85% 70% 80% 78.3% 3.8cm通过计算我们得到了各品种的种子活力指数：- A品种：88.3% * 3.6cm = 317.88- B品种：83.3% * 4.2cm = 349.86- C品种：78.3% * 3.8cm = 297.54根据结果我们可以看出，B品种的种子活力指数最高，最适合作为优良的种子来源。
活力指数越高，说明种子具有更好的发芽能力和生长潜力。
而对于不同处理方式的比较，我们可以看出处理2对种子的发芽率和芽长有较为显著的提高。
这可能是由于处理2提供了适宜的环境条件，如更加合理的温度和光照，促进了种子的发芽和生长。
种子生活力测定
料垫板（切种子用）、放大镜、标签纸等。
项目五. 实验步骤
任务1 浸泡：将种子用温水（约30--35℃）浸泡5h左右，使种 子充分吸胀，便于染色（一般用先泡好的种子）。 任务2 试样数取与切取：随机数取4份，每份50粒种子。沿种 胚中线纵向切成两半，取其中的一半（一定要带胚并且要 完整的暴露在切3 样品染色：向上述 4 个培养皿中加入 5%的红墨水溶液，将切好的种子浸没，室 温下浸10min染色。
任务4 冲洗与观察鉴定：染色后的种子用清水冲洗种子 至少 2 次，直至洗液无红色为止（注意要缓慢冲洗， 不要让水流直接冲到种子上），观察种胚被染色的情 况（可借助放大镜查看），凡种胚不着色的为有生活 力的种子，种胚和胚乳都被染成相同红色的就是无生 活力的种子。 有 生 活 力 的 种 子
无生活力的种子
任务5 计算：
种子生活力（ % ） = （有生活力的种子数／检测种子数） ×100%（保留整数）
先计算每份实验的种子生活力。再计算其平均生活力。
项目六. 结果报告
姓名：
送检单位 作物名称 品种名称 重复 检验粒数 种子 生活 力测 定 有生活力种子数 种子生活力 平均种子生活力
填表日期： 年 月 日
种子生活力测定的记载 表
产地 送检样品重（g）
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
项目七. 注意事项
1）切取时，一定要沿胚的中线切开； 2）染色时要使漂浮的种子全部浸入试剂中；
3）染色时间不足或太长，否则不易区分；
4）冲洗次数不够，冲洗时把麦粒冲到废液杯中； 5）鉴别错误，把活种子看着死种子，把死种子看着活种子； 6）计算结果4组平均生活力保留整数。
模块三
快速测定种子生活力
红墨水染色法
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实验四种子生活力测定
一、目的要求
应用化学药剂处理和生物化学法快速测定体眠种子生活力并比较不同方法的效果。
二、材料用具
（一）材料：水稻和玉米种子
（二）药品：2．3—5一氯化三苯基四氮唑和红墨水等。
三、方法步骤
（一）四唑盐类法：
1．在洁净的水稻种子中，随机数取试样2份，各100粒剥去谷壳，浸入30℃的水中6－8小时。
2．用2．3．5－氯化三苯基四氮唑配制成的溶液，装在棕色玻璃瓶里，保存在黑暗中。
3．将已剥去壳的软化的米粒沿种胚纵切，取其一半浸于已配好的药液中，放于暗处（最好用棕色发芽皿盛放），经24小时可观察结果，如果提高温度可以缩短处理时间（40℃1小时）。
4．观察结果：凡种胚的主要构造染成深红色者为有生活力的种子，凡种胚的主要构造染成浅红色或不染色者为无生活力的种子。
5．具体种子具体做法：
取水稻种子样品200粒，去壳，放纸间或水中30℃预湿12h，沿种子侧面胚纵切，放入0.1%四唑溶液35℃染色1-2h，凡是胚的主要构造染成正常鲜红色，或胚根尖端2/3不染色而其他部分正常染色的种子为有生活力种子。
（二）红墨水染色法：
1．从洁净玉米种子随机数取试样二，各100粒，于30℃温水中浸2-3小时。
2．配制红墨水溶液，用红墨水加水配成1：60的溶液。
3．取出软化过的种子，沿胚切成对半，取其半粒种子。
4．浸入红墨水溶液，15分钟后取出，用清水冲洗。
5．观察结果：凡种胚的主要构造不染色或染色浅者为有生活力的种子，凡种胚染色者为无生活力的种子。
四、结果表示与报告
计算各个重复中有生活力的种子数，重复间最大容许差距不得超过附表（生活力测定重复间的最大容许差距）的规定，平均百分率计算到最近似的整数。