液相色谱仪的检定和校准

使用中检验 – + + – – – + + + – – – – +
最小检测浓度 * 波长示值误差 波长重复性 线性范围 换挡误差 整机 定性定量重复性*
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2. 液相色谱仪检定规程
5）计量器具控制
c) 检定方法 d) 检定结果的处理 一个检测器 一个以上检测器 e) 检定周期 一般不超过2年。 修理、更换重要部件或对仪器性能 有怀疑时，应随时检定。
式中:
ND为检测器基线噪声， K 为衰减倍数， B 为测得的基线峰-峰高对应的记录仪标度（AU）。
基线漂移用一小时内基线偏离原点的值（AU/h）表示。 30
3. 液相色谱仪检定方法
色谱基线噪声图
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3. 液相色谱仪检定方法
色谱基线漂移图
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3. 液相色谱仪检定方法
3.4.3 最小检测浓度的检定
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3. 液相色谱仪检定方法
3.4 紫外-可见光和二极管阵列检测器的检定
3.4.1 波长示值误差和重复性的检定 将检测器和记录仪连接好，仪器预热后，将紫外波 长标准溶液（标准波长为235nm，257nm, 313nm 和 350nm）注入样品池中冲洗，并将池充满。将检测器波 长调到低于标准波长5nm处（如检定257nm时，检测器波 长先调到252nm），记录纸速调到（2～4）cm/min，记 录笔调到记录纸的中间，启动记录仪，记录笔画出一条 直线。调检测器波长，每（5～10）s改变1nm，记录仪 上将画出如下图所示的折线，折线的最高点（或最低点） 对应的波长与标准溶液波长之差为波长示值误差。每个 波长重复测量3次，其中最大值与最小值之差为波长重 复性误差。 28
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梯度误差Gc:不超过±3％
2. 液相色谱仪检定规程
b) 柱温箱 柱箱温度设定值误差ΔTS: 不大于 ± 2℃。 温度稳定性 TC: 不大于 1℃。
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2. 液相色谱仪检定规程
c) 检测器
液相色谱仪检测器的主要技术指标如下 检测器 紫外-可见 二极管阵列 基线噪声 基线漂移 不大于5×10-4AU 不大于5×10-3AU/h 不大于5×10-4FU 不大于5×10-3FU /h 不大于1×10-9g /mL 硫酸奎宁/高氯酸水 不大于±2nm 优于2nm 优于103 优于2% 优于103 优于2% 不大于5×10-7RIU 不大于5×10-6RIU/h 不大于1×10-6g/mL 丙三醇/水 荧光检测器 示差折光检测器
液相色谱仪的检定 和校准
中国计量科学研究院
2008年8月
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液相色谱仪的检定和校准
1. 2. 3. 4. 计量基础知识 液相色谱仪检定规程 液相色谱仪检定方法 液相色谱仪检定结果计算举例
5. 液相色谱仪的期间核查
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1.计量基础知识
1.1 什麽是计量
计量是实现单位统一、保证量值准确可 靠的活动，它包括科学技术上的、法律法 规上的和实践管理上的一系列活动。 计量的内容通常可以概括为6个方面： a) 计量单位和单位制； b）计量器具（或测量仪器）
本规程委托全国物理化学计量技术委员会负责解释
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2. 液相色谱仪检定规程
检定规程的主要内容
1）范围 2）概述 3）计量性能要求 4）通用技术要求 5）计量器具控制 附录
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2. 液相色谱仪检定规程
1）范围 本规程适用于配有紫外-可见光检测 器、二级管阵列检测器、荧光检测器和 示差折光率检测器的液相色谱仪的首次 检定、后续检定和使用中检验。液相色 谱仪样机试验和型式评价中有关计量-7g/mL 萘/甲醇 波长示值误差 波长重复性 线性范围 换挡误差 不大于±2nm 优于2nm 优于103 优于2%
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2. 液相色谱仪检定规程
d)整机性能
仪器的整机性能用定性、定量测量重复性表示 * 定 性 测 量 重 复 性 （ 6 次 测 量 ） RSD6 ： 不大于1.5% * 定 量 测 量 重 复 性 （ 6 次 测 量 ） RSD6 不大于3.0%
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2. 液相色谱仪检定规程
2）概述 液相色谱仪（以下简称仪器）是由输液 系统、进样器、色谱柱及柱温箱、检测器和数 据记录处理装置等部分组成的分析仪器，图1 是其组成的方框图。液相色谱仪利用试样中各 组分在色谱柱内固定相和流动相间分配或吸附 特性的差异，由流动相将试样带入色谱柱中进 行分离，经检测器检测，依据组分的保留时间 和响应值（峰面积或峰高）进行定性和定量分 析。
3. 液相色谱仪检定方法
3.2.2 泵流量设定值误差SS和流量稳定性误差SR
按计量性能表的要求设定流量，启动仪器，压力稳 定后，在流动相出口处用事先清洗称重过的容量瓶收集 流动相，同时用秒表计时，收集表1规定时间流出的流 动相，在分析天平上称重，按式（1）、式（2）计算SS 和SR。
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3.液相色谱仪检定方法
3. 液相色谱仪检定方法
3.4.1 波长示值误差和重复性的检定
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3. 液相色谱仪检定方法
3.4.2 基线噪声和基线漂移的检定
选 用 C18 色 谱 柱 ， 100% 甲 醇 为 流 动 相 ， 流 量 为 1.0mL/min，紫外检测器的波长选在254nm，检测灵敏度 调到最灵敏档，记录纸速调至（5～10）mm/min。开机预 热, 仪器稳定后记录基线30min, 由检测器的衰减倍数和 测得的基线峰-峰高对应的记录仪标度，计算基线噪声， 用AU 表示。 ND=K×B (4)
2. 液相色谱仪检定规程
b) 检定项目 泵 耐压检定 流量设定值误差SS 流量稳定性误差SR 梯度误差GC 柱箱 温度设定值误差ΔTS 温度稳定性 TC 检测器 基线噪声 * 基线漂移 *
+
首次检定 + + * + + + + + + + + + + + +
后续检定 – + + + + + + + + + + – – +
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3. 液相色谱仪检定方法
3.4.4 线性范围的检定
将检测器和记录仪连接好，检测器波长选在 254nm，通电稳定后，用注射器直接向检测池中注射2% 异丙醇/水溶液冲洗检测池至记录仪读数不变，记下此 值。之后，依照上法分别注入丙酮/2%异丙醇系列水溶 液（丙酮含量为0.1%、0.2%、……1.0%）冲洗检测池， 并记下各溶液对应的稳定记录仪读数，每个溶液重复测 量3次，取算术平均值。以5个丙酮含量（0.1%～0.5% 5 个点）和对应的记录仪读数做标准曲线，在曲线上找出 丙酮含量大于0.5%各点的读数，与对应含量的测量值做 比较，测量值低与读数5%时，认为曲线弯曲，此点的浓 度做为检测上限CH。按3.4.3的方法和式（5）测出丙酮 的CL值，由CH/CL算出检测器的线性范围。 34
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3. 液相色谱仪检定方法
0.10
0.08
0.06
0.04
0.02
0.00
-0.02 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34
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3. 液相色谱仪检定方法
3.2.3 梯度误差的检定
Gci=(Li平-Lm平)/ Lm平×100%
式中：
(3)
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1.计量基础知识
c) 量值传递和溯源，包括检定、校准、 测试、检验和测量； d）物理常量、材料和物质特性的测定； e）测量不确定度、数据处理与测量理论 及其方法； f）计量管理，包括计量保证与计量监督 等。
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1.计量基础知识
1.2 什麽是检定 测量仪器的检定是指查明和确认测量仪器是否 符合法定要求的程序，它包括检查、加标记和 （或）出具检定证书。 检定具有法制性，其对象是法制管理范围内的 测量仪器。我国规定列入用于贸易结算、安全防 护、医疗卫生和环境检测四个方面的工作计量器 具属于国家强制检定的管理范围。对社会公用计 量标准、部门和企事业单位的各项最高计量标准 也实行强制检定。 检定的依据是按法定程序审批公布的计量检定 规程。
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2. 液相色谱仪检定规程
A B 进 样 器 色 谱 柱 检 测 器 数据处理系统
输液泵
废 液 收 集
图1.液相色谱仪组成方框图
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2. 液相色谱仪检定规程
3）计量性能要求 a) 输液系统：
流量设定值误差SS和流量稳定性误差SR应 符合以下要求： 流量设定值（mL/min）:0.5 1.0 2.0 测 量 次 数 : 3 3 3 流动相收集时间(min) :10 5 5 允许误差 Ss :5% 3% 2% *SR :3% 2% 2%
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：
2. 液相色谱仪检定规程
4）通用技术要求 仪器外观（名称，型号等） 电路系统（接线，开关，旋钮， 指示灯等）
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2. 液相色谱仪检定规程
5）计量器具控制
a）检定条件 环境条件：检定场地、温度(15-30)℃、湿度(20-80)%RH、 电源。 检定设备：秒表、分析天平、温度计、注射器、游标卡尺、 容量瓶。 标准物质：萘、硫酸奎宁、丙三醇标准溶液。 其 他：HPLC用甲醇、纯水、丙酮、异丙醇、玻璃器皿 等。 18
SS=(Fm平-Fs)/Fs×100% SR=(Fmax-Fmin)/Fm平×100%
(1) (2)
式中： Fm=(W2-W1)/ρT·t，流量实测值(mL/min)， W2 ——容量瓶+流动相的质量(g)， W1 ——容量瓶的质量(g)， ρT ——实验温度下流动相的密度(g/cm3)， Ft ——收集流动相的时间(min)； Fm平 ——同一组测量的算术平均值(mL/min)； Fs ——流量设定值(mL/min)； Fmax——同一组测量中流量最大值(mL/min)； Fmin——同一组测量中流量最小值(mL/min)。