银杏叶提取物中银杏酸含量测定方法
复方银杏叶制剂中总银杏酸含量测定方法的优化
复方银杏叶制剂中总银杏酸含量测定方法的优化郑云枫;阚宏飞;杨阳;严辉;潘苏华;郭海英【摘要】目的:优化复方银杏叶制剂中银杏酸(GA)的测定方法.方法:以白果新酸对照品结合总银杏酸对照品定位,采用HPLC测定复方银杏叶制剂中5种银杏酸成分总含量,并比较石油醚提取/甲醇溶解、甲醇提取/氯仿萃取和甲醇提取/正己烷萃取法对制剂中银杏酸含量测定结果的影响;进一步以甲醇浓度、溶剂体积、提取时间为影响因素,以总银杏酸含量测定值为评价指标,通过Box-behnken响应面法分析与优化测定方法.结果:甲醇提取/正己烷萃取法对复方银杏叶制剂中总银杏酸的提取精制效果最好.响应面法分析显示,提取溶剂及溶剂体积对总银杏酸含量值具有显著性影响(P<0.01),最佳提取条件:提取溶剂为85％甲醇,溶剂体积为100 mL,提取时间为1.8 h,在此条件下方法的平均回收率达97.7％,精密度RSD为1.42％.结论:HPLC简便可行,测定结果准确,可用于测定银杏叶提取物及复方制剂中银杏酸的含量测定.【期刊名称】《中国现代中药》【年(卷),期】2018(020)010【总页数】6页(P1282-1287)【关键词】复方银杏叶制剂;总银杏酸;含量测定;响应面曲线法;Box-Behnken设计【作者】郑云枫;阚宏飞;杨阳;严辉;潘苏华;郭海英【作者单位】南京中医药大学,江苏南京 210023;南京中医药大学,江苏南京210023;南京中医药大学,江苏南京 210023;南京中医药大学,江苏南京 210023;南京中医药大学,江苏南京 210023;南京中医药大学,江苏南京 210023【正文语种】中文银杏叶制剂中残留银杏酸（ginkgolic acid，GA）的问题一直受到国内外学者的关注[1]，它被认为是银杏叶提取物（EGb）及制剂中的主要有害物质，可引起肝损伤、免疫毒性、胚胎毒性及严重的过敏反应[2-3]。
为了保障银杏叶制剂使用的安全性，所有EGb及其制剂必须建立相应的银杏酸检测方法，并严格限定其含量[4-5]。
注射用银杏叶提取物及其制剂中总银杏酸含量的测定
注射用银杏叶提取物及其制剂中总银杏酸含量的测定引言银杏是一种珍贵的中草药，其叶子被广泛应用于医药制剂中。
银杏叶提取物中的总银杏酸是其主要活性成分之一，具有改善微循环、抗氧化、抗炎等多种作用。
监测和测定注射用银杏叶提取物及其制剂中总银杏酸含量是非常重要的。
材料与方法1. 实验仪器与试剂(1) 仪器: 离心机、紫外可见分光光度计、磁力搅拌器、研钵、磁力搅拌器、0.22μm微孔膜过滤器。
(2) 试剂: 甲醇、乙醇 (分析纯)、总银杏酸标准品。
2. 样品的制备粉碎银杏叶干燥物，取适量粉碎物加入甲醇与乙醇混合溶液浸泡，振荡60分钟后过滤，取滤液加入甲醇与乙醇混合液中，浸泡24小时后过滤，浓缩收集溶剂，干燥得到提取物。
3. 总银杏酸的测定(1) 样品溶液的制备: 取适量提取物加入甲醇与乙醇的混合溶液中，振荡溶解，通过0.22μm微孔膜过滤器过滤。
(2) 样品溶液的检测: 取适量样品溶液，用紫外可见分光光度计进行检测，以总银杏酸标准品为对照组。
数据处理通过测定样品中总银杏酸的浓度，得出样品中总银杏酸的含量，并与标准品进行对照，计算出样品中总银杏酸的含量。
讨论注射用银杏叶提取物及其制剂中总银杏酸含量的测定是十分重要的。
总银杏酸的含量不仅决定了银杏叶提取物的质量，也与其药效密切相关。
对总银杏酸含量进行精准的测定是保证药品质量和有效性的重要保障。
结论制作注射用银杏叶提取物及其制剂中总银杏酸含量的测定是十分关键的，通过合理选择仪器、试剂和标准操作流程，可以准确测定样品中总银杏酸的含量，并且得出科学准确的数据，为保障药品的质量和有效性提供了重要的支持。
这一研究也为银杏叶提取物及其制剂在临床上的应用提供了科学的参考依据。
银杏提取物标准
中国药典银杏叶提取物质量标准我要投稿作者：不详出处：不详时间：2010-11-23类别：银杏叶提取物人气：432 中国药典银杏叶提取物质量标准：制法：乙醇（不是甲醇）回流提取，大孔树脂吸附，喷干，粉碎。
性状：浅棕黄色至棕褐色粉末；味微苦。
检查：水分小于5.0%；炽灼残渣小于0.8%；重金属不得过百万分之二十，即20ppm以下。
黄酮苷元峰面积比，槲皮素与山奈素的峰面积比应为0.8至1.5。
（如果超过1.5，则应怀疑被人为添加了槲皮素或者芦丁。
）总银杏酸不得过百万分之十，即10ppm。
含量测定高效液相色谱法。
总黄酮醇苷不得少于24.0%；总黄酮醇苷含量=槲皮素含量+山奈素含量+异鼠李素含量萜类内脂总量不得少于6.0%；萜类内脂总量=白果内脂+银杏内脂A+银杏内脂B+银杏内脂C。
银杏叶提取物 Ginkgo Biloba Extract（1）原料级标准（不可直接用于制剂）（1）Routine银杏黄酮≥24% Total Ginkgo flavone glycosides ≥ 24%槲皮素与山奈酚峰比0.8--1.5之间 Quercatin: kaemperol 0.8--1.5银杏总内酯≥6% Total terpene lactones ≥ 6%（2）中国药典2005版标准（2）CP2005银杏黄酮≥24% Total Ginkgo flavone glycosides ≥ 24%槲皮素与山奈酚峰比0.8--1.5之间 Quercatin: kaemperol 0.8--1.5 银杏总内酯≥6% Total terpene lactones ≥ 6%银杏酸＜10ppm Ginkgolic acid ＜ 10ppm(3) 低酸银杏叶提取物 EGB761 (3) EGB761银杏黄酮≥24% Total Ginkgo flavone glycosides ≥ 24%槲皮素与山奈酚峰比0.8--1.5之间 Quercatin: kaemperol 0.8--1.5 银杏总内酯≥6% Total terpene lactones ≥ 6%银杏酸＜5ppm Ginkgolic acid ＜ 5ppm（4）超低酸银杏叶提取物（4）Minimal acid银杏黄酮≥24% Total Ginkgo flavone glycosides ≥ 24%槲皮素与山奈酚峰比0.8--1.5之间 Quercatin: kaemperol 0.8--1.5银杏总内酯≥6% Total terpene lactones ≥ 6%银杏酸＜1ppm Ginkgolic acid ＜ 1ppm（5）中国药典2005标准水溶性银杏叶提取物（5）CP2005（ Water soluble）银杏黄酮≥24% Total Ginkgo flavone glycosides ≥ 24%槲皮素与山奈酚峰比0.8--1.5之间 Quercatin: kaemperol 0.8--1.5银杏总内酯≥6% Total terpene lactones ≥ 6%银杏酸＜10ppm Ginkgolic acid ＜ 10ppm溶解度：1克溶于1000毫升水中 Solubility:1g extract in 1000 ml water (6) 低酸水溶性银杏叶提取物 EGB761 (6) EGB761（ Water soluble）银杏黄酮≥24% Total Ginkgo flavone glycosides ≥ 24%槲皮素与山奈酚峰比0.8--1.5之间 Quercatin: kaemperol 0.8--1.5银杏总内酯≥6% Total terpene lactones ≥ 6%银杏酸＜5ppm Ginkgolic acid ＜ 5ppm溶解度：1克溶于100毫升水中 Solubility:1g extract in 100 ml water （7）超低酸水溶性银杏叶提取物（7）Minimal acid（ Water soluble）银杏黄酮≥24% Total Ginkgo flavone glycosides ≥ 24%槲皮素与山奈酚峰比0.8--1.5之间 Quercatin: kaemperol 0.8--1.5银杏总内酯≥6% Total terpene lactones ≥ 6%银杏酸＜1ppm Ginkgolic acid ＜ 1ppm。
银杏叶提取物中的银杏酸
银杏叶提取物中的银杏酸更新时间：2010-8-4 8:56:52银杏是一种具有很高药用价值的植物, 其叶、果实、种子均有较高的药用价值, 其药理作用不断被认识, 临床应用范围逐步扩大。
银杏叶提取物中的黄酮苷与银杏内酯分别具有抗氧化、抗血小板聚集及改善记忆、提高机体免疫功能等药理作用, 银杏叶提取物制剂目前在临床上用于治疗胸痹、中风, 实际上其功能远不止这些, 已有确切的报道指出其对周围神经病变、老年痴呆症等有良好的功效。
该类银杏叶提取物制剂的应用范围日渐扩大, 产品也涉及药品、保健品和化妆品等领域。
银杏叶有重要的药用价值, 它含有多种药用成分, 如: 银杏黄酮类、萜类内酯类、生物碱、亚油酸、酚类、奎宁酸、抗坏血酸、白果酸、白果酮等, 这些物质对于由动脉硬化、血脂过高引起的各种疾病有很好的疗效, 现有上市的银杏叶提取物叶片, 多以单味银杏叶提取物为原料制成。
相关研究发现, 银杏叶中除含有功效成分银杏黄酮苷与银杏内酯外, 还含有一类引起不良反应的烷基酚酸类物质, 约占银杏叶干重的l%~2%, 主要由银杏酸、白果酚和白果二酚组成[1], 其中与不良反应有关的主要是银杏酸。
目前已知的银杏叶提取物制剂中银杏酸主要有白果酸( Ginkgolic acid, a) 、氢化白果酸( Hydroginkgolic acid, b) 、氢化白果亚酸( Hydroginkgolinicacid, c) 和白果新酸( Ginkgoneolic acid, d) , 各化合物结构与生漆中的致敏物质漆酚类似, 而此结构正是致敏的根源, 其中烃基上的双链越多越易致敏。
国外研究报道, 银杏叶提取物中的银杏酸具有潜在的致敏和致突变作用、和强烈的细胞毒性[5], 可引起严重的过敏反应、基因突变、神经损伤, 导致恶心和胃灼热、过敏性休克、过敏性紫癜、剥脱性皮炎、消化道黏膜过敏、痉挛和神经麻痹等不良反应。
在德国银杏叶提取物制剂EGb761的一项回顾性研究中报道, 8505例用药患者中共有9例出现胃肠道不良反应。
注射用银杏叶提取物及其制剂中总银杏酸含量的测定
注射用银杏叶提取物及其制剂中总银杏酸含量的测定作者：孙健李丽敏胡青诸艳蓉毛秀红季申来源：《世界中医药》2019年第04期摘要;目的：建立超高效液相色谱串联三重四极杆质谱测定注射用银杏叶提取物及其制剂中总银杏酸的方法。
方法：采用HLB固相萃取净化制剂，Waters Cortecs T3色谱柱（50mm×2.1 mm，2.7 μm），以甲醇-1%冰醋酸溶液（90∶10）为流动相，在电喷雾离子化负离子模式下，以多反应监测方式（MRM）检测。
结果：银杏酸C13：0、C15：1、C17：1在0～50 ng/mL范围内成良好线性关系，相关系数均大于0.999;平均加样回收率为97.3%～115.2%，相对标准偏差（RSD）为0.3%～3.4%;检出限分别为0.03、0.06、0.04 mg/kg。
结论：本方法可应用于实际样品的测定。
关键词;银杏叶提取物;注射剂;银杏酸C13：0;银杏酸C15：1;银杏酸C17：1;超高效液相色谱-三重四极杆质谱;多重反应监测;固相萃取Determination of Ginkgolic Acids in the Ginkgo Biloba Extract for Injection and its Preparation Sun Jian，Li Limin，Hu Qing，Zhu Yanrong，Mao Xiuhong，Ji Shen（Shanghai Institute for Food and Drug Control，Shanghai 201203，China）Abstract;Objective：To develop an analytical method for determination of ginkgolic acids in the ginkgo biloba extract for injection and its preparation by ultra-high performance liquid chromatography-triple quadrupole mass spectrometry.Methods：The preparations were purified by HLB SPE.A chromatographic column，Waters Cortecs T3（50 mm×2.1 mm，2.7 μm），was used with methanol-1% acetic acid（90∶10）as the mobile phase.The ginkgo acids were detected by electrospray ionization mass spectrometry in negative mode with multiple reaction monitoring （MRM）mode.Results：Ginkgo Acid C13：0，C15：1 and C17：1 possessed good linear correlation in the mass concentration range from 0 to 50 ng/mL，with the correlation coefficients more than 0.999.The mean recoveries were in the range of 97.3%-115.2%，and the RSDs were 0.3%-3.4%.The limits of quantification were 0.03，0.06，0.04 mg/kg，respectively.Conclusion：The method could be applied to the analysis of ginkgolic acids in actual samples.Key Words;Ginkgo biloba extract; Injection; Ginkgolic acid C13：0; Ginkgolic acid C15：1; Ginkgolic acid C17：1; Ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry; Multiple reaction monitor; Solid-phase extraction中圖分类号：R284.1文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2019.04.006银杏叶提取物为银杏科植物银杏的干燥叶经加工制成的提取物，其主要功效为活血化瘀通络。
银杏叶提取物中组分定性检测及含量测定
第43卷第2期罗祥敏等：银杏叶提取物中组分定性检测及含量测定191 DOI：10.13822/ki.hxsj.2021007861 化学试剂，2021，43(2)，191 〜195银杏叶提取物中组分定性检测及含量测定罗祥敏a’h，雷芳a’b，陈伟b，何琚(贵州大学a.药学院;b.贵州省生化工程中心，贵州贵阳550025)摘要：通过显色反应实验、泡沫实验和p H试纸对银杏叶提取物中组成成分类别进行定性测试，并采用U V法和高效液相色谱（HPLC)法测定银杏叶提取物中成分含量。
银杏叶提取物均含有黄酮、有机酸、多糖、蒽醌、鞣质、萜类化合物，无皂苷和生物碱类化合物（去掉了各成分含量范围）。
两种银杏叶提取物中黄酮、有机酸、多糖、蒽醌、萜类化合物含量相差不大，鞣质在2015年版药典银杏叶提取物中含量明显高于水溶性银杏叶提取物。
为银杏叶提取物质量整体评价及安全、稳定性研究提供数据参考。
关键词：银杏叶提取物；组成成分分析；定性试验;含量测定；HPLC;黄酮中图分类号：R284.1文献标识码：A 文章编号：0258-3283 ( 2021) 02-019卜05Qualitative Determination and Content Determination of Components in G i n k g o B i l o b a Extract LUO X iang-m ina h, LEI Fangah ^ CHEN W e i',HE7u/i * b( a. College of Pharmacy, b. Research Center of Biochemistry Engineering of Guizhou Province, Guizhou University，Guiyang 550025,C h in a)，Huaxue Shiji,2021，43(2) , 191 〜195Abstract：The constituents of Ginkgo biloba extract were determined by qualitative color development,foam test and pH test paper, and the content of active components of Ginkgo biloba extract were determined by UV and HPLC.Gin^o biloba extract contains flavonoids,organic acids,polysaccharides,anthraquinones,tannins,terpenoid lactones,no saponins and alkaloids.The content of flavonoids , organic acids, polysaccharides, anthraquinones, terpenoid lactones in two kinds of Ginkgo biloba extract did not differ significantly, tannins content was higher than water-soluble Ginkgo biloba extract in the 2015 edition.Data reference for the overall quality evaluation,safety and stability study of Ginkgo biloba extract was provided.Key words ：biloba extract；constituent analysis；qualitative test；content determination ； HPLC ；flavonoids银杏（G ira/cgo 6iZ o6a)又名白果树、公孙树，素 有“活化石”、“植物界的熊猫”之称，是我国特有的最古老树种之一，约占世界总量的70%[1]，我 国将其列为国家重点保护植物[2‘3]。
银杏叶提取物
法计算总银杏酸含量，即得。
本品含总银杏酸不得过 10mg/kg。
【含量测定】总黄酮醇苷 照高效液相色谱法（通则 0512）测定。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4%磷酸溶
液（50：50）为流动相；检测波长为 360nm。理论板数按槲皮素峰计算应不低于 2500。
黄酮苷元峰面积比 按〔含量测定〕项下的总黄酮醇苷色谱计算，槲皮素与山柰素的峰
面积比应为 0.8～1.2，异鼠李素与槲皮素的峰面积比值应大于 0.15。
总银杏酸 照高效液相色谱法（通则 0512）测定。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长为 150mm，柱
内径为 4.6mm，粒径为 5μ m）；以含 0.1%三氟乙酸的乙腈为流动相 A，含 0.1%三氟乙酸的
0～30
75→90
25→10
30～35
90
10
35～36
90→75
10→25
36～45
75
25
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对照品溶液的制备 取白果新酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每 1ml 含 1μ g 的
溶液，作为对照品溶液；另取总银杏酸对照品适量，用甲醇制成每 1ml 含 20μ g 的溶液，作
银杏叶提取物 Yinxingye Tiquwu GINKGO LEAVES EXo biloba L.的干燥叶经加工制成的提取物。
【制法】取银杏叶，粉碎，用稀乙醇加热回流提取，合并提取液，回收乙醇并浓缩至适
量，加在已处理好的大孔吸附树脂柱上，依次用水及不同浓度的乙醇洗脱，收集相应的洗脱
相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程分别计算白果内酯、银杏内酯 A、银杏内酯 B 和银
注射用银杏叶提取物及其制剂中总银杏酸含量的测定
注射用银杏叶提取物及其制剂中总银杏酸含量的测定【摘要】本研究旨在开发一种测定注射用银杏叶提取物及其制剂中总银杏酸含量的方法。
样品经过制备后，通过色谱条件进行分析，采用定量方法测定银杏酸含量，并进行方法验证。
结果分析表明，该方法准确可靠，适用于银杏酸的测定。
结论指出，本研究为注射用银杏叶提取物及其制剂的质量控制提供了重要参考，具有一定的应用前景。
【关键词】注射用银杏叶提取物、总银杏酸含量、测定、样品制备、色谱条件、定量方法、方法验证、结果分析、总结、展望1. 引言1.1 研究背景目前，国内外对于银杏叶提取物中总银杏酸含量的测定方法主要有高效液相色谱法、气相色谱法、紫外分光光度法和色谱质谱联用法等。
这些方法在测定精度、灵敏度和准确性上各有优劣，但都需要进行方法的验证和结果的分析，以确保测定结果的可靠性和准确性。
本研究旨在建立一种简便、准确的方法，用于测定注射用银杏叶提取物及其制剂中总银杏酸的含量，并进行方法验证和结果分析，为其临床应用提供科学依据。
1.2 研究目的本研究旨在建立一种精确、快速、稳定的测定注射用银杏叶提取物及其制剂中总银杏酸含量的方法。
当前市面上对注射用银杏叶提取物及其制剂中总银杏酸含量的测定方法存在一定的局限性和不足，在一定程度上影响了产品质量的监控和控制。
本研究的目的是对现有的测定方法进行改进和优化，使其具有更高的灵敏度、准确度和稳定性，从而为相关企业提供更准确、可靠的产品质量控制手段。
通过该研究，也将为相关行业的技术研发和质量监管提供参考和借鉴，推动该领域的发展和进步。
2. 正文2.1 样品制备样品制备是该研究的关键步骤之一，其质量直接影响到后续的分析结果。
需要选择高质量的注射用银杏叶提取物作为样品。
样品的选择应该考虑到其来源、保存条件以及处理方式等因素，以确保样品的稳定性和纯度。
在实际操作中，可以选择市售的银杏叶提取物作为样品，也可以自行提取银杏叶提取物。
在样品制备过程中，需要注意保持样品的稳定性和一致性。