临床医学等专业生物化学实验大纲

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主要仪器设备 NO 1 2 3 4 5 6 7 8 9 设备名称 紫外分光光度计 PCR 仪 微量加样器 紫外检测仪 台式高速离心机 水浴锅 眼科剪 眼科镊 电泳槽和电泳仪 主要实验耗材 NO 1 2 3 4 5 6 7 8 耗材名称 E.P.管 吸头 琼脂糖 蛋白酶 K、RNA 酶 饱和酚、氯仿、异戊醇 PCR 扩增试剂盒 引物 一次性手套 规格型号 1.5ml、0.5ml、 0.2μ l 1.0ml 、200μ l 数量 单价 金额 备注 16G 规格型号 S-54 型 P.E.TC-1 1000μ l、 200μ l、20μ l 数量 单价 金额 购置日期
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主要仪器设备 NO 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 设备名称 层析柱 核酸蛋白检测仪 记录仪 电泳仪 电泳槽 载玻片、点样玻片 中试管 三角烧瓶 吸量管、滴管 剪刀、镊子、刀片 玻璃棒、玻璃板 主要实验耗材 NO 1 2 3 4 5 6 7 耗材名称 血清 PBS 缓冲液 （NH4）2SO4 葡聚糖 G－25 DEAE－52 醋酸纤维薄膜 染色液、透明液、漂洗液 规格型号 数量 单价 金额 备注 规格型号 1×20cm HD-2000 型 XWT-S DYY-2C 型 数量 单价 金额 购置日期
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实验项目 项目序号 实验类型 实验课时 目的要求： 通过本实验使学生掌握蛋白质分离、 纯化的基本过程及核酸蛋白质检测仪的使用 方法。熟悉盐析法分离蛋白质，柱层析法纯化蛋白质及蛋白质的离心、浓缩、电泳等 技术。 实验内容： 1. 盐析法分离蛋白质。 2. 分子筛层析法纯化 γ－球蛋白。 3. 离子交换柱层析法纯化 γ－球蛋白。 4. 醋酸纤维薄膜电泳鉴定蛋白质。 实验步骤： 1. 2ml 血清＋2ml PBS 缓冲液＋2.0ml 饱和（NH4）2SO4 沉淀蛋白质。 2. 3000r/min 离心，弃上清，沉淀用 1mlPBS 溶解＋饱和（NH4）2SO40.5ml。 3. 再次 3000r/min 离心，弃上清，沉淀用 10 滴 PBS 溶解（样品） ，加样于葡聚糖凝 胶柱，用核酸蛋白检测仪检测收集蛋白质。 4. 将收集的蛋白质溶液用葡聚糖 G－25 浓缩。 5. 应用 DEAE-52 阴离子交换柱层析，纯化 γ－球蛋白。 6. 浓缩后醋酸纤维薄膜电泳鉴定。 注意事项： 1. 装柱后要防止柱床干燥，如发生干裂需重新装柱。 2. 上样时既要求柱床上面的缓冲液尽量流入柱床，又要保证柱床不干，这样才能保 证上样的蛋白质浓度不被稀释。 3 综合型 12 项目名称 适用层次 开设类型 血清 γ－球蛋白的分离、 纯化和鉴 定 本科 必开
注意事项： 制备无蛋白血滤液时，先加 H2SO4，混匀后再加 Na2WO4，先造成酸性环境，让蛋 白质带正电荷，带正电荷的蛋白质颗粒和 WO42-离子结合形成沉淀，若先加入 Na2WO4， 再加 H2SO4 则蛋白沉淀不完全，影响血糖测定结果。
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主要仪器设备 NO 1 2 3 4 5 6 7 设备名称 分光光度计 吸量管 奥氏吸量管 试管 试管架 漏斗 糖管 主要实验耗材 NO 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 耗材名称 家兔 肾上腺素 胰岛素 草酸钾 25％葡萄糖 手术刀片 注射针头 钨酸钠 硫酸 碱性铜盐 磷钼酸 标准葡萄糖溶液 滤纸 规格型号 数量 单价 金额 备注 规格型号 S-22PC 1、2、5ml 1.0ml 中号 数量 单价 金额 购置日期13源自5 6 7 8 9 10 11
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实验项目 项目序号 实验类型 实验课时 目的要求： 通过本实验使学生掌握 DNA 分离、纯化、PCR 扩增和鉴定的基本原理及微量加 样器的正确使用方法。熟悉 DNA 分离、纯化、PCR 扩增和鉴定的基本操作技术。 实验内容： 1. 基因组 DNA 的分离、经典酚氯仿法提取基因组 DNA。 2. 测定 A260、A280，确定 DNA 的浓度和纯度。 3. PCR 技术扩增目的基因。 4. 琼脂糖凝胶电泳鉴定基因组 DNA 及 PCR 产物。 实验步骤： 1. 用眼科剪将组织 DNA 剪碎，加入细胞裂解液及 RNase，保温 55℃，30min。 2. 加入蛋白酶 K，37℃水浴过夜。 3. 酚抽提取基因组 DNA。 4. 测定 DNA 溶液的 A260 和 A280，计算 A260/A280，确定 DNA 的浓度和纯度。 5. PCR 扩增：PCR 反应混合物（包括 10×Buffer、dNTP、Taq-DNA 聚合酶）＋DNA 模板＋上、下游引物＋ddH2O，历经变性、退火、延伸 30 个循环。 6. 琼脂糖凝胶电泳，鉴定组织中提取的基因组 DNA（大片段）和 PCR 扩增产物（小 片段） 。 注意事项： 1．酚腐蚀性强，操作时要小心，一旦溅到手上立即用水冲洗。 2．DNA 纯度要达标：A260/A280=1.8~2.0 4 综合型 16 项目名称 适用层次 开设类型 DNA 的分离、提取、扩增与鉴定 本科 必开
实验内容： 1. 家兔称重，耳缘静脉取血。 2. 家兔分组、分别注射肾上腺素、胰岛素。 3. 注射后，肾上腺素 15min，胰岛素 30min 后第二次取血。 4. 制备无蛋白血滤液。 5. 测定血糖。
实验步骤： 1. 饥饿 16h 的家兔称重、记录。 2. 耳缘静脉取血：取血瓶中预先加抗凝剂，边取血边摇，防止凝血。 3. 家兔分两组，分别注射肾上腺素、胰岛素（后腿腹股沟侧皮下） 。 4. 注射肾上腺素的家兔 15min 后再次取血，注射胰岛素的家兔 30min 后再取血。 5. 制备无蛋白血滤液。 6. 分别测定注射前、注射后家兔血糖浓度。
主要实验耗材 NO 1 2 3 4 耗材名称 CuSO4 0.05mol/L H2SO4 蒸馏水 坐标纸 规格型号 数量 单价 金额 备注
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实验项目 项目序号 实验类型 实验课时 目的要求： 通过本实验使学生掌握家兔耳缘静脉取血的方法及无蛋白血滤液的制备方法，掌握 血糖测定的方法（Folin-吴氏法） ，验证肾上腺素、胰岛素对家兔血糖浓度的调节作用。 2 综合型 4 项目名称 适用层次 开设类型 血糖测定及激素对血糖水平的影 响 本科 必开
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实验项目 项目序号 实验类型 实验课时 5 设计性 6 项目名称 适用层次 开设类型 脏器生化、医学酶学、蛋 白质生化与基因检测 本硕/本科 必修
目的要求：本教研室利用开放实验室为学生创新科研，提高动手动脑能力提供实验平 台。首先由高年资教师给学生讲解有关脏器生化、医学酶学、蛋白质生化、基因检测的 实验设计，让学生组织科研小组（4-6 人） ，通过查阅文献自己设计实验。教师从中挑选 课题设计合理、技术路线清晰、方法简便易行的，经过教师认真修改后批准实验，提供 实验仪器、试剂，让学生自己动手独立完成实验，从而实现理论联系实际，培养学生提 出问题，解决问题的能力，加强学生的创新意识、科研意识，为将来进入临床打下良好 的基础。 实验内容： （根据不同的实验设计安排不同内容） 现以其中一个设计性实验降脂食品（黑加仑）对高脂血症大鼠食疗的研究为例，说明 实验内容： 1. 实验动物分组：对照组、模型组、阳性药物对照组、给药组（大、中、小剂量） 2. 建立高脂血症大鼠动物模型（约 9 天） 3. 灌黑加仑（大、中、小剂量） 4. 取血，检测各组外周血生化指标 5. 统计学处理 主要仪器设备 NO 1 2 3 4 设备名称 分光光度计 核酸蛋白检测仪、记录仪 PCR 扩增仪 凝胶成像仪 规格型号 S-22PC HD－2000 型，XWT-S P.E.TC-1 数量 单价 金额 购置日期
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脏器生化、医学酶学、蛋 白质生化与基因检测
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设计性
本科
4～6
必开
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实验项目 项目序号 实验类型 实验课时 目的要求： 1. 掌握玻璃仪器的洗涤方法及吸量管的使用方法。掌握分光光度计的使用方法。 2. 熟悉实验室规则，熟悉比色法的基本原理。 3. 了解分光光度计的基本结构， 实验内容： 1. 吸量管的选择和使用。 2. 配制不同浓度的硫酸铜溶液。 3. 制作硫酸铜标准曲线。 4. 利用标准曲线测定未知硫酸铜溶液的浓度。 实验步骤： 1. 练习吸量管的使用及如何准确读数。 2. 利用硫酸铜标准贮备液配制应用标准液，浓度（含铜量）分别为 1000μ g/ml、2000 μ g/ml、3000μ g/ml、4000μ g/ml。 3. 以硫酸调“0” ，在 690nm 波长处，测定各管的吸光度值。 4. 以硫酸铜浓度为横坐标，以吸光度值为纵坐标，绘制硫酸铜标准曲线。 5. 测定未知硫酸铜溶液吸光度，从标准曲线上查出未知溶液的浓度。 1 验证型 4 项目名称 适用层次 开设类型 基本操作及 CuSO4 标准曲线的 制作 本科 必开
《基础医学复习纲要与强化训练·生物化学》第 1 版（2006.8 出版） 主编 关亚群 库热西·玉努斯 科学出版社
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实验指导及讲义： 《生物化学与分子生物学实验指导》 科学出版社 主编 实验项目名称和学时分配表 NO 1 实验项目 基本操作及 CuSO4 标准 曲线的制作 2 血糖测定及激素对血糖 水平的影响 3 血清 γ－球蛋白的分离纯 化和鉴定 （1）盐析与分子筛层析 法分离和纯化蛋白质 （2）离子交换层析法纯 化 γ－球蛋白 （3）醋酸纤维薄膜电泳 鉴定蛋白质 4 DNA 的分离、提取、扩增 与鉴定 （1）基因组 DNA 的分 离 （2）经典酚氯仿法提取 基因组 DNA （3） PCR 技术扩增目的 基因及 DNA 纯度的鉴定 （4）琼脂糖凝胶电泳鉴 定基因组 DNA 及 PCR 产物 4 综合型 本科 2 必开 4 综合型 本科 2 必开 4 综合型 本科 2 必开 4 综合型 本科 2 必开 4 综合型 本科 2 必开 4 综合型 本科 6 必开 4 综合型 本科 6 必开 4 综合型 本科 2 必开 实验学时 4 实验类型 验证型 适用层次 本科 每组人数 开设方式 2 必开 库热西·玉努斯 关亚群
适用专业
临床本硕、临床医学五年制、口腔医学、法医学、麻醉医学、 医学影像、基础医学、预防医学、临床药学、药学 实验报告和其他 50% 50% 实验成绩占总成绩的 30％