表2：标准叶绿素铜钠盐标准曲线
叶绿素铜钠盐的制备与分析检测
叶绿素铜钠盐的制备与分析检测[摘要]叶绿素类色素主要包括叶绿素及其衍生物，高等植物和藻类中包含大量的叶绿素，本文在前期提取蓝藻叶绿素的基础上，研究了叶绿素铜钠盐的制备条件并分析了其结构，结果表明：温度60℃、时间40min以上时皂化较彻底；酸化置铜ph1-2、温度50℃、时间超过60min铜化较彻底，再成盐结晶得到叶绿素铜钠盐，得率为1.91%；通过hplc、uv、lc/ms等方法，分析测试所得到的叶绿素铜钠盐并进行结构鉴定，得出cu chlorin p6为叶绿素铜钠盐主要成分，根据它的分子结构和产生的分子离子峰碎片，推测分析了其电离机理。
[关键词]叶绿素铜钠盐制备分析检测蓝藻为原核生物，又称蓝绿藻或蓝细菌。
蓝藻是所有藻类生物中最简单、最原始的一种光合放氧生物，蓝藻在地球表面从无氧的大气环境变为有氧环境过程中起了巨大的作用，蓝藻中含有丰富的藻胆蛋白、天然色素、多糖、油脂等，因此综合利用蓝藻成为近年来开发研究的热点，其中研究得最为广泛为蓝藻中的叶绿素。
叶绿素类色素主要包括叶绿素及其衍生物，高等植物和藻类中包含大量的叶绿素[1]。
叶绿素类似物中的卟啉环结构类似人体血红素结构，可促进创伤和溃疡愈合、活化细胞、抗贫血、抗菌消炎等多种活性功能，同时它也能预防心血管疾病、护肝以及抗衰老；研究表明，叶绿素能有效抑制多环芳烃类的诱变作用，对抑制癌细胞生成也有一定的效果[2]。
叶绿素衍生物也得到较为广泛的应用，如叶绿素铜钠可作食品添加剂和日用化工的染色剂[3]、脱臭剂[4]，且还可用来制造光敏剂[5]、汽油和涂料的添加剂等，叶绿素铜钠盐还可作为医药原料起到保肝、护胃、抗贫血的作用[4]，对传染性肝炎、十二指肠溃疡、慢性肾炎、胰腺炎、以及白血病等疾病有一定的疗效[6]。
本文在提取蓝藻叶绿素的基础上，研究了叶绿素铜钠盐的制备并对其结构进行了分析。
一、材料与方法（一）材料与试剂干蓝藻取自无锡某公司：新鲜蓝藻脱水后再喷雾干燥，4℃冰箱储存。
叶绿素铜钠的制备、合成与分析
叶绿素铜钠的合成、分离与分析一、实验目的：1、从蚕沙中提取叶绿素并计算提取率。
2、初步研究叶绿素合成叶绿素铜钠的工艺条件。
3、分析叶绿素铜钠产品的纯度，计算产率；4、利用光谱技术对合成的叶绿素铜钠进行初步表征。
二、实验原理:叶绿素铜钠盐是一种具有很高稳定性的金属卟啉，呈墨绿色粉末，着色力强，色泽亮丽，其水溶液呈蓝绿色澄清透明液，钙离子存在时则有沉淀析出。
当其水溶液pH 值小于6 时，溶液底部出现粉末状沉淀，这是由于平面空间结构的叶绿素铜钠分子在酸性条件下易于聚集。
叶绿素铜钠盐已被国际有关卫生组织批准用于食品上，广泛应用作食品添加剂、化妆品添加剂、食品着色剂、药品等领域。
叶绿素铜钠盐可以通过叶绿素卟啉环中的镁原子被铜置换来制成。
蚕沙中含有丰富的叶绿素，其纯含量达0.8—1.0%，居所有天然色素之首，故可用蚕沙来提取叶绿素，由于叶绿素易溶于乙醚、苯、丙酮、乙醇的脂性溶剂，故可用乙醇、丙酮混合液来提取。
所得的叶绿素再添加适量硫酸铜、使得叶绿素卟啉环中的镁原子被铜置换即可制得叶绿素铜钠盐。
叶绿素是一种含有卟吩环的物质，在其结构中，含有一个由四个吡咯环和四个次甲基交替相联形成的卟吩环。
卟吩环闭合的共轭体系提供了包围镁离子(或其它相似离子)的刚性平面。
在制叶绿素铜钠过程中，叶绿素分子中的镁原子和四个吡咯上的氮原子相结合，环上是双羧酸的酯，一个被甲基所酯化，另一个被叶醇基所酯化，故可以发生皂化反应生成钠盐：Ｃ55Ｈ72Ｏ5Ｎ4Ｍｇ + 2ＮａＯＨ = Ｃ34Ｈ30Ｏ5Ｎ4ＭｇＮａ2 + ＣＨ3ＯＨ + Ｃ20Ｈ39ＯＨ在酸性介质中，叶绿素钠盐分子中的镁极易被氢原子取代生成褐色的叶绿素酸：C34H30O5N4MgNa2 + 4 H+ →C34H34O5N4 + Mg2+ + 2 Na+叶绿素酸可与铜盐加热条件下生成叶绿素铜酸析出，将叶绿素铜酸溶于丙酮，再与碱反应就生成叶绿素铜钠盐：C34H34O5N4 + Cu2+ →C34H32O5N4Cu + 2 H+C34H32O5N4Cu + 2 NaOH = C34H30O5N4CuNa2 + 2 H2O三.实验仪器及材料：仪器：721分光光度计、PHS-2B酸度计、电子天平、PH试纸、旋转蒸生器一台、恒温加热磁力搅拌一台、搅拌子一个、烘箱、温度计、500ml蒸馏烧瓶、蒸馏装置、索氏提取器、回流冷凝管、减压过滤装置、滤纸、研钵、分液漏斗、容量瓶（10ml、100ml、250ml若干），移液管（2ml、10ml）、量筒（10ml、50ml、100ml）、吸耳球、玻璃棒、沸石、烧杯（100ml、250ml、500ml、1000ml若干）、胶头滴管等玻璃仪器。
叶绿素铜钠盐的制备研究
叶绿素铜钠盐的制备研究作者：郭海蓉王晓飞李媛媛来源：《湖北农业科学》2011年第16期摘要：以甘蔗糖厂滤泥中提取的叶绿素为原料，探索了叶绿素铜钠盐的制备条件，结果表明，叶绿素铜钠盐在５０℃下皂化６０ｍｉｎ；在ｐＨ值为４的酸性条件下铜代６０ｍｉｎ效果较好，对制得的叶绿素铜钠盐按ＧＢ３２６２－８２进行各项检测，均符合国标要求。
关键词：叶绿素铜钠盐；甘蔗糖厂；滤泥；制备中图分类号：Ｓ３９；Ｏ６２９．９文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）16－3381-03ＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆＳｏｄｉｕｍＣｏｐｐｅｒＣｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌｉｎＧＵＯＨａｉ－ｒｏｎｇ，ＷＡＮＧＸｉａｏ－ｆｅｉ，ＬＩＹｕａｎ－ｙｕａｎ（ＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｇｈｔＩｎｄｕｓｔｒy ａｎｄＦｏｏｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＧｕａｎｇｘｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｎｉｎｇ５３０００４，Cｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｆｉｌｔｅｒｍｕｄｆｒｏｍｓｕｇａｒｃａｎｅｍｉｌｌｗａｓｕｓｅｄａｓ the ｒａｗｍａｔｅｒｉａｌ．Ｔｈｅｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｆｏｒｓｏｄｉｕｍｃｏｐｐｅｒｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌｉｎｗａｓｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｂｅｓｔｓａｐｏｎｉｆｉｃａｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔｃｏｕｌｄｂｅｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｔｒｅａｔｅｄａｔ５０℃ｆｏｒ６０ｍｉｎ，ａｎｄｔｈｅｃｏｐｐｅｒｅｘｃｈａｎｇｅｄｒｅａｃｔｉｏｎｗａｓｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｉｎｐＨ４ｂｕｆｆｅｒ for 60 min．Ｔｈｅｏｂｔａｉｎｅｄｓｏｄｉｕｍｃｏｐｐｅｒｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌｉｎｗａｓｕｐｔｏｐａｒａｆｔｅｒｅｖａｌｕａｔｅｄａｃｃｏｒｄｉｎｇ to ＧＢ３２６２－８２．Ｋｅｙｗｏｒｄs：ｓｏｄｉｕｍｃｏｐｐｅｒｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌｉｎ；ｓｕｇａｒcane ｍｉｌｌ；ｆｉｌｔｅｒｍｕｄ；ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓ叶绿素铜钠盐作为一种天然水溶性安全无毒食用色素，是经过联合国粮农组织和我国食品添加剂标准委员会批准使用的色素［１］。
叶绿素铜钠盐的制备及稳定性研究_王正平
工程师园地文章编号:1002-1124(2004)09-0050-02 叶绿素铜钠盐的制备及稳定性研究王正平,单旭峰(哈尔滨工程大学化工学院,黑龙江哈尔滨150001) 摘 要:具有独特的生物活性的叶绿素铜钠盐作为天然卟啉-叶绿素的衍生物,有着广泛的用途。
本文对叶绿素铜钠盐的结构表达、制备方法及应用进行了较为翔实的论述。
关键词:叶绿素;叶绿素铜钠盐;卟啉;结构中图分类号:T Q20213 文献标识码:AStudy on prep aration and stability of chlorophyllW ANG Zheng -ping ,SH AN Xu -feng(Chem ical Engineering Institute ,Harbin Engineering University ,Harbin 150001,China ) Abstract :As the derivative of natural perphyrinchlorophyll ,chlorophyll Cu -Na salt has a special bioactivity ,it hasa extensive use.This paper summarized the contruction expression ,the preparation and application of chlorophyll Cu -Na salt.K ey w ords :chlorophyll ;chlorophyll Cu -Na salt ;porphyin ;construction收稿日期:2004-07-22作者简介:王正平(1958-),男,教授,1982年毕业于浙江大学,硕士生导师,主要从事精细化学的研究开发工作。
对植物食品中具有生物活性物质的研究表明,日益增加的水果和蔬菜消费量与心血管疾病、癌症等疾病的下降有密切的关系[1]。
叶绿素的提取及叶绿素铜钠的合成与测定
单位：班级：实验操作人：实验同组人：实验地点:指导老师：实验操作时间：叶绿素的提取及叶绿素铜钠的合成与测定一、实验目的1．分析叶绿素铜钠的纯度，计算产率。
2．从绿色植物中提取叶绿素并算提取率。
3．利用光谱技术对合成的叶绿素铜钠进行初步表征4．初步研究用叶绿素合成叶绿素铜钠的条件二、实验原理叶绿素是一种含有卟吩环的天然色素，它与蛋白质结合存在于植物的叶和绿色茎中，是植物进行光合作用的催化剂。
叶绿素难溶于水，易溶于有机溶剂。
通常说的叶绿素是指由多种含镁卟啉化合物共存的混合物，有a,b两种 R=CH 3者为a型R=CHO者为b型叶绿素一旦离开活性植物体，就很不稳定，；把叶绿素转化为叶绿素铜钠盐，就解决了上述问题。
叶绿素铜钠盐也有a，b型。
b 型中的—CHO在多步反应中易被氧化，以钠盐形式存在。
将蚕沙中萃取的叶绿素粗品（无溶剂物称糊状叶绿素），经皂化、置铜、纯化和成盐等几步后，就可得出叶绿素铜钠盐成品。
鉴别叶绿素铜钠盐的纯度要看它的吸光度（E1%1cm405nm），在规定条件下，吸光度值大，叶绿素铜钠盐含量高。
其中E1%1cm不低于568。
利用多波长分光光度法对产品叶绿素铜钠进行初步表征。
测定叶绿素铜钠质量的三项指标：吸光度比值、游离铜含量、干燥失重。
a和叶绿素b分子式如下：叶绿素与碱发生皂化反应：叶绿素分子中的镁原子和四个吡咯上的氮原子相结合，环上是双羧酸的酯，一个被四所酯化，另一个被叶醇基所酯化，故可以发生皂化反应生成钠盐：C55H72MgN4O5 + 2 NaOHC34H30O5N4MgNa2 + CH3OH + C20H39OH在酸性介质中，叶绿素钠盐分子中的镁极易被氢原子取代生成褐色的叶绿素酸：C34H30O5N4MgNa2 + 4 H+C34H34O5N4 + Mg2+ + 2 Na+叶绿素酸可与铜盐加热条件下生成叶绿素铜酸析出，将叶绿素铜酸溶于丙酮，再与碱反应就生成叶绿素铜钠盐：C34H34O5N4 + Cu2+C34H34O5N4Cu + 2 H+C34H34O5N4Cu + 2 NaOHC34H34O5N4CuNa2 + 2 H2O蚕粪叶绿素铜钠盐的光谱特性蚕粪叶绿素铜钠盐水溶液在360~700之间有2个吸收峰在波长440处有一最大吸收峰,其吸光度为114;在630处有一较小的吸收峰,其吸光度为017"在波长440的吸收峰为叶绿素铜钠盐特有,而在630处的吸收峰为叶绿素特有,叶绿素铜钠盐的含量约是蚕粪中叶绿素含量的2倍，所以试验中均采用440的波长测定叶绿素铜钠盐的稳定性。
叶绿素铜钠盐--美国药典
DEFINITIONChlorophyllin Copper Complex Sodium contains sodium salts of copper-chelatedchlorophyll derivatives. It contains no artificial coloring.定义：叶绿素铜钠盐为叶绿素螯合铜、钠的衍生物；不包括人工色素。
IDENTIFICATION鉴别• A. Spectrophotometry and Light-Scattering 851 (in the visible region)分光光度法—可见光区Sample solution: 10 µg/mL 样品浓度：10µg/mLMedium: pH 7.5 phosphate buffer, prepared by mixing 0.15 M dibasic sodium phosphate and 0.15 M monobasic potassium phosphate (21:4)方法：PH 7.5磷酸盐缓冲溶液：0.15mol/l磷酸氢二钠溶液与0.15mol/l磷酸二氢钾溶液（21:4）Acceptance criteria: The ratio of A405/A630 is 3.0–3.9.吸光度比值：A405/A630 =3.0-3.9OTHER COMPONENTS 其他参数• Content of Total Copper总铜含量Stock solution 1: 1000 µg/mL of copper. Transfer 1.000 g of copper to a1000-mL volumetric flask, dissolve in 20 mL of nitric acid, and dilute with 0.2 N nitric acid to volume.[Note—Store in a polyethy l ene bottle. ]储备溶液1：1000 µg/mL Cu2+----1.000g Cu溶解于20ml硝酸，用0.2mol/l 稀硝酸定容至1000ml，储备于聚乙烯瓶中。
芹菜叶制取叶绿素铜钠盐的工艺研究
芹菜叶制取叶绿素铜钠盐的工艺研究孙永林;杨瑞【摘要】以新鲜的芹菜叶为材料,采用正交试验考察制取叶绿素铜钠盐的工艺优化条件.研究结果表明,芹菜叶叶绿素提取的最佳条件为:乙醇浓度为95%.料液比为1:9,浸提时间为8 h.叶绿素铜钠盐的制取工艺为:皂化pH值为11～12,皂化时间为30 min,酸化铜代的pH值为2～3,温度为75℃,CuSO4的加入量为理论值的2倍.反应时间1.5 h.【期刊名称】《长江蔬菜》【年(卷),期】2010(000)004【总页数】3页(P36-38)【关键词】芹菜;叶绿素铜钠盐;正交试验【作者】孙永林;杨瑞【作者单位】襄樊学院化学工程与食品科学学院,湖北襄樊,441053;襄樊学院化学工程与食品科学学院,湖北襄樊,441053【正文语种】中文芹菜（Apium graveolens）别名药芹或水芹，为伞形花科植物芹菜的全草，具有平肝降压、利尿消肿、养血补虚、防癌抗癌等功效[1]。
可食用部分为其肉质直立的叶柄，叶片往往作为废弃物被扔掉。
叶片中含有丰富的天然叶绿素资源，但天然的叶绿素着色力低，在光、热、氧气、pH值等变化时稳定性差，通过稀酸分离的方法可除去其卟啉环中心的镁，形成脱镁叶绿素，用铜取代镁后可获得对光稳定的衍生物叶绿素铜钠，该衍生物具有补血、造血、活化细胞、抗菌消炎、抑制癌细胞生成等功效[2]。
为了充分利用资源，减少废弃物对环境的污染，我们对芹菜叶的叶绿素及叶绿素铜钠的提取工艺进行了研究。
1 材料与方法1.1 试验材料芹菜，购于609菜场。
试验仪器有UV-1900紫外-可见分光光度计、旋转蒸发仪、水浴锅、烧杯、锥形瓶、量筒、玻璃棒、漏斗等。
试验试剂有氢氧化钠、硫酸铜、无水乙醇、95%乙醇、石油醚、丙酮等均为国产分析纯。
1.2 试验方法①叶绿素的提取将新鲜的芹菜叶洗净、晾干并剪成适当大小的碎片，分批投入沸水中烫漂1 min，不断搅拌，迅速取出，用去离子水冲洗3遍，滤干水分。
常用作物生理指标测定方法以及叶绿色测定
SOD,POD,CAT,MDA,可溶性蛋白用同一提取液。
磷酸缓冲液配制：A液（Na2HPO40.2M）:Na2HPO4.2H2O=35.61g(或Na2HPO4.12H2O=71.64g)定容1000MLB液（NaH2PO4 0.2M）:NaH2PO4.H2O=27.6g(或NaH2PO4.2H2O=31.21g)定容到1000ml浓度mol/l PH值A液体积ml B液体积ml 定容体积ml0.05 7.8 91.5 8.5 4000.1 7.5 84 16 2000.1 7.0 61 39 2000.1 6.0 12.3 87.7 2001/15 7.0 61 39 300130mmol/l甲硫氨酸（Met）溶液：称1.9399gMet用磷酸缓冲液定容至100ml0.75mmol/l氮蓝四唑（NBT）溶液：称0.06133gNBT用磷酸缓冲液定容至100ml避光保存0.1mmol/LEDTA-Na2溶液：取0.03721gEDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至1000ml0.02mmol/l核黄素溶液：取0.00753g核黄素定容至1000ml避光保存反应液组成水：磷酸：Met：NBT：EDTA-Na2：FD=5：30：6：6：6：6150ml反应液的组成是水12.7ml+磷酸（0.05M,PH=7.8）76.3ml+Met15.25ml+NBT15.25ml+EDTA=Na215.25ml+FD15.25mlSOD：称取0.5g鲜样，加1ml磷酸缓冲液（0.05mol/L PH=7.8），冰浴研磨，研磨后再加入1ml缓冲液倒入离心管，再用2ml缓冲液冲洗研钵，倒入离心管中，平衡后低温（0-4℃）10000rpm离心后10min冷藏保存。
取相同型号的试管，加入20μl上清液（2支对照管加缓冲液），分别加3ml反应液，其中一支对照放于暗处，其余在4000lux下反应20-30min（温度高时时间短，温度低时时间长）后再560nm下进行比色。