长期毒性

二、

动物

本试验选用两种动物大鼠和狗,均购自锦州医学院实验动物中心。经过一周检疫和适应 ,选择一般状况良好的动物用于试验。分组时称量体重 ,雄性大鼠重1 2 2.7 士 2 9.5 g,雌性大鼠重 13 6.8 土 2 6.7 g ;雄狗重1 0.8 土 2.7 k g,雌狗重9.9 士 2.6kg。

试验方法

1.分组

鉴于急性毒性试验的给药量超过了限度试验的剂量(小白鼠注射给药超过0.2 g/100 k g), 可考虑只设一个剂量组。另外,文献报告一次静脉给药的最大容量,大鼠和狗分别为0.l m l/10g 和20 m l / 只因此,本试验确定设二个剂量组:低剂量相当于上述最大容量(大鼠为10m l / k g,狗为l.7 m l / k g),高剂量则根据予试验的结果再扩大5、7倍(大鼠为4 5 m l/ k g,狗为1 3 m l / k g)。为了比较,同时设生理盐水对照组(大鼠一次静注4 5m l / k g,狗为13 m 】/ kg )。分组时将雌雄大鼠和狗按体重分层,再随机分配。大鼠每组雌雄各1 0 只,狗为各2只。

2 给药方法

连续2 8 天,每天一次,按规定剂量给动物静注复方甘油注射液。注射速度1 5 ~ 2 0m l /m

i n。注射部位,大鼠取尾静脉,狗取后肢小隐静脉。

3 观察与检查

3.1 一般症状观察、体重和进食量测定每天午前、午后两次仔细观察动物的外形、活动有无异常。每周一次测定动物体重和进食量。

3.2血液学及血液生化检查

试验开始前一天及连续.给药 1 4、2 8天后,各对动物进行一次检查.血液学指标为:红细胞计数、血红蛋白、白细胞总数及分类、血小板计数。血液生化指标有:谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、尿素氮及血清钠。采血方法,大鼠,头两次以钳取眼球法,末次以断头法取血,狗则三次都是从后肢小隐静脉取血。每次采血前须让动物断绝饮食8 小时,目的减轻药物对血液稀释的影响。

3.3 心电图检查

试验前后给每只狗各做一次心电图( l导联) 检查。由于狗的心电图所受影响因素较多,个体间变异很大,而同一只狗在不同时间却变化较小的特点,故以同一狗前后自身对照为基础,判断雌雄狗不同组别的心电图波形变化之大小。

3.4 病理学检查

试验期终了,将所有狗及被抽检的大鼠(每组取雌雄大鼠各4只)以放血法快速处死。随即解剖,首先肉眼观察殉和大鼠各种内脏器官有无异常,继而摘出并称量不同性别、不同组别动物的心、肝、脾、肺、肾、脑的湿重,依据解剖当日的动物体重计算各种脏器的相对重量一脏器系数(g 100g B.W.)。最后,将上述器官连同胃和小隐静脉等一并施行 1 0 肠福尔马林固定,石腊包埋,H E 染色,光学显微镜观察。

试验结果与讨论

1 一般症状

试验过程中,大鼠或纯的不同组别间, 其外形和活动,如眼、耳、鼻、皮肤、粘膜、呼吸、进食、大小便、姿势等未见有明显差别。低剂量组雌鼠中,在第二次钳取眼球后有一只于翌日死亡,可能是失血过多引起的

2. 体重与进食量

曾先后四次测定雌雄大鼠或狗的不同组别的平均体重和进食量,结果发现同种属、同性别、不同组别间的体重增长大致相同,狗呈体重增长抑制倾向,而大鼠的体重则呈负增长

导致后一现象的原因,可能来自大鼠眼部创伤和擒捉注射的机械刺激及精神刺激。大鼠和狗的进食量伴随着体重增加略有所增,各组的变化幅度呈平行趋势(见表l)。

3.血液学及血液生化检查

试验前及连续用药1 4、2 8天之后,各检查一次。无论大鼠或拘,其不同性别,组别之间,所列各项血液学及血液生化指标均无明显差别(见表2、5 )。

4.心电图检查

分析每只狗于试验前后做的两份电图,可以认为,无论雌雄,其不同组别间的

P 一R 间期、Q一T 间期以及R波振幅的改变均未超过动物自发性变化的范围(见表6 ).

5.病理学检查

经系统解剖,对大鼠或狗的不同组别进行肉眼观察,结果均未发现具有毒理学意义的改变.各组大鼠或狗,包括生理盐水对照组,心、肝、肾、肺等器官的相对重量增大,估计是由动物体重增长抑制所带来的继发性改变(见表7 )。对上述动物的心、肝、脾、肺、肾、脑、胃及小隐静脉进行病理组织学检查,结果亦未见明显病理性改变。

综上所述,在本试验条件下,复方甘油注射液未能引起狗和大鼠出现明显的机能性改变,以及特异性靶器官、靶细胞的损害。故可认为复方甘油注射液对狗和大鼠的最大无作用量分别超过1 3 m l/ k g 和4 5 m l / k g。

根据试验结果推论,如果成人每天一次,每次5 O0 m l,连续1~ 7天静注复方甘油注射液,估计在此剂量范围内是相对安全的。

大鼠和狗静脉注射注射液4周体重和进食量

Animal species

0d 7d 14d 21d 28d

45 10 132.5±14.1 129.4±10.1 131.1±12.6 128.5±14.8 130.7±16.7 10.6 11.3 11.2 11.7

10 10 114.4±15.2 112.1±14.3 113.2±13.3 112.0±11.9 113.6±12.4 9.2 9.6 8.9 10.1

45 10 121.3±18.7 118.9±16.5 120.1±17.9 117.8±16.6 117.3±15.4 10.5 11.2 11.0 11.4

45 10 130.6±17.2 128.0±12.9 129.3±15.8 126.7±14.2 129.1±15.3 10.4 11.8 11.2 11.6

10 10 135.8±16.8 131.7±14.1 133.1±15.3 129.4±12.7 131.9±11.8 10.7 11.2 10.9 12.0

45 10 144.0±19.1 140.1±16.2 141.2±17.9 141.0±16.8 141.5±13.7 11.5 11.5 12.0 12.5

13 2 9.75±3.10 9.65±2.90 9.80±3.38 9.95±3.11 10.11±3.25 212 215 219 224

1.7 2 10.82±

2.55 10.71±2.42 10.98±2.60 11.10±2.38 11.12±2.40 234 236 239 243

13 2 11.84±1.28 12.40±1.13 12.42±1.45 12.44±1.36 12.45±1.17 256 259 263 266

13 2 8.70±1.52 8.61±1.75 8.87±1.68 8.96±1.64 9.05±1.62 180 191 193 196

1.7 2 11.74±0.89 11.50±0.99 11.90±1.03 1

2.14±1.24 12.25±1.01 254 258 262 266

13 2 9.30±1.66 9.13±1.78 9.35±1.98 9.49±2.03 9.94±2.86 201 205 210 216

动物体重：连续给药每隔七天测得的体重

进食量：给药后某周七天之中，每只动物的平均进食量

表中数据均为均数(X±S)

0d 14d 28d 0d 14d 28d

10 7.2±0.4 7.1±0.5 6.9±0.5 137.1±10.6 141.3±8.6 138.9±6.7

10 7.6±0.4 7.5±0.4 7.3±0.4 148.6±9.0 138.5±5.4 142.7±9.8

10 7.4±0.5 7.2±0.4 7.1±0.5 136.3±8.5 142.8±9.2 140.3±4.5

10 7.5±0.1 7.3±0.3 7.0±0.4 145.1±5.7 144.3±6.7 138.2±6.3

10 7.1±0.5 7.0±0.5 7.2±0.6 130.4±7.4 132.4±4.8 149.3±7.6

10 7.3±0.4 7.2±0.4 7.1±0.5 141.5±6.2 137.5±3.9 132.1±6.0 续表2

0d 14d 28d 0d 14d 28d

235.6±30.2 214.3±27.1 235.3±36.2 8.5±1.7 8.3±1.4 8.4±2.3

250.2±28.1 230.5±40.6 260.2±22.0 8.1±2.3 8.0±1.3 7.7±1.5

219.7±42.0 227.4±25.2 241.4±42.7 8.2±1.4 7.1±2.4 6.9±2.7

224.4±38.5 240.5±48.3 237.5±31.0 8.0±2.3 8.1±2.8 8.0±1.9

239.5±41.8 255.2±44.8 215.4±19.2 7.7±1.5 7.0±1.3 7.0±2.2

240.8±20.3 213.7±35.2 215.7±26.4 7.9±2.1 7.5±4.4 6.9±3.3