微生物学 实验5 霉菌的形态观察
常见霉菌形态观察
学习观察霉菌形态的基本方法，认识霉菌菌落特征与个体形态。要求每个同学必须掌握好具体操作方法。区分细菌、酵母菌和放线菌菌落特征。
二、基本原理 霉菌的营养体是分枝的丝状体，称菌丝体，其菌丝平均宽度3-10μm，分为基内菌丝和气生菌丝。生长到一定阶段时，气生菌丝中又可分化出繁殖菌丝。不同的霉菌其繁殖菌丝可以形成不同的孢子或子实体。 霉菌菌丝有无横隔膜，其营养菌丝有无假根、足细胞等特殊形态的分化，其繁殖菌丝形成的孢子着生的部位和排列情况，以及是否形成有性孢子等，是鉴别霉菌的主要依据，镜检时应仔细注意观察。 由于霉菌是真核微生物，其菌丝一般比放线菌粗长几倍至几十倍，并且菌丝生长比较松散，速度比放线菌快，因此，其菌落多呈大而疏松的绒毛状或棉絮状等特征。
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可从长出菌落的形状，大小、颜色、光泽、表面状况、边缘、隆起度、透光性、质地以及是否分泌色素等方面的特征来描述。一般讲，有鞭毛的菌落平，呈不规则的边缘，有荚膜的菌落看上去特别光滑，呈透明的水珠状，有芽孢的菌落常因芽孢折光率变化而粗糙，不透明，多皱折，表面似乎干燥等，同时细菌菌落易被接种环挑取。 菌落呈圆形、湿润具有粘性、不透明、表面光滑、有油脂状光泽，多数白色或乳白色，少数红色。与培养基结合不紧，易被挑取。当培养时间较长时，菌落颜色变暗，有特殊的酒香味。 观察放线菌菌落的外形、大小、表面形状、表面及背面颜色，与培养基结合情况等(即不易被接种环挑取菌体)
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三、操作方法
3.1 霉菌菌落特征的观察 观察并描述根霉与毛霉、青霉与曲霉的菌落形态，菌落大小，局限生长或蔓延生长；菌落表面和反面颜色，基质的颜色变化；菌落的组织状态，棉毛状、网状或毡状，疏松或紧密，有无同心环纹或放射状绉褶。3.2 霉菌个体形态的观察水浸片法 在于净载玻片上加棉兰一滴，用解剖针挑取少许菌体(或在培养皿盖上挑取少许霉菌体)，放于载玻片上棉兰染色液中，并将菌丝体分开，勿让它成团，加盖玻片，(注意不要产生气泡)。用滤纸吸去多余棉兰液，在低倍镜或高倍镜下观察。毛霉和根霉的观察 用上述水浸片法，剪取毛霉及根霉玻璃纸，分别制片后在低倍和高倍镜下观察，注意菌丝有无分隔，孢子囊梗有无分枝，有无假根和葡萄枝，孢子囊及子囊孢子的形状等。青霉与曲霉的观察 同用上述水浸片法，抽取青霉及曲霉插片，分别制片后在低倍镜和高倍镜下观察菌丝有无分隔，分生孢子梗有无分枝；帚状枝的形状，小梗，梗基的分枝和排列特点；顶囊的形状与小梗的列数；分生孢子的形状，大小与颜色。观察顶囊时，可用酒精反复冲洗，去掉复盖的大量孢子，使顶囊显示出来。
实验五 霉菌的形态观察
实验五霉菌的形态观察、微生物的测微与计数一．实验目的1。
学习并掌握观察霉菌形态的基本方法,初步了解霉菌的形态特征及鉴别依据。
2.学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显微镜下测定微生物大小的方法。
3.了解血球计数板的构造和使用方法。
学习使用血球记数板测定微生物数量的方法。
4.总结并掌握细菌、放线菌和霉菌的鉴别方法.二、实验原理1。
霉菌定义及用途⏹霉菌不是真菌分类中的名词，而是丝状真菌的统称。
⏹霉菌在自然界中广泛分布,与食品的关系密切，是人类在实践活动中最早利用的一种微生物,如早期进行的酱和酱油的制作等。
⏹霉菌也可以使食品发生腐败变质或产生毒素，影响人体健康甚至危及生命。
2.霉菌特征⏹霉菌可产生分支的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子.⏹菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。
⏹霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗的多(约3-10um），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍。
因此,用低倍镜即可观察。
3。
霉菌的菌落⏹松：由于霉菌的菌丝较粗较长，菌丝体疏松,因而形成的菌落也比较疏松,呈绒毛状、棉絮状或蜘蛛网状;⏹大：菌落形态较大,一般比细菌和放线菌的菌落大几倍到几十倍,有时会长满整个培养皿；⏹干：外观干燥,不透明;⏹挑：菌落与培养基间的连接紧密，不易挑取;⏹颜色：由于基内菌丝、气生菌丝、孢子颜色不同，不同的霉菌菌落表面呈现不同的颜色，菌落正反面、边缘与中心颜色常不一致。
同一种霉菌在不同的培养基上或不同的培养条件下所形成的菌落特征可能有所不同.但同一种霉菌在相同的培养条件下和培养基上所形成的菌落特征相对稳定。
菌落特征是霉菌鉴定的重要依据之一.4、霉菌的菌丝形态⏹构成霉菌营养体的基本单位是菌丝。
菌丝的宽度一般为3-10μm，比放线菌菌丝宽很多倍，其菌可伸长并产生分枝。
许多分枝的菌丝相互交织在一起，称为菌丝体。
⏹一部分菌丝存在于培养基质中吸收营养，称为基内菌线或营养菌丝。
霉菌的形态观察实验原理和操作步骤
霉菌的形态观察实验原理和操作步骤一、实验目的1、学习自制水浸片观察微生物的形态；2、学习并掌握观察霉菌形态的基本方法，了解四类常见霉菌的基本形态特征。
二、基本原理霉菌可产生复什分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。
霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。
霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多(约为3～10微米)，常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。
三、实验器材1、菌种青霉(Penicillium sp.)、曲霉(Aspergillus sp.)、根霉（Rhizopus sp.）、毛霉（Mucor sp.）培养约2～5d的马铃薯琼脂培养物。
2、溶液或试剂乳酸石炭酸棉蓝染色液、蒸馏水、50%乙醇、碘液。
3、器材剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、解剖针、显微镜等。
四、实验方法及步骤1.水浸制片观察法在载玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液或蒸馏水，用解剖针从生长有霉菌的平板中挑取少量带有孢子的霉菌菌丝，用50%的乙醇浸润，再用蒸馏水将浸过的菌丝洗一下，然后放入载玻片上的液滴中，仔细地用解剖针将菌丝分散开来。
盖上盖玻片（勿使产生气泡，且不要再移动盖玻片），先用低倍镜，必要时转换高倍镜镜检并记录观察结果。
2.玻璃纸透析培养观察法（1）玻璃纸的选择与处理要选择能够允许营养物质透过的玻璃纸。
也可收集商品包装用的玻璃纸，加水煮沸，然后用冷水冲洗。
经此处理后的玻璃纸若变硬，必定是不可用的，只有那些软的可用。
将那些可用的玻璃纸剪成适当大小，用水浸湿后，夹于旧报纸中，然后一起放入平皿内121℃灭菌30min备用。
（2）菌种的培养按无菌操作法，倒平板，冷凝后用灭菌的镊子夹取无菌玻璃纸贴附于平板上，再用接种环沾取少许霉菌孢子，在玻璃纸上方轻轻抖落于纸上。
然后将平板置28—30℃下培养3—5天，曲霉菌和青霉菌即可在玻璃纸上长出单个菌落（根霉菌的气生性强，形成的菌落铺满整个平板）。
微生物实验报告——真菌的观察
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根霉的 菌丝无隔膜， 营养菌丝体 上产生匍匐 枝，匍匐枝的 节间形成特 有的假根，从 假根处向上 丛生直立、不 分枝的孢囊梗，顶端膨大形成圆形的孢子囊，囊内产生孢囊孢子。孢子囊内囊轴明显，球形或近球 形，囊轴基部与梗相连处有囊托。
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根据公式：目微尺每格长度=重合线间台微尺格数×10/重合线间目微尺格数 计算出不同放大倍数下目微尺每格所代表的实际长度。 ⑶.目微尺校正完毕后，取下镜台测微尺，换上酵母菌浸片，用高倍镜和油镜分别测量酵母菌直径或长、 宽分别占目微尺的格数，最后将所得格数乘以目镜测微尺每格代表的长度，即为酵母菌的实际大小。 3. 酵母菌显微计数。 ⑴.将酵母菌培养液稀释一定的倍数，保证在血细胞计数板上每个中格能看到几十到一百个左右的菌体。 ⑵.在洁净的计数板上平放一盖玻片，使盖玻片完全覆盖两个平台上的计数室方格。用移液枪吸取摇匀 的稀释菌液在盖玻片一段边缘滴一小滴，使菌液在毛细作用下自动进入计数室，静置 5min 使菌体自然 沉降。
0.05%吕氏美兰染液
不同浓度吕氏美兰染液染色不同时间观察记录表
3min
30min
不到一半的酵母菌显蓝色， 超过一半酵母菌显蓝色，大
颜色深浅不一
部分蓝色很深
0.1%吕氏美兰染液
大约一半酵母菌呈蓝色
大部分酵母菌呈蓝色且颜色 较深
从上表可以看出吕氏美兰染液浓度越高、染色时间越长，被染成蓝色的酵母菌细胞就越多。
实训五 酵母菌的形态观察及死活细胞鉴定
实训五酵母菌的形态观察及死活细胞鉴定一、实验目的1、观察酵母细胞的形态结构及出芽繁殖；2、掌握鉴别死活酵母细胞的染色技术；3、学会水浸制片观察酵母菌。
二、实验原理酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，细胞一般呈球状、卵圆状、椭圆状、柱状或分枝状的假菌丝。
其细胞核与细胞质有明显分化，菌体较细菌大几倍甚至十几倍，在高倍显微镜下即可观察到胞内有明显的细胞核和内含物。
酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种。
无性繁殖大多是以出芽的方式进行，也有分裂繁殖；有性繁殖则是通过接合产生子囊孢子。
酵母菌的母细胞经过一系列的芽殖后，如长大的子细胞不与母细胞分离，就会形成藕节状的假菌丝，成为假丝酵母。
用生理盐水（或水-碘液染色液）制作水浸片可以观察酵母菌的形态和出芽繁殖方式。
用美蓝染色液制水浸片可鉴别酵母细胞的死活状态。
美蓝是一种弱氧化剂，氧化时呈蓝色，还原后呈无色。
用美蓝对酵母菌进行染色时，活酵母细胞因新陈代谢不断进行，胞内具有很强的还原能力，能将进入细胞的美蓝还原，使得细胞呈无色。
因此，具有还原能力的酵母活细胞为无色，而老化细胞还原能力弱，染色后呈淡蓝色，死细胞则失去还原能力，被染料染成蓝色。
三、实验材料1、菌种：啤酒酵母或葡萄汁酵母（制成斜面培养物或液体培养物）2、试剂：0.1%吕氏美蓝染色液、0.05%吕氏美蓝染色液、水-碘液染色液（革兰氏染液用碘液：水=1：3）、0.85%生理盐水3、仪器及其他：显微镜、擦镜纸、接种环、载玻片、盖玻片、镊子、滴管、酒精灯、蒸馏水、吸水纸等四、实验时间2课时五、实验步骤（一）生理盐水浸（封）片（酵母菌的形态观察）1、在载玻片中央加1滴无菌生理盐水（不宜用无菌水制作水浸片，否则细胞易破裂），然后以无菌操作从斜面培养基上用接种环取少量啤酒酵母菌苔与生理盐水混匀，使其分散成云雾状薄层。
2、用镊子取洁净盖玻片，先将其一边与菌液接触，然后缓慢地将盖玻片放下，避免产生气泡影响观察。
3、在显微镜下，先用低倍镜观察，再用高倍镜观察酵母菌的形态、大小及出芽情况。
实验三、霉菌的形态观察和酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别
二、基本原理 基本原理
1、酵母菌形态观察和死活细胞鉴别
酵母菌是不运动的单细胞真核微生物， 酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常 见细菌大几倍甚至十几倍。大多数酵母以芽殖 少数以裂殖 见细菌大几倍甚至十几倍。大多数酵母以芽殖、少数以裂殖进 芽殖、 裂殖进 行无性繁殖；有性繁殖则通过结合产生子囊孢子。 子囊孢子。 行无性繁殖；有性繁殖则通过结合产生子囊孢子 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型 氧化型呈蓝色， 无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时， 无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代 谢作用，细胞内具有较强的还原能力， 谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化 型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞 型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无 活细胞是 色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则分别呈蓝色和淡 死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则分别呈蓝色和 或代谢作用微弱的衰老细胞则分别呈蓝色 蓝色。 蓝色。
四、操作步骤
在载玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液 子挑取少许菌丝， 子挑取少许菌丝，浸于染液中 散开 盖上盖玻片 用镊 用解剖针将菌丝分 用高倍
低倍镜观察
镜观察菌丝局部
操作要点： 操作要点： • 挑菌和制片时要细心，尽可能保持霉菌自然生长状态。 挑菌和制片时要细心，尽可能保持霉菌自然生长状态。 • 尽可能将菌丝分开，加盖玻片时勿压入气泡，以免影响观察。 尽可能将菌丝分开，加盖玻片时勿压入气泡，以免影响观察。 • 挑取菌丝前镊子和解剖针要在酒精灯上灼烧灭菌。 挑取菌丝前镊子和解剖针要在酒精灯上灼烧灭菌。
实验三 酵母菌的形态观察及死、 酵母菌的形态观察及死、活细胞 的鉴别和霉菌的形态观察 的鉴别和霉菌的形态观察
霉菌的形态实验报告
霉菌的形态实验报告霉菌的形态实验报告引言：霉菌是一类微生物，广泛存在于自然界中的土壤、空气、水体以及植物和动物体内。
它们具有多样的形态和结构，对人类和环境有着重要的影响。
本实验旨在通过观察和研究霉菌的形态特征，了解其生长和繁殖方式，进一步认识霉菌的生物学特性。
实验材料与方法：1. 霉菌培养基：将适量的琼脂糖、葡萄糖、酵母粉和琼脂按比例混合，加入适量的蒸馏水，混合均匀后加热煮沸，倒入培养皿中，冷却凝固。
2. 霉菌样品：从自然环境中采集到的霉菌样品，如土壤、腐烂的植物等。
3. 实验器材：培养皿、显微镜、移液管、烧杯等。
实验步骤：1. 准备好霉菌培养基，将其倒入培养皿中，待凝固。
2. 从采集到的霉菌样品中取一小块，用移液管将其转移到培养皿的表面，轻轻涂抹均匀。
3. 将培养皿放入恒温箱中，设置适宜的温度和湿度，培养一段时间。
4. 取出培养皿，用显微镜观察霉菌的形态特征，记录下所见。
实验结果与讨论：在观察过程中，我们发现了霉菌的多样形态。
有些霉菌呈现出菌丝状的结构，由细长的菌丝组成，形成一个复杂的网络。
这种菌丝状的结构有助于霉菌在环境中的生长和营养吸收。
另外，还有一些霉菌呈现出颗粒状或球状的形态，它们通常生长在潮湿的环境中，如水体或腐烂的植物上。
除了形态上的差异，我们还观察到了霉菌的颜色多样性。
有些霉菌呈现出白色或浅黄色，而另一些则呈现出绿色、黑色或红色等。
这是由于霉菌在生长过程中产生的色素的不同。
色素的产生与霉菌的代谢活动密切相关，不同的色素可能具有不同的生物学功能。
此外，我们还注意到霉菌在培养基上的分布情况。
有些霉菌呈现出均匀的分布，形成一个连续的菌落；而另一些则呈现出不规则的分布，形成散落的斑点。
这可能与霉菌在培养过程中的生长速度和竞争关系有关。
通过这次实验，我们对霉菌的形态特征有了更深入的了解。
霉菌的多样形态和色彩给我们展示了微观世界的奇妙之处。
同时，我们也认识到霉菌在自然界中的重要作用，它们可以分解有机物质，促进土壤肥沃化，还可以产生抗生素等有益物质。
山大微生物实验报告——霉菌的形态观察
霉菌的形态观察作者：喻曙光学号：班级：生院2010级生命基地生北周五第四组同组者：。
【实验目的】1、学习并掌握观察霉菌形态的基本方法2、了解四类常见霉菌（曲霉、毛霉、青霉、根霉）的基本形态特征【实验原理】霉菌霉菌可产生复什分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。
霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。
霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约 3～10μm ），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。
观察方法观察霉菌的形态有多种方法，常用的有直接制片观察法、载玻片培养观察法和玻璃培养观察法三种方法，本次实验采用载玻片培养观察法（小室培养法）。
载玻片培养观察法（小室培养法）用无菌操作将培养基琼脂薄层置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，霉菌即在载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。
培养一定时间后，将载玻片上的培养物置于显微镜下观察。
这种方法既可以保持霉菌自然生长状态，还便于观察不同发育期的培养物。
【实验器材】1.菌种：曲霉 (Aspergillus sp.) ，青霉，根霉 (Rhizopus sp.) ，毛霉（Mucor sp.），培养 7d 的马铃薯琼脂平板培养物2.培养基：马铃薯培养基（简称PDA）（配方见附表）3.仪器或其他用具：平皿，载玻片，盖玻片，无菌吸管，U 型玻棒，解剖刀，镊子，50%乙醇，20%甘油，显微镜，接种环，酒精灯等【实验步骤】1.载玻片培养观察法（小室培养法）（1）.培养小室的灭菌：在平皿底铺一张略小于皿底的圆滤纸片，再放一Ｕ形玻棒，其上放一洁净载玻片和两块盖玻片，盖上皿盖，包扎后于110℃灭菌20～30分钟，烘干备用。
（2）.琼脂薄片的制作：取已灭菌的马铃薯琼脂培养基各6～7ml 注入另两个灭菌平皿中，使之凝固成薄层。
通过无菌操作，用解剖刀将其切成 1cm x 1cm的琼脂块，并将其移至上述培养室中的载玻片上（每片放两块 )。
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实验五
一、实验目的
霉菌的形态观察
(1)观察霉菌的菌落特征。 (2) 观察根霉、青霉、曲霉的形态构造及无 性孢子。
(3)学习并掌握霉菌的制片方法。
二、实验原理
霉菌为真核微生物，菌丝较粗大，有分枝或不 分枝的。菌丝体为无色透明或暗褐色至黑色，或呈 现鲜艳的颜色。在显微镜下观察时，菌丝皆呈管状。 在固体培养基上生长，为绒毛状或棉絮状。一些较 高等的霉菌丝状管道中皆有横隔，将菌丝隔成许多 细胞。霉菌细胞易收缩变形，而且孢子很容易分散， 所以制标本时常用乳酸石炭酸棉兰染色液。该染色 液①可使细胞不变形；②具有防腐杀菌作用；④不 易干燥，能保持较长时间；⑤溶液本身呈蓝色，有 一定的染色效果。
三、实验材料
1.菌种 黑曲霉、青霉、黑根霉。
2. 其他 显微镜、培养箱、养皿、乳酸 石炭酸棉蓝染色液、载玻片、盖玻片、 无菌水、接种环、接种钩、解剖针、酒 精灯、火柴、滤纸、玻璃铅笔等。
四、操作方法
(一)制片观察法（水浸片法制作标本片）
(1) 在一洁净载玻片上，滴一滴乳酸石炭酸棉兰 染色液；按无菌操作，用解剖针挑取少量带有 孢子的霉菌菌丝于染色液中（注：挑取带有颜 色的菌丝），再细心地把菌丝挑散开，然后用 盖玻片盖上（注：不要产生气泡）。 (2)置于显微镜下，观察霉菌菌丝的形态（观察 菌丝有无隔膜、假根、匍匐枝、足细胞；以及 无性或有性孢子的形态、大小和颜色等）。
显微形态：菌丝体无隔，有 假根和匍匐枝，其中，匍匐 黑根霉（匍枝根霉） 枝无色，假根发达呈褐色。 孢子囊簇生呈黑色或褐色， 菌落：初期白色，老熟 可形成球状接合孢子。 后灰褐色
根霉
孢子囊
匍匐枝 假根 接合孢子
孢囊孢子
接合孢子
黑曲霉
曲霉
分生孢子
菌丝体心态：有横隔，常无色，老熟 时变为浅黄色至褐色，有足细胞 无性生殖体： 分生孢子梗、顶囊、小梗、分生孢子
(二)玻璃纸透析培养观察法
(1) 向霉菌斜面试管中加入 5ml 无菌水洗下孢子，制成孢 子悬液；
(2)用无菌镊子将已灭菌的直径与培养皿相同的圆形玻璃 纸覆盖在察氏培养基平板上； (3)用1ml 的无菌移液管吸取 0.2ml孢子悬液于上述玻璃纸 平板上，并用无菌玻璃棒涂抹均匀； (4)置于28℃培养箱内培养48h后，取出培养皿。打开皿 盖，用镊子将玻璃纸与培养基分开，再用剪刀取一小片， 置于载玻片上，用显微镜观察其特殊形态。
此外，为了得到清晰、完整并保持自然状态的霉菌 形态，还可以利用载玻片培养法或玻璃纸透析培养 法进行观察。载玻片培养法是在一定湿度的培养皿 中，放人一霉菌载片培养物，并盖上一块盖玻片， 使霉菌在一狭窄的空隙中生长、繁殖便于在显微镜 下观察霉菌的特殊形态构造，如曲霉的足细胞、分 生孢子、顶囊等生长情况。并且还可在同一标本上 观察到它们不同阶段的生长、发育状况。玻璃纸透 析培养法是利用玻璃纸的半透膜特性及透光性，将 霉菌生长在覆盖于琼脂培养基表面的玻璃纸上，然 后将长菌的玻璃之间取一小片，贴放在载玻片上， 置于显微镜下观察。本实验以制片观察为主。
小梗 顶囊 分生孢子梗
足细胞
有隔菌丝
分生孢子头发辫状
黑曲霉的显微形态
青霉
菌丝体形态： 营养菌丝有横隔，无足细胞 分生孢子梗有横隔 分生孢子头无顶囊，呈帚状 小梗顶串生分生孢子（球形 、椭圆或短圆柱状）
电子显微 镜2400倍
青霉的显微形态
五、实验作业
将显微镜下所观察到的 3种霉菌的菌丝体形态结构 及产孢结构描绘出来，并标注各部分名称。