黄原胶的发酵和提取
_黄原胶

改善方法
新菌种的研发
如果能采用基因工程的手段将黄原胶生产菌种中 的产胶基因分离出来,再导入新的菌株中,使其具有 双产胶基因或更多的产胶基因,饼稳定遗传,将会使 我们的黄原胶产量成倍增长。一旦成功,将会使黄原 胶的生产水平有极大的飞跃。 改善生物反应器 生物反应器主要指发酵罐,是制造生物物质的关 键设备。所以在不断改进现有的生物反应器的基础上, 更朝着高效节能、多型号、大型化和计算机控制调作 发现发展。
二 发酵工艺
黄原胶经过半个世纪的发展精琢,现已较为成熟。它的工业生产方法是采用微生 物发酵来制取。
菌体
控制操作条件
菌种选取
发酵罐
发 酵 液
灭 菌
滤 出 菌 体
沉 淀
产 品 的 分 离
菌种生长
接种
乙醇告示溶剂 蒸馏回收
产 品 的 清 洗 脱 水 干 燥
黄 原 胶
微生物发酵菌
野油菜黄单胞菌(主要菌种) 锦葵黄单胞菌 发酵的菌种 菜豆黄单胞菌
产品的分离和提纯
目前,黄原胶的分离提取部分,其工艺路线主要有乙醇沉淀 法,钙盐-乙醇沉淀法,氯化钾-乙醇沉淀法,季铵盐-甲醇法, 直接干燥法,超滤膜脱盐法等6种方法。下面介绍其中两种。 1)工业乙醇沉淀法 发酵液中加入一定量的盐调节pH值,使其呈酸性。再加入 乙醇搅拌成絮状物过滤得黄原胶沉淀粉再加入乙醇搅拌,用 10%KOH调节pH值使之呈中性,过滤,挤干沉淀物,得饼 状黄原胶。然后在60~65℃中烘干,粉碎,过筛,得工业级 黄原胶。
16.2.4 黄原胶的合成
黄原胶的生产为好氧发酵,特点是必须供给氧气。其生产 装置如图16-3所示的发酵罐。
黄原胶工业生产发酵罐
黄原胶深层培养法的基本操作顺序如下;
黄原胶的生产

黄原胶(Xanthan Gum)的特性、生产及应用许多微生物都分泌胞外多糖,它们或附着在细胞表面,或以不定型粘质的形式存在于胞外介质中,这些胞外多糖对于生物体间信号传递、分子识别、保护己体免受攻击、构造舒适的体外环境等方面都发挥着重要的作用。
这些分泌的多糖结构各异,其中一些有着优良的理化性质,已为人类广泛应用。
对于仍不为人类所知的绝大多数多糖,人们试图通过相关的多糖结构问的相互比较,推断出构效关系,从而人为地主动修饰、构造多糖,以满足应用的需要。
其中,黄原胶是人类研究最为透彻、商业化应用程度最高的一种。
.1 黄原胶的结构黄原胶(xanthan gum)是20世纪50年代美国农业部的北方研究室(Northern Re.gional Research Laboratories,NRRL)从野油菜黄单孢菌(Xanthomonas campestris)NRRLB一1459发现了分泌的中性水溶性多糖,又称为汉生胶。
黄原胶由五糖单位重复构成,如图1,主链与纤维素相同,即由以13—1,4糖苷键相连的葡萄糖构成,三个相连的单糖组成其侧链:甘露糖一葡萄糖一甘露糖。
与主链相连的甘露糖通常由乙酰基修饰,侧链末端的甘露糖与丙酮酸发生缩醛反应从而被修饰,而中间的葡萄糖则被氧化为葡萄糖醛酸,分子量一般在2×10。
~2×10 D之间。
黄原胶除拥有规则的一级结构外,还拥有二级结构,经x一射线衍射和电子显微镜测定,黄原胶分子问靠氢键作用而形成规则的螺旋结构。
双螺旋结构之间依靠微弱的作用力而形成网状立体结构,这是黄原胶的三级结构,它在水溶液中以液晶形式存在¨。
2 黄原胶的性质黄原胶的外观为淡褐黄色粉末状固体,亲水性很强,没有任何的毒副作用,美国FDA于1969年批准可将其作为不限量的食品添加剂,1980年,欧洲经济共同体也批准将其作为食品乳化剂和稳定剂。
由其二级结构决定,黄原胶具有很强的耐酸、碱、盐、热等特性。
黄原胶生产工艺1

黄原胶生产工艺黄原胶是由D 一葡萄糖、D 一甘露糖、D 一葡萄糖醛酸、乙酸和丙酮酸组成“五糖重复单元”, 结构聚合体, 分子摩尔比为28 : 3 : 2 : 17: 0 .5 1 一0. 63 。
黄原胶分子一级结构由p 一1, 4 键连接的D 一葡萄糖基主链与三糖单位侧链组成, 其侧链由D 一甘露糖和D 一葡萄糖醛酸交替连接而成。
黄原胶分子侧末端含有丙酮酸, 其含量对黄原胶性能有很大影响, 在不同溶氧条件下发酵所得黄原胶, 其丙酮酸含量有明显差异。
一般,溶氧速率小, 其丙酮酸含量低生产工艺工艺流程为: 菌种摇瓶扩大培养发酵罐发酵提取干燥粉碎成品包装1. 1 生产菌株黄原胶生产菌株为黄单抱菌属几个种, 目前工业化生产用菌株主要是甘蓝黑腐病黄单孢杆菌(亦名野油菜黄单胞菌) , 直杆状,宽0. 4 林n l ~ 0. 7 林m ,有单个鞭毛, 可移动,革兰氏阴性, 好氧。
19 61 年Je an e S 等首先从甘蓝黑腐病斑中分离出甘蓝黑腐病黄单抱杆菌, 赵大建等在19 8 6 年也得到编号为N . K 一01 甘蓝黑腐病黄单抱杆菌。
此外, 菜豆黄单胞菌、锦葵黄单胞菌和胡萝卜黄单胞菌亦可作为发酵菌种。
1. 2 培养基组成及优化1.2.1 培养基固体培养基:蔗糖2g,蛋白胨0.5g,酵母粉0.2g,琼脂2g,水100mL。
种子培养基:蔗糖2g,蛋白胨0.5g,酵母粉0.2g,水100mL。
发酵培养液:蔗糖5g,蛋白胨0.5g,0.3g,碳酸钙0.3g,磷酸二氢钾0.5g,硫酸镁0.25g,硫酸亚铁0.025g,柠檬酸0.025g,水100mL。
1.3 试验方法1.3.1 平皿培养取Φ9cm的培养皿,倒入25mL固体培养基,30℃培养4d~8d。
1.3.2 啤酒糟处理啤酒糟(取自江苏食品职业技术学院啤酒实训中心)用自来水洗涤2次,烘干后备用。
1.3.3 发酵条件研究培养基组成的研究:分别以葡萄糖、麦芽糖、乳糖和淀粉代替发酵培养基中的碳源,进行发酵培养,并做空白对照,确定最佳的碳源。
黄原胶的性能及其应用

黄原胶的性能及其应用黄原胶的性能及其应用摘要:论述黄原胶的性质、生产工艺、技术关键, 讨论了黄原胶的发酵设备、生产过程中分离、干燥、粉碎等工序。
关键词:黄原胶发酵1 、概述黄原胶又名汉生胶、黄菌胶、占吨胶在食品工业中可作为理想的增稠剂及稳定剂使用。
黄原胶是由甘,、兰、黑腐病黄单胞杆菌发酵产生的胞外微生物多糖, 是新型的发酵工程产品及食品添加剂。
由于它的大分子特殊结构和胶体特性, 具有多种功能, 可作乳化剂、稳定剂、凝胶增稠剂、浸润剂、膜成形剂,广泛用于石油开采、食品等二十多个行业。
国际市场价格居高不下。
我国是应用黄原胶的大国, 但目前生产仍处于开发阶段, 供需矛盾突出, 亟待开发。
2 、特性及应用2. 1 特性黄原胶是由淀粉在黄杆菌酶的作用下,1, 6- 糖苷键被切断, 支链被打开, 并重新按1, 4 键合成直链组成的一种生物高分子多糖聚合物, 其分子量为2 ×106 ~ 2× 107 之间,粘度≥0. 55Pa·s, 无毒。
黄原胶是一种浅黄褐色或灰褐色粉末, 它具有纤维素葡萄糖的主链及含三糖的侧链, 有些侧链带丙酮酸和醋酸基团, 因此具有许多独特而优良的特性。
它易溶于水, 其水溶液呈透明胶状, 它在冷水、热水中的分散性稳定, 在低浓度下能产生很高的粘度, 增稠性良好, 浸泡1h( 搅拌时间≤ 1h) 应呈溶胶状。
该水溶液具有较高的假塑性, 良好的稳定性, 广泛pH 值( pH= 1~13) 稳定性和宽温度范围( 18~80 ℃粘度变化很小, 不受温度影响) 的稳定, 同时也具有良好的分散作用、乳化作用。
在碱性及高盐条件下也很稳定。
黄原胶与酸碱和盐类的配伍性好、与半乳甘露聚糖的反应性好、抗污染力强、抗生物酸降解, 对于各种酸的氧化、还原稳定性好; 也具有优良的冻融稳定性和优良的乳化性能与固体悬浮能力。
黄原胶是一种性能优良的多功能生物高分子聚合物。
2. 2 应用 2. 2. 1 食品工业黄原胶用作稳定剂、乳化剂、悬浮剂、增稠剂、泡沫增强剂和加工辅助剂。
黄原胶的生产和应用

黄原胶的生产和应用1 前言黄原胶(Xanthangum),又称黄胶、汉生胶、黄单细胞多糖,是野油菜黄单孢杆菌(Xanthomonascampestris)以碳水化合物为主要原料,经发酵工程生产的一种作用广泛的微生物胞外多糖,简称XC。
黄原胶是50年代美国农业部北部地区研究所(NRRL)首先发现。
普通商品黄原胶是含有K、Na、Ca等盐的混合物,其它类型有:脱乙酰胺的黄原胶、丙酮酸232黄原胶和与铬盐交联的高触变性黄原胶等。
它具有如下特性:在热水和冷水中有很好的溶解性;有良好的增粘性和悬浮能力,在低浓度下具有较高的粘度;有很高的稳定性,耐酸碱、高盐环境,抗高温、低温冷冻,易生物降解,抗污染能力强,在-4~93e范围内反复加热、冷冻,其粘度基本不变;可同多种物质(酸、碱、盐、表面活性剂、生物胶等)互配,具有令人满意的兼容性;有良好的触变性(剪切稀释能力)和假塑性(恢复能力);有良好的分散作用、乳化稳定作用。
黄原胶和刺槐豆胶、瓜尔豆胶等半乳甘露聚糖配合使用时有极为显著的协同增效作用,可显著提高粘度和耐盐稳定性,达到用量少、成本低和提高使用效果的目的。
黄原胶可广泛用于食品、石油、陶瓷、纺织、印染、医药、造纸、地矿、灭火、涂料、牙膏、化妆品等20多个行业。
近年来,世界黄原胶生产国家经过不断的技术改造,其生产能力已达5万余t/a,工业级黄原胶价格在3.5万~4.5万元/t范围内波动,食品级则根据质量、供需双方情况波动幅度更大,为5万~10万元/t,从外国进口的工业级黄原胶约为6万~7万元/t,食品级则为15万元/t左右,可见黄原胶的市场广阔,前景看好,是目前世界上生产规模最大且用途极为广泛的微生物多糖。
2 黄原胶的生产2.1 培养基黄单孢杆菌产生黄原胶常用的培养基是:以葡萄糖、蔗糖或淀粉等为碳源,以蛋白质、鱼粉、豆粉或硝酸盐为氮源,加KH2PO4、MgSO4、CaCO3等无机盐和Fe2+、Mn2+、Zn2+等微量元素,以及生成促进剂谷氨酸、柠檬酸等。
浅谈化学教学中黄原胶的制备

浅谈化学教学中黄原胶的制备作者:颜延宁杨巍巍来源:《成才之路》2008年第29期摘要:黄原胶发酵生产过程中,使用淀粉作为碳源优于其他碳源。
用硅藻土过滤法比较经济,酶降解法更明显地提高了黄原胶的质量。
超滤处理可将黄原胶发酵液中多糖质量分数由原来的2%浓缩到8%以上,节省乙醇用量,降低成本。
用乙醇沉淀浓缩后的黄原胶发酵液,产品的纯度和收率均较高。
关键词:黄原胶;发酵;超滤在化学教学中,黄原胶是用黄单胞菌经微生物发酵制取的生物细胞外粘多糖,具有良好的增黏性、耐酸碱性和抗高温性,能耐高浓度盐,具有乳化和均匀悬浮颗粒等性能,可广泛应用于食品、石油、陶瓷、纺织、印染、医药、造纸、地矿、灭火、涂料、化妆品等20多个行业,用微生物发酵的方法生产黄原胶在国内外有着广泛的前景,并且越来越引起人们的重视。
但由于黄原胶发酵液的黏度很高,采用过滤的方法不能有效去除其中的菌体,加之发酵液中黄原胶的含量很低(质量分数只有1%~5%),传统的分离方法非常浪费能源和材科。
本文探讨了影响黄原胶产量的一系列因素,得出了黄原胶发酵的最佳条件和提纯及分离的技术。
一、材料与方法1. 菌种野生油莱黄单胞菌(Xanthomonas Campestris)2. 种子培养基3. 发酵培养基4. 发酵条件(1)碳源。
碳源是生物发酵的一个重要影响因素。
实验采用蔗糖、乳糖、葡萄糖和淀粉四种物质作为碳源,通过测定发酵液的黏度,可以考察碳源对发酵效果的影响。
从表1可以看出淀粉作为碳源发酵液的黏度高于其他碳源的发酵液粘度。
(2) pH值。
pH对发酵液黏度的影响见表2。
黄原胶发酵周期为48~56h,24h前主要是菌体生长,24h以后进入产胶期,36h左右产胶达到高峰。
最有利于菌体生长的pH值为6.0~6.3,而pH值在7.3~7.6最适合胶的生产。
产胶时pH值不断下降会抑制糖基载体的活性,从而影响产胶。
当pH值降到5.4后,产胶完全停止。
因此,发酵过程中必须保持pH中性。
黄原胶

了国家政策的支持和扶植,历次被纳入星火计划
和
火炬计划作为国家重点攻关项目和重点推广项目,
现被列入《当前国家重点鼓励发展的产业、产品
和技术目录》。
目前生产企业主要有山东淄博中轩集团(10 000t/a)、山东金栗生物制品有限公司(3 000t/a)和山 东福瑞集团(2 000 t/a)等十几家。至2 005年,黄原 胶年生产能力约为3万吨,但实际上许多企业难以达到设
黄原胶的应用
(7)黄原胶可应用于罐头食品的加工,有利 于保持产品的外观,而且利用黄原胶的假塑 性,能控制装罐时的粘度,易于灌注。 (8)黄原胶在面食制品中,是很好的值得推 广的添加剂。
石油工业
• 低浓度黄原胶溶液能保持钻井液的粘
度并控制其流变性能,而在高速转动的钻
头部位粘度极小、节省动力;在钻孔部位
度恢复正常。
黄原胶 的 性质
黄原胶的胶凝机理
黄原胶生物大分子的聚集态结构:侧链与主链间 通过氢键结合形成双螺旋结构,并以多重螺旋聚合体 状态存在。黄原胶分子中带电荷的三糖侧链围
绕主链骨架结构反向缠绕,形成类似棒状的刚 性结构。
黄原胶的制备方法
目前国外采用的生产工艺为:
发酵罐为专用搅拌式反应器,目前也逐步改 为气升式发酵罐,以减少能耗。后处理采用 的是物理脱水与化学沉淀相结合办法。
黄原胶的胶凝机理
侧链葡萄糖醛酸基带负电荷,阳离子一 般可先与其作用而不再作用于主链,故其粘 稠水溶液具有良好的抗盐性能。随盐的浓 度的增高,金属离子对黄原胶侧链结构的屏 蔽作用会使其分子构象更加稳定,由于一定 盐度的溶液具有耐温性,因而又提高了黄原 胶水溶液的耐温性能。并且在适宜的pH 值 下,黄原胶分子能与高价金属离子发生凝胶 化作用。
生物工艺学_黄原胶生产工艺

主要内容简介(性质、用途) 菌种; 发酵条件及工艺控制; 提取纯化。
第一节 黄原胶简介 发展概况; 分子结构; 性质; 应用。
第2页,共38页发展概况 黄原胶(Xamthan Gum)别名汉生胶,又称黄 单胞多糖,是国际上20世纪70年代发展起来 的新型发酵产品。
是微生物中产量最大的一种胞外水溶性黏多 糖,它是在20世纪50年代,由美国农业部的 北方研究室Jeanes等人从野油菜黄单胞菌 NRRLB—1459中发现的。
第3页,共38页 国际上,黄原胶开发及应用最早的是美国。
美国农业部北方地区Peoria实验室于20世纪 60年代初首先用微生物发酵法获得黄原胶。
1964年,美国Merek公司Keco分部在世界上 首先实现了黄原胶的正业化生产。
1979年世 界黄原胶总产量为2000t,1990年达4000t以 上。
在美同,黄原胶年产值约为5亿美元,仅 次于抗生素和溶剂的年产量,在发酵产品中 居第三位。
目前,中国产量占世界60%。
第4页,共38页 黄原胶的外观为淡褐黄色粉末状固体,亲水 性很强,没有任何的毒副作用,美国FDA于 1969年批准可将其作为不限量的食品添加 剂,1980年,欧洲经济共同体也批准将其作 为食品乳化剂和稳定剂。
第5页,共38页 以5分子糖为一单元,由与此 相同的单元聚合而成的高分子 多糖物质。
每一单元由2分子 葡萄糖、2分子甘露糖和1分子 葡萄糖醛酸组成。
其主链由B葡萄糖通过1,4-糖苷键相连而 成的2分子葡萄糖为单元,其 结构与纤维素结构相同,相间 在葡萄糖的C3上连有2分子甘 露糖和1分子葡萄糖醛酸构成 侧链。
在侧链上有丙酮酸及羧 酸侧基。
黄原胶所具有的独特 性能跟含有的丙酮酸有关,通 常情况下黄原胶中丙酮酸含量 的高低可以用来衡量黄原胶性 能的优劣。
分子结构黄原胶的性质 典型的流变特性: 随着剪切速率增加,因胶状网络遭到破坏,导致黏度降 低,胶液变稀,但一旦剪切力消失,黏度又可恢复,因 而使黄原胶具有良好的泵送和加工性能。
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黄原胶的发酵和提取
牛佐朕
(组别:周三组指导教师:魏东盛日期:2014.11.19)
[摘要]:利用野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)可以产生胞外荚膜多糖的性质,通过种子培养基的培养,种子培养基提取液接种到发酵培养基培养72h,并用乙醇提纯制得黄原胶,求得多糖产率,了解微生物多糖在工业上的制法以及用途。
[关键词] 黄原胶,发酵,提纯
正文:
1.前言:
黄原胶应用范围很广,目前世界上食品工业应用占60%,石油及其它工业占40%。
黄原胶在食品工业中是理想的增稠剂、乳化剂、成型剂,在某些苟刻条件下(如pH3— 9,温度80—130℃),它的性能基本稳定,比明胶、CMC、海藻胶、果胶等优越。
黄原胶另一个大市场是石油工业,黄原胶在增粘、增稠、抗盐、抗污染能力远比其它聚台物强,尤其在海洋、海滩、高卤层和永冻土层钻井,黄原胶用于泥浆处理、完井液和三次采油等方面效果显著,对加快钻井速度、防止油井坍塌、保护油气田、防止井喷、大幅度提高采油率等方面都有明显的作用。
黄原胶在其它行业中也有广大的市场。
用它作为釉浆悬浮剂和粘结剂.被称为陶瓷工业的重大技术革新。
对于具有如此重要作用的黄原胶,我国黄原胶的还存在许多影响和制约因素。
本文着重阐述了黄原胶对于食品的应用、黄原胶的生产工艺及黄原胶生产工艺中影响因素的控制。
多糖是多个单糖分子经脱水缩合形成的结构复杂、高分子量的糖类物质,广泛分布与自然界中。
多糖也出现在微生物中——G+和G-细胞壁的主要成分肽聚糖就是细菌的细胞质合成运送至细胞膜外,构成细胞壁的多糖物质。
黄原胶是用黄单孢菌经微生物发酵制取的生物细胞外粘多糖,具有良好的增粘性、假塑性、耐酸碱性和抗高温性,能耐高浓度盐,具有乳化和均匀悬浮颗粒等性能。
用微生物发酵的方法生产黄原胶在国内外有着广泛的前景,并且越来越引起人们的重视。
2.材料和方法
2.1材料
2.1.1菌种:
野油菜黄单胞菌
2.1.2培养基
斜面保藏培养基:牛肉膏蛋白胨琼脂斜面。
种子培养基:
成分蔗糖鱼蛋白胨牛肉粉蒸馏水pH=7.0
用量20g 5g 3g 1000ml 发酵培养基:
成分蔗糖鱼蛋白胨牛肉粉碳酸钙自来水pH=7.5
用量40g 5g 3g 3g 1000ml
2.1.3用具:
三角烧瓶(250ml),烧杯(500ml),培养皿,玻璃棒,药匙,尼龙纱布,
天平,微量取样器,枪头,旋转式摇床,烘箱
2.1.4试剂:
95%乙醇
2.2实验方法:
2.2.1接种及种子培养
以无菌操作挑取斜面菌苔移接至种子培养基,28℃,220r/min旋转摇瓶振荡
20h;
2.2.2发酵培养
以无菌操作吸取1ml种子液移接至发酵培养基中,接种量为2%,0.1MPa灭菌
20min,28℃,220r/min旋转摇瓶振荡培养72h;
2.2.3黄原胶的提纯
发酵培养结束后,将发酵液转入500ml烧杯中(因发酵液粘稠,需用药匙仔
细刮取,否则可能会减低产量),向其中缓慢加入100ml乙醇,并同时迅速搅拌,
使沉淀析出;使用双层尼龙纱布过滤沉淀,将两组沉淀合并,再次在烧杯中使用
50ml 乙醇洗涤沉淀,并挤压沉淀使乙醇去除;再次使用30ml 乙醇洗涤沉淀,用捏饺子的手势使劲捏沉淀,使乙醇去除;将沉淀在培养皿上铺展开来成薄薄一层;使用烘箱70℃烘烤沉淀,并在烘烤30min 时打开烘箱是酒精逸散;烘烤数小时后,取出沉淀,称量并计算产率。
3.结果与讨论
3.1实验结果:
黄原胶重量 0.78g 产率= )发酵液体积()黄原胶质量(ml g =100ml
50g 78.0 =1.56% 3.2讨论与分析: 3.2.1配置培养基时由于碳酸钙不溶,所以最后加入碳酸钙,其作用是提高黄原胶的产量,并增加发酵液的黏度。
这是因为在黄原胶发酵生产的过程中会产生丙酮酸等酸性物质,使发酵培养基呈酸性,不利于菌种的生长繁殖和黄原胶的生成碳酸钙起到中和缓冲的作用。
3.2.2在黄原胶的发酵过程中,pH 值、温度、接种量、转速等因素影响着黄原胶的发酵。
进来许多研究表明:黄单胞菌的最适生长温度是24-27℃,最适产黄原胶的温度为30-33℃,因此,采用分段控制温度为宜,在发酵产胶期将发酵温度由27℃调整到32℃,有利于细胞生长和产黄原胶;发酵过程中pH 控制在
6.5-
7.5,最适pH 为7.0,pH 控制要严格,最好控制pH 为7.0±0.5,否则会影响黄原胶发酵产率和质量;黄原胶的接种量一般为发酵液的7.5%(体积分数)左右,接种量的大小与种子液的质量密切相关;转速也可调整至200r /min 左右为宜。
3.2.3发酵液预处理:预处理方法大致分为三种:第一种是物理处理方法,如采用热处理使菌体细胞及蛋白质等有机残留物变性凝集,通过过滤除去这些杂志;第二种是化学处理方法,如加入盐可絮凝颗粒,硅藻土可吸附杂志颗粒等;第三种是生物化学处理方法,如采用酶法讲解细胞成为可溶性物质或碎片、采用二次发酵除去菌体细胞和残余的有机物等。
[参考文献]
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[2]李娟,王君高,杨婷婷.《黄原胶发酵生产培养基优化研究》;中国食品添加剂试验研究.2012(01)148-153
[3]黄成栋、白雪芳、杜昱光;《黄原胶(Xanthan Gum)的特性、生产及应用》;中国科学院大连化学物理研究所大连 1 1602
[4]杨瀑,张学欢,汪智姝,杨秋艳,温皓程,张永奎;《黄原胶发酵及提取工艺的优化研究》;《食品工业》2008年第6期。