实验十 大分子物质的水解试验
微生物实验
实验十细菌鉴定中的生理生化反应实验原理各种微生物在代谢类型上表现出很大的差异，如表现在对大分子糖类和蛋白质的分解能力以及分解代谢的最终产物的不同，反映出它们具有不同的酶系和不同的生理特性，这些特性可被用作为细菌鉴定和分类的内容。
（一）大分子物质水解实验1、淀粉水解试验2、油脂水解试验脂肪水解后产生脂肪酸可改变培养基的pH，培养基中的中性红指示剂在pH降低时从淡红色转变为深红色3、明胶水解试验明胶25℃以下维持凝胶状态，25℃以上则液化。
明胶被一种称为明胶酶的胞外酶所水解后，25℃甚至4 ℃保持液化状态4、石蕊牛奶实验石蕊+脱脂牛奶→ →呈浑浊蓝色牛奶中酪素水解成氨基酸和肽→ →培养基变透明乳糖发酵产乳酸→ →石蕊变粉红色，酸过量时还可引起牛奶凝固氨基酸分解产生碱性反应→ →石蕊变紫色石蕊被还原→ →白色5、尿素试验尿素酶分解尿素产生氨，培养基pH升高，培养基中指示剂酚红由黄色（pH6.8）转变为深粉红色（pH8.4）（二）糖发酵试验不同细菌分解糖类物质的能力有很大差别产酸产气、产酸不产气、不能利用产酸：溴甲酚紫指示剂（pH6.8紫色、pH5.2黄色）产气：倒置的杜氏小管用于收集气体（三）IMViC+硫化氢试验1、吲哚试验色氨酸酶分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸吲哚与对二甲基氨基苯甲醛接合后可形成玫瑰吲哚2、甲基红试验检验利用葡萄糖产生有机酸的能力甲基红指示剂：pH6.3橙黄色，pH4.2红色3、伏-普试验用来测定利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力，如丙酮酸丙酮酸缩合、脱酸生成乙酰甲基甲醇乙酰甲基甲醇在碱性条件下被空气中的氧气氧化成二乙酰二乙酰与蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成红色化合物4、柠檬酸盐试验培养基中柠檬酸盐及磷酸铵被分解利用后，形成碱性化合物，使培养基的pH升高1%溴麝香草酚蓝指示剂：pH6.0以下黄色、pH6.5~7.0绿色、pH7.6以上蓝色5、硫化氢试验某些细菌分解含硫氨基酸产生硫化氢硫化氢与铅盐或铁盐反应形成黑色沉淀实验十二金黄色葡萄球菌检测实验原理金黄色葡萄球菌属于微球菌科葡萄球菌属，可产生肠毒素，人误食了含有毒素的食品，就会发生食品中毒，因此，由该菌引起的中毒为毒素型食物中毒。
实验八 大分子物质的水解实验及糖发酵实验
1．培养基（每组的量，由班长分发）
• 灭菌培养皿（淀粉水解）：3皿
• 明胶液化培养基： 4支
• 葡萄糖发酵培养基： 3支
• 乳糖发酵培养基： 3支
• 淀粉培养基：
1瓶/2组
2.接种用具
接种环（针），酒精灯，标签纸，试管架
3.实验菌种
枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，普通变形杆菌，
金黄色葡萄球菌
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四、实验内容
（2）将接种过和作为对照的6支试管置于37℃恒温培养箱培养 24h。
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..实ຫໍສະໝຸດ 结果糖发酵实验.五、实验结果
（1）大分子物质水解实验结果
将结果填入下表。“＋” 表示阳性，“－”表示阴性 注意：观察结果时，可打开皿盖，滴加碘液于平板上，轻轻旋转， 使碘液均匀铺满整个平板。如菌苔周围出现无色透明圈，则说明 淀粉已被水解，为阳性。透明圈的大小，说明该菌水解淀粉能力 的强弱，即产生胞外酶活力的高低。（以“+”、“—”表示有 无透明圈）
实 验八
大分子物质的水解实验 及糖发酵实验
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一、实验目的
1.证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力的 不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
2.掌握进行微生物大分子水解实验的原理和方法 3.了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作
用 4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法
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二、实验原理
微生物代谢重要特征之一，就是代谢类型的多样性，因此使得 微生物在自然界的物质循环中起着重要的作用，同时也为人类开 发利用微生物资源提供更多的机会与途径。人们在微生物的分类 鉴定工作中，常利用其生理生化反应作为重要依据。
的背面分别记下菌名。 （3）将接完种的平板倒置于37℃恒温培养箱，培养24h。 2. 明胶液化试验 （1）取4支明胶培养基试管，用接种针分别以穿刺接种法接种枯草
微生物鉴定中常用的生理生化试验
一、实验目的1.证明不同微生物对各种有极大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
2.掌握微生物大分子物质水解实验的原理和方法。
3.了解糖发酵的原理和在肠细菌鉴定中重要作用。
4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
5.了解IMViC的原理。
二、实验原理由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。
具体的原理如下：1.淀粉水解试验：在淀粉固体培养基上接种两种细菌（枯草杆菌，大肠杆菌），培养两天以后，再往培养基中加碘液染色，若该细菌能分泌胞外淀粉酶，则能利用其周围的淀粉，淡然在染色后，其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈。
2.糖发酵试验：不同的细菌分解糖的能力不同，有些细菌能利用糖发酵产酸和产气，有些则不能。
酸在加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。
若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。
3.IMVC实验主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌。
（1）吲哚试验：在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。
本次不做该试验。
（2）甲基红试验（MR）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲酸，乙酸和乳酸等多种有机酸，是培养液PH值降至4.2以下，加入甲基红后溶液呈红色。
三、实验材料1.菌种大肠杆菌（Escherichia coli），金黄色葡萄球(Staphyloccocus aureus Rosenbach)，铜绿假单胞菌（P.Aeruginosa），枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis Cohn），产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)，普通变形杆菌（Proteus.vulgaris)。
实验十大分子物质的水解实验
实验目的
证明微生物对各种大分子具有分解能力， 且其分解能力与微生物和有机物的种类 不同而不同。 掌握微生物大分子水解实验的原理与方 法。
实验原理
微生物对大分子物质不能直接吸收，必须靠产生的胞 外酶（胞外酶主要为水解酶）将大分子物质分解后 才能吸收利用。这些过程均可通过观察细菌菌落周 围的物质变化来证实：淀粉遇碘会产兰色，但细菌 水解淀粉的区域，用碘测定不再产生兰色，表明细 菌产生了淀粉酶。明胶是由胶原蛋白经水解产生的 蛋白质，有些微生物可产生一种称作明胶酶的胞外 酶，水解蛋白质，使明胶液化。
实验报告
结果（＋或－）
菌种名 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 淀粉水解 明胶水解
思考题 1）你怎样解释淀粉酶是胞外酶而非胞内酶？ 2）不利用碘液，你怎样证明淀粉水解的存在？ 3）接种后的明胶试管可以在35 ℃培养，在培养后你 必须做什么才能证明水解的存在？
实验内容
1、淀粉水解实验
淀粉
加碘液 （蓝色） 水解
单糖
（无色）
2、明胶水解实验
明胶
25℃以下 （固态） 水解
氨基酸
（液态）
实验菌种
枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，金黄色葡萄 球菌
淀粉水解实验步骤
倒平板 用记号笔在平板底部划成三部分 37 ℃培养24小时
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
将三菌种分别在不同的部分划线接种， 在平板的反面分别对应写上菌名 用碘液测定结果
菌苔周围出现无色透明圈，说明淀粉已被水解，为阳性。 透明圈的大小可初步判断该菌水解淀粉能力的强弱，即产 生胞外淀粉酶的高低
淀粉水解实验
明胶水解实验步骤
实验十 微生物鉴定中常用的生理生化试验
实验十微生物鉴定中常用的生理生化试验摘要本次实验包括大分子水解试验、糖发酵试验和IMViC试验（吲哚、甲基红试验）三类试验，根据要求本实验使用六种培养基分别对所需菌种组合进行了大约24h的培养，之后按照实验要求进行各个试验。
最后观察到了实验现象，了解了所用菌种鉴别的方法和原则。
关键词微生物鉴定；生理生化试验；大分子水解试验；糖发酵试验；IMViC试验前言类的微生物有着不同的代谢类型，例如对一些物质的分解能力及分解代谢的产物的不同反映出他们不同的生理特征，这些特征可以用来对不同种类微生物进行鉴定和分类。
因此可以对微生物的不同生化反应进行试验，以此证明微生物生理特征的多样性，证明微生物分类鉴别的依据。
生理生化试验相比其他鉴别方法而言相对简便、快捷、经济实用，在一般的实验室中都可以进行，因此在微生物种类的初步鉴别中被广泛使用。
一、实验目的1、大分子水解试验证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统，掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。
2、糖发酵试验了解糖发酵的原理和在肠细菌鉴定中的重要作用，掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
3、IMViC试验了解IMViC的原理及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。
二、实验原理在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢。
代谢过程主要是酶促反应过程。
具有酶功能的蛋白质多数在细胞内，称为胞内酶（endoenzymes）.许多细菌产生胞外酶(exoenzymes)，这些酶从细胞中释放出来，以催化细胞外的化学反应。
各种微生物具有不同的酶系统，所以它们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。
具体的原理如下：1、大分子水解试验：微生物对大分子如淀粉、蛋白质和油脂不能直接利用，必须依靠产生的胞外酶将大分子物质分解后才能被微生物吸收利用。
实验十、大分子水解实验
一,目的:掌握进行微生物大分子水解试验的原理 和方法 二,原理:微生物对某些大分子如淀粉,蛋白质, 脂肪等不能直接利用,必须靠产生的胞外酶将大 分子物质分解后才能吸收利用.如淀粉酶可将淀 粉水解成小分子的糊精,双糖及单糖;蛋白酶可 将蛋白质水解成氨基酸等.微生物在利用这些物 质时可能会产生酸性或碱性代谢物并使培养基pH 值升高或降低,应用指示剂与代谢物质的显色反 应可以初步判断微生物利用状态. 三,材料:大肠杆菌,枯草杆菌,变形杆菌,葡萄 球菌,糖发酵培养基,明胶液化培养基,淀粉水 解培养基,接种环(针),酒精灯
四,操作步骤 1.糖类发酵试验
用接种环以无菌操作方式挑取大肠杆菌,变形杆菌-→分别接种于葡萄 糖和乳糖培养基中,轻轻摇动试管使其均匀-→置37℃温箱中培养24-48小 时-→观察并记录结果.
2.明胶液化试验
用接种针以无菌操作方式挑取大肠杆菌,枯草芽孢杆菌和葡萄球菌-→ 以穿刺法分别接种于明胶培养基中-→置20℃温箱中培养2-5天-→观察并 记录结果.
3.淀粉水解试验
先在淀粉琼脂平板背面划十ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ线分区并标记数字-→用接种环以无菌操 作方式挑取大肠杆菌,枯草芽孢杆菌,葡萄球菌和变形杆菌-→分别在不同 标记区内划十字接种-→将平板倒置在37℃温箱中培养24小时-→打开平 板,加入少量卢哥氏碘液并使其均匀铺满平板-→观察并记录结果.
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实验八_大分子物质水解试验
实验八_大分子物质水解试验一、实验目的1. 了解大分子物质的水解2. 掌握大分子物质水解的实验原理和操作方法3. 比较不同大分子物质的水解速率二、实验原理大分子物质是由许多重复单元组成的生物高分子或合成高分子，如蛋白质、淀粉、纤维素、聚合物等。
由于其大分子结构，容易难以被生物体吸收直接利用，因此需要经过水解反应，使其分解为一个个低分子化合物，方便生物体吸收利用。
在本实验中，我们将研究3种大分子物质的水解反应，分别为淀粉、聚乳酸和聚酯。
淀粉的水解需要使用酶类，因为淀粉的分子结构中包含α-1,4-糖苷键和α-1,6-糖苷键，这些糖苷键需要在酶的作用下被分解。
聚乳酸和聚酯的水解则需要使用酸，因为它们的分子结构中包含酯键，酸可以在水的存在下水解酯键。
在水解过程中，大分子物质被分解为低分子量的化合物，如单糖、乳酸、酒精、苯甲酸等，这些化合物可以被生物体吸收利用。
三、实验步骤1. 淀粉水解试验步骤一：准备淀粉溶液将2克淀粉粉末加入100毫升蒸馏水中，搅拌至淀粉完全溶解，得到10mg/mL的淀粉溶液。
步骤二：加入淀粉酶将0.1毫升淀粉酶加入淀粉溶液中，搅拌均匀。
步骤三：加热反应将淀粉溶液加热至80℃，反应10分钟。
加入10毫升0.1mol/L NaOH，中和反应。
步骤五：检测还原糖取1毫升反应液，加入1毫升Benedict试液，加热10分钟，观察是否产生红色沉淀。
将2克聚乳酸粉末加入50毫升四氢呋喃中，搅拌至聚乳酸完全溶解。
四、实验结果加入Benedict试液后，反应液产生红色沉淀，说明淀粉水解后生成了还原糖。
聚乳酸水解试验：五、实验分析通过本实验，我们研究了3种大分子物质的水解反应。
淀粉是由多个葡萄糖单元组成的多糖，需要酶的作用才能进行水解，反应生成的还原糖可以被生物体吸收利用。
聚乳酸和聚酯含有酯键结构，在酸的作用下容易进行水解反应，生成的乳酸和苯甲酸也可以被生物体吸收利用。
本实验中，聚乳酸水解后未生成酒精的结果可能是因为聚乳酸的链长和结构不同，导致酯键的水解速率与其他酯键不同。
微生物实验 08.大分子物质的水解试验
2、掌握微生物大分子水解实验的原理和方法。
（二）实验原理
微生物对生物大分子（如：淀粉；蛋白质； 脂肪）不能直接吸收利用，只有那些能够 产生并分泌胞外酶的微生物才能利用大分 子有机物。
胞外酶主要为水解酶。
淀粉
淀粉酶 水解糊精（蓝红 ） Nhomakorabea双糖、单糖
（无色）
加碘（蓝色）
脂肪
脂肪酶 水解
甘油+脂肪酸
2、明胶水解试验 做标记------穿刺接种------培养（20℃ 2-5d） ------------观察液化情况
（五）注意事项
1 、淀粉水解试验中加碘液时碘液要铺 满整个平板； 2、倒平板时无菌操作
3、接种时防止菌种交叉污染。
（六）实验作业
分别将淀粉水解试验（“+”表示发生水解，“-”表示 不发生水解）和明胶水解试验（“+”表示发生水解，“-” 表示不发生水解）结果填入下表，并分析原因。 菌名 淀粉水解能力 明胶水解能力 大肠杆菌 枯草芽孢杆菌
乳糖蛋白胨培养液 蛋白胨 10g 牛肉膏 3g 乳糖 5g NaCl 5g 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1ml 蒸馏水 1000mlpH 7.2-7.4 注：最后加溴甲酚紫。 115℃灭菌20min
实验八 大分子物质的水解试 验
（一）实验目的
1 、证明不同微生物对各种大分子的水解能力不 同，从而说明不同微生物具有不同的酶系统。
(四）实验方法
1、淀粉水解试验
注意无菌操 作
（1）制固体淀粉培养基平板；冷却凝固。 （2）标记后将大肠杆菌、枯草芽孢杆菌接种。
大肠杆菌
枯草杆菌
（3）36℃恒温倒置培养1-2d；
（4）观察生长情况，将平板打开盖子，滴入少 量碘液于平皿中，轻轻旋转平板，使碘液 均匀铺满整个平板；