手足口病的实验室检测

五、标本种类及采集、运送

（一）粪便标本 采集病人发病 7日内的粪便标本，用于病 原检测。粪便标本采集量 5~8g/ 份，采集 后立即放入无菌采便管内， 4℃暂存立即 (12h 内 ) 送达实验室，－ 20℃ 以下低温冷 冻保藏，需长期保存的标本存于－70℃冰 箱。

（二）咽拭子标本 采集病人发病3日内的咽拭子标本，用于病原 检测。用专用采样棉签，适度用力拭抹咽后壁 和两侧扁桃体部位，应避免触及舌部；迅速将 棉签放入装有3~5ml保存液（维持液或生理盐 水）的采样管中，在靠近顶端处折断棉签杆， 旋紧管盖并密封，以防干燥。4℃暂存立即 （12h内）送达实验室，－20℃以下低温冷冻 保藏，需长期保存的标本存于－70℃冰箱。
四、标本采集对象
出现手足口病暴发疫情的所在社区（村）的临床诊 断病例和与之相邻的无病例社区（村）的托幼机 构5岁以下儿童的健康对照人群。 标本包括粪便、咽拭子和疱疹液，如果患者出 现神经系统症状，可以采集脑脊液标本。对于血 清学诊断，需要在急性期和恢复期采集双份血清 标本。临床标本在运输和贮存过程中要避免反复 冻融，如果不能确保-20℃的条件，应该在0~8℃ 运输和保存。标本应冷冻运输，运输时要附有必 要的信息。

（三）血清标本 采集急性期（发病0-3d）和恢复期（发 病14-30d）双份配对血清用于抗体检测。 静脉采集3~5ml全血，置于真空无菌采血 管中，分离血清，将血清置于－20℃以 下冷冻保存。

（四）疱疹液 在手足口病的实验室诊断中，从疱疹液中分离到 病毒具有很高的诊断价值，可同时采集多个疱疹 作为一份标本。先用75%的酒精对疱疹周围的皮肤 进行消毒，然后用消毒针将疱疹挑破用棉签蘸取 疱疹液，迅速将棉签放入内装有 3~5ml保存液（维 持液或生理盐水）的采样管中，在靠近顶端处折 断棉签杆，旋紧管盖并密封。所采集标本4℃暂存 立即（ 12h内）送达实验室，－20℃以下低温冷冻 保藏，需长期保存的标本存于－70℃冰箱。

（五）脑脊液标本 出现神经系统症状的病例，要采集脑脊液标本， 进行病原和抗体检测，从脑脊液中分离病毒也 具有很高的诊断价值。采集时间为出现神经系 统症状后 3 天内，采集量为 1.0-2.0ml 。采集后 立即装入无菌带垫圈的冻存管中， 4℃ 暂存立 即(12h内)送达实验室，－20℃以下低温冷冻保 藏，需长期保存的标本存于－70℃冰箱。
手断一般是通过临床标本进行病毒 分离和病毒鉴定。也可以通过血清学试验来检 测血清中的中和抗体，或直接从临床标本中检 测病毒的核酸来诊断。 能引起手足口病的肠道病毒有很多血清型，不 同细胞系对不同病毒的敏感性是有所不同的。 通常用于肠道病毒分离的细胞系为RD细胞（对 CA16和EV71敏感）、HEp-2细胞（对某些柯萨 奇B组病毒敏感）及Vero细胞等。

使用血清型特异性的中和抗血清进行的 中和试验是肠道病毒鉴定的基本方法， 如果使用了适当的抗血清，实验结果是 比较可靠的。因为肠道病毒包括若干个 血清型，通常使用组合抗血清进行鉴定。

当无法进行病毒分离或得不到适用于病 毒分离用的标本时，血清学检测可以为 肠道病毒的感染提供一个间接的证据。 一般用急性期血清与恢复期血清的检测 结果进行比较，抗体滴度呈四倍或以上 增高证明有急性感染。但是，无症状的 肠道病毒感染也是常见的，所以对检测 结果的解释要慎重一些。


（六）病例密切接触者的标本采集 选择典型病例所在的托幼机构、或所在 村，以新发病例密切接触者为采样对象， 采集单份粪便和血清标本。 （七）健康对照的标本采集 选择患儿发病所在社区（村）的临近无 病例的社区（村）或托幼机构。采集5岁 以下的儿童单份粪便和血清标本。
六、标本采集注意事项

二、实验室诊断病例
根据手、足、口等部位典型皮疹即可作出 HFMD 临床诊断，流行病学接触史有助 于诊断，临床诊断病例中符合下列之一， 即为实验室诊断病例： 1．病毒分离 自咽拭子或咽喉洗液、粪便或肛拭子、脑 脊液或疱疹液、以及脑、肺、脾、淋巴 结等组织标本中分离到肠道病毒。


2．血清学检验 病人血清中特异性 IgM 抗体阳性，或急性期与 恢复期血清IgG抗体有4倍以上的升高。 3．核酸检验 自病人血清、咽拭子或咽喉洗液、粪便或肛拭 子、脑脊液或疱疹液以及脑、肺、脾、淋巴结 组织等的标本中检测到病毒核酸。
在手足口病的实验室诊断中，从疱疹液或脑脊液 中分离病毒具有很高的诊断价值，但对于不同血 清型的肠道病毒，脑脊液中的病毒分离率是大不 相同的。用于采集咽拭子的无菌拭子要放在适当 的保存液中，如维持液或生理盐水，以防干燥。 用于分子生物学诊断的标本采集与病毒分离标本 的采集方法一样。为了保证检测结果的准确性和 有效性，标本应在病例发病后尽早采集，尽快检 测。不能立即检测的标本应冷冻保存。对于血清 学诊断，急性期血清应该在发病后尽早采集，恢 复期血清在发病两周后采集。
谢谢大家

为了提高检测速度，也为了辅助中和实 验法进行毒株鉴定，最近很多实验室都 使用分子生物学方法。目前，用分子生 物学方法对肠道病毒进行定型还没有统 一的标准，而且要根据检测目的选择使 用适用的方法。
一、病原学

引起手足口病的主要为小RNA病毒科、肠道病毒属的柯萨 奇病毒(Coxasckie virus) A组16、4、5、7、9、10 型， B组 2、5、13 型；埃可病毒（ECHO viruses）和肠道病毒71型 （EV71），其中以EV71及Cox Al6型最为常见。肠道病毒 适合在湿、热的环境下生存与传播，对乙醚、去氯胆酸盐 等不敏感，75%酒精和5%来苏亦不能将其灭活，但对紫外 线及干燥敏感。各种氧化剂 ( 高锰酸钾、漂白粉等 ) 、甲醛、 碘酒都能灭活病毒。病毒在50℃可被迅速灭活，但1mol浓 度二价阳离子环境可提高病毒对热灭活的抵抗力，病毒在 4℃可存活1年，在-20℃可长期保存，在外环境中病毒可长 期存活。
三、检测结果的评价
如果从临床标本中分离到肠道病毒，尤其是分离 自脑脊液、疱疹液，那么很可能该病毒就是病 因病原。当无法进行病毒分离或未分离到病毒 时，血清学诊断方法可以作为病毒感染的间接 证据。对于难以分离到的肠道病毒，分子生物 学方法如RT-PCR是很有用的。肠道病毒有时引 起无症状感染，所以实验结果的实际意义应结 合临床过程和流行病学资料进行解释。