药物分析实验 葡萄糖杂质检查
生物药物分析实验指导书
生物药物分析实验指导书蚌埠学院生物与食品工程系二0一0年十二月目录目录 ----------------------------------------------------------1 实验一药物分析基本操作 --------------------------------------2 实验二葡萄糖的杂质检查 ------------------------------------6 实验三药物的鉴别试验-----------------------------------------9 实验四异烟肼片含量测定--------------------------------------10 实验五阿司匹林含量测定--------------------------------------11 实验六阿司匹林片剂含量分析----------------------------------12 实验七对乙酰氨基酚片的含量测定------------------------------14 实验八片剂的含量均匀度与溶出度测定 -------------------------15 参考文献------------------------------------------------------17实验一药物分析基本操作一、目的要求1、掌握电子分析天平的使用与维护；2、掌握容量仪器和滴定管的使用二、主要仪器与药品电子分析天平、容量瓶、酸式滴定管、碱式滴定管。
三、实验方法1-1电子分析天平的使用与维护分析天平是定量分析工作的最常用的仪器之一，称量准确与否对分析结果有重大影响。
因此，必须掌握天平的正确使用和必要的日常维护，以保证仪器的精度和分析结果的准确性。
1、称量前检查与校正水平位置：揭去天平罩，检查天平的水平位置，调节天平底座后面的两个脚扭，使水泡置于圆圈中央。
察看天平上标明的最大载重量，称量时切勿超过最大载重量。
实验二 葡萄糖的杂质检查
实验二葡萄糖的杂质检查一、实验目的1、掌握葡萄糖一般杂质检查的目的和原理；2、熟悉杂质检查的操作方法。
二、实验原理1、酸碱度检查：是用药典规定的方法对药物中的酸度、碱度及酸碱度等酸碱性杂质进行检查。
检查时应以新沸并放冷至室温的水为溶剂。
不溶于水的药物，可用中性乙醇等有机溶剂溶解。
常用的方法有酸碱滴定法，指示剂法以及pH值测定法。
2、溶液的澄清度与颜色检查供试品的水溶液应澄清无色，如显浑浊，不得比1号浊度标准溶液更浓；如显色，不得比对照液更深。
3、氯化物检查法：氯化物在硝酸溶液中与硝酸银作用，生成氯化银沉淀而显白色浑浊，与一定量的标准氯化钠溶液和硝酸银在同样条件下用同法处理生成的氯化银浑浊程度相比较，测定供试品中氯化物的限量。
反应离子方程式：Cl- + Ag+ → AgCl↓（白色）4、硫酸盐检查法：药物中微量硫酸盐与氯化钡在酸性溶液中作用，生成硫酸钡沉淀而显白色浑浊液，同一定量标准硫酸钾溶液与氯化钡在同样条件下，用同法处理生成的浑浊比较，判断药物中含硫酸盐的限量。
反应离子方程式：SO42- + Ba2+ → BaSO4↓(白色)5、亚硫酸盐与可溶性淀粉供试品水溶液加碘试液应显黄色。
6、蛋白质检查供试品水溶液加磺基水杨酸不得发生沉淀。
7、铁盐检查三价铁盐在硝酸酸性溶液中与硫氰酸盐生成红色可溶性的硫氰酸铁络离子，与一定量标准铁溶液用同法处理后进行比色。
反应离子方程式：Fe3+ + 3SCN- → Fe（SCN）3（红棕色）8、重金属检查供试品的醋酸盐缓冲溶液与硫代乙酰胺溶液加热后，溶液颜色不得比对照管更深。
三、试剂与仪器四、实验步骤1、酸度取本品2.0g，加水20ml溶解后，加酚酞指示液3滴与氢氧化钠滴定液（0.02mol/L）0.20ml，应显粉色。
2、溶液澄清度取本品5g，加热水溶解后，放冷，用水稀释至10ml，溶液应澄清无色，如显浑浊，与1号浊度标准液（chp2000，附录ⅨB）比较，不得更浓；如显色，不得比对照液更深。
药物分析实验讲义药本
第三部分药物分析实验内容实验一葡萄糖的分析一、目的要求1.掌握氯化物、铁盐、重金属限度检查的方法、原理、反应条件及其计算；2.正确使用纳氏比色管。
二、方法原理1.氯化物中国药典对氯化物的检查是利用氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银白色浑浊液，与一定量标准氯化钠溶液在相同条件下生成的氯化银浑浊液比较，浊度不得更大。
2.铁盐铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸铵生成红色可溶性硫氰酸铁配位离子，再与一定量标准铁溶液用同法处理后所呈的颜色进行比较，颜色不得更深。
3.重金属硫代乙酰胺在弱酸性(pH3．5醋酸盐缓冲液)条件下水解，产生硫化氢，与微量重金属离子生(以pb2+为代表)生成黄色到棕黑色的硫化物混悬液，与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较,颜色不得更深。
三、操作步骤1.氯化物取本品0.6g，置50ml纳氏比色管中，加水溶解使成25ml，再加稀硝酸10ml；加水使成约40ml，摇匀，即得供试溶液。
另取标准氯化钠溶液（10µgCl-/ml）6.00ml，置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成约40ml，摇匀，即得对照溶液。
于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1ml，用水稀释至50ml，摇匀，在暗处放置5分钟，同置黑色背景上，观察比较，即得。
2.铁盐取本品2.0g，加水20ml溶解后，加硝酸3滴，缓缓煮沸5分钟，放冷，移至50ml纳氏比色管中，加水稀释使成45ml，加硫氰酸铵溶液（30→100）3ml，摇匀，如显色，与标准铁溶液（10µgFe/ml）2.00ml用同一方法制成的对照液比较，不得更深。
3.重金属取纳氏比色管两支，甲管中加标准铅溶液（10µgPb/ml）2.00ml与醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml后，加水稀释使成25ml。
取本品4.0g，置于乙管，加水适量溶解后，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml，加水稀释使成25ml；再在甲乙两管中分别加入硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深（含重金属不得过百万分之五）。
药物分析实验：实验二 葡萄糖的分析
2013-3-2
12
酸度 新沸过的冷蒸馏水（加水20ml ），加酚酞指示液， 溶液的澄清度与颜色（1号浊度） 乙醇溶液中的澄清度：乙醇 回流 蛋白质：不得发生沉淀。 亚硫酸盐与可溶性淀粉：
6
（三）检查
干燥失重：主要检查药物中的水分及其他挥 发性杂质。系指药品在规定的条件下，经干 燥后所减失的量，以百分率表示。（恒重）
4
（二）鉴别
根据药物的分子结构、理化性质、采用化 学、物理化学或生物学方法来判断药物的 真伪。分为：一般鉴别试验、专属鉴别试 验。
葡萄糖 显色反应 IR
5
（三）检查
药物的杂质检查是控制药物纯度的一个非常重要的方面， 药物纯度检查也可称为杂质检查。 酸碱度检查：用酸度、碱度、酸碱度和pH来衡量药物中 的酸碱性杂质。 澄清度：检查药品溶液的混浊程度，反映药物溶液中微量 不溶性杂质的存在情况，是控制注射用原料药纯度的重要 指标。
砷盐：是利用金属锌与酸作用产生新生态的氢， 与药物中微量砷盐作用生成具挥发性的砷化氢， 遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑，与一定 量标准砷溶液所生成的砷斑比较，以判断药物中 砷盐的限量。 AsO33-+3Zn+9H+→AsH3↑+3Zn2++3H2O
• AsH3+2HgBr2→2HBr+AsH(HgBr)2 黄色
• AsH3+3HgBr2→3HBr+As(HgBr)3 棕色
炽烧残渣：
10
含量测定
供试品：50%葡萄糖溶液 含葡萄糖（C6H12O6·H2O）应为标示量的95.0
％～105.0％。 比旋度计算公式：[a]tD =100a/l*c（其中a为
旋光度；t为温度，20℃；D表示钠光灯源； l为测定管长度，dm；c为溶液浓度， g/100ml） C=100×A/([a]tD ×l) ×(198.18÷180.16) [a]tD=+52.75°
葡萄糖杂质检查
葡萄糖杂质检查一、实验目的1、掌握葡萄糖一般杂质检查的目的和原理；2、熟悉杂质检查的操作方法。
二、实验原理1、酸碱度检查：是用药典规定的方法对药物中的酸度、碱度及酸碱度等酸碱性杂质进行检查。
检查时应以新沸并放冷至室温的水为溶剂。
不溶于水的药物，可用中性乙醇等有机溶剂溶解。
常用的方法有酸碱滴定法，指示剂法以及pH值测定法。
2、氯化物检查法：氯化物在硝酸溶液中与硝酸银作用，生成氯化银沉淀而显白色浑浊，与一定量的标准氯化钠溶液和硝酸银在同样条件下用同法处理生成的氯化银浑浊程度相比较，测定供试品中氯化物的限量。
反应离子方程式：Cl- + Ag+→ AgCl↓（白色）3、硫酸盐检查法：药物中微量硫酸盐与氯化钡在酸性溶液中作用，生成硫酸钡沉淀而显白色浑浊液，同一定量标准硫酸钾溶液与氯化钡在同样条件下，用同法处理生成的浑浊比较，判断药物中含硫酸盐的限量。
反应离子方程式：SO42- + Ba2+ → BaSO4↓(白色)4、干燥失重：主要指水分，包括其它挥发性物质。
用于受热较稳定的药物,温度一般为105℃，在烘箱内干燥至恒重。
4、铁盐检查法：三价铁盐在硝酸酸性溶液中与硫氰酸盐生成红色可溶性的硫氰酸铁络离子，与一定量标准铁溶液用同法处理后进行比色。
反应离子方程式：Fe3+ + 3SCN-→ Fe（SCN）3（红棕色）三、试剂与仪器(1)、酚酞指示液 (2)、氢氧化钠滴定液（0.02mol/L）(3)、1号浊度标准液 (4)、石蕊试纸(5)、稀硝酸 :取硝酸10.5 ml，加水稀释至100 ml，即得。
本液含HNO3应为9.5％～10.5％(6)、稀盐酸:取盐酸23.4 ml,加水稀释至100 ml，即得。
本液含盐酸分数应为9.5%~10.5%(7)、硝酸银溶液（0.1mol/L） :称取1.75 g硝酸银，溶于100 mL水中。
(8)、标准氯化钠溶液（10μgCl－/ml）:称取氯化钠0.165 g，置1000 ml 量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。
药物分析药分实验三、葡萄糖含量测定
•
Ⅰ
• 称量瓶与样品原重（g） 26.9542
• 称取后重量 （g）
26.4531
• 取样重（g）
0.5011
Ⅱ 26.4531 25.9413
0.5118
Ⅲ 25.9413 25.4326
0.5087
原始记录例二
• 时间：2013年9月12日 地点：主楼704实 验室 温度：27.5℃
• NaOH溶液（0.01mol/L）滴定HCl溶液，以酚酞为 指示剂，平行测定两次。
一、目的要求： 1．掌握比旋度的概念和旋光法测定旋光性物质含量的 原理与计算方法 2．熟悉折光法测定葡萄糖注射液含量的原理与计算方 法。 3．熟悉快速分析法(剩余碘量法)测定葡萄糖含量的基 本原理和方法。比较三种分析法的优缺点。
二、基本原理：
(一) 旋光法 葡萄糖为旋光性药物, 其
比旋度为+52.5°, 用旋光计测出样品
严禁迟到早退，中途离开实验室不得超过20分钟。 请假只得60分，旷课0分
• 3、做好原始记录 • 及时 • 原始 • 完整
一、原始记录
1、准备专门的实验记录本，标上页码，不得记录在单页纸 或小纸片上或随意记录在其它任何地方。原始记录必须是 做实验时当场记录下来，不得过后再根据回忆记录或先写 在碎纸片上。
铁盐：
不比对照溶液颜色更深
金属：
不比对照溶液颜色更深
砷盐：
不比对照溶液颜色更深
蛋白质： 发生沉淀
二、实验数据的整理和表达
列三线表 1、表号和表题 2、表格的行首或列首应标明名称和单位 3、若有计算，需在表C NaOH
1000 V NaOH
m KHC 8H 4O4 M KHC 8H 4O
实训一葡萄糖的杂质检查
实训一葡萄糖的杂质检查一、实训目的1、掌握葡萄糖中杂质的检查方法。
2、熟悉供试品溶液与对照品溶液制备、检查、比色等操作方法。
3、了解称量、平行操作、干燥等操作要点。
二、实训原理葡萄糖分子中具有醛基，还原碱性酒石酸铜生成红色氧化亚铜沉淀。
本品除了检查氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐等到一般杂质外，还需检查溶液的澄清度与颜色（目的是检查水不溶性物质或有色杂质）、乙醇溶液的澄清度（检查醇不溶性杂质如糊精、蛋白质等）、亚硫酸盐与可溶性淀粉（因为制备时使用的酸可能带有亚硫酸盐，而可溶性淀粉是中间体引入）。
三、实训操作1、干燥失重取本品1~2g，置与供试品同样条件下干燥至恒重的扁形称量瓶中，使供试品平铺于瓶底，厚度不超过5mm，加盖，精密称定，将称量瓶放入洁净的培养皿中，瓶盖半开或置瓶旁，放入105℃干燥箱中干燥。
取出后迅速盖好瓶盖，置干燥器放冷至室温，迅速精密称重，再于105℃干燥箱中至恒重，即得，减失重量不得过9.5%。
2、性状本品为无色结晶或白色结晶性或颗粒粉末，无臭，味甜，在水中易溶，乙醇中微溶。
取本品约10g，精密称定，置100ml量瓶中，加水适量与氨试液0.2ml，溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，放置10min，在25℃时测定比旋度，应为52.5~53.0°。
3、酸度取本品2.0g，加新沸过的冷蒸馏水20ml，溶解后，加酚酞指示液3滴NaOH滴定液0.2ml，应显粉红色。
4、乙醇溶液的澄清度取本品1.0g加90%乙醇30ml，置水浴中加热回流约10min，溶液应澄清。
5、亚硫酸盐与可溶性淀粉取本品1.0g，加水10ml溶解后，加碘试液1滴，应即显黄色。
6、蛋白质取本品1.0g加水溶解后，加磺基水杨酸溶液（1→5）3ml，不得发生沉淀。
7、氯化物取本品0.3g，置于25ml纳氏比色管，加水溶解使成约13ml，再加稀硝酸5ml，加水使成约20ml摇匀，即得供试溶液。
另取标准氯化钠溶液（10ug/ml）3.0ml，置25ml 纳管中，加稀硝酸5ml，加水使成约20ml，摇匀，即得对照溶液。
实验一.葡萄糖的一般杂质检查
10、重金属检查法
硫代乙酰胺法 原理：
CH3CSNH2 H2O pH3.5CH3CONH2 H2S
药物：Pb2 H2S pH3.5PbS黄色～棕黑色
对照：PbNO3c、V H2S pH3.5PbS黄色～棕黑色
重金属检查方法
取50mL纳氏比色管两支，甲管中标准铅 溶液（10μg/mL）2.0mL与醋酸盐缓冲液 （pH3.5）2mL后，加水稀释至25mL;
实验要求
记录每个试验项目的称样质量 记录酸度的检查、溶液的澄清度与颜色检
查、氯化物的检查、硫酸盐的检查的实验 现象 给出实验结果、进行结果判定 实验报告
主要试剂及器皿
试剂：
酚酞指示液 25%氯化钡溶液 0.020mol/L NaOH溶液 稀硝酸 10 μg/mL NaCl标准溶液 稀盐酸 100μg/mLK2SO4标准溶液 器皿： 50mL纳氏比色管 电子天平
硫酸盐的限量
V 2.0mL，c 100g / mL，m 200g
L V c 100% m
L 100 g / mL 2.0mL 100%
2.0g
100 g / mL 2.0mL 100 % 2.01000000 g
1104 100% 1102% 0.01%
9.铁盐的检查
原理：铁盐在酸性溶液中与硫氰酸铵生成 红色可溶性硫氰酸铁配位离子，与一定量 标准铁溶液同法处理后所呈颜色比较，判 断供试品铁盐是否超限。 Fe3 6SCN H [Fe(SCN)6 ](红)
2．正确选用量具：根据检查试验一般允许误差为±10%的 要求和药品、试剂的取用量。
3．平行操作：标准品与样品必须同时进行实验，加入试 剂量、顺序等均应一致。观察时，两管受光照的程度应 一致，使光线从正面照入，比色时置白色背景上，比浊 时置黑色背景上，自上而下地观察。
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19.4.20
4
2. 硫酸盐(Sulfates)
硫酸盐在盐酸酸性溶液中与氯化钡试液作 用，生产硫酸钡白色浑浊液，与一定量标
准硫酸钾溶液相同条件下生成的浑浊比较， 判断供试品中的硫酸盐是否符合限量规定。
SO42? ? Ba2? ? ?H?C?l BaSO4 ? (白)
Pharmaceutical Analysis Experiment
AsH3 ? As(HgBr)3 ? 3 HBr ? As2Hg 3（棕黑色）
Pharmaceutical Analysis Experiment
19.4.20
8
操作步骤 ？ ？
观察方法
Pharmaceutical Analysis Experiment
供试品管 氯化物 对照管
本品0.60g
10μgCl-/mL标准 NaCl溶液6.0mL
5.砷盐(Arsenic) : 古蔡氏法(Gutzeit)
As3? ? 3Zn? 3H? ? 3Zn2? ? AsH3 ?
AsO
33
?
3Zn
?
9H ?
?
3Zn 2? ? 3H 2O ? AsH 3 ?
AsH3 ? 3HgBr2 ? 3HBr ? As(HgBr)3 (黄色）
AsH 3 ? 2As(HgBr)3 ? 3 As(HgBr)2 (棕色）
1．氯化物(Chlorides)
氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银试液作 用，生成氯化银白色浑浊液，与一定量标
准氯化钠溶液相同条件下生成的氯化银浑 浊液比较，判断供试品中的氯化物是否符 合限量规定
Cl ? ? Ag ? ? ?HN?O3? AgCl ? (白)
Pharmaceutical Analysis Experiment
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5
3. 铁盐(Iron) : 硫氰酸盐法
铁盐在 盐酸酸性 溶液中与硫氰酸铵生成红色 可溶性硫氰酸铁配位离子，与一定量标准铁 溶液同法处理后所呈颜色比较，判断供试品 铁盐是否超限
Fe3? ? 6SCN ? ? ?H ? ? [Fe(SCN)6 ]3? ? (红)
Pharmaceutical Analy和贮藏过程 中引入
杂质限量： 在不影响药物疗效 和不发生毒
性的前提下，药物中所含 杂质的最大允许 量，叫做 杂质限量 。通常用百分之几（％）
或百万分之几（ ppm）来表示。
Pharmaceutical Analysis Experiment
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3
一般杂质检查原理
摇匀，放置 10min
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6
4. 重金属(Heavy metals) ：硫代乙酰胺法
CH3CSNH 2 ? H 2O ?? ? CH3CONH 2 ? H2S
H 2S ? Pb2? ? ?pH?3.5? PbS ? ? H ?
Pharmaceutical Analysis Experiment
19.4.20
7
砷盐
供试品试砷瓶
本品2.0g，加水5mL溶解 ？
① +稀硫酸5mL ② +溴化钾溴试液0.5mL
对照试砷瓶
1μgAs/mL标准砷溶 液2.0mL
水浴加热 约20min
放冷
加盐酸5mL与水适量使成约28mL
① +碘化钾试液5mL？ ② +酸性氯化亚锡5滴？
25-40℃，1hour
比较砷斑
加锌粒1.0g
供试品管
本品4.0g
供试品管 +对照管
对照管
本品4.0g
10μgPb2+/mL标准铅 溶液2.0mL
加水适量溶解 加水适量溶解
10μgPb2+/mL标准铅 溶液2.0mL
重金属
pH3.5醋酸盐缓冲液2mL 加水至25mL
硫代乙酰胺试液*2mL 摇匀 放置2min
同置白色背景上比较
*硫代乙酰胺试液制备：混合液（1molNaOH 15mL+水5.0mL+甘油20mL）12 5.0mL +硫代乙酰胺溶液（4%）1.0mL→水浴加热20秒，冷却，立 即使用。
③+水至50 mL 摇匀
放置10min 同置黑色背景上比较
供试品管 铁盐 对照管
本品2.0g
10μgFe3+/mL标准铁溶液2.0mL
+水20mL+硝酸3滴
缓慢煮沸5min 放冷
置50mL纳氏比色管中 ① +水使成约45mL ② +硫氰酸铵溶液 （30→100）3.0mL
加水至50mL，摇匀
11
同置白色背景上比较
最
未反应的原料、中 间体、副产物??
大 允 许
量
杂质限量
分 类
有机杂质 按结构分
无机杂质
信号杂质 按性质分
有害杂质
L
?
C?V S
?100%
Pharmaceutical Analysis Experiment
19.4.20
2
药物杂质的概念、来源和控制
杂质:药物中存在的 无治疗作用 ，或影响药物的疗 效和稳定性 ，甚至对人体健康有害 的物质。
目的：
葡萄糖杂质检查
1）通过葡萄糖杂质检查 ,了解一般杂质检查的项 目、方法和意义
2）掌握葡萄糖中氯化物、硫酸盐、铁盐、重金 属及砷盐限度检查的原理和方法
Pharmaceutical Analysis Experiment
19.4.20
1
杂质和纯度
一般杂质
生产过程
按来源分 特殊杂质
*来源
杂质
贮藏过程
加水约25mL溶解
供试品管 硫酸盐 对照管
本品2.0g
100μgSO42-/mL标准 硫酸钾溶液2.0mL
置50mL纳氏比色管中
置50mL纳氏比色管中 ①+稀硝酸10mL？ ②+水使成约40mL ③+硝酸银试液1.0mL
用水稀释至50mL，摇匀 在暗处？放置5min
同置黑色背景上比较
加水约40mL ①+稀盐酸2 mL？ ② +25%氯化钡5.0 mL