实验十一 大分子物质的水解实验
实验十大分子物质的水解实验
实验报告
结果（＋或－）
菌种名
淀粉水解
明胶水解
大肠杆菌
金黄色葡萄球菌
枯草芽孢杆菌
思考题
1）你怎样解释淀粉酶是胞外酶而非胞内酶？
2）不利用碘液，你怎样证明淀粉水解的存在？
3）接种后的明胶试管可以在35 ℃培养，在培养后你 必须做什么才能证明水解的存在？
实验十 大分子物质的水解实验
实验目的
证明微生物对各种大分子具有分解能力， 且其分解能力与微生物和有机物的种类 不同而不同。
掌握微生物大分子水解实验的原理与方 法。
实验原理
微生物对大分子物质不能直接吸收，必须靠产生的胞 外酶（胞外酶主要为水解酶）将大分子物质分解后 才能吸收利用。这些过程均可通过观察细菌菌落周 围的物质变化来证实：淀粉遇碘会产兰色，但细菌 水解淀粉的区域，用碘测定不再产生兰色，表明细 菌产生了淀粉酶。明胶是由胶原蛋白经水解产生的 蛋白质，有些微生物可产生一种称作明胶酶的胞外 酶，水解蛋白质，使明胶液化。
实验内容
单糖
（无色）
2、明胶水解实验
25℃以下
明胶
水解
（固态）
氨基酸
（液态）
实验菌种
枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，金黄色葡萄 球菌
淀粉水解实验步骤
倒平板
用记号笔在平板底部划成三部分
将三菌种分别在不同的部分划线接种， 在平板的反面分别对应写上菌名
37 ℃培养24小时
用碘液测定结果
菌苔周围出现无色透明圈，说明淀粉已被水解，为阳性。 透明圈的大小可初步判断该菌水解淀粉能力的强弱，即产 生胞外淀粉酶的高低
淀粉水解实验
明胶水解实验步骤
取三支明胶培养基试管，用记号笔标明 菌种名
用接种针分别穿刺接种 将接种后的试管置20 ℃中培养2-5天 观察明胶液化情况
微生物实验
实验十细菌鉴定中的生理生化反应实验原理各种微生物在代谢类型上表现出很大的差异，如表现在对大分子糖类和蛋白质的分解能力以及分解代谢的最终产物的不同，反映出它们具有不同的酶系和不同的生理特性，这些特性可被用作为细菌鉴定和分类的内容。
（一）大分子物质水解实验1、淀粉水解试验2、油脂水解试验脂肪水解后产生脂肪酸可改变培养基的pH，培养基中的中性红指示剂在pH降低时从淡红色转变为深红色3、明胶水解试验明胶25℃以下维持凝胶状态，25℃以上则液化。
明胶被一种称为明胶酶的胞外酶所水解后，25℃甚至4 ℃保持液化状态4、石蕊牛奶实验石蕊+脱脂牛奶→ →呈浑浊蓝色牛奶中酪素水解成氨基酸和肽→ →培养基变透明乳糖发酵产乳酸→ →石蕊变粉红色，酸过量时还可引起牛奶凝固氨基酸分解产生碱性反应→ →石蕊变紫色石蕊被还原→ →白色5、尿素试验尿素酶分解尿素产生氨，培养基pH升高，培养基中指示剂酚红由黄色（pH6.8）转变为深粉红色（pH8.4）（二）糖发酵试验不同细菌分解糖类物质的能力有很大差别产酸产气、产酸不产气、不能利用产酸：溴甲酚紫指示剂（pH6.8紫色、pH5.2黄色）产气：倒置的杜氏小管用于收集气体（三）IMViC+硫化氢试验1、吲哚试验色氨酸酶分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸吲哚与对二甲基氨基苯甲醛接合后可形成玫瑰吲哚2、甲基红试验检验利用葡萄糖产生有机酸的能力甲基红指示剂：pH6.3橙黄色，pH4.2红色3、伏-普试验用来测定利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力，如丙酮酸丙酮酸缩合、脱酸生成乙酰甲基甲醇乙酰甲基甲醇在碱性条件下被空气中的氧气氧化成二乙酰二乙酰与蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成红色化合物4、柠檬酸盐试验培养基中柠檬酸盐及磷酸铵被分解利用后，形成碱性化合物，使培养基的pH升高1%溴麝香草酚蓝指示剂：pH6.0以下黄色、pH6.5~7.0绿色、pH7.6以上蓝色5、硫化氢试验某些细菌分解含硫氨基酸产生硫化氢硫化氢与铅盐或铁盐反应形成黑色沉淀实验十二金黄色葡萄球菌检测实验原理金黄色葡萄球菌属于微球菌科葡萄球菌属，可产生肠毒素，人误食了含有毒素的食品，就会发生食品中毒，因此，由该菌引起的中毒为毒素型食物中毒。
实验八 大分子物质的水解实验及糖发酵实验
1．培养基（每组的量，由班长分发）
• 灭菌培养皿（淀粉水解）：3皿
• 明胶液化培养基： 4支
• 葡萄糖发酵培养基： 3支
• 乳糖发酵培养基： 3支
• 淀粉培养基：
1瓶/2组
2.接种用具
接种环（针），酒精灯，标签纸，试管架
3.实验菌种
枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，普通变形杆菌，
金黄色葡萄球菌
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四、实验内容
（2）将接种过和作为对照的6支试管置于37℃恒温培养箱培养 24h。
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..实ຫໍສະໝຸດ 结果糖发酵实验.五、实验结果
（1）大分子物质水解实验结果
将结果填入下表。“＋” 表示阳性，“－”表示阴性 注意：观察结果时，可打开皿盖，滴加碘液于平板上，轻轻旋转， 使碘液均匀铺满整个平板。如菌苔周围出现无色透明圈，则说明 淀粉已被水解，为阳性。透明圈的大小，说明该菌水解淀粉能力 的强弱，即产生胞外酶活力的高低。（以“+”、“—”表示有 无透明圈）
实 验八
大分子物质的水解实验 及糖发酵实验
.
一、实验目的
1.证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力的 不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
2.掌握进行微生物大分子水解实验的原理和方法 3.了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作
用 4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法
.
二、实验原理
微生物代谢重要特征之一，就是代谢类型的多样性，因此使得 微生物在自然界的物质循环中起着重要的作用，同时也为人类开 发利用微生物资源提供更多的机会与途径。人们在微生物的分类 鉴定工作中，常利用其生理生化反应作为重要依据。
的背面分别记下菌名。 （3）将接完种的平板倒置于37℃恒温培养箱，培养24h。 2. 明胶液化试验 （1）取4支明胶培养基试管，用接种针分别以穿刺接种法接种枯草
实验八 大分子物质的水解及营养元素对微生物生长的影响
实验八大分子物质的水解及营养元素对微生物生长的影响杨明轩生物111 1102040128一、实验目的1、通过了解不同细菌对不同的生物大分子及含氮化合物的分解利用情况，认识微生物代谢类型多样性。
2、了解营养元素对微生物生长的影响。
3、学习平板接种法（点接）及穿刺接种法。
二、实验原理某些微生物能产生胞外酶，将大分子的淀粉、蛋自质和脂肪等分解为小分子物质，然后再被微生物吸收利用。
不同的微生物因具有不同的代谢酶系而表现出不同的代谢类型，即当它们作用于相同的底物时可以产生不同的终产物。
这些可以作为微生物鉴定和分类的依据。
本实验通过微生物对碳水化合物（如淀粉）、含氮化合物（蛋白质）和含磷有机物（卵磷脂）的水解，证明微生物对于这些大分子有机化合物的水解作用。
淀粉的水解是由于微生物分泌淀粉酶作用的结果，可用碘液来检测；微生物产生并分泌磷酸酯酶，可水解卵磷脂为脂肪和甘油；蛋白质中的含硫氨基酸被分解产生硫化氢，遇到培养基中的铁盐或铅盐，就形成黑色的硫化铁或硫化铅。
微生物的生长发育需要一定的营养物质和环境条件，只有全面满足以上要求时，微生物才能进行正常的生命活动。
影响微生物生长、繁殖的主要营养元素主要包括碳、氢、氧、氮、磷、硫等，个别微生物还需要某些维生素和微量元素。
本实验通过将黑曲霉接种于缺乏不同营养元素的培养基中，观察它的生长情况，确知几种营养元素对微生物生长的作用。
三、实验材料1、菌种：大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、普通变形杆菌（Proteus vulgaris）、黑曲霉（Aspergillusniger）；2、培养基：淀粉培养基、LB培养基；3、试剂：20%蔗糖溶液、1.5%硝酸铵溶液、0.5%KH2PO4、混合液（1.2%MgSO4、0.05%NaCl、0.005%FeSO4等量混合）、蒸馏水、生理盐水，以上试剂灭菌备用；5、仪器：无菌培养皿、100ml无菌三角瓶、无菌吸管（5ml、10ml）、移液器、接种用具。
实验十一蔗糖水解反应
实验十一 蔗糖水解反应【实验目的】1. 测定不同温度时蔗糖转化反应的速率常数和半衰期，并求算蔗糖转化反应的活化能。
2. 了解旋光仪的构造、工作原理，掌握旋光仪的使用方法。
【基本要求】1.了解在蔗糖反应的动力学方程式中，任何时刻t 的蔗糖浓渡可以被反应体系在该时刻的选光度α与反应终了时的选光度∞α之差所替代的依据。
2 测定蔗糖转化率的速率常数的半衰期。
3 了解旋光仪的基本原理，掌握其实用方法。
【实验原理】蔗糖转化反应为： C 12H 22O 11 + H 2O → C 6H 12O 6 + C 6H 12O 6蔗糖 葡萄糖 果糖为使水解反应加速，常以酸为催化剂，故反应在酸性介质中进行。
由于反应中水是大量的，可以认为整个反应中水的浓度基本是恒定的。
而H ＋是催化剂，其浓度也是固定的。
所以，此反应可视为准一级反应。
其动力学方程为kC dtdC =- (1) 式中，k 为反应速率常数；C 为时间t 时的反应物浓度。
将(1)式积分得： 0ln ln C kt C +-=(2)式中，C 0为反应物的初始浓度。
当C =1/2C 0时，t 可用t 1/2表示，即为反应的半衰期。
由(2)式可得：kk t 693.02ln 2/1== (3)蔗糖及水解产物均为旋光性物质。
但它们的旋光能力不同，故可以利用体系在反应过程中旋光度的变化来衡量反应的进程。
溶液的旋光度与溶液中所含旋光物质的种类、浓度、溶剂的性质、液层厚度、光源波长及温度等因素有关。
为了比较各种物质的旋光能力，引入比旋光度的概念。
比旋光度可用下式表示：[]lC tD αα= (4)式中，t 为实验温度(℃)；D 为光源波长；α为旋光度；l 为液层厚度(m)；C 为浓度(kg·m -3)。
由(4)式可知，当其它条件不变时，旋光度α与浓度C 成正比。
即：α＝KC (5)式中的K 是一个与物质旋光能力、液层厚度、溶剂性质、光源波长、温度等因素有关的常数。
微生物实验 08.大分子物质的水解试验
2、掌握微生物大分子水解实验的原理和方法。
（二）实验原理
微生物对生物大分子（如：淀粉；蛋白质； 脂肪）不能直接吸收利用，只有那些能够 产生并分泌胞外酶的微生物才能利用大分 子有机物。
胞外酶主要为水解酶。
淀粉
淀粉酶 水解糊精（蓝红 ） Nhomakorabea双糖、单糖
（无色）
加碘（蓝色）
脂肪
脂肪酶 水解
甘油+脂肪酸
2、明胶水解试验 做标记------穿刺接种------培养（20℃ 2-5d） ------------观察液化情况
（五）注意事项
1 、淀粉水解试验中加碘液时碘液要铺 满整个平板； 2、倒平板时无菌操作
3、接种时防止菌种交叉污染。
（六）实验作业
分别将淀粉水解试验（“+”表示发生水解，“-”表示 不发生水解）和明胶水解试验（“+”表示发生水解，“-” 表示不发生水解）结果填入下表，并分析原因。 菌名 淀粉水解能力 明胶水解能力 大肠杆菌 枯草芽孢杆菌
乳糖蛋白胨培养液 蛋白胨 10g 牛肉膏 3g 乳糖 5g NaCl 5g 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1ml 蒸馏水 1000mlpH 7.2-7.4 注：最后加溴甲酚紫。 115℃灭菌20min
实验八 大分子物质的水解试 验
（一）实验目的
1 、证明不同微生物对各种大分子的水解能力不 同，从而说明不同微生物具有不同的酶系统。
(四）实验方法
1、淀粉水解试验
注意无菌操 作
（1）制固体淀粉培养基平板；冷却凝固。 （2）标记后将大肠杆菌、枯草芽孢杆菌接种。
大肠杆菌
枯草杆菌
（3）36℃恒温倒置培养1-2d；
（4）观察生长情况，将平板打开盖子，滴入少 量碘液于平皿中，轻轻旋转平板，使碘液 均匀铺满整个平板；
实验十一 大分子物质的水解实验
2．淀粉水解试验
(1)将淀粉培养基溶化后，冷至45℃左右， (1)将淀粉培养基溶化后，冷至45℃左右，以无菌操作 45℃左右 将淀粉培养基溶化后 制 成平板。 成平板。 (2)接种从土壤中分离的菌株 (2)接种从土壤中分离的菌株 (3)将上述已接种的平板倒置于37℃温室中培养24小时。 (3)将上述已接种的平板倒置于37℃温室中培养24小时。 将上述已接种的平板倒置于37℃温室中培养24小时 (4)将已培养24小时的平皿取出 打开皿盖， 将已培养24小时的平皿取出， (4)将已培养24小时的平皿取出，打开皿盖，加少量卢 戈 氏碘液于平板上，轻轻旋转平皿， 氏碘液于平板上，轻轻旋转平皿，使碘液均匀铺满 整 个平板。如菌苔周围出现无色透明圈， 个平板。如菌苔周围出现无色透明圈，说明淀粉已 被
一.实验目的及要求
1、了解不同微生物对各种有机大分子的水 解能力。 解能力。 了解不同微生物有不同的酶系统。 2、了解不同微生物有不同的酶系统。 掌握微生物大子水解试验的原理和方法。 3、掌握微生物大子水解试验的原理和方法。 掌握大分子试验在微生物鉴别中的作用。 4、掌握大分子试验在微生物鉴别中的作用。
三.实验器材
菌种： 菌种：土壤中分离的菌株 材料：油脂培养基，淀粉培养基，无菌平皿、 材料：油脂培养基，淀粉培养基，无菌平皿、 接种环、卢戈氏碘液（ 接种环、卢戈氏碘液（Lugol's iodine solution） solution）等。
四.实验步骤
1．油脂水解试验 (1)将溶化的油脂培养基冷至45℃左右时 将溶化的油脂培养基冷至45℃左右时， (1)将溶化的油脂培养基冷至45℃左右时，充分 振荡，使油脂均匀分布， 振荡，使油脂均匀分布，用无菌操作倒入平 皿中，待凝。 皿中，待凝。 (2)接种从土壤中分离的菌株 (2)接种从土壤中分离的菌株 (3)将接种的平板倒置于37℃温室中培养24h。 将接种的平板倒置于37℃温室中培养24h (3)将接种的平板倒置于37℃温室中培养24h。 (4)取出平板 观察平板底层长菌的地方， 取出平板， (4)取出平板，观察平板底层长菌的地方，如出 现红色斑点，说明脂肪被水解，为阳性反应。 现红色斑点，说明脂肪被水解，为阳性反应。
微生物生理生化实验
姓名班级13级生命基地班学号同组者：科目微生物学实验题目微生物生理生化实验组别3【实验题目】微生物生理生化实验【实验目的】1.了解生理生化的意义。
2.掌握几种常用生理生化的实验方法。
【实验器材】1、菌种：枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，铜绿假单胞菌，变形杆菌，产气肠杆菌2、试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水等3、仪器和用具：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管等4、培养基淀粉培养基、油脂培养基（大分子物质水解实验）葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基（内附倒置的德汉氏小管）（糖发酵实验）蛋白胨水培养基（吲哚实验）葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红培养基）【实验原理】在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程。
具有酶功能的蛋白质多数在细胞内，称为胞内酶。
许多细菌产生胞外酶，这些酶从细胞中释放出来，以促进细胞外的化学反应。
各种微生物在代谢类型上表现出很大的差异，如表现在对大分子糖类和蛋白质的分解能力以及分解代谢的最终产物的不同，反映出他们具有不同的酶系和不同的生理特性，这些特性可被用作为细菌鉴定和分类的内容。
具体实验原理如下：一、大分子物质的水解实验原理姓名班级13级生命基地班学号同组者：科目微生物学实验题目微生物生理生化实验组别31、淀粉水解由于微生物对淀粉这种大分子物质不能直接利用，所以必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。
胞外酶主要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能被运输至细胞内。
如淀粉酶将淀粉水解为小分子的糊精,双糖和单糖，能分泌胞外淀粉酶的微生物，则能利用其周围的淀粉。
已知淀粉遇到碘会显现蓝色，因此可通过在淀粉培养基上滴加碘液来判断微生物是否能产生淀粉酶分解淀粉，菌落周围不呈蓝色，出现无色透明圈，则该菌种能够水解淀粉。
2、油脂水解脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸，而产生的脂肪酸可改变培养基的PH,因此在油脂培养基上接种细菌，培养一段时间后可通过观察菌苔的颜色判断菌种是否能够水解油脂，若出现红色斑点，则说明这种菌可产生分解油脂的酶。
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三.实验器材
菌种： 菌种：土壤中分离的菌株 材料：油脂培养基，淀粉培养基，无菌平皿、 材料：油脂培养基，淀粉培养基，无菌平皿、 接种环、卢戈氏碘液（ 接种环、卢戈氏碘液（Lugol's iodine solution） solution）等。
四.实验步骤
1．油脂水解试验 (1)将溶化的油脂培养基冷至45℃左右时 将溶化的油脂培养基冷至45℃左右时， (1)将溶化的油脂培养基冷至45℃左右时，充分 振荡，使油脂均匀分布， 振荡，使油脂均匀分布，用无菌操作倒入平 皿中，待凝。 皿中，待凝。 (2)接种从土壤中分离的菌株 (2)接种从土壤中分离的菌株 (3)将接种的平板倒置于37℃温室中培养24h。 将接种的平板倒置于37℃温室中培养24h (3)将接种的平板倒置于37℃温室中培养24h。 (4)取出平板 观察平板底层长菌的地方， 取出平板， (4)取出平板，观察平板底层长菌的地方，如出 现红色斑点，说明脂肪被水解，为阳性反应。 现红色斑点，说明脂肪被水解，为阳性反应。
实验九
大分子物质水解试验
一.实验目的及要求
1、了解不同微生物对各种有机大分子的水 解能力。 解能力。 了解不同微生物有不同的酶系统。 2、了解不同微生物有不同的酶系统。 掌握微生物大子水解试验的原理和方法。 3、掌握微生物大子水解试验的原理和方法。 掌握大分子试验在微生物鉴别中的作用。 4、掌握大分子试验在微生物鉴别中的作用。
2．淀粉水解试验
(1)将淀粉培养基溶化后，冷至45℃左右， (1)将淀粉培养基溶化后，冷至45℃左右，以无菌操作 45℃左右 将淀粉培养基溶化后 制 成平板。 成平板。 (2)接种从土壤中分离的菌株 (2)接种从土壤中分离的菌株 (3)将上述已接种的平板倒置于37℃温室中培养24小时。 (3)将上述已接种的平板倒置于37℃温室中培养24小时。 将上述已接种的平板倒置于37℃温室中培养24小时 (4)将已培养24小时的平皿取出 打开皿盖， 将已培养24小时的平皿取出， (4)将已培养24小时的平皿取出，打开皿盖，加少量卢 戈 氏碘液于平板上，轻轻旋转平皿， 氏碘液于平板上，轻轻旋转平皿，使碘液均匀铺满 整 个平板。如菌苔周围出现无色透明圈， 个平板。如菌苔周围出现无色透明圈，说明淀粉已 被
二.实验原理பைடு நூலகம்
各种细菌在代谢类型上表现了很大的差异。 各种细菌在代谢类型上表现了很大的差异。 不同的细菌分解大分子碳水化合物、 不同的细菌分解大分子碳水化合物、蛋白 质和脂肪的能力不同， 质和脂肪的能力不同，所能发酵的类型和 最终产物也不一样。 最终产物也不一样。不同细菌对营养的要 求不同也说明了它们有不同的合成能力。 求不同也说明了它们有不同的合成能力。 所有这些都反映了它们是有不同的酶系统。 所有这些都反映了它们是有不同的酶系统。 细菌的生化反应的多样性也被人们作为细 菌的鉴定和分类方法来利用。 菌的鉴定和分类方法来利用。
五.实验结果 实验结果
将结果填入课本上的表格里。“+”表示 将结果填入课本上的表格里。 阳性； 表示阴性。 阳性；“-”表示阴性。